微阵列芯片技术在耐多药结核病临床诊断中的应用研究

目的 探讨微阵列芯片技术在耐多药结核病（multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB）临床诊断中的应用。方法 收集2020年6月至2021年5月经滨州市中心医院确诊的245例住院肺结核患者的标本（痰液标本125例和痰培养分离菌株120例）。痰液标本同时采用DNA微阵列芯片技术和传统培养法检测其结核杆菌阳性率。痰液标本和分离菌株均采用DNA微阵列芯片技术进行肺结核耐多药检测和分枝杆菌菌种鉴定。结果 125例痰液标本经DNA微阵列芯片技术和痰培养法检测,阳性率分别为58.4%（73/125）和24.8%（31/125）,两种方法比较差异有统计学意义（2=14.520,P<0.001）。采用DNA微阵列芯片技术检测125例痰液标本和120例分离菌株,共检出结核分枝杆菌复合群192例,非结核分枝杆菌7例。结核分枝杆菌复合群192例检出耐药者41例,其中耐异烟肼15例,耐利福平19例,同时耐两种药物7例。非结核分枝杆菌包括胞内分枝杆菌4例,堪萨斯分枝杆菌2例,鸟分枝杆菌1例。结论 DNA微阵列芯片技术检测周期短,能同时进行结核分枝杆菌耐多药检测和菌种鉴定,对MDR-TB的早期诊断和治疗有较大的临床应用价值。     

台州地区非结核分枝杆菌流行趋势研究

目的 了解台州地区临床流行的非结核分枝杆菌的种类和感染趋势,为临床诊疗NTM肺病提供依据。方法 回顾性分析2015～2018年来源于台州市不同地区就诊和送检于恩泽医疗中心(集团)的1156株临床分离分枝杆菌菌株,采用基因芯片进行菌种鉴定。结果 1156例分枝杆菌分离出非结核分枝杆菌228例,其中胞内分枝杆菌125例,浅黄分枝杆菌45例,鸟分枝杆菌20例,龟/脓肿分枝杆菌11例,草分枝杆菌16例,不产色分枝杆菌4例,金色分枝杆菌2例,堪萨斯分枝杆菌2例,瘰疬分枝杆菌1例,戈登分枝杆菌1例,海/溃疡分枝杆菌1例。男141例,占61.84%,女87例,占38.16%。结论 台州地区非结核分枝杆菌感染有逐年上升的趋势,主要以胞内分枝杆菌为主,分离人群以男性居多。     

海南省某医院2014—2021年脓肿拟分枝杆菌分离鉴定及药物敏感性分析

目的 通过对海南医学院第二附属医院肺部感染患者脓肿拟分枝杆菌复合群(Mycobacteroides abscessus complex,MABC)进行菌种鉴定，探讨海南地区MABC肺部感染菌种类型、药物敏感性及人群分布情况。方法 收集2014—2021年期间就诊于海南医学院第二附属医院疑似肺结核患者的呼吸道标本并进行分枝杆菌分离培养，通过对硝基苯甲酸/噻吩-2-羧酸肼(PNB/TCH)培养基与DNA微阵列芯片法初步鉴定出非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacteria,NTM)菌株，再采用hsp65及rpoB基因测序法鉴定MABC及其亚种，并采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验。结果 研究期间共收集3 025例疑似肺结核患者呼吸道标本，从123例患者呼吸道标本中分离培养鉴定出124株MABC菌株，包括脓肿拟分枝杆菌脓肿亚种(Mycobacteroides abscessus subsp.abscessus)74株，脓肿拟分枝杆菌马赛亚种(Mycobacteroides abscessus subsp.massiliense)38株，脓肿拟分枝杆菌博莱亚种(M...     

2013—2021年杭州某综合医院非结核分枝杆菌肺病流行状况分析

目的 分析杭州市结核病定点诊治医院2013—2021年非结核分枝杆菌（nontuberculosis mycobacteria,NTM）肺病的流行状况,为杭州市该病的临床防治诊疗及流行病学提供依据。方法 收集2013—2021年浙江大学医学院附属杭州市胸科医院结核科及呼吸与危重症医学科收治的疑似肺结核患者,经抗酸杆菌涂片及BACTEC MGIT960确诊为分枝杆菌感染,采用实时荧光聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）检测结核分枝杆菌复合群（Mycobacterium tuberculosis complex,MTB）与NTM的菌群鉴定,对鉴定为NTM的菌株采用HAIN基因分型鉴定法及DNA微阵列技术进行菌种鉴定,并对感染者的相关资料进行总结分析。结果 2013—2021年,从37 520例疑似肺结核患者标本中分离出NTM菌株1257株,检出率从2013年的0.8%上升到2021年的6.7%。患者中男性占50.76%,女性占49.24%。年龄分布上,60~79岁的中老年患者最多,占55.0%。2013年检出3种NTM菌种,分别是胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和龟/脓肿分枝杆菌;2021年菌种分布达13种,前三位分别是胞内分枝杆菌、龟/脓肿分枝杆菌和鸟分枝杆菌。结论 2013—2021年杭州地区NTM检出率持续升高,感染人群以男性、60~79岁的中老年为主,感染菌种以胞内分枝杆菌、龟/脓肿分枝杆菌和鸟分枝杆菌为主。     

基因芯片快速鉴定分枝杆菌菌种方法的建立

目的：利用基因芯片技术,建立一种能快速、准确鉴定分枝杆菌菌种的方法,并验证其临床应用价值。方法根据23种分枝杆菌基因序列设计特异性探针并制作基因芯片,通过PCR‐反向点杂交鉴定23种分枝杆菌标准菌株、9种非分枝杆菌和103株分枝杆菌临床分离株的菌种。结果应用基因芯片技术检测23种分枝杆菌标准菌株和9种非分枝杆菌菌株,特异性为100％。103株临床分离株经鉴定87株为结核杆菌复合群（MTC）;16株为非结核分枝杆菌（NTM）,其中脓肿分枝杆菌5株、胞内分枝杆菌3株、鸟分枝杆菌3株、偶发分枝杆菌2株,以及堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、戈登分枝杆菌各1株。103株临床分离株鉴定结果与测序法完全一致,该方法最低检出限为103copy／mL。结论采用基因芯片技术能快速鉴定分枝杆菌菌种,并区分MTC和NTM,具有简便快速及准确性、特异性、灵敏度高的优点。     

云南省非结核分枝杆菌流行状况及病原谱分析

目的 分析云南省非结核分枝杆菌（NTM）流行状况及NTM病原谱和优势菌群,为云南省NTM的有效防治提供参考依据,以适应临床诊治工作需求。方法 对云南省2009、2013—2015年收集的5 406例临床分离分枝杆菌进行结核分枝杆菌复合群（MTC）与NTM鉴别,对鉴定为NTM的菌株进行菌种鉴定。结果 在5 406例临床分离分枝杆菌中共鉴别出NTM菌株87株,其中非结核分枝杆菌患者以男性为主,40岁以上患者多见。20~39岁患者占所有患者的18.39%,40岁以上占80.46%;患者的民族以汉族为主（占80.46%）,其次是彝族（8.05%）。优势流行的菌种前4位为胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、鸟分枝杆菌、偶发分枝杆菌,肺结核高中低疫情地区NTM分离率差异有统计学意义,且肺结核疫情与NTM分离率呈负相关。结论 云南省NTM分离率低,肺结核疫情高的地区非结核分枝杆菌分离率低,反之则高,地区差异明显,因此应加强NTM流行状况监测,同时结合优势菌种优化诊治流程,为临床早诊断、早治疗提供帮助。     

PCR方法鉴定结核分枝杆菌临床分离株

目的:用3对引物PCR扩增的方法对结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定.方法:将3对特征性的结核分枝杆菌标记基因:MPT40基因、α抗原基因和IS6100插入序列,分别放入PCR体系中,在各自的退火温度下进行PCR扩增,通过对扩增产物的不同带型进行分析,对结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定.结果:用3对引物PCR扩增的方法可将各种类型的结核分枝杆菌以及结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌鉴别开.结论:3对引物PCR扩增的方法是一种有效的结核分枝杆菌菌种鉴定的方法,可用于结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌以及各种类型的结核分枝杆菌的区分.     

应用PCR技术快速鉴定结核分枝杆菌复合群菌种

目的 建立快速鉴定结核分枝杆菌复合群菌种的方法.方法 将7对结核分枝杆菌复合群各菌种特异性引物(Mtbc1-7)进行聚合酶链反应(PCR)扩增,通过对扩增产物的不同系带型进行分析,对已知标准株和96株临床分离株进行菌种鉴定.结果 用3株结核分枝杆菌复合群(MTBC)标准株,9株非分枝杆菌标准株以及27株非结核分枝杆菌的分枝杆菌(MOTT)对7对结核分枝杆菌复合群各菌种特异性引物进行特异性鉴定,结果证明引物Mtbc1能鉴定出分枝杆菌和非分枝杆菌;引物Mtbc2能鉴定出MOTT和MTBC;引物Mtbc3能鉴定出田鼠分枝杆菌;引物Mtbc4能从MTBC中识别出牛分枝杆菌和卡介苗;引物Mtbc5能鉴定出非洲分枝杆菌Ⅱ型和结核分枝杆菌;引物Mtbc6和引物Mtbc4结合能鉴定出卡介苗;引物Mtbc7和引物Mtbc5联合能鉴定出canettii分枝杆菌.96株临床分离株经7对引物扩增,扩增结果显示MOTT 20株,牛分枝杆菌1株,卡介苗1株,canettii分枝杆菌3株,田鼠分枝杆菌3株,非洲分枝杆菌Ⅰ型3株,caprae分枝杆菌1株,结核分枝杆菌或非洲分枝杆菌Ⅱ型64株.结论 应用PCR技术鉴定结核分枝杆菌复合群菌种结果准确可靠,且具有简便和快速等优点,有较大的分子流行病学应用价值.     

免疫受损状态下非结核分枝杆菌感染的临床特征

目的 探讨免疫受损状态下并发肺部非结核分枝杆菌(NTM)的感染率、菌种构成、临床特点和治疗.方法 对结核内科分枝杆菌培养(+)的免疫受损患者,进行菌种鉴定及药敏试验,分析NTM感染病例的临床资料.结果 105例免疫受损患者从痰、支气管冲洗液中检出可确定的NTM感染18例(17.1%),分离出NTM菌株40株,其中鸟-胞内分枝杆菌复合群(MAC)5例,MAC +玛尔摩1例,龟-脓肿分枝杆菌3例,龟-偶发分枝杆菌1例,苏尔加+脓肿分枝杆菌1例,堪萨斯分枝杆菌2例,玛尔摩分枝杆菌1例,耻垢分枝杆菌2例,胃分枝杆菌1例,次要分枝杆菌1例.耐药性高,治疗8例,好转5例,未治或弃治10例,死亡4例.结论 免疫受损状态下并发NTM的感染率较为严重,其菌种比较集中在MAC及快生长群(RGM),存在复合群感染、混合感染的特点.临床表现无特异性,肺部病变分布广泛,呈多形态改变,呈高度耐药性,由于基础疾病的存在治疗更加困难.     

广州地区临床分离非结核分枝杆菌菌种鉴定及耐药结果分析

目的 分析广州地区临床分离的非结核分枝杆菌(NTM)的菌种鉴定结果及耐药情况.方法 用改良罗氏培养基培养法分离680例疑似结核病患者痰液,对确诊为NTM的38例,用传统生化反应进行菌种鉴定,采用以罗氏培养基为基础的绝对浓度法做NTM药物敏感试验.结果 38株NTM按Runyon分类法,检出感染菌种分布为Ⅰ群1株(2.6...     

应用寡核苷酸探针阵列法快速鉴定临床分离株中的分支杆菌

目的:建立一种简便、快速、灵敏、特异的分支杆菌菌种鉴定方法。方法:通过16S rRNA聚合酶链反应(polym erase chain reaction,PCR)-单链构象多态性(single-stranded conform ation polymorph ism,SSCP)分析鉴定253株分支杆菌临床分离株;应用16S rRNA PCR-寡核苷酸探针与待测菌株生物素标记的16S rRNA基因PCR产物进行反向斑点杂交。结果:分析28种分支杆菌标准菌株和9种非分支杆菌菌株,结果显示寡核苷酸探针是特异的。253株分支杆菌临床分离株,198株为结核分支杆菌复合群,55株为非结核分支杆菌。经寡核苷酸探针阵列法分析,198株结核分支杆菌分离株鉴定为结核分支杆菌复合群,36株鉴定为非结核分支杆菌,分别与相对应的特异探针杂交,另19株与分析探针杂交阴性。结论:16S rRNA PCR-寡核苷酸探针阵列法灵敏度高、特异性强、简便、快速,可用于鉴定临床分离株分支杆菌菌种。     

母牛分支杆菌菌苗治疗非典型分支杆菌肺病的临床观察

目的评价母牛分支杆菌(微卡)菌苗对非典型分支杆菌(NTM)肺病的疗效。方法将31例经菌型鉴定为NTM肺病的患者随机分为A组(微卡组)和B组(对照组)，B组采用4~6种敏感药物，A组在B组的基础上加用微卡，观察痰菌转阴及肺部病灶吸收情况。结果A组痰菌转阴率高于B组。肺部病灶吸收有显著性差异。结论微卡能加速痰菌转阴，提高免疫功能，是一种较好的免疫调节剂。     

应用聚合酶链反应-膜芯片技术快速鉴定分支杆菌菌种

目的建立一种简便、快速、灵敏、特异的分支杆菌菌种鉴定方法。方法通过 1 6SrDNA聚合酶链反应 单链构象多态性 (polymerasechainreaction singlestrandedconformationpolymorphism ,PCR SSCP)分析鉴定 1 4 0株分支杆菌临床分离株 ;设计与合成用于鉴定分支杆菌菌种的 1 6SrDNA寡核苷酸探针 ,制作膜芯片 ,与待测菌株生物素标记的 1 6SrDNA基因PCR产物进行反向斑点杂交。结果 1 4 0株分支杆菌临床分离株中 ,经 1 6SrDNAPCR SSCP初步鉴定 ,1 33株为结核分支杆菌复合群 ,7株为非结核分支杆菌。经膜芯片杂交分析 ,1 33株结核分支杆菌分离株鉴定为结核分支杆菌复合群 ;7株非结核分支杆菌中 ,1株鉴定为戈登分支杆菌 ,1株为土分支杆菌 ,1株为偶发分支杆菌 ,1株为胞内分支杆菌 ,另 3株与分析探针杂交阴性。分析 2 8种分支杆菌标准菌株和 9种非分支杆菌菌株 ,结果显示寡核苷酸探针是特异的。结论 1 6SrDNAPCR 膜芯片技术灵敏度高、特异性强、简便、快速 ,可用于鉴定分支杆菌菌种     

45例非结核分枝杆菌肺病临床特征及耐药特点分析

目的分析我院近5年来非结核分枝杆菌（NTM）肺病临床特征及耐药特点。方法对2006年1月至2011年12月我院检验科分枝杆菌实验室分离、培养的分枝杆菌培养物进行菌种鉴定、耐药性统计及其每份标本相对应的临床资料分析总结。结果我院2006年至2011年NTM的平均分离率0.91%,远低于全国水平。NTM对异烟肼（INH）、对氨基水杨酸（PAS）耐药率最高,对阿米卡星（AMK）耐药率最低,同时耐INH、利福平（RFP）和至少耐1种药分别为62.22%和91.11%。结论 NTM肺病病程长,临床症状无特异性,耐药率高,需要及早行细菌学培养、菌株鉴定和药敏试验。     

应用PCR-反向斑点杂交快速鉴定分枝杆菌菌种

目的：应用聚合酶链反应-反向斑点杂交法（PCR-RDBHA）快速鉴定分枝杆菌至种的水平。方法：以分枝杆菌rpoβ基因编码序列为靶基因,应用PCR-RDBHA检测126株分枝杆菌临床分离株。以PCR-DNA测序为对照,对经PCR-RDBHA鉴定为非结核分枝杆菌（NTM）的临床分离株进行PCR-DNA测序。结果：126株临床分离株中,经鉴定115株（91.3%）为结核分枝杆菌复合群（MTC）,11株（8.7%）为NTM。NTM中,4株胞内分枝杆菌,1株堪萨斯分枝杆菌,1株戈登分枝杆菌,2株瘰疬分枝杆菌,3株脓肿分枝杆菌。11株NTMPCR-RDBHA与PCR-DNA测序结果一致。结论：PCR-RDBHA能鉴定分枝杆菌临床分离株至种的水平,方法简便、快速,结果准确,具有良好的临床应用价值。     

中西医结合治疗皮肤软组织非结核分枝杆菌感染的临床研究

[目的 ]探讨皮肤软组织肌注后非结核分枝杆菌感染的治疗方法。 [方法 ]将 6 3例臀部非结核分枝杆菌感染病人分为两组 ,观察组在传统化疗和手术基础上加用中药生肌玉红膏和九一丹治疗 ;对照组只给予化疗和手术治疗。观察感染伤口的愈合情况。 [结果 ]按照临床治愈出院标准全部治愈。观察组 38例平均愈合天数为 6 8 4 8± 36 13,对照组 2 5例为110 0 5± 6 8 83,两组相比有显著性差异。 [结论 ]皮肤软组织非结核性分枝杆菌感染治疗难 ,易反复 ,运用中西医结合疗法可以缩短病程 ,促进愈合。     

非结核分枝杆菌肺病分析

目的：了解非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria,NTM）肺病流行情况及耐药特点。方法：收集2003年9月～2006年5月门诊痰菌阳性标本,按《全国结核病细菌学检验规程》的要求,用改良罗氏法进行痰结核菌培养、菌种鉴定和药物敏感性试验。结果：非结核分枝杆菌分离率为10.3%,35岁以上分离率高于35岁以下人群,性别无明显差异。耐药率达100%,明显高于结核分枝杆菌,耐多药率51.7%,与结核分枝杆菌无明显差异。结论：非结核分枝杆菌在肺病患者中分离率高,且多耐药,因此对难治性肺病患者进行菌株鉴定及药敏试验非常重要。     

广东省珠海市1 527株结核和非结核分枝杆菌耐药情况

目的 分析珠海市结核和非结核分枝杆菌耐药情况,为结核病防控提供依据。方法 分析2014年1月—2018年6月珠海市慢性病防治中心培养阳性的结核和非结核分枝杆菌菌株,菌种鉴定后采用比例法对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）、乙胺丁醇（EMB）、阿米卡星（AMK）,丙硫异烟胺（PTO）、莫西沙星（MOX）、卡那霉素（KAM）、卷曲霉素（CPM）、对氨基水杨酸（PAS）、左氧氟沙星（LVFX）、克拉霉素（CLA）等12种药物进行耐药性检测,并对耐药结果进行统计分析。结果 结核分枝杆菌感染患者1 259例,初治和复治患者耐药率分别为28.3%和44.7%,差异有统计学意义（P<0.01)。非结核分枝杆菌感染患者268例,初治和复治患者耐药率分别为97.5%和92.5%,差异无统计学意义（P=0.06)。结核分枝杆菌初复治患者中耐药率最高均为MR-TB(12.4%,19.5%),初复治患者除PR-TB差异无统计学意义外,MR-TB、MDR-TB以及XDR-TB的耐药率差异皆有统计学意义。结核分枝杆菌初治患者耐药率最高的五位分别为SM、INH、RFP、EMB、CLA,复治患者中耐药率最高的5种药物依次为INH、SM、RFP、EMB、LVFX（INH、SM、RFP三者耐药率相同）。非结核分枝杆菌感染初治患者耐药率最高的6种药物依次为SM、PAS、EMB、CPM、RFP、INH（RFP与INH耐药率相同）,复治患者耐药率最高的药物依次为：INH、PAS、SM、RFP、EMB。结论 珠海地区结核和非结核复治患者的耐药形势严峻,需要加强抗结核一线药物的规范使用,依据药敏结果进行个体化治疗,提高患者的服药依从性,有效降低耐药率。