miRNA-506在三阴性乳腺癌中的表达及对其增殖和侵袭作用的研究

目的 探讨miRNA-506对三阴性乳腺癌癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法 qRT-PCR检测三阴性乳腺癌患者癌组织、癌旁正常组织、乳腺良性病变组、三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231以及正常乳腺上皮细胞系HBL-100中miRNA-506表达情况;转染miRNA-506mimics后CCK-8检测细胞增殖情况;Transwell小室法检测MDA-MB-231细胞侵袭情况。结果 乳腺癌组织中的miRNA-506表达水平低于癌旁正常组织以及乳腺良性病变组织（P <0.01）;人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞内的miRNA-506低于人正常乳腺上皮细胞系HBL-100细胞（P <0.01）;转染miRNA-506mimics可显著抑制MDA-MB-231细胞增殖和侵袭（P <0.01）。结论 miRNA-506在三阴性乳腺癌低表达以及其可抑制三阴性乳腺癌的增殖、侵袭生物学行为。     

慢病毒介导的miRNA-197-3p-siRNA对喉癌细胞系Hep-2生物学行为的影响

 【摘要】目的 通过构建慢病毒介导(lentivirus,LV)的miRNA-197-3p-siRNA,探讨下调miRNA-197-3p对喉癌细胞系Hep-2生物学行为的影响。方法 针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体,将重组miRNA-197-3p-RNAi-LV3转染喉鳞状细胞癌Hep-2。Hep-2细胞设为干扰组 (miRNA-197-3p-siRNA,MI组)、阴性对照组(negative control,NC组)和空白对照组(blank,B组);分别采用聚合酶链反应方法检测miRNA-197-3p的表达情况;用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭情况。结果 miRNA-197-3p-RNAi-LV3可显著降低miRNA-197-3p的表达。CCK8实验显示细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。Transwell实验显示细胞侵袭能力明显减弱(P<0.05)。流式细胞仪检测表明转染后对Hep-2细胞周期及细胞凋亡均无明显影响(P>0.05)。结论 miRNA-197-3p-siRNA通过下调miRNA-197-3p的表达,可以抑制Hep-2细胞增殖,并降低其侵袭能力。     

miRNA-30b对抑制胃癌细胞增殖及侵袭的作用研究

目的研究miRNA-30b在胃癌癌组织中的表达水平及对癌细胞增殖侵袭的影响,探讨miRNA-30b在胃癌中的临床意义及可能的分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miRNA-30b在胃癌及癌旁组织中的表达情况;用miRNA-30b模拟物及抑制物转染人胃癌HGC-27细胞,CCK-8法检测细胞增殖的情况,Transwell 小室法检测细胞侵袭情况,Western blot 检测RAB22A 和USP47 蛋白表达。结果miRNA-30b在胃癌组织中表达水平低于对应癌旁组织（P <0.05）,且miRNA-30b 低表达与胃癌分期及肿瘤大小有关（P <0.05）;与转染阴性对照细胞比较,转染miRNA-30b模拟物的HGC-27细胞增殖水平和侵袭能力均受到抑制（P <0.05）,RAB22A和USP47 蛋白表达水平降低（P <0.05）;而转染miRNA-30b 抑制物的HGC-27细胞增殖水平和侵袭能力则增强（P <0.05）,RAB22A 和USP47 蛋白表达水平升高（P <0.05）。结论miRNA-30b 在胃癌组织中表达下调,且miRNA-30b 可能通过调节RAB22A 和USP47 的表达从而影响胃癌细胞的增殖及侵袭。     

靶向survivin基因siRNA对喉癌细胞增殖、凋亡的影响

目的观察靶向survivin基因的siRNA对喉癌细胞Hep-2增殖和凋亡的影响,为喉癌的基因治疗提供有效靶点及技术。方法使用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将靶向survivin基因的siRNA转染至喉癌细胞株Hep-2;MTT[3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测对喉癌细胞Hep-2增殖的影响;RT-PCR检测喉癌细胞Hep-2survivin基因mRNA表达的变化;Western Blot检测survivin基因蛋白表达;流式细胞技术检测喉癌细胞Hep-2凋亡情况。结果各浓度survivin-siRNA转染组细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于对照组（〈0.05）,survivinmRNA和蛋白表达有不同程度减弱,并且有明显的浓度依赖性,随着浓度的上升表达率下降。结论利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制喉癌细胞Hep-2细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,不同浓度survivin-siRNA转染能下调survivinmRNA和蛋白表达,靶向survivin基因的RNA干扰技术在喉癌的基因治疗中具有一定价值。     

PRMT1对喉癌细胞增殖、迁移的影响及其机制

目的 探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)调控核糖核苷酸还原酶亚单位M2(RRM2)对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移的影响及其机制。方法 收集蚌埠医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科收治的确诊为喉癌的8例患者的病理标本及癌旁正常组织。使用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测喉癌和癌旁组织中PRMT1 mRNA、RRM2 mRNA相对表达量。Western blot实验检测喉癌和癌旁组织中PRMT1、RRM2蛋白相对表达量。通过对Hep-2细胞不同处理分为3组：si-PRMT1组(PRMT1小干涉RNA下调PRMT1)、si-NC组(无关序列转染)和control组(不进行处理)。噻唑兰(MTT)法检测各组细胞增殖。RT-PCR检测各组Hep-2细胞中PRMT1、RRM2 mRNA、vimentin mRNA和E-cadherin mRNA相对表达量。Transwell检测各组Hep-2细胞侵袭和迁移能力。Western blot检测各组Hep-2细胞PRMT1、RRM2蛋白、侵袭和迁移相关蛋白(vimentin、E-cadherin)相对表达量。结果 喉癌组织中的PRMT1和RRM...     

转移相关基因2对喉癌细胞系Hep-2的增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨转移相关基因2(MTA2)对喉癌细胞系Hep-2的增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过针对MTA2基因的小干扰RNA(siRNA-MTA2)对MTA2基因表达进行下调,采用RT-PCR和Transwell检测转染,作为实验组,对照组转染阴性对照(sicontrol),通过MTT、细胞划痕实验和Transwell法分别检测MTA2对Hep-2的增殖、迁移和侵袭的影响。结果:实验组MTA2mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05),实验组培养7d和9d时细胞增殖能力明显低于对照组(P<0.05),实验组细胞迁移能力和细胞侵袭能力明显低于对照组(P<0.05)。结论:MTA2与喉癌细胞系Hep-2细胞增殖、迁移和侵袭密切相关,有望成为治疗喉癌的靶点。     

微RNA-200家族对程序性死亡配体1的调控及其在非小细胞肺癌中的临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）免疫检查点分子程序性死亡配体1（PD-L1）的表达及其与miRNA-200家族之间的调控关系,阐明PD-L1在NSCLC中的临床意义及调控机制。方法 选取138例NSCLC患者癌组织及配对的癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色检测PD-L1表达,qRT-PCR检测miRNA-200家族（miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c、miRNA-429、miRNA-141）的表达水平。培养肺癌A549细胞,通过转染miRNA-200家族5个miRNA模拟物使其过表达,采用蛋白质印迹法检测miRNA-200家族过表达对PD-L1表达的影响,CCK-8实验检测miRNA-200家族过表达对A549细胞增殖活性的影响,荧光素酶报告基因实验验证miRNA-200家族对PD-L1的调控作用。结果 138例NSCLC患者癌组织PD-L1总阳性率为58.7%（81/138）,高于癌旁组织（3.6%,5/138）,差异有统计学意义（P<0.05）;PD-L1表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型无关,而与淋巴结转移、脉管侵犯、临床TNM分期有关（P均<0.05）。NSCLC癌组织中miRNA-200家族表达水平均低于癌旁组织（P均<0.01）,且PD-L1表达阳性的患者具有更低水平的miRNA-200家族表达水平（P均<0.01）。A549细胞过表达miRNA-200家族能下调PD-L1的表达（P均<0.01）,且抑制癌细胞增殖活性（P均<0.01）。荧光素酶报告基因实验证实miRNA-200家族直接负调控PD-L1的表达（P均<0.01）。结论 PD-L1高表达预示NSCLC患者预后不良。PD-L1是miRNA-200家族的靶基因,miRNA-200家族表达水平低可能是NSCLC患者高表达PD-L1的重要原因。     

丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响及机制研究

目的研究丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响,并探讨其作用机制。方法运用CCK-8检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖活性的影响。运用流式细胞仪检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞凋亡率的影响。划痕实验检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验比较丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞侵袭转移能力的影响。Western blot法检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平的影响。结果CCK-8法发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其作用呈浓度依赖性。流式细胞术分析发现丹酚酸B能诱导人喉癌Hep-2细胞发生凋亡。划痕实验发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞的迁移能力。Transwell实验发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞的体外侵袭能力。Western blot法检测发现测丹酚酸B能有效降低人喉癌Hep-2细胞PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平。结论丹酚酸B在体外能够有效抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,诱导细胞凋亡,同时抑制喉癌细胞的体外侵袭转移能力。其作用可能与下调PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平相关。     

Caspase-8在喉癌组织中的表达及其与细胞凋亡相关性研究

目的探讨半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)在喉癌组织中的表达及其与细胞凋亡的相关性。方法采用流式细胞术检测45例喉癌患者喉癌组织和相应癌旁组织中Caspase-8的表达,并以20例非喉癌患者喉部正常黏膜组织作对照;同时检测喉癌组织中的细胞凋亡率。结果 (1)喉癌组织中Caspase-8蛋白的表达量及阳性表达率均明显低于癌旁组织及正常喉黏膜组织(P<0.01),癌旁组织及正常喉黏膜组织的表达差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Caspase-8蛋白的表达与喉癌组织中的淋巴结转移、临床分期、分化程度有相关性(P<0.05);与临床分型、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无相关性(P>0.05)。(3)喉癌组织细胞凋亡率与临床分期、淋巴结转移有相关性;与临床分型、病理分级、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关。(4)喉癌组织中Caspase-8蛋白表达水平与喉癌组织细胞凋亡率呈正相关(P<0.01)。结论 Caspase-8蛋白的低表达可促进喉癌的发生、发展,并通过抑制凋亡并促进细胞增殖参与喉癌发展。     

IL-10对miRNA-125b表达和非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究白细胞介素10(IL-10)对miRNA-125b表达和非小细胞肺癌增殖与凋亡的影响.方法:采用实时荧光定量PCR检测IL-10刺激肺癌细胞系NCI-H460各微小RNA(miRNA)的表达水平变化;利用细胞计数试剂盒(CCK8)比较IL-10刺激后和恢复miRNA-125b表达后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测IL-10刺激后和恢复miRNA-125b表达后对细胞凋亡的影响;荧光定量PCR技术验证miRNA-125b在非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达情况.结果:IL-10刺激NCI-H460细胞后,miRNA受到调控的程度不同,所测21种miRNA中,miRNA-125b下调程度最大;miRNA-125b恢复表达后,抑制了由IL-10刺激引起的细胞增殖(P<0.01),促进了细胞凋亡;miRNA-125b在非小细胞肺癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.01).结论:在IL-10诱导的细胞增殖中,miRNA-125b起到抑癌的作用,可作为未来治疗非小细胞肺癌的药物研发对象.     

MicroRNA-196a 在喉癌组织中的表达及其 对喉癌细胞侵袭和转移的影响

目的 探讨microRNA-196a（miR-196a）在喉癌组织中表达及其对喉癌细胞侵袭和转移的影响。 方法 选取2015 年1 月—2017 年12 月金华市中心医院70 例喉癌手术切除标本的喉癌组织和癌旁组织。将 人喉癌Hep-2 细胞分为空白对照组、阴性对照组及siRNA 组。siRNA 组细胞转染pcDNA/miR-196a,阴性 对照组细胞转染pcDNA/miR-NC,空白对照组不做处理。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定癌旁 组织和喉癌细胞中miR-196a 水平;Transwell 小室测定喉癌细胞侵袭和迁移能力;Western blotting 检测喉癌 细胞磷脂酰肌醇-3- 激酶（PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-PKB）、Bax 及Bcl-2 蛋白水平;RT-PCR 测定喉 癌细胞PI3K、p-PKB、Bax 及Bcl-2 mRNA 水平。结果 喉癌组织中miR-196a 水平高于癌旁组织（P <0.05）。 与空白对照组和阴性对照组比较,siRNA 组喉癌细胞中miR-196a 水平降低（P <0.05）,细胞侵袭和迁移能 力下降（P <0.05）,PI3K、p-PKB 及Bcl-2 蛋白和mRNA 水平降低（P <0.05）,Bax 蛋白和mRNA 水平升 高（P <0.05）;空白对照组与阴性对照组细胞各指标比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 喉癌组织中 miR-196a 水平升高,沉默miR-196a 可降低喉癌细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与PI3K/PKB 信号通路 有关。     

长链非编码RNA MALAT-1基因的敲除抑制人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的增殖和迁移

目的探讨敲除长链非编码RNA MALAT-1基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的影响。方法使用实时聚合酶链反应（RTPCR） 以永生化鼻咽上皮（NPE）细胞株NP-69作为参照检测FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达,使用shmalat1 慢病毒转染Hep-2细胞,RT-PCR检测其MALAT1的表达。增殖速率分析,MTT法明确MALAT-1对细胞增殖的影响。流式细 胞术分析细胞周期和细胞凋亡。采用Transwell 小室检测Hep-2 细胞的迁移。最后使用Matrigel 侵袭实验评估shmalat1 和 shCtrl慢病毒转染的Hep-2细胞的侵袭能力。结果使用qPCR检测FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达,结果 发现与NP-69细胞相比,FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达显著增加。敲除MALAT1明显抑制Hep-2细胞增 殖。与MOCK和shCtrl 细胞相比,MALAT1-shRNA 慢病毒转染细胞S期细胞数量显著增加（P<0.01）。此外,细胞在G2/M期 的百分比下降（P<0.01）。下调MALAT1时,Hep-2细胞的侵袭和迁移都受到抑制。结论MALAT1在喉鳞状细胞癌高表达。敲 除长链非编码RNA MALAT-1基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移起抑制作用。     

RNAi沉默PCDGF基因对喉鳞癌Hep-2细胞生物学特性的影响

目的 研究RNAi沉默畸胎瘤细胞源性生长因子(PCDGF)表达对喉鳞癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法 RT-PCR检测喉鳞癌组织中PCDGF的mRNA表达水平;Hep-2细胞分为空白对照组、阴性对照组和PCDGF-siRNA组,Western blot检测转染效果及Bcl-2、Bax、E-cadherin和MUC1蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell 小室检测细胞侵袭能力.结果 喉鳞癌组织中的PCDGF mRNA表达水平显著高于声带息肉组织(t=6.88,P=0.005).PCDGF在喉鳞癌组织中高表达.PCDGF-siRNA组喉鳞癌Hep-2细胞中PCDGF、Bcl-2、MUCI蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.05),Bax、E-cadherin蛋白表达显著高于空白对照组(P<0.05),细胞增殖率显著低于空白对照组(P<0.05),细胞侵袭数显著低与空白对照组(P<0.05),细胞凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05).结论 抑制PCDGF的表达能够抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞发生凋亡.     

microRNA-29a在结直肠癌组织中的表达及意义

目的 探讨microRNA-29a（miR-29a）在结直肠癌组织中的表达,以及miR-29a反义寡核苷酸对结直肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 选取行手术治疗的初诊结直肠癌患者195例,利用实时荧光定量聚合酶链反应检测结直肠癌和癌旁组织中miR-29a表达,培养人结直肠癌LoVo细胞,随机分为ASO-miR-29a组、ASO-对照序列组和空白对照组,检测各组细胞中miR-29a表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,Transwell小室检测各组细胞迁移和侵袭能力。结果 结直肠癌组织miR-29a相对表达量为（1.93±0.19）,癌旁组织为（1.26±0.12）,两者比较差异有统计学意义（P?<0.05）;结直肠癌组织中miR-29a相对表达量与TNM分期和淋巴结转移有关（P?<0.05）,多元线性回归分析结果显示,TNM分期和淋巴结转移是影响结直肠癌组织中miR-29a表达的因素（P?<0.05）;ASO-miR-29a组细胞中miR-29a相对表达量低于ASO-对照序列组和空白对照组（P?<0.05）;MTT实验结果显示,ASO-miR-29a组与ASO-对照序列组和空白对照组相比吸光度值降低（P?<0.05）;与ASO-对照序列组和空白对照组比较,ASO-miR-29a 组迁移细胞数和侵袭细胞数均减少（P?<0.05）。结论 miR-29a在结直肠癌组织中呈高表达,参与结直肠癌发生、进展过程,特异性抑制结直肠癌细胞中miR-29a表达可减少细胞增殖,抑制细胞迁移和侵袭能力。     

siRNA沉默eIF4E诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其机制

目的:观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞(siRNA-eIF4E组),同时设空白对照组和空质粒组。MTT法检测siRNA对Hep-2细胞增殖的抑制作用,罗丹明染色检测转染后细胞内线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化。结果:与空白对照组及空质粒组比较,siRNA-eIF4E组Hep-2细胞中eIF4E基因转录和表达水平明显下调(P<0.01),Hep-2细胞生存率下降(P<0.05),细胞线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),凋亡相关基因Bim、Bid及Caspase-3表达上调(P<0.05)。结论:siRNA-eIF4E在体外可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其机制可能是通过激活线粒体凋亡途径诱导Hep-2细胞凋亡。     

下调PI3K/Akt信号通路对抑制喉癌细胞生长的影响

目的 探讨钾通道阻断剂四乙胺(TEA)通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对人喉癌上皮细胞(Hep-2)增殖与凋亡的影响.方法 将TEA作用于Hep-2,用噻唑蓝(MTT)法测定Hep-2细胞活性,计算出TEA对Hep-2的增殖抑制率;采用Hoechest33258染色检测细胞凋亡,用流式细胞仪(FCM)法测定Hep-2凋亡率.结果 5、10、20 mmol/L TEA接种后,Hep-2细胞增殖抑制率分别达到12.573%、31.385%和56.132%,Hep-2作用96 h后细胞凋亡率分别为(41.64±2.67)%、(58.76±4.32)%和(72.65±6.54)%,TEA处理组抑制率和凋亡率都高于未用TEA处理的对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 TEA可抑制Hep-2的增殖及体内生长,促进Hep-2的凋亡.     

PTEN基因在喉鳞癌中的表达及意义

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)在喉鳞癌中的表达及其临床意义.方法:应用半定量RTPCR方法检测喉癌组织中PTEN mRNA的表达.结果:淋巴结转移组喉癌较正常喉组织PTEN mRNA表达下降有统计学意义(P＜0.05).病理低分化与高分化相比,PTEN mRNA表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论:PTEN基因表达下降在喉鳞癌演进中起重要作用.