乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物检验方法的建立

<正>本文参照国家食品安全风险评估中心培训的方法,采用对青霉素类药物绝对敏感的标准菌株,利用舒巴坦特异性抑制β-内酰胺酶的活性,并加入青霉素作为对照,通过比对加入β-内酰胺酶抑制剂与未加入抑制剂的样品所产生的抑制圈的大小来间接测定样品是否含有β-内酰胺酶类药物,建立乳及     

南京市乳制品中β-内酰胺酶类药物残留状况调查

目的：调查南京零售牛乳制品中添加生鲜牛乳抗生素分解剂—β-内酰胺酶的比例。方法：按照卫生部颁发的＂乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物检验方法—杯碟法＂检测。结果：10个品牌的乳制品样品中共有5个品牌检出β-内酰胺酶,检出率达到50.0%;同一品牌的不同样品中,检出率在12.5%~33.3%之间。结论：南京市乳制品中不仅检测到β-内酰胺酶,且添加率较高,应当采取措施杜绝β-内酰胺酶在乳制品中的使用。     

碘量法快速测定乳和乳制品中的β-内酰胺酶

目的:建立了快速筛查乳与乳制品中的β-内酰胺酶的碘量法。方法:检测β-内酰胺酶分解β-内酰胺类抗生素所生成的青霉噻唑酸,间接判断牛奶中是否有β-内酰胺酶。结果:采用碘量法对牛奶中的β-内酰胺酶定性、半定量分析,结果表明,当酶浓度大于20 U/ml时,可以用直接碘量法对其进行定性分析。结论:本方法操作简单、分析时间短、重现性好,适用于乳与乳制品中β-内酰胺酶的间接快速检测。     

2010年吉林省生鲜乳和乳制品β-内酰胺酶污染状况调查

目的了解2010年吉林省生鲜乳和乳制品β-内酰胺酶污染状况。方法采用对青霉素类药物绝对敏感的标准菌株,利用舒巴坦特异性抑制内酰胺酶的活性,并加入青霉素作为对照,通过比对加入内酰胺酶抑制剂,与未加入抑制剂的样品所产生的抑菌圈大小来间接测定样品是否含有内酰胺酶类药物。结果乳头奶和原料奶中:(A)与(B)的抑菌圈直径差异<3 mm,52份液体纯牛奶中有26份(A)<(B)的抑菌圈直径差异在3 mm以上,且重复性良好,含有β-内酰胺酶均低于4 U/ml。结论本次试验乳头奶(直接从牛乳房中挤出)、原料奶(将乳头奶混入桶中,无菌采集)均未检出β-内酰胺酶;液体奶采7种品牌,有2种品牌的阳性率为100%,所以阳性样品均为人为添加。     

比色法测定乳与乳制品中L(-)-羟脯氨酸的探讨

目的 对比色法测定乳与乳制品中L(-)-羟脯氨酸的方法和样品处理过程进行探讨.方法 采用12.0 mol/L盐酸110(±1)℃恒温消解、过滤后定容、调节pH后按GB/T9695.23-2008加氯胺T氧化、加显色剂、60℃水浴后比色测定,并绘制标准曲线比较定量.结果 该法线性范围L(-)-羟脯氨酸在1.0～ 10.0 μg,标准曲线的线性良好,r=0.9995,方法灵敏度为16.2 μg/吸光度,检出限48.8μg/g,回收率在80.5％～95.2％,相对标准偏差在2.15％ ～4.18％.结论 比色法测定羟脯氨酸的准确度和精密度良好,能有效地测定乳及乳制品中L(-)-羟脯氨酸含量.     

青霉素对金黄色葡萄球菌耐药性及β-内酰胺酶活性的影响

目的 观察青霉素对金黄色葡萄球菌耐药性及β-内酰胺酶活性的影响.方法 将金黄色葡萄球菌对青霉素的敏感株及耐药株分别接种于青霉素培养基内,培养不同时间取培养物检测菌落数、青霉素残留活性及β-内酰胺酶活性.结果 在64 μg/ml青霉素堵养基中培养24 h,敏感株菌落数逐步减少;耐药菌在前6 h菌落数明显减少,但随后显著增加;接种了敏感株的培养基中的青霉素活性维持稳定,接种了耐药株的培养基中的青霉素活性逐步降低;耐药菌的β-内酰胺酶活性随培养时间延长而明显增高.结论 青霉素对生长繁殖早期阶段的金黄色葡萄球菌可以产生明显的抑制或杀灭作用,青霉素可诱导耐药菌株产生更多的β-内酰胺酶,从而导致细菌耐药性增强.     

连云港市市售生鲜乳中β-内酰胺酶添加情况调查

摘要:目的　调查连云港市零售生鲜乳制品中抗生素分解剂β-内酰胺酶的添加状况,为加强该市生鲜乳中非法添加管理提供科学依据。方法　依照卫生部颁发的“乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物检验方法-杯碟法”检测。结果　9家品牌的产品被检样品50份生鲜乳中,其中5个品牌的7份样品β-内酰胺酶检出阳性,检出率分别为100.0%（1/1）、100.0%（1/1）、50.0%（1/2）、37.5%（1/3）和33.3%（3/8）,总检出率14.0%。结论　连云港市部分市售生鲜乳中β-内酰胺酶仍有检出,存在一定的安全隐患,为保障消费者身体健康,应加强对其监管。     

β-内酰胺酶抑制剂复合抗菌药物的使用量与产ESBLs细菌分离率关系研究

目的探讨临床上产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌分离率的增加,是否与含β-内酰胺酶抑制剂的复合β-内酰胺类抗菌药物使用量有关,为抗菌药物的规范合理使用提供依据. 方法用SPSS10.0统计软件包,统计分析1998～2002年,每年含β-内酰胺酶抑制剂的复合β-内酰胺类抗菌药物使用量与产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离率间的相关性关系. 结果 5年来含β-内酰胺酶抑制剂的复合β-内酰胺类抗菌药物使用总量从16.54kg/年增加到156.868kg/年,增加了848.4%;培养总样本数从10 897份增加到18 567份,增加了70.4%;两者间相关系数r=0.884, P<0.05;抗菌药物使用总量与细菌分离株数间的相关系数r=0.449,P＞0.05,与产ESBLs细菌总分离率间的相关系数r=0.933,P<0.05;年平均每份送检样本中此类抗菌药物的使用量与细菌分离株数间的相关系数r=0.389,P＞0.05,与产ESBLs细菌总分离率间的相关系数r=0.889,P<0.05. 结论产ESBLs细菌分离率的增加与含β-内酰胺酶抑制剂的复合β-内酰胺类抗菌药物使用总量及年平均每份送检样本中此类抗菌药物的使用量呈正相关,提示临床使用抗菌药物应更具合理性.     

酸奶中β-内酰胺酶的快速检测方法

目的建立酶热生物传感器法用于快速检测酸奶中β-内酰胺酶。方法酸奶样品于4℃下5000r／min离心10min,取中间层清液与一定量青霉素G混合,室温震荡反应3h,使样品中β-内酰胺酶充分酶解加入的青霉素G底物,然后直接通过酶热生物传感器进行分析。酶热生物传感器中装备有专一性酶柱,能够特异性地与青霉素G进行反应,并对其含量进行测定。根据震荡反应前后酸奶样品中青霉素G含量的变化,可以推算出酸奶样品中β-内酰胺酶的活性。结果该方法样品检出限为2U／ml,定量限为4U／ml;线性范围4～20U／ml,3个加标水平（6U／ml、10U／ml、18U／m1）的平均回收率在85％～110％之间,相对标准偏差小于20％。结论本文所建立的酶热生物传感器法能够快速测定酸奶中B一内酰胺酶活性,与传统微生物法相比,操作简单、仪器可便携,显著节约了检测时间和成本,是传统方法的有力补充,更适合于大规模样品筛查和现场检测。     

乳与乳制品中硫氰酸盐含量的分光光度法测定

目的:建立分光光度法测定乳与乳制品中硫氰酸盐含量的方法。方法:样品经处理后,在中性介质中,于50℃条件下,样品中硫氰酸根与氯胺T反应生成氯化氰,再与异烟酸作用,经水解后生成戊烯二醛,最后与吡唑啉酮缩合生成蓝色染料,该蓝色染料的吸光度与硫氰酸根的浓度在一定范围内呈线性关系,以此测定样品中硫氰酸根的浓度。结果:该方法硫氰酸盐浓度在0.0 mg/L～1.0 mg/L呈线性关系,相关系数为0.9997,检出限为0.02 mg/kg,相对标准偏差在3.48%,样品加标回收率为90.8%。结论:该法操作简单,灵敏度高,准确可靠,适用于乳制品的质量监测。     

革兰阴性杆菌临床分离株对β-内酰胺类抗菌药物的耐药性研究

目的研究医院感染革兰阴性(G-)杆菌对β-内酰胺类抗菌药物的耐药性特征及耐药机制。方法测定泵抑制剂对MIC的影响,β-内酰胺酶(Bla)的表型鉴定及等电点测定,PCR扩增检测Bla基因及DNA序列测定。结果所试菌对大多数药物的耐药率高,均产Bla,其中42.1%产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、17.5%产头孢菌素酶(AmpC酶)、7.0%产金属β-内酰胺酶,10.5%同时为外排泵阳性菌;8株阴沟肠杆菌的ampC基因与阴沟肠杆菌ECLC074的ampC基因高度同源。结论产Bla是G-杆菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要机制,ESBLs检出率最高;产AmpC酶阴沟肠杆菌的ampC基因均起源于ECLC074的ampC基因;亚胺培南是治疗耐药G-杆菌所致感染最有效的药物,β-内酰胺酶抑制剂复合物和阿米卡星可分别用于治疗耐药非发酵杆菌和持续高产AmpC酶阴沟肠杆菌所致感染。     

双缩脲-分光光度法快速测定乳与乳制品中的蛋白质含量

目的建立一种快速测定乳与乳制品中蛋白质含量的方法。方法用双缩脲反应测定蛋白质含量。结果工作曲线在(0-0.20)g/100 mL蛋白质浓度范围内遵守朗伯比尔定律,线性关系良好。曲线的回归方程为:Y=0.004 868+3.018X,相关系数r=0.999 3,加标回收率(95.00-104.00)%,方法的检出限0.02g/100 mL。结论该方法操作简便、快速、准确,灵敏度和精密度高,适用于乳与乳制品中蛋白质的快速测定。     

蛋白芯片检测牛乳β-乳球蛋白条件的优化

目的优化蛋白芯片检测β-乳球蛋白(β-Lg)的技术条件。方法用芯片点样仪将β-乳球蛋白的一种抗体点样于三维基片上,用其另一种抗体作为检测抗体,以Cy3标记的羊抗作为二抗进行检测。以双抗夹心法对β-Lg抗原进行检测。结果β-Lg单克隆鼠抗66#被确定为点样探针,选择接触式点样进行芯片点样,点样数在42~92点之间可出现较好的点样一致性;β-Lg固定探针的浓度选择0.5 mg/mL,其检测抗体的稀释度为1∶2000;1%无蛋白封闭液被优选为封闭剂;β-Lg检测下限与生物检测限分别为17.54和55.31 ng/mL。根据β-Lg的S型曲线确定了其线性范围并建立了对β-Lg具有最佳决定系数(R~2=0.9993)的回归方程与标准曲线。结论本研究优化了牛乳中β-Lg检测的蛋白芯片检测条件,建立了定量检测牛乳β-Lg的蛋白芯片平台。     

3种β-内酰胺类抗菌药物延长及持续输注对产ESBLs细菌的药效学研究

目的评价哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦及亚胺培南延长、持续、传统输注给药方案对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌的药效学。方法测定医院产ESBLs菌株(大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌)的MIC,应用蒙特卡洛模拟(MCS)分析比较哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦及亚胺培南延长输注(PI)、持续输注(CI)和传统输注(TI)方案的药效学目标到达。结果对于传统输注给药方案,只有亚胺培南3种方案获得了90%的累积反应分数(CFR),其次为哌拉西林/他唑巴坦4.5 g 1次/6 h和4.5 g 1次/8 h方案,分别为84.3%、63.7%延长输注方案,亚胺培南的3种给药方案均获得了100.0%的CFR,其次哌拉西林/他唑巴坦4.5 g 1次/6 h为95.7%,24 h持续输注时,只有亚胺培南的给药方案能达到90%的CFR;哌拉西林/他唑巴坦9 g CI和13.5 gCI获得72.9%、76.6%CFR;然而,头孢哌酮/舒巴坦的任何给药方案获得的CFR均60%。结论亚胺培南仍然为治疗产ESBLs细菌的最佳药物,哌拉西林/他唑巴坦的延长输注和持续输注较传统方案更优,以高剂量延长输注方案最优,可以作为经验治疗方案。     

自动电位滴定仪测定乳与乳制品中酸度的方法

目前,国家卫生标准中测定乳与乳制品中酸度的方法是以酚酞作指示剂,中和100 ml乳所需氢氧化钠标准滴定溶液(0．100 0 mol／L的毫升数。但如今市场中存在不同口味的乳与乳制品,并呈现不同颜色,如草莓味、番茄味含乳饮料呈粉色,巧克力牛奶呈灰褐色等,原有的国标法靠酚酞指示剂呈现粉     

SNAP法检测牛奶中三种β-内酰胺药物的初步研究

目的　以国标TTC方法为参照 ,分析SNAP快速检测法检测牛奶中三种 β 内酰胺类药物的灵敏度和特异性及部分影响因素 ,论证SNAP快速检测法的可行性。方法　国标TTC方法 (微生物抑制分析法 )与SNAP快速检测法 (β 内酰胺类 ,ELISA法 )。 结果　SNAP快速检测法灵敏度高于国标TTC方法 ,特异性与国标TTC方法没有差异。细菌存在及样本冻融对SNAP方法的结果没有影响。结论　提示SNAP快速检测法可应用于牛奶中β 内酰胺类抗生素残留的检测     

239株非产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌对β-内酰胺类抗菌药物及美罗培南的耐药性检测

目的 了解临床分离大肠埃希菌中非产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株对β-内酰胺类抗菌药物及美罗培南的耐药性检测.方法 CLSI表型确证试验-纸片增强法检测非产ESBLs大肠埃希菌,琼脂稀释法测定非产ESBLs大肠埃希菌对8种β-内酰胺类抗菌药物及美罗培南的敏感性.结果 非产ESBLs大肠埃希菌株对氨苄西林的耐药率高达90.3%,对头孢唑林、头孢呋辛的耐药率>60.0%,对头孢哌酮/舒巴坦、头孢美唑、头孢吡肟的耐药率分别为19.2%、23.8%、31.8%,但对美罗培南非常敏感、耐药率为2.9%.结论 非产ESBLs大肠埃希菌对第三代头孢菌素和美罗培南非常敏感,对氨苄西林和第一、二代头孢菌素耐药显著.     

牛奶中β-内酰胺类抗生素残留检测方法的研究进展

β-内酰胺类抗生素作为兽药广泛应用于畜牧业中,在养牛业中经常用来治疗牛乳腺炎、肺炎、细菌性腹泻及细菌性关节炎等疾病。尤其值得关注的是,即使牛无上述疾病,作为预防措施,这类抗生素也会作为一种添加剂应用于畜产品中。非法滥用此类抗生素的后果是,增加了食物链中抗生素残留,长期使用低浓度的带有抗生素残留的食物将影响人体的健康(高敏感个体对于此类抗生素的过敏反应),并且增加人体的抗药性。世界粮农组织(FAO)、世界卫生组织(WHO)、     

牛奶中β-内酰胺酶两种检测方法的比较

目的对牛奶中β-内酰胺酶的两种检测方法进行比较,探求准确、可靠和快速的检测方法。方法采用Unisensor试剂盒法和杯碟法对52份牛奶及奶制品进行β-内酰胺酶检测,通过试验比较两种检测方法的检出率。结果两种方法的β-内酰胺酶检出率的差异无统计学意义(χ2=0.33,P0.05)。结论两种检测方法均可用于检测牛奶中β-内酰胺酶。     

多药耐药鲍氏不动杆菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药机制的研究

目的 了解临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRAB)对β-内酰胺类抗菌药物的耐药机制.方法　从2009年4-8月中山大学附属第三医院住院患者中分离出20株MDRAB,用K-B法测定鲍氏不动杆菌对13种抗菌药物的敏感性,采用PCR及序列分析的方法分析28种β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白carO基因.结果 检测TEM、OXA- 23群、ADC等3种β内酰胺酶基因呈阳性,阳性率分别为100.0％、65.0％、100.0％;其余均阴性,膜孔蛋白carO基因检测均阳性.结论 MDRAB对多种β-内酰胺类抗菌药物耐药主要与产OXA- 23群碳青霉烯和ADC型AmpC酶相关;产OXA- 23型碳青霉烯酶是导致MDRAB对碳青霉烯类耐药的重要原因,与产金属β-内酰胺酶和膜孔蛋白缺失无关.