细胞色素P450 3A4和3A5对磷酸二酯酶5抑制剂（PDE5Is）-西地那非，优地那非，伐地那非3种药物代谢的影响

细胞色素P450 3A5（CYP3A5）基因多态性在细胞色素P4503A（CYP3A）底物代谢上的作用目前尚不清楚，Ku HY等人进行了一项相关研究，分析了CYP3A4和CYP3A5两种异构体对PDE，抑制剂-西地那非，优地那非，伐地那非3种药物代谢的差异。研究者采用重组的CYP3A和15个以CYP3A5基因表型为主的人肝微粒体进行体外研究，     

冻存对大量分离的人肝细胞色素氧化酶P4503A4活性的影响

成功的冻存使人肝细胞有可能用于暂时替代肝脏治疗急性肝衰竭和多次、反复治疗肝代谢性疾病.P4503A4是肝细胞色素P450氧化酶系中重要成分,在内外源化合物的代谢中起重要作用,包括环孢霉素、FK506[1].所以,该酶可衡量肝细胞冻存后功能保存,对肝移植后肝功能检测有重要意义.我们用高效液相色谱法(HPLC)测定P450A4酶活性,观察冻存对大量分离的人肝细胞P4503A4酶活性的影响.     

冻存对大量分离的人肝细胞色素氧化酶P4503A4活性的影响

成功的冻存使人肝细胞有可能用于暂时替代肝脏治疗急性肝衰竭和多次、反复治疗肝代谢性疾病.P4503A4是肝细胞色素P450氧化酶系中重要成分,在内外源化合物的代谢中起重要作用,包括环孢霉素、FK506[1].所以,该酶可衡量肝细胞冻存后功能保存,对肝移植后肝功能检测有重要意义.我们用高效液相色谱法(HPLC)测定P450A4酶活性,观察冻存对大量分离的人肝细胞P4503A4酶活性的影响.     

冻存对大量分离的人肝细胞色素氧化酶P4503A4活性的影响

成功的冻存使人肝细胞有可能用于暂时替代肝脏治疗急性肝衰竭和多次、反复治疗肝代谢性疾病.P4503A4是肝细胞色素P450氧化酶系中重要成分,在内外源化合物的代谢中起重要作用,包括环孢霉素、FK506[1].所以,该酶可衡量肝细胞冻存后功能保存,对肝移植后肝功能检测有重要意义.我们用高效液相色谱法(HPLC)测定P450A4酶活性,观察冻存对大量分离的人肝细胞P4503A4酶活性的影响.     

冠脉搭桥术病人用地尔硫对咪达唑仑和阿芬太尼的药动学影响

咪达唑仑和阿芬太尼在体内经细胞色素P4503A酶(CYP3A)酶解代谢。钙通道阻滞药地尔硫(艹卓)(硫氮(艹卓)酮diltiazem)则抑制这些同工酶,因此可能影响麻醉的苏醒。 作者选择30例冠脉搭桥术(CABG)病人随机等分为地尔硫(艹卓)组(诱导前口服60mg并继续静滴地尔硫(艹卓)0.1mg·kg~(-1)·h~(-1),共23h)和对照组(只用安慰剂)。两     

CYP3A5基因型指导肝移植术后钙神经蛋白抑制剂的应用

肝移植术后早期的成功移植和长期优质的生活取决于免疫抑制剂治疗效果和不良反应之间的平衡,仅保持治疗性药物有效的血药浓度水平是有局限性的,还需根据受者的细胞色素P4503A5(CYP3A5)遗传背景和个体的高危因素选择合适的钙神经蛋白抑制剂(CNI),并选择适当的药物剂量。但目前CYP3A5与环孢素(CsA)合适剂量或初始剂量之间的关系仍需要进一步探讨。本文从CYP3A5的特点、CYP3A5基因表达对肝移植术后CNI用药的影响、CYP3A5基因多态性对临床疗效的影响、根据基因型个性化精准化选用CNI等方面进行述评。关注CNI的精准化用药,从针对所有受者的综合治疗方案向个性化精准化治疗方案转变。     

五酯胶囊对CYP3A5基因表达型特发性膜性肾病他克莫司药代动力学影响的初步探索

目的 分析五酯胶囊(wuzhi capsules,WZC)对CYP3A5基因表达型特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)患者他克莫司(tacrolimus,TAC)药代动力学指标的影响程度,初步探索此类患者联用WZC后TAC的用药剂量.方法 2013年7月至2015年3月本院肾内科住院经肾穿刺病理活检诊断为IMN,荧光染色原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测CYP3A5基因分型均为CYP3A5基因表达型(即AA、AG)的患者68例,随机数字表分为治疗组(WZC+ TAC)与对照组(TAC),比较两组患者治疗开始8周、16周、24周时TAC用药剂量D[mg·(kg·d)-1]、全血谷浓度C0 (ng/mL)、全血谷浓度与用药剂量的比值C0/D[(ng/mL)/(mg· (kg·d)-1)],并记录治疗24周两组患者有效率、不良反应发生率.结果 治疗开始8周、16周、24周的各访视点上,两组患者的C0差异无统计学意义(P＞0.05);组间比较:治疗组的D较对照组显著降低(P ＜0.001),C0/D较对照组显著升高(P＜0.001);两组患者组内比较时不同访视点D、C0/D的差异无统计学意义(P＞0.05),治疗组TAC的平均用药剂量为(0.037±0.002)mg·(kg·d)-1,约为对照组平均用药剂量的60％.治疗24周,两组患者的治疗有效率以及不良反应发生率的差异无统计学意义(P＞0.05),但治疗组的有效率较对照组有所升高.结论 WZC可平稳、安全的显著提高CYP3A5基因表达型IMN患者TAC全血谷浓度,进而减少用药剂量、减轻患者的经济负担,为其临床推广创造条件.     

不同浓度七氟醚后处理对心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 探讨不同浓度七氟醚后处理对大鼠离体心脏缺血-再灌注损伤的保护作用.方法 SD雄性大鼠90只,随机分为六组(n=15):N组灌注150min,其余各组灌注30 min,然后全心缺血30 min,再灌注90min;Ⅰ、S1、S2、S3、S4组在再灌注开始时分别给予含0％、1％、2％、3％、4％七氟醚的K-H液灌注5min.记录左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP).再灌注后测定心肌梗死面积,评估线粒体损伤程度,检测线粒体和胞质细胞色素C水平.结果 与N组相比,Ⅰ组和S1、S2、S3、S4组LVEDP、胞质细胞色素C水平明显升高,LVDP、线粒体细胞色素C水平明显降低(P＜0.05).与Ⅰ组和S1组相比,S2、S3、S4组LVEDP、胞质细胞色素C水平明显降低,LVDP、线粒体细胞色素C水平明显升高(P＜0.05).再灌注后Ⅰ组和S1组的梗死面积明显大于S2、S3、S4组(P＜0.05).结论 2％～4％七氟醚后处理对大鼠离体心脏再灌注损伤有明显的保护作用,可能与减轻线粒体损伤,抑制细胞色素C释放有关.     

细胞色素酶CYP3A4基因多态性研究进展

背景 药物代谢酶的基因多态性是导致药物在体内处置和反应存在明显个体差异的重要因素之一,而细胞色素酶P450家族的CYP3A4 (cytochrome P450 3A4)酶是药物及外源性物质的主要代谢酶.CYP3A4基因多态性是导致这些药物代谢个体差异的主要原因.目的 就CYP3A4基因多态性对药物代谢的影响作一综述.内容 CYP3A4主要分布于肝脏和小肠内,其基因结构、酶活性的个体差异以及遗传多态性的种族差异,是导致药物作用和副作用个体差异的主要原因,甚至与许多疾病包括肿瘤等的发病有关.趋向 对CYP3A4基因多态性的研究将有助于提高药物疗效,避免副作用发生,预防和治疗某些疾病尤其是肿瘤等疾病.     

肝移植术后受体他克莫司个体化用药与供体细胞色素P4503A亚家族多肽5和白细胞介素-18基因多态性的关系

目的 探讨肝移植供体细胞色素P4503A亚家族多肽5(CYP3A5)和白细胞介素-18(IL-18)基因多态性与受体术后他克莫司血药浓度/给药剂量的关系.方法 应用测序技术检测84例肝移植患者供体CYP3A5 rs776746和IL-18rs5744247位点单核苷酸多态性,分析基因多态性与他克莫司代谢表型(全血谷浓度/剂量比值,C/D,ng· ml-·mg-·kg-)的相关性.结果 肝移植术后,供体IL-18 rs5744247 GG+ GC基因型患者他克莫司C/D值[(163.1±100.8)ng·ml-1.mg-1·kg-1]明显高于CC基因型患者[116.7±78.2)ng.ml-1·mg-1·kg-1,P＜0.01].移植表达CYP3A5蛋白(*1基因型)供体的患者中,不同供体IL-18基因型患者C/D值(ng.ml-1·mg-1·kg-1) (GG+ GC:133.4±65.3;CC:88.3±39.9)差异有统计学意义(P＜0.05).结论 联合检测供体CYP3A5rs776746和IL-18 rs5744247基因型有助于指导他克莫司个体化用药.     

环孢素A对大鼠肝脏缺血再灌注后线粒体细胞色素C释放及肝细胞凋亡的影响

目的探讨线粒体膜通透性转换孔抑制剂———环孢素A对大鼠肝脏常温缺血再灌注后线粒体细胞色素C的释放和肝细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组(IR)、CsA组(IR+CsA)。CsA组术前连续给予CsA 10 mg/(kg.d)灌胃4 d,其余组给予等量生理盐水。大鼠肝脏热缺血再灌注模型参考Nauta的方法。缺血时间60 min,免疫组化法检测再灌注0、1、6、247、2 h等不同时相的肝细胞胞浆细胞色素C,Western blot检测胞浆细胞色素C含量,Tunel法检测肝细胞凋亡。结果缺血再灌注引起肝细胞线粒体发生线粒体膜通透性转换(mito-chondrial permeabdity transion,MPT)作用,细胞色素C释放入胞浆,IR组及CsA组与假手术组相比,再灌注后0、1、62、4 h,细胞色素C释放明显增多,再灌注6、247、2 h,肝细胞凋亡明显增多(P<0.01);CsA组与IR组相比,再灌注1、62、4 h细胞色素C释放明显减少(P<0.01),6、24 h细胞凋亡发生率明显降低(P<0.05)。结论环孢素A可能通过抑制MPT,减少了缺血再灌注后线粒体细胞色素C的释放,减少了肝细胞的凋亡。     

Clusterin前导序列抗前列腺癌细胞凋亡作用的研究

目的　探讨clusterin前导序列在抗前列腺癌细胞凋亡中的作用。　方法　培养转染全长clusterin序列的LNCaP细胞 (简称A)及缺少前导序列clusterin的LNCaP细胞 (简称B)为试验组 ,培养野生型 (简称L)及转染PIRES2 EGFP永久表达载体的LNCaP细胞 (简称M)为对照组 ,RT PCR法检测 4组细胞的clusterinmRNA水平。以TNF α进行诱导 ,检测L组细胞clusterinmRNA的变化 ,MTT及ELISA法检测 4组细胞的增殖活性与凋亡情况。　结果　B、A组细胞clusterinmRNA水平均显著高于L、M组 (P均 <0 .0 1) ;B、A组间差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。TNF α作用 2h时 ,与对照组 (A =12732 .0± 5 1.1)相比L组细胞clusterinmRNA有一过性升高 (A =15 6 4 2 .0± 6 4 .3) ,t =- 77.10 6 ,P <0 .0 1;12、2 4hmRNA显著降低 (A =1170 5 .3± 30 .7,984 8.0± 6 7.4 ,t=2 4 .890 ,4 8.0 2 0 ,P均 <0 .0 1) ;TNF α作用 2 4h后 ,A组细胞存活比例 (0 .75 97± 0 .0 2 5 1)显著高于B组细胞 (0 .6 6 97± 0 .0 185 )及对照组 (0 .6 80 8± 0 .0 2 2 2 ,0 .6 991± 0 .0 2 91) ,P均 <0 .0 1;A组细胞凋亡程度 (A =0 .32 6 5± 0 .0 387)显著低于B组细胞 (A =0 .5 6 5 0± 0 .0 32 4 )及对照组 (A =0 .5 892± 0 .0 4 18,0 .6 2 36± 0 .0 311,P均     

A型肉毒毒素治疗挛缩性瘢痕

目的 探索A型肉毒毒素(botulinum toxin type A,BTXA)治疗挛缩性瘢痕的疗效.方法 选取26例挛缩性瘢痕患者,随机分为A型肉毒毒素组(BTXA组)和曲安奈德组(TAC组,对照组),注射药物治疗前测量各组患者瘢痕长轴长度,并于注射后再次测量其长度,1次/月,共6次,通过比较治疗前后差值评价药物疗效.切取各组瘢痕组织行免疫组织化学检测,观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及肌球蛋白-Ⅱ的表达情况.结果 药物作用1个月后,BTXA组较TAC组瘢痕挛缩程度明显减轻(P＜0.05),尤以6个月时差异最明显,BTXA组和TAC组瘢痕长轴长度差值分别为(1.23±0.42) cm和(0.56±0.33) cm.免疫组织化学结果显示,BTXA组瘢痕内α-SMA及肌球蛋白-Ⅱ表达较TAC组明显减少(P＜0.05).结论 A型肉毒毒素治疗挛缩性瘢痕操作简单、效果明显,值得推广应用.     

免疫性血小板减少性紫癜脾切除血液学疗效与脾脏细胞免疫异常的关系

目的探讨免疫性血小板减少性紫癜(ITP)脾切除血液学疗效与脾脏细胞免疫的关系。方法应用免疫组织化学技术,采用抗人CD3、CD4、CD8单克隆抗体和抗人S100多克隆抗体,分别检测33例脾切除有效(A组)和14例脾切除无效(B组)的ITP患者的脾脏组织标本CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞和S100+细胞的表达情况,对照组为12例因外伤性脾破裂行脾切除术的脾脏组织标本(C组)。显微镜下观察脾脏组织动脉周围淋巴鞘(PALS)中染色阳性细胞的百分数,并计算CD4+/CD8+比值。分析3组CD3+、CD4+、CD8+、S100+细胞百分数和CD4+/CD8+细胞比值的差异。结果 3组PALS中CD3+、CD4+细胞百分数差异均无统计学意义;A组CD8+细胞百分数高于B组(P=0.001)和C组(P0.01),而C组PALS中CD4+/CD8+比值分别高于A组(P=0.001)和B组(P=0.001);A组PALS中S100+细胞百分数高于B组(P=0.015)。结论 ITP患者脾脏细胞免疫存在异常。脾切除血液学疗效与脾脏细胞免疫异常有密切关系。     

氙、异氟烷和氧化亚氮对神经胶质瘤细胞凋亡和β淀粉样蛋白含量的影响

目的探讨氙、异氟烷和氧化亚氮对H4人神经胶质瘤细胞凋亡和β淀粉样蛋白(amyloid-βprotein,Aβ)含量的影响。方法 H4人神经胶质瘤细胞(H4)和转染了淀粉样前蛋白的H4人神经胶质瘤细胞(H4-APP)分别暴露于70%氙、2%异氟烷或74%氧化亚氮中2 h,孵育24 h后检测细胞Bcl-2、Bax、NF-κB和裂解的caspase-3表达、细胞活力和细胞培养液中Aβ含量,计算Bcl-2/Bax。结果 70%氙或2%异氟烷处理2 h使H4-APP细胞Bcl-2/Bax增高(P0.05),H4-APP细胞裂解的caspase-3表达下调并增强H4-APP细胞活力(P0.05)。70%氙、2%异氟烷或74%氧化亚氮处理2 h使H4-APP细胞NF-κB表达下调(P0.05)。所有H4-APP细胞产生较多的Aβ(P0.05),70%氙、2%异氟烷或74%氧化亚氮暴露2 h未使H4-APP细胞产生Aβ增加(P0.05)。结论短时间接触70%氙或2%异氟烷可能与Bcl-2/Bax信号通路和抑制caspase-3激活防御细胞凋亡有关。     

当归对大鼠椎间盘髓核细胞自噬及氧化应激损伤的作用及机制研究

目的 :探讨当归降低椎间盘髓核细胞自噬及氧化应激损伤的作用及其机制。方法 :从大鼠椎间盘中分离并培养SD大鼠原代髓核细胞,用不同浓度(0.1mg/ml、1mg/ml、5mg/ml)的当归注射液干预第3代细胞,噻唑蓝(methyl thiazolete trazolium,MTT)法检测适当的当归浓度。将原代髓核细胞随机分成3组:A组(对照组)、B组(H2O2组)和C组(当归+H2O2)组。A组用生理盐水处理24h,不进行H2O2刺激,B组用400μmol/L H2O2分别刺激0.5h、1.5h和3h,C组用适当浓度当归注射液预处理24h后,400μmol/L H2O2分别刺激0.5h、1.5h和3h。流式细胞术检测各组细胞不同时间的凋亡率,western blot检测凋亡相关蛋白细胞色素C、Bcl-2和Bax及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62、p-AKT、p-m TOR和p-p70S6K的表达。结果:与其他浓度当归处理组比较,1mg/ml当归注射液可显著增加细胞存活(P0.05)。与A组相比,B组细胞凋亡率随着时间的延长逐渐增加,细胞色素C的表达增加(P0.05),Bcl-2/Bax的比例减小(P0.05),LC3-Ⅱ/Ⅰ的比例增加(P0.05),p62、p-AKT、p-m TOR和p-p70S6K的表达降低(P0.05);与B组相比,C组中细胞凋亡率和细胞色素C、p62、p-AKT、p-m TOR和pp70S6K的表达均降低(P0.05),Bcl-2/Bax和LC3-Ⅱ/Ⅰ的比例升高(P0.05)。结论 :1mg/ml当归注射液能够抑制大鼠髓核细胞凋亡,这可能与线粒体凋亡通路被阻断相关;1mg/ml当归能促进其髓核细胞自噬,这可能与AKT/m TOR信号通路被抑制相关。     

TAC与TC新辅助化疗方案治疗局部晚期乳腺癌疗效比较

目的 比较TAC与TC新辅助化疗方案治疗局部晚期乳腺癌的临床疗效和不良反应.方法 经病理等检查确诊局部晚期乳腺癌患者257例,随机分为TAC组(130例)及TC组(127例),分别给予TAC方案、TC方案化疗4个周期.TAC组129例、TC组124例化疗结束2周后行乳腺癌改良根治术.比较TAC组、TC组疗效和不良反应,治疗前、后TNM分期变化及术后并发症.结果 临床疗效比较TAC组优于TC组,其差异有统计学意义(P＜0.05);TNM分期较新辅助化疗前降低(P＜0.05),不良反应比较差异无统计学意义(P＞0.05);术后并发症比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TAC及TC新辅助化疗方案对局部晚期乳腺癌均有效,TAC方案优于TC方案.     

丹参酮ⅡA通过抑制磷酸肌醇3激酶-蛋白激酶B-雷帕霉素靶蛋白-p70S6激酶1通路促进胃癌细胞在体外的自噬

目的 探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)体外对人胃癌SGC7901细胞自噬的影响及机制.方法 不同浓度(0.5、1、2和4 mg/L) TanⅡA作用体外培养的胃癌SGC7901细胞24、48、72 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活力的改变;TanⅡA(1、2和4mg/L)作用48 h,流式细胞术检测细胞自噬小体的含量;Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ的蛋白的表达水平及磷酸肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-p70S6激酶1(p70S6K1)的活性.结果 0.5 mg/L TanⅡA对胃癌SGC7901细胞没有明显的生长抑制作用,1、2和4 mg/L TanⅡA对胃癌SGC7901细胞则有明显的生长抑制作用,且抑制作用呈剂量和时间依赖性(P＜0.05);流式细胞分析结果显示,1、2和4 mg/L TanⅡA组细胞内酸性自噬小体含量分别为(9.77±1.92)、(13.28 ±2.95)和(16.54±3.28)％,与对照组(4.16±0.64)％比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Westem blot结果显示,1、2和4 mg/L TanⅡA作用后胃癌SGC7901细胞中Beclin-1的相对表达量为0.62±0.12、0.71±0.11和0.85±0.13,与对照组(0.37±0.05)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);1、2和4 mg/L TanⅡA作用后胃癌SGC7901细胞中LC3-Ⅱ的相对表达量为0.48±0.06、0.65 ±0.11和0.86 ±0.14,与对照组(0.31±0.03)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);此外,1、2和4 mg/L TanⅡA作用后胃癌SGC7901细胞PI3K-Akt-mTOR-p70S6K1活性则下降(P＜0.05).结论 TanⅡA可通过抑制PI3 K-Akt-mTOR-p70S6K1信号通路促进人胃癌SGC7901细胞自噬.     

缺氧状态下大鼠肝细胞糖酵解变化的实验研究

目的　探讨缺氧状态下肝细胞糖酵解的改变。　方法　配制 3种不同浓度的低氧混合气体 ,用以体外培养大鼠正常肝细胞株BRL ,相应地设为A、B、C组 ,每组设 1、2、4、8、16h 5个缺氧时相点。另以正常肝细胞作为对照。采用生物化学方法 ,检测各时相点肝细胞糖酵解关键酶己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶 (PFK)、丙酮酸激酶 (PK)、乳酸脱氢酶 (LDH)的活性以及培养液中乳酸 (LA)含量的变化。　结果　 (1)与正常值比较 ,A、B组BRL细胞的LDH活性在各缺氧时相点均明显增加(P <0 .0 5 ) ,C组细胞的LDH活性从缺氧 2h开始明显增加 (P <0 .0 5 )。 (2 )与正常值比较 ,A组细胞的HK活性在 1、2、4、16h时明显升高 (P <0 .0 5 ) ;B、C两组细胞的HK活性在 1h时明显升高 (P<0 .0 5 )。A组细胞的PFK活性在 1、4h时明显升高 (P <0 .0 5 ) ;B、C两组细胞的PFK活性在 4h时明显升高 (P <0 .0 5 )。 3组细胞的PK活性在各缺氧时相点均明显增高 (P <0 0 5 )。 (3)与正常值比较 ,A、B两组细胞培养液的LA浓度在缺氧 2h时开始增加 (P <0 .0 5 ) ,C组细胞的LA浓度在缺氧 4h时开始增加 (P <0 .0 5 ) ,并均随时间的延长而升高。　结论　缺氧可启动肝细胞糖酵解。     

机械牵张对A549细胞穿透素-3表达的影响

目的 探讨械牵张对肺泡上皮腺癌细胞A549(A549细胞)穿透素-3(PTX-3)表达的影响.方法 体外培养人A549细胞,将A549细胞接种于包被胶原基底膜的培养板上,待细胞贴壁并融合50%后,随机分为正常对照组(Ⅰ组)、假机械牵张组(Ⅱ组)、机械牵张组(Ⅲ组)、siRNA对照组(Ⅳ组)和siRNA+机械牵张组(V组).Ⅳ组仅转染PTX-3 siRNA;Ⅴ组转染PTX-3 siRNA后24 h,进行周期性机械牵张4 h.机械牵张结束后24 h时测定PTX-3 mRNA、PTX-3蛋白水平及细胞凋亡情况.结果 与Ⅰ组和Ⅱ组比较,Ⅲ组PTX-3 mRNA和PIX-3蛋白水平上调,Ⅳ组和Ⅴ组上述两指标下调(P＜0.05或0.01);与Ⅲ组比较,Ⅴ组上述两指标下调(P＜0.01).Ⅲ组和Ⅴ组细胞凋亡率高于Ⅱ组(P＜0.01);Ⅴ组细胞凋亡率低于Ⅲ组(P＜0.01).结论 机械牵张可上调A549细胞PTX-3 mRNA表达.