RhoA/ROCK信号通路与心血管系统疾病关系的研究进展

心血管疾病是中国人群死亡的主要原因,然而其发病机制尚不明确.研究发现,RhoA/ROCK信号通路与高血压、 冠心病、 心力衰竭、 心律失常等疾病的发生和发展密切相关.ROCK抑制剂也为心血管疾病的治疗提供新的思路,现就RhoA/ROCK信号通路在心血管疾病中研究做一综述.     

束缚应激通过激活Rho/ROCK通路诱导大鼠杏仁核血脑屏障的损伤

目的 探讨Rho/ROCK信号通路在束缚应激诱导大鼠杏仁核血脑屏障损伤过程中的作用及机制。方法 选取60只SPF级雄性SD大鼠建立束缚应激模型,将大鼠分为4组：Control组（n=15,每日禁食水6 h）;Stress组（n=15,每日束缚6 h）;Stress+Fasudil组（n=15,每日束缚6 h,束缚前0.5 h给予腹腔注射1 mg/100 g Fasudil溶液）;Fasudil组（n=15,每日给予腹腔注射1 mg/100 g Fasudil溶液）。用高架十字迷宫实验（EPM）检测各组大鼠行为学变化,ELISA检测血清CORT和S100B水平,检测脑组织伊文思蓝（EB）的渗漏情况以评估渗透性的改变,免疫荧光法和Western blotting方法检测紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin、ZO-1的表达变化,Pull-down实验和Western blotting检测Rho/ROCK通路的激活情况,透射电镜观察脑微血管内皮细胞超微结构的形态变化。结果 与Control组相比,Stress组和Stress+Fasudil组大鼠表现出了明显的焦虑样行为;Stres...     

三焦针法通过激活SDF-1α/CXCR4通路对快速老化模型小鼠学习和记忆能力的改善作用

探讨三焦针法对快速老化模型（SAMP8）小鼠神经功能和基质细胞衍生因子1α/趋化因子受体4（SDF-1α/CXCR4）通路的改善作用,探讨三焦针法在SAMP8小鼠中的作用机制。     

RhoA/ROCK信号通路对胚胎干细胞神经分化的影响

RhoA是RhoGTP酶家族成员之一,ROCK是RhoA的下游效应分子,ROCK影响细胞骨架及细胞核内的转录,这一系列反应构成RhoA/ROCK信号通路。胚胎干细胞是具有自我更新和分化为各种细胞的潜能的原始细胞,RhoA/ROCK信号通路在胚胎干细胞向神经分化中发挥重要作用。本文对Rho/ROCK对胚胎干细胞分化过程的影响进行论述,并对其今后的研究方向进行了展望、总结。     

RhoA/ROCK途径在糖尿病相关疾病中的研究进展

RhoA是一种小的GTP结合蛋白,它的下游效应蛋白Rho激酶(ROCK)调节多种细胞功能,包括细胞生长、基因表达和细胞骨架重组.已有研究表明,这一信号通路在糖尿病并发症、高血压、中风、肿瘤、骨关节炎、急性肺损伤等疾病中具有重要的病理生理作用.糖尿病相关疾病的发生发展与RhoA/ROCK途径的激活或表达上调密切相关,RO...     

RhoA/ROCK通路调控前列腺增生细胞上皮间质转化

目的:通过研究RhoA/ROCK通路对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的良性前列腺增生(BPH)上皮细胞发生的上皮-间质转化(EMT)的影响,提示BPH的可能发生机制,为治疗BPH提供新的靶点。方法:TGF-β处理BPH上皮细胞系(BPH-1),检测EMT相关分子和RhoA的mRNA表达。随后用ROCK抑制剂Y-27632和TGF-β共处理BPH-1,检测EMT相关分子和RhoA的mRNA和蛋白表达。结果:TGF-β诱导BPH-1细胞发生EMT,上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达降低,神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达升高,同时BPH-1细胞RhoA的mRNA表达上调。Y-27632能够逆转TGF-β诱导的BPH-1细胞E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA表达和E-cadherin、N-cadherin蛋白表达改变,差异具有统计学意义。结论:EMT在BPH的发生过程中可能有着重要作用,而RhoA/ROCK通路参与了TGF-β诱导的EMT的调控。     

杜仲醇提取物通过RhoA/ROCK信号通路调控大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化作用研究

目的:分析杜仲醇提取物通过RhoA/ROCK信号通路调控骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化中的影响。方法:选取实验用纯系大鼠50只,随机数字表法分成5组:正常组(10只)、模型组(10只)、杜仲低剂量组(10只)、杜仲中剂量组(10只)与杜仲高剂量组(10只),模型组与杜仲低、中、高剂量组制备OP大鼠模型,杜仲低、中、高剂量组大鼠分别使用50、100、200 mg/kg杜仲醇提取物灌胃,正常组、模型组大鼠5 mL/kg生理盐水灌胃,末次给药后断颈处死大鼠,经过BMSCs培养并察看大鼠细胞成长及矿化状况,RT-PCR检测大鼠软骨细胞内ROCK1、RhoA表达状况及BMSCs成骨诱导后骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)mRNA表达。结果:模型组、杜仲低剂量组大鼠细胞矿化率较正常组显著降低,杜仲中、高剂量组大鼠细胞矿化率较模型组、杜仲低剂量组显著升高,差异均有统计学意义(P0.05);模型组、杜仲低剂量组大鼠ROCK1、RhoA mRNA表达量较正常组显著降低,杜仲中剂量组、杜仲高剂量组大鼠ROCK1、RhoA mRNA表达量较模型组显著升高,差异均有统计学意义(P0.05);模型组、杜仲低剂量组OPN、Runx2及OCN mRNA表达量较正常组显著降低,杜仲中、高剂量组OPN、Run×2及OCN mRNA表达量较模型组、杜仲低剂量组显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:杜仲醇提取物可提升BMSCs内RhoA/ROCK信号路径ROCK1、RhoA mRNA表达量,促进成骨分化和BMSCs增殖,但其具体机制仍需行更深入研究。     

BKca下调RhoA/ROCK信号通路改善糖尿病大鼠阴茎勃起功能

目的：观察大电导钙激活钾通道（big conductance Ca2+-activated K+ channel,BKca）对糖尿病勃起功能障碍（diabetes mellitus-induced erectile dysfunction,DMED）大鼠阴茎海绵体平滑肌RhoA/ROCK信号通路的影响。方法：实验大鼠分为空白对照组8只,DMED组8只,NS1619组（DMED治疗组）7只,NS1619组大鼠采用特异性BKca激活剂（NS1619）阴茎海绵体注入2周。观察各组勃起行为,并电刺激检测阴茎海绵体内压（intracavernous pressure,ICP）/平均动脉压（mean arterial pressure,MAP）,取各组阴茎海绵体平滑肌检测肌张力,采用Western blot和定量PCR（real-time PCR）方法检测RhoA、ROCK1、ROCK2表达,反应RhoA/ROCK信号通路差异,同时检测MYPT-1表达反应肌球蛋白轻链磷酸酶（myosin light chain phosphatase,MLCP）磷酸化程度。结果：成功构建DMED大鼠模型,NS1619组大鼠与DMED组大鼠比较,勃起次数和ICP/MAP明显改善（P=0.025、0.024）,阴茎海绵体平滑肌舒缩顺应性提高（P=0.031、0.024）并且RhoA、ROCK2以及肌球蛋白磷酸酶靶向结合亚基（myosin phosphatase target subunit,MYPT）-1蛋白和mRNA表达水平下调（P=0.029、0.003、0.002）,但仍未达到正常对照组大鼠水平（P=0.018、0.040、0.003）,ROCK1表达无明显差异（P=0.533）。结论：DMED大鼠因RhoA/ROCK信号通路上调和MLCP磷酸化增强导致阴茎海绵体平滑肌舒缩顺应性降低以致勃起功能障碍发生,激活BKca可以通过下调RhoA/ROCK信号通路和抑制MLCP磷酸化,改善勃起功能。     

α受体介导的雌二醇对大鼠结肠平滑肌细胞RhoA/ROCK通路的影响

目的：探讨17β?雌二醇（17β?estraial,E2）对大鼠结肠平滑肌细胞（smooth muscle cell,SMC）RhoA/ROCK通路的影响。方法：体外分离培养Sprague?Dawley（SD）大鼠结肠SMCs。细胞免疫荧光双标法观察ROCK1、雌激素受体（ER)α与α肌动蛋白（α?SMA）共表达。不同浓度和不同时间E2刺激后,以反转录实时荧光定量qRT?PCR、Western blot检测RhoA、ROCK1表达。不同浓度ROCK抑制剂Y27632刺激后,Western blot检测E2对其下游蛋白表达情况。观察ER阻断剂ICI182780、牛血清白蛋白结合的E2（BSA?E2）、ERα激动剂PPT及ERβ激动剂DPN在E2影响RhoA、ROCK1表达的作用。构建ERα、ERβ的siRNA,观察E2刺激对转染后SMC中RhoA、ROCK1表达的影响。结果：细胞免疫荧光示结肠SMC上 ROCK1与α?SMA共表达。50 nmol/L E2刺激24 h可显著抑制大鼠结肠SMC上RhoA、ROCK1表达（P < 0.05）。Y27632可浓度依赖性抑制下游蛋白p?MYPT1、p?CPI17、p?MLC表达。E2组及PPT组RhoA、ROCK1表达显著低于其他各组（P < 0.05）。ERα siRNA组可上调RhoA、ROCK1表达（P < 0.05）。结论：大鼠结肠SMC上存在ROCK1,E2可抑制RhoA/ROCK通路表达,该作用由雌激素α受体介导。     

RhoA/ROCK信号通路在左心疾病致大鼠肺动脉高压模型中的作用

目的 探讨RhoA/ROCK信号通路在左心疾病相关的大鼠肺动脉高压模型中的表达水平和作用。 方法 3-4周龄健康雄性SD大鼠20只,体重90-100g,随机分为对照组（C组：n=10）、肺高压组（H组：n=10）。H组采用升主动脉固定缩窄术建造左心疾病相关肺动脉高压大鼠模型,C组大鼠行假手术处理（钛夹固定于血管旁纵隔组织而非升主动脉,其他所有手术操作同H组）,在建模后60天,对各组大鼠进行血流动力学（右心室收缩压、肺动脉压力）检测,处死大鼠并用PBS行在体心肺灌洗致双肺变白,左肺组织固定于4%多聚甲醛行病理切片以观察肺组织病理形态学变化、右肺组织冻存以备生物分子学检测（Rho激酶mRNA、RhoA mRNA、ET-A 受体mRNA）。结果 与C组相比,H组肺动脉压力、右心室收缩压明显增高(P<0.01),肺小动脉壁明显增厚,肺小动脉管腔狭窄甚至闭塞,管壁肥厚指数明显增大（P<0.01）;与C组相比,H组肺组织的Rho激酶mRNA表达水平明显增加,RhoA mRNA、ET-A 受体mRNA表达水平亦明显增加,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论 采用升主动脉固定缩窄术成功建造了左心疾病相关肺动脉高压大鼠模型;与C组相比,H组肺小血管壁明显增厚,肺组织的Rho激酶mRNA、RhoA mRNA、ET-A受体 mRNA表达明显增高,该信号通路可能参与了左心疾病相关肺动脉高压的形成过程。     

三焦针法对阿尔茨海默病免疫功能影响的研究

[目的]观察三焦针法对阿尔茨海默病（AD）的临床疗效及对患者免疫功能的影响。[方法]收集AD患者32例和健康老年人30例。AD组给予三焦针法,取穴膻中、中脘、气海、血海、足三里和外关,健康组不给予任何干预。利用简易精神状态检查表（MMSE）、临床痴呆量表（CDR）、老年性痴呆评估量表-认知分量表（ADAS-cog）和日常生活活动量表（ADL）评价AD患者针刺前后的认知功能、非认知功能和日常生活能力。应用流式细胞术和酶联免疫吸附法（ELISA法）检测外周血CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺T细胞数量、CD4⁺/CD8+比例、免疫球蛋白（IgG）、白介素（IL）-1β、IL-2、IL-6、干扰素-γ（IFN-γ）的水平。[结果]针刺后AD组MMSE评分升高,CDR、ADAS-cog、ADL评分降低（P<0.05）。与健康组比较,AD组CD3⁺、CD8⁺T细胞数量减少,CD4⁺T细胞数量增加（P<0.05）,针刺后CD3⁺T细胞数量增加（P<0.05）。与健康组比较,AD组IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-γ水平增加（P<0.05）,IgG未见明显改变（P>0.05）,针刺后以上细胞因子水平降低（P<0.05）。[结论]三焦针法可能通过调节AD患者的免疫功能而改善其痴呆状态。     

浅析不同针法治疗阿尔兹海默病的研究进展

针灸治疗阿尔兹海默病(Alzheimer's disease,AD)具有早期性、安全性、有效性、良性双向调整的优势.根据AD发病的不同病因病机特点,学者们将其和针灸理论相结合,提出不同的针灸治则和选穴处方,如嗅三针法、益肾调督针法、三焦针法等.不同学术思想的出现往往有利于百家争鸣,就不同针法治疗AD进行综述,可为临床提...     

次声作用后大鼠血脑屏障的改变及意义

目的：探讨次声作用后血脑屏障通透性改变及意义,为研究次声的生物学效应机理奠定基础。方法：４０只ＳＤ大鼠随机分为正常对照,次声作用１次,７次及１４次４组。采用本校研制的次声压力仓,次声作用组用８Ｈｚ,１２０ｄＢ的次声按规定次数,每次作用２ｈ。硝酸镧心脏灌注法固定鼠脑,透射电镜下观察ＢＢＢ改变。结果：次声作用１次与７次组其ＢＢＢ改变相似,均有密连接开放,血管基膜外以至组织间隙内存在硝酸镧颗粒;至１４次     

Effect of thrombin on blood brain barrier permeability and its mechanism

Muchattentionhasbeengiventothrombin (TM )inthestudyofthepathogenesisofbrainedemaafteranintracerebralhemorrhage (ICH) PreviousstudieshaveindicatedthatanintracerebralinjectionofTMinducesmarkedbrainedema ,aneffectthatisreducedbytheTMinhibitorhirudin Therefore,TMmayplayamajorroleinbrainedemaafterICH However,themechanismbehindTM inducedbrainedemaispoorlyunderstood Inthisstudy ,wesoughttofurtherinvestigatetheeffectofTMonbloodbrainbarrier(BBB ) permeabilityandinvestigateits possiblemechanis…     

放射线照射降低血脑屏障的作用及促进化疗药物的渗透性

目的　探讨放射线对血脑屏障的影响,以及放疗与化疗的顺序性及交叉接触的最佳时间。方法　采用９９ｍ ＴＣＧＨ 显影技术观察不同剂量放射线对血脑组织屏障的影响,采用静脉注射氨甲喋呤（ＭＴＸ）观察不同剂量放射线对血脑脊液屏障的影响。结果　放射线有降低血脑屏障的作用,２０ Ｇｙ 射线照射后血脑屏障功能开始下降,两屏障功能下降程度与照射剂量有关。结论　放射线有降低血脑组织屏障和血脑脊液屏障的作用,且与照射剂量有关。照射２０ Ｇｙ 后开始化疗是最佳时机     

灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠明胶酶及血脑屏障通透性的影响

目的：通过检测脑缺血再灌注小鼠明胶酶A（MMP-2）、明胶酶B（MMP-9）的活性及脑组织中伊文思蓝的含量，探讨灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠明胶酶及血脑屏障（BBB）通透性的影响。方法：复制脑缺血再灌注模型，并于术前15min腹腔注射灯盏花素注射液10mg／kg，采用明胶酶谱分析法检测脑组织海马区明胶酶的活性，同时经尾静脉注射2％伊文思蓝，检测脑组织伊文思蓝含量。结果：脑缺血再灌注后明胶酶（A、B）活性增加；灯盏花素组MMP-9活性明显低于脑缺血再灌注组，而灯盏花素对MMP-2作用不显著。脑缺血再灌注后4h起脑组织伊文思蓝渗出逐渐增多，48h达高峰，以后有下降趋势。灯盏花素组于术后伊文思蓝渗出明显低于相应时间的脑缺血再灌注组（P〈0．05）。结论：灯盏花素具有降低脑缺血再灌注小鼠明胶酶B的活性、降低血脑屏障通透性的作用。     

针刺对痴呆小鼠大脑神经元超微结构的影响

[目的] 研究三焦针法对痴呆小鼠皮质和海马CA1区神经元线粒体结构的影响。[方法] 选取雄性SAMP8小鼠30只(随机分成模型组、非穴组、穴位组)和10只SAMR1小鼠(正常对照组)。持续治疗30日后,采用电子显微镜对小鼠大脑皮质顶叶和海马CA1区进行观察。[结果] R1组皮质顶叶和海马CA1区超微结构正常;SAMP8模型组小鼠神经元部分线粒体肿大、部分变性、部分脂肪化和坏死;SAMP8三焦针刺组线粒体肿大减少,少数线粒体变性,脂肪化和坏死;非经穴针刺组线粒体少数介于两者之间。[结论] 三焦针法能有效改善SAMP8小鼠大脑皮质和海马CA1区神经原线粒体病理性损伤。     

Effect of anisodamine on changes of blood-brain barrier permeability following brain injury in rabbits

The changes of blood-brain barrier(BBB)permeability following brain injury werestudied quantitatively by using colloidal gold(CG)particles of various sizes as tracers in 57 rab-bits.In addition,water content in brain tissues was determined.The brain-injured rabbits re-ceived intravenous injection of anisodamine in a dose of 0.3 mg/kg BW at 5rain or 3h after braininjury,and the effect of anisodamine on aherations of BBB permeability and water content of thebrain tissue after brain injury was investigated.The results indicated that an increase of BBBpermeability began at 30min after injury with only a few of 5nm CG tracers present in the endo-cytic pits and endothelial microvilli,and there were 10nm CG tracers passing through the BBB at3 h after brain injury.The increase of BBB permeability reached its peak at 6 h after brain in-jury.More 15nm CG tracers penetrated the BBB by way of pinocytotic vesicule transportationand opening of tight junctions between endothelial cells.The water content in the brain tissueincreased,which was closely correlated to the above-mentioned EBB permeability and giving ad-vantages to the treatment of traumatic brain edema in the present study.     

山莨菪碱对脑损伤后血脑屏障通透性变化的影响

选用57只家兔,采用各种不同大小的胶体金(CG)微粒示踪,研究脑损伤后血脑屏障(BBB)通透性变化,并检测脑组织水含量。同时给予脑损伤兔静脉注射山莨菪碱(654—2).剂量为0.3mg/kg.观察其对脑损伤BBB通透性及脑组织水含量变化的影响。实验结果表明,脑损伤后30min BBB通透性已升高,有5nmCG微粒进入内皮小凹和微绒毛;伤后3h,10nmCG透过BBB.伤后6h.BBB通透性增高达高峰,较多15nmCG以胞饮转运或经开放的内皮细胞紧密连接处透过BBB入脑.脑组织水含量明显升高。与BBB通透性变化直接相关。山莨菪碱具有显著地降低BBB通透性的作用.有利于外伤性脑水肿的治疗。     

静脉注射脂多糖和小剂量肾上腺素后血脑屏障的开放

为了解机体免疫系统受激发的状态下血脑屏障能否开放及血压升高对此过程的影响。方法以大肠杆菌来源的脂多糖ＬＰＳ为免疫的,或（和）给以单独给药时不能开放血脑屏障的小剂量肾上腺素,以伊思蓝为血脑屏障开放的指示剂进行研究。