苯那普利对糖尿病大鼠心肌CTGF基因表达的影响及作用机制

目的：研究苯那普利对结缔组织生长因子（CTGF）mRNA在糖尿病（DM）大鼠心肌中表达的影响及相关机制。 方法：用24只Wistar大鼠建立DM模型后,随机分为苯那普利治疗组及DM未治疗组,处理12周末检测血糖、血脂,应用放免法检测心肌血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的含量,应用RT-PCR检测心肌CTGF mRNA表达,并与正常组对照。 结果：DM未治疗组血糖、血脂明显增高,心肌AngⅡ含量及CTGR mRNA表达明显高于正常组和苯那普利治疗组（P<0.01）。结论：持续血糖增高能导致大鼠心肌AngⅡ含量增加和心肌CTGF mRNA表达增加,苯那普利能在一定程度上抑制大鼠心肌CTGF mRNA表达,其机制可能与其减少心肌AngⅡ含量有关。     

生脉解毒通络胶囊对实验性糖尿病大鼠心肌MCP-1基因表达的影响及其作用机制

目的探讨生脉解毒通络胶囊对单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA在糖尿病(DM)大鼠心肌中表达的影响及相关机制。方法链脲佐菌素诱导建立糖尿病模型,成模2周后分别灌服依那普利、生脉解毒通络胶囊高、中、低剂量,连续12周,于第14周末应用放射免疫法检测心肌局部血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量,并应用RT-PCR技术检测MCP-1 mRNA的表达。结果与正常组对照,糖尿病模型组心肌局部AngⅡ含量及MCP-1 mRNA的表达均明显增加(P<0.01),依那普利及生脉解毒通络胶囊高、中剂量组可使糖尿病大鼠心肌局部AngⅡ含量及MCP-1 mRNA的表达下降(P<0.01、P<0.05),低剂量组无显著效果。结论持续血糖增高能导致实验性糖尿病大鼠心肌局部AngⅡ含量及MCP-1 mRNA表达增加,生脉解毒通络胶囊能在一定程度上抑制大鼠心肌MCP-1mRNA表达,其机制可能与减少心肌局部AngⅡ含量有关。     

解毒通络保肾胶囊对糖尿病大鼠肾脏结缔组织生长因子表达的影响

目的研究中药解毒通络保肾胶囊对糖尿病(DM)大鼠肾脏病变的保护作用及其机制.方法将实验动物分为正常对照组、DM对照组、阳性对照组和实验组.检测各组第12周的血糖、尿素氮、血肌酐、尿白蛋白排泄率(UAER)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量及肾脏肥大指标的变化,应用RT-PCR检测肾皮质结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达,免疫组化检测肾内纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)蛋白表达水平.结果解毒通络保肾胶囊较DM对照组血糖显著降低(P<0.01),UAER明显减少(P<0.05),尿素氮和血肌酐水平下降,肾脏肥大指标改善(P<0.01).RT-PCR结果表明DM大鼠肾皮质CTGF mRNA表达升高,肾小球FN、Col Ⅳ沉积增多,解毒通络保肾胶囊治疗组CTGF mRNA表达水平和Fn和Col Ⅳ蛋白表达均低于DM对照组(P<0.01).结论解毒通络保肾胶囊对DM肾脏病变有保护作用,其机制可能是减少肾组织中AngⅡ含量,下调CTGF的表达,减少细胞外基质的沉积.     

降香与红景天对心肌梗塞大鼠心肌组织AngⅡ含量及AGTmRNA表达的影响

观察“药对”降香、红景天对心肌梗塞大鼠心肌组织血管紧张素ⅡAngⅡ含量、血管紧张素原（AGT）mRNA表达的影响,探讨其改善心肌重塑作用机制。方法：结扎大鼠冠状动脉左前降支制备心肌梗塞模型,分别给予降香、红景天煎剂和卡托普利溶液灌胃,连续6周后取梗塞区心肌,分别用放射免疫法和荧光定量PCR检测心肌组织血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素原mRNA表达量。结果：模型组血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素原mRNA表达量高于假手术组和正常组（P〈0．05）;药对组、药对联合卡托普利组血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素原mRNA表达量较模型组降低（P〈0．05）,与卡托普利组接近（P〉0．05）;联合用药组血管紧张素原mRNA含量较药对组降低（P〈0．05）。结论：“药对”降香、红景天能够改善心肌梗塞后大鼠心肌重塑,其作用机制可能与降低梗死区心肌组织血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素原mRNA表达有关。     

厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌组织血管紧张素转换酶2表达的影响

目的 探讨厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌组织血管紧张素转换酶2(ACE2)mRNA表达的影响.方法 将30只8周龄雄性Wismr大鼠随机分为正常对照组(Ctrl组,n=7)、糖尿病组(DM组,n=14)和50mg/kg厄贝沙坦干预组(DM+Irb50组,n=9),一次性腹腔注射链脲佐菌素5 mg/kg,72 h后血糖大于16.7 mmol/L纳入糖尿病组,造模成功后4周,灌胃法给予相应剂量厄贝沙坦,继续喂养8周.ELISA测定各组大鼠心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量;实时荧光定量PCR检测各组大鼠心肌组织ACE2 mRNA表达.结果 糖尿病大鼠心肌组织AngⅡ显著升高,厄贝沙坦干预后,AngⅡ水平显著降低(P<0.001).DM+Irb50组大鼠心肌组织ACE2 mRNA表达显著高于正常对照组和DM组(P<0.05).结论 厄贝沙坦可上调心肌组织ACE2 mRNA表达,这可能是其改善心功能的机制之一.     

归芪方对糖尿病大鼠心肌病变的保护作用

目的:探讨归芪方对糖尿病(DM)大鼠心肌病变的保护作用及其机制。方法:将21只SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立DM模型,按随机数字表法分为DM模型组(D组)、贝那普利治疗组(B组)、归芪方治疗组(G组)。另7只作为空白正常对照组(N组)。G组给予归芪方4.5 g/(kg.d),B组给予贝那普利片10 mg/(kg.d),D组及N组注射等体积的柠檬酸缓冲液。各组大鼠于第8周末处死,测定各组血糖、血脂、心脏重、体重的改变;观察心肌组织Ⅰ、Ⅲ胶原及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的表达,荧光定量PCR法检测心肌转化生长因子-β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子-β1(CTGFβ-1)mRNA的表达。结果:归芪方改善了血糖、血脂异常及抑制Ⅰ、Ⅲ胶原、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、TGFβ-1、CTGF-β1mRNA的高表达(P<0.05),且在抑制心肌TGF-β1、CTGFβ-1mRNA方面的表达归芪方优于贝那普利组(P<0.01,P<0.05)。结论:归芪方可调节糖尿病大鼠受损的糖、脂代谢异常,抑制心肌TGFβ-1、CTGFβ-1mRNA的表达,延缓糖尿病心血管并发症的进展。     

苯那普利对糖尿病大鼠肾脏结缔组织生长因子mRNA表达的影响

目的：观察苯那普利对糖尿病（DM）大鼠肾脏结缔组织生长因子（CTGF）基因表达和肾脏病 变的影响。 方法：将实验动物分为正常对照组（CON）、糖尿病组（DM）和苯那普利治疗组（DM+B）。 苯那普利处理12周后检测血清肌酐、尿素氮水平、尿白蛋白排泄率（UAER）和肾皮质血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）含量,RT-PCR检测肾皮质CTGF mRNA表达,免疫组化检测肾纤维连接蛋白（FN）和Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）蛋白表达水平。 结果：实验终止时,DM组UAER（12.92±3.56）mg·24 h^-1明显高于CON组（2.74±1.09）mg·24 h^-1（P<0.01）,DM+B组大鼠UAER（5.69±2.74）mg·24 h^-1明显低于DM组（P<0.01）。与CON组相比,DM组血清肌酐和尿素氮水平均明显增高（P<0.01）;苯那普利治疗使其水平明显降低（P<0.01）。DM大鼠肾皮质CTGF mRNA表达水平约为CON组的2.65倍（P<0.01）,在DM+B组其表达水平减少23.68%（P<0.05）。DM大鼠肾小球FN和Col Ⅳ蛋白表达均较CON组明显上调（均为P<0.01）,苯那普利治疗后其表达水平明显降低（P<0.01）。 结论：苯那普利能降低DM大鼠肾脏CTGF基因表达,并能明显减轻肾病变。     

CTGF mRNA在糖尿病大鼠心肌中的表达及葛根素和氨基胍的调节作用

目的：观察结缔组织生长因子（CTGF）在糖尿病大鼠心肌组织中的表达情况及葛根素（Pue）、氨基胍（AG）对CTGF表达的调节作用。方法：给大鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病模型,用葛根素（Pue1组,160mg·kg^-1·d^-1;Pue2组,120mg·kg^-1·d^-1;Pue3组,80mg·kg^-1·d^-1）、氨基胍（AG组,100·kg^-1·d^-1）治疗12周;采用RT-PCR检测心肌组织CTGF mRNA的表达,透射电镜下观察心肌细胞的形态学改变。结果：糖尿病组大鼠心肌组织CTGF mRNA的表达升高,Pue2组、Pue3组和AG组CTGF mRNA的表达明显降低;电镜下可见糖尿病组大鼠心肌细胞肌原纤维含量明显减少,治疗组大鼠心肌病变明显减轻。结论：葛根素（120和80mg·kg^-1·d^-1）和氨基胍能下调CTGF mRNA的表达,对糖尿病大鼠心肌具有保护作用。     

糖心平胶囊对糖尿病大鼠心肌超微结构、血管紧张素Ⅱ及其1型受体的影响

目的：探讨糖心平胶囊对糖尿病大鼠心肌病变的保护作用及机制。方法：80只大鼠通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,并随机分为模型组、格华止组、开搏通组和糖心平胶囊大、中、小剂量治疗组,灌胃给药8周,并以10只正常大鼠作为正常对照组。分别采用放射免疫法和逆转录聚合酶链式反应法检测给药后各组大鼠心肌组织中AngⅡ含量和AT1RmRNA表达水平,透射电子显微镜检测心肌超微结构的改变。结果：模型组、格华止组和糖心平中、小剂量组心肌组织中AngⅡ含量和AT1RmRNA表达较正常对照组显著增高（P〈0.05,P〈0.01）。糖心平大剂量组和开搏通组心肌组织中AngⅡ含量和AT1RmRNA表达低于模型组（P〈0.05,P〈0.01）。模型组心肌超微结构与正常对照组相比,心肌线粒体体积轻度增大。所有治疗组心肌超微结构较模型组有明显改善。结论：糖心平胶囊可能通过调整心肌局部肾素-血管紧张素系统的紊乱对糖尿病心肌病变产生保护作用。     

大豆皂苷对糖尿病大鼠心肌组织中NOX4和p22phox表达的影响及其对心肌的保护作用

［摘 要］ 目的：探讨大豆皂苷对糖尿病大鼠心肌组织中NOX4和p22phox表达的影响,阐明其对心肌的保护作用。方法：将雄性Wistar 大鼠建立糖尿病模型后随机分为糖尿病组和大豆皂苷给药组,仅注射等体积0.1 mol?L-1柠檬酸缓冲液的大鼠作为对照组,对照组、糖尿病组和大豆皂苷给药组动物分别每日灌胃给予生理盐水、生理盐水和大豆皂苷（10 mg/kg）,共3个月。取心肌组织并采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）测定大鼠心肌组织中NOX4和p22phox mRNA表达;免疫组织化学方法检测心肌组织中铜-锌超氧化物歧化酶（Cu-Zn-SOD）和结缔组织生长因子（CTGF）的蛋白表达;HE染色检测心肌病理学改变。结果：与对照组比较,糖尿病组大鼠心肌组织中NOX4 mRNA、p22phox mRNA和CTGF蛋白表达均显著升高（P<0.01）,而Cu-Zn-SOD蛋白表达显著降低（P<0.01）;与糖尿病组比较,大豆皂苷给药组大鼠心肌组织中NOX4 mRNA、p22phox mRNA和CTGF蛋白表达均显著降低（P<0.01）,但Cu-Zn-SOD蛋白表达显著增加（P<0.01）;对照组和大豆皂苷给药组上述指标比较差异均无统计学意义（P>0.05）。HE染色可见对照组大鼠心肌细胞排列紧密整齐,糖尿病组大鼠心肌细胞排列疏散紊乱,间质可见炎细胞浸润;大豆皂苷给药组大鼠心肌细胞基本整齐紧密。结论：大豆皂苷能降低糖尿病大鼠心肌组织中NOX4 mRNA、p22phox mRNA和CTGF蛋白的表达,提高Cu-Zn-SOD蛋白的表达,减轻氧化应激对心肌的损害,从而对心肌有一定的保护作用。     

中西医结合对自发性高血压大鼠心肌血管紧张素Ⅱ 1型受体mRAN和蛋白表达的影响

目的观察降压胶囊联合尼莫地平对自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用,并探讨其对大鼠心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体蛋白和mRAN基因表达的影响。方法将66只SHR大鼠随机分为6组,即模型组、降压胶囊大剂量联合尼莫地平组(联合大剂量组)、降压胶囊小剂量联合尼莫地平组(联合小剂量组)、降压胶囊大剂量组(中药大剂量组)、降压胶囊小剂量组(中药小剂量组)、尼莫地平组。连续灌胃8周,每日1次,正常饲料喂食。8周末,动物麻醉取血和分离心脏组织,放射免疫法测定AngⅡ含量,逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)法测定各组大鼠心肌mRNA的含量,采用Western免疫印迹(Western Blot)法测定各组大鼠心肌AT1R受体的蛋白表达。结果与模型组比较,联合大、小剂量组,中药大、小剂量组和尼莫地平组SHR大鼠血压、血浆AngⅡ含量均显著下降(P0.05或P0.01)。与模型组比较,联合大、小剂量组,中药大剂量组和尼莫地平组对大鼠心肌AT1受体蛋白表达和mRNA基因表达均显著降低(P0.05或P0.01);且联合大、小剂量组对AT1受体蛋白表达及联合大剂量组mRNA基因表达较尼莫地平组显著降低(P0.05或P0.01)。结论降压胶囊联合尼莫地平可抑制血中AngⅡ水平,降低大鼠血压,其治疗机理与抑制心肌AngⅡAT1受体mR-NA含量的增加和降低其蛋白的表达有关,其降低水平和治疗作用优于单纯用中药和单纯用西药。     

前列地尔注射液对糖尿病大鼠心肌纤维化的防治及机制

目的观察前列地尔注射液对糖尿病大鼠心肌纤维化的防治作用,探讨其可能的作用机制。方法SD大鼠40只,随机分为4组：正常对照组（NC组）、糖尿病模型组（DM组）、前列地尔治疗组（DM＋Alp组）、缬沙坦治疗组（DM＋Val组）。对照组给予普通饲料喂养;其余3组高脂高糖饲料喂养,连续喂养8周后一次性尾静脉注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）30mg／kg构建糖尿病大鼠模型,各组大鼠给予相应的药物干预措施。12周后检测心功能;计算心脏指数fH／B）及左心室质量指数（left ventrieular mass index, LVMI）;Masson染色光镜下观察心肌间质胶原纤维沉积情况,Proplus6．0图像分析系统测算心肌胶原容积分数（collagen volume fraction, CVF）;氯胺T法测定心肌组织羟脯氨酸含量,代表心肌胶原总含量;Elisa试剂盒测定血液中血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）、转化生长因子-β1（transforming growth factor- β1, TGF- β1）的浓度;Western—blotting检测心肌组织信号通路相关蛋白TGF—β1、Smad2、p-Smad2、Smad7的表达。结果与对照组相比,模型组大鼠心功能状态差,H／B、LYMI、CVF及心肌组织羟脯氨酸含量均明显升高（P〈0．01）,血液中AngⅡ、TGF-β1的浓度亦显著升高（P〈0．01）,心肌组织内TGF—β1、Smad2、p-Smad2的表达水平显著上调,Smad7的表达量则明显下降（P〈0．01）;前列地尔和缬沙坦治疗组上述指标均明显改善,两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论前列地尔注射液在一定程度上能够抑制糖尿病大鼠心肌纤维化的发生,机制可能与减弱心肌组织内TGF—β1／Smads信号转导通路的过度激活有关。     

阿托伐他汀抑制心房肌细胞CTGF及Cx43的表达

目的探讨阿托伐他汀(atorvastatin)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心房肌细胞结缔组织生长因子(con-nective tissue growth factor,CTGF)及缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)表达的影响。方法 18只雌雄对半1周龄左右Wistar大鼠,用于体外心房肌细胞的分离培养与鉴定。设置6组(n=18):正常对照组、AngⅡ(终浓度1μmol/L)组、AngⅡ+二甲基亚砜(DMSO)组、AngⅡ+atorvastatin(0.1、1.0、10μmol/L)组,作用72 h后RT-PCR分别检测CTGF、TGF-β1及Cx43的mRNA表达。结果与正常对照组相比,AngⅡ组CTGF、TGF-β1和Cx43 mRNA表达呈显著增加(P<0.05),阿托伐他汀逆转上述变化,10μmol/L组作用最强(P<0.05),而作为溶剂的DMSO无明显作用(P>0.05)。结论阿托伐他汀可能通过抑制AngⅡ诱导的心房肌细胞CTGF mRNA的高表达来减轻心房纤维化,同时可能通过下调Cx43 mRNA的表达来逆转缝隙连接蛋白的重构,最终减低房颤发生率。     

津力达颗粒对糖尿病大鼠肾及心血管组织肾素-血管紧张素系统的影响

目的 观察津力达颗粒(JLG)对实验性糖尿病大鼠肾脏、心脏和腹主动脉组织肾素-血管紧张素系统(RAS)的影响,探讨JLG保护糖尿病患者肾脏及心血管的可能机制.方法 采用随机数字表法将大鼠分为糖尿病模型组20只和正常对照组(CON组)10只.CON组喂以普通饲料;糖尿病模型组喂以高脂饲料,喂养4周后用30 mg/kg链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导糖尿病模型.诱导糖尿病模型成功后,再随机分成糖尿病津力达治疗组[DM+JLG组:JLG3g/(kg·d)灌胃]和糖尿病未治疗组(DM组),每组10只.8周后取肾、心脏及腹主动脉,采用ELISA法测定各组织匀浆血管紧张素Ⅰ(Ang Ⅰ)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平,蛋白质印迹分析法检测血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1 R)、血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2 R)的表达.结果 与CON组相比,DM组大鼠双肾质量/体质量、心脏质量/体质量、血糖、24 h尿蛋白增加(P＜0.05),体质量减少(P＜0.05),肾脏、心室肌和腹主动脉组织AngⅠ、AngⅡ、AT1R、AT2R水平升高(P＜0.05).与DM组相比,DM+JLG组大鼠双肾质量/体质量、血糖、24 h尿蛋白降低(P＜0.05),体质量增加(P＜0.05),肾脏、心室肌和腹主动脉组织Ang Ⅰ、AngⅡ、AT1R、AT2R水平降低(P＜0.05).结论 JLG能降低实验性糖尿病大鼠肾脏、心脏及腹主动脉组织血管紧张素及其受体水平,有利于保护肾脏及心血管系统.     

解毒通络保肾胶囊对2型糖尿病大鼠血清脂联素、肾组织脂联素及MCP-1蛋白表达水平的影响

目的:探讨解毒通络保肾胶囊(保肾胶囊)对2型糖尿病大鼠肾组织脂联素及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)蛋白表达的干预作用,阐明其肾脏保护作用及机制。方法:将65只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(对照组,10只,喂饲常规大鼠饲料)、高脂膳食组(高脂组,10只)和糖尿病组(45只),后2组大鼠实验期间喂饲高脂饲料。4周后糖尿病组大鼠腹腔注射低剂量链脲佐菌素复制2型糖尿病模型,造模后再随机分为糖尿病模型组(模型组)、保肾胶囊组(1.4g·kg-1)和罗格列酮联合贝那普利组(阳性对照组)。连续进行相应处理12周后,测定大鼠血糖(BG)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿微量清蛋白排泄量(UAE)及血清脂联素水平,免疫组织化学法检测肾组织脂联素和MCP-1蛋白表达水平。结果:与对照组比较,保肾胶囊组糖尿病大鼠BG、Scr、BUN水平及UAE明显降低(P<0.01)。与对照组比较,模型组大鼠血清脂联素水平、肾组织脂联素蛋白表达水平明显降低(P<0.01),肾组织MCP-1蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。保肾胶囊组大鼠血清脂联素水平和肾脂联素蛋白表达水平较模型组分别升高1.5和3.0倍(P<0.01),而肾组织MCP-1蛋白表达水平降低55%(P<0.01)。相关分析,血清脂联素水平与UAE(r=-0.466,P<0.01)、Scr水平(r=-0.563,P<0.01)、BUN水平(r=-0.512,P<0.01)及肾组织MCP-1蛋白表达水平(r=-0.526,P<0.01)均呈负相关关系。结论:保肾胶囊处理可升高2型糖尿病大鼠血清脂联素水平,上调肾组织脂联素水平和下调肾组织MCP-1蛋白表达水平,这可能与保肾胶囊的肾脏保护作用有关。     

RhoA-ROCK通路在血管紧张素Ⅱ刺激人胚肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子中的作用

目的 探讨RhoA-ROCK通路在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激人胚肺成纤维细胞(HFL-1)表达结缔组织生长因子(CTGF)中的作用.方法 培养HFL-1,设置无刺激对照组、AngⅡ组(10-7 mol/L的AngⅡ刺激)、Irbesartan+AngⅡ组(以10-6 mol/L的AT-1受体拮抗剂Irbesartan预处理1 h后再予10-7 mol/L的AngⅡ刺激)和ROCK抑制剂Y27632+AngⅡ组(10-6 mol/L的Y27632预处理1 h后再予10-7 mol/L的AngⅡ刺激).利用Western印迹和QuantiGene多基因定量方法检测RhoA-ROCK激活及下游因子CTGF表达情况.结果 观察Irbesartan对AngⅡ诱导CTGF蛋白表达的实验,结果:AngⅡ组CTGF蛋白表达较对照组增强(0.89±0.05比0.48±0.10,P＜0.01),Irbesartan+AngⅡ组(0.72±0.05)较AngⅡ组减弱(P＜0.05).AngⅡ组RhoA蛋白表达较对照组增强(3.40±0.46比1.77±0.37,P＜0.01),Irbesartan+AngⅡ组(2.27±0.45)较AngⅡ组减弱(P＜0.05).重新培养细胞留取标本观察Y27632对AngⅡ诱导CTGF蛋白表达的影响,结果:AngⅡ组CTGF蛋白表达较对照组增强(0.62±0.15比0.16±0.05,P＜0.01),Y27632+AngⅡ组(0.17±0.04)较AngⅡ组减弱(P＜0.01).从基因水平重复上述实验,结果:AngⅡ组CTGF mRNA表达较对照组增强(1.16±0.06比1.00±0.01,P＜0.01),Irbesartan+AngⅡ组(0.99±0.07)较AngⅡ组减弱(P＜0.01),Y27632+AngⅡ组(1.04±0.08)较AngⅡ组减弱(P＜0.05);AngⅡ组RhoA mRNA表达较对照组增强(1.21±0.07比1.00±0.06,P＜0.01),Irbesartan+AngⅡ组(1.00±0.12)较AngⅡ组减弱(P＜0.05),Y27632+AngⅡ组(1.10±0.05)与AngⅡ组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AngⅡ通过AT-1受体诱导HFL-1细胞CTGF蛋白和mRNA表达,RhoA-Rock通路参与其中.

Abstract：

Objective To explore the production of connective tissue growth factor(CTGF)by Angiotensin Ⅱ(Ang Ⅱ)in human embryonic lung fibroblast via the RhoA-ROCK pathway. Methods Human embryonic lung fibroblast(HFL-1)was divided into 4 groups:(1)control group:no stimulation;(2)AngⅡgroup:stimulation of AngⅡ(10-7 mol/L);(3)Irbesartan plus Ang Ⅱ group:stimulation by Ang Ⅱ(10-7 mol/L)with AT-1 receptor antagonist irbesartan(10-6 mol/L)pre-treatment;(4)Irbesartan plus Ang Ⅱ group:stimulation by Ang Ⅱ(10-7 mol/L)with ROCK inhibitor Y27632(10-6 mol/L)pretreatment.Then the products of protein and RNA were collected.Western blot and QuantiGene were used to detect the activation of RhoA-Rock pathway and CTGF.Results Exploring the affect of irbesartan on Ang Ⅱ through the Western blot analysis of CTGF and RhoA protein expression:the CTGF level was up-regulated by AngⅡ(0.89±0.05 vs control 0.48 ±0.10,P ＜0.01).Such an effect was markedly blocked by a pretreatment of irbesartan(0.72 ± 0.05,P＜0.05).After the use of Ang Ⅱ,the expression of RhoA protein was significantly enhanced(3.40 ± 0.46 vs control 1.77 ± 0.37,P＜0.01)and blunted by a pretreatment of irbesartan(2.27 ± 0.45,P＜0.05).The Western blot analysis of CTGF protein expression showed that Ang Ⅱ caused a robust increase in CTGF(0.62 ± 0.15 vs control 0.16 ± 0.05,P＜0.01).Such an effect was markedly blocked by a pretreatment of Y27632(0.17 ± 0.04,P＜0.01).The result was similar at the gene level.Ang Ⅱ significantly increased the expression of CTGF mRNA(1.16 ± 0.06 vs control 1.00 ± 0.01,P＜0.01).And it was markedly blocked by a pretreatment of irbesartan(0.99 ±0.07,P＜0.01)or Y27632(1.04 ±0.08,P＜0.05).AngⅡ significantly increased the expression of RhoA mRNA(1.21 ± 0.07 vs control 1.00 ± 0.06,P＜0.01).And it was markedly blocked by a pretreatment of irbesartan(1.00 ± 0.12,P＜0.05)but not Y27632(1.10 ± 0.05,P＞0.05).Conclusion Ang Ⅱ activates HFL-1 to produce CTGF through the AT-1 receptor.And the RhoA-Rock pathway is involved.