极低密度脂蛋白对内皮细胞t-PA和PAI-1 mRNA表达的影响

近年来 ,极低密度脂蛋白 (ＶＬＤＬ)与血浆纤溶系统平衡紊乱在动脉粥样硬化 (ＡＳ)中的作用受到广泛的重视。临床研究表明 ,血浆ＶＬＤＬ水平升高与血浆纤溶活性密切相关 ,我们的体外研究亦发现 ,一定浓度的ＶＬＤＬ能刺激人脐静脉内皮细胞 (ＨＵＶＥＣｓ)分泌Ⅰ型纤溶酶原抑制剂 (ＰＡＩ 1)抗原 ,而不影响组织型纤溶酶原激活物 (ｔ ＰＡ)抗原含量〔1〕。为进一步探讨ＶＬＤＬ干扰纤溶系统平衡的机制 ,我们于1998年 3月至 1999年 1月从基因转录水平探讨ＶＬＤＬ对ＨＵＶＥＣｓｔ ＰＡ和ＰＡＩ 1ｍＲＮＡ表达的影响。　　一、材料与方法　　 …     

急性脑梗死患者血浆及脑脊液t-PA及PAI-1含量测定及其临床意义

采用双抗体夹心固相酶联免疫吸附法（ELISA）检测35例急性服梗死患者血浆和其中31例患者脑脊液t－PA及PAI-1抗原含量，与35例对照组血浆和其中20例对照组脑脊液进行比较。结果：急性脑梗死组血浆t－PA含量高于对照组，PAI-I含量显著高于对照组；其脑脊液t－PA、PAI－1含量均显著高于对照组；脑脊液中t－PA、PAI－1的含量分别与血浆中t－PA、PAI－1含量呈正相关，认为急性脑梗死患者纤溶活性明显下降；t－PAE及PAI－1参与了脑梗死之病理过程；t－PA及PAI－1抗原含量是反映体内纤溶活性的两个重要指标，可用血浆或脊液t－PA、PAI－1的含量作为判断病情的参考指标之一。     

血管紧张素Ⅱ对脐静脉内皮细胞分泌t-PA和PAI-1的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对内皮细胞(EC)纤溶活性的影响。方法:用ELISA法测定人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养上清液中的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)及1型纤溶酶原抑制剂(PAI-1)抗原,观察不同浓度AngⅡ对EC分泌t-PA,PAI-1抗原的影响。结果:不同浓度AngⅡ(0、10-10、10-9、10-8、10-7和10-6mol／L)与EC共孵育4 h,培养上清液中PAI-1抗原含量分别为(94.00±18.62)、(136.10±19.20)、(164.22±25.60)、(188.00±22.36)、(140.50±25.31)和(124.48±24.20)ng／3×105EC,t-PA抗原含量无明显变化;10-8mol／L AngⅡ与EC共孵育1-24 h,从2 h开始培养上清液中PAI-1抗原含量明显高于同时点的对照组,4 h组升幅最大(3.5倍)。结论:一定浓度的AngⅡ可刺激HUVEC分泌PAI-1抗原。     

纤溶酶原激活物抑制物—1与动脉粥样硬化

纤溶系统含有一个无活性的酶原即纤溶酶原,它可被纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ与Ｕ－ＰＡ）激活成纤溶酶,纤溶系统通过纤溶酶降解纤维蛋白负责将其从循环中去除。纤溶系统的抑制可在两个水平上进行,一是在纤溶酶水平,主要是抗纤溶酶（－ａｎｔｉｐｌａｓｍｉｎ,ＡＰ）;另一个在纤溶酶原激活物的水平,即受纤溶酶原激活物抑制物的调节,其中主要是纤溶酶原激活物抑制物－１（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒＩｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｔｙｐｅ　１ｓ,ＰＡＩ－１）的作用［１］。临床及流行病学研究提示动脉粥样硬化（ＡＳ）及冠心病…     

纤维蛋白原、纤维蛋白及其降解产物对共培养血管内皮细胞纤溶活性的影响

目的研究纤维蛋白原（Fg）、纤维蛋白（Fb）及其降解产物（FDP）对共培养体系中人脐静脉内皮细胞组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂表达的影响。方法应用Transwell膜建立人脐静脉内皮细胞-兔主动脉平滑肌细胞共培养体系，在不同浓度（0、0．5、1．5、3．0、4．5和6．0g／L）Fg、Fb和FDP干预24h后，分别检测该共培养体系中人脐静脉内皮细胞组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂mRNA水平（RT-PCR法）以及培养上清中组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂抗原含量（ELISA法）与活性（发色底物法）的变化情况。结果Fg对组织型纤溶酶原激活物的表达没有显著影响，较高浓度的Fg（3．0～4．5g／L）可明显促进纤溶酶原激活物抑制剂mRNA表达、抗原含量及活性升高，但过高浓度的Fg（6．0g／L）却抑制纤溶酶原激活物抑制剂的表达。3．0-4．5g／L的Fb对组织型纤溶酶原激活物mRNA和抗原含量都起上调作用，同时显著下调组织型纤溶酶原激活物活性。较高浓度的Fb（1．5-4．5g／L）则可明显上调纤溶酶原激活物抑制剂的表达，且在mRNA、蛋白和活性水平趋势基本一致。3．0-6．0g／L的FDP均可明显下调组织型纤溶酶原激活物mRNA、蛋白和活性水平，1．5-6．0mg／ml的FDP均可促进纤溶酶原激活物抑制剂的高表达。结论Fg、Fb和FDP可以通过影响组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂的表达，引起纤溶活性降低，参与动脉粥样硬化的发展进程。     

下肢深静脉血栓形成患者围术期t—PA、PAI的表达及临床意义

近年研究发现,血管内皮细胞能分泌一种快速灭活组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）的抑制物即纤溶酶原激活剂抑制物（ＰＡＩ）。为此,对３０例下肢深静脉血栓（ＤＶＴ）患者进行围术期ｔ－ＰＡ、ＰＡＩ检测,以探讨其临床价值。现报告如下。１资料与方法１．１研究对象取临床确诊的３０例ＤＶＴ患者为观察组,男１２例,女１８例;年龄２４～７２岁,平均４９．３岁。另取健康人３０例为对照组。男１４例,女１６例,年龄３２～６５岁,平均４６．５岁。１．２检测方法　观察组３０例分别于术前、术后３天、术后６天采血。对照组３０例血标…     

氧化型低密度脂蛋白对血管内皮细胞ICAM-1 mRNA表达的影响

目的 探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对人血管内皮细胞表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响。方法 采用血管内皮细胞株EAhy926培养，观察150mg／L的氧化型低密度脂蛋白作用在不同时程(0～36h)及不同终浓度(0～300mg／L)的氧化型低密度脂蛋白作用24h对细胞间粘附分子-1mRNA表达的影响。RT-PCR测定ICAM-1基因表达水平。结果 氧化型低密度脂蛋白可诱导培养血管内皮细胞表达细胞间粘附分子-1mRNA，并呈时间和剂量依赖性增加。结论 ox-LDL可以促进EAhy926细胞间粘附分子-1表达，ICAM-1可能参与氧化型低密度脂蛋白所致的动脉粥样硬化进程。     

急性脑梗塞患者溶栓治疗期间血浆t—PA,PAI—1活性动态变化及意义

１９９６～１９９８年，我们观察了３１例急性脑梗塞患者超早期溶栓治疗期间血浆组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）及其快速抑制物（ＰＡＩ－１）的动态变化，现对其临床意义进行讨论。１　临床资料本文溶栓组患者３１例（男１９例、女１２例，平均年龄６１．７０９±６．８６岁），其中２９例为颈内动脉系，２例为椎基动脉系梗塞，有高血压史８例，糖尿病史４例，高血脂症６例。３１例均符合中华神经科学会制订的脑梗塞诊断标准〔１〕，并具备以下条件：①年龄＜７５岁；②无严重意识障碍（但椎基动脉系梗塞意识不清者入选）；③瘫肢肌力＜…     

救心胶囊对损伤内皮细胞PAI-1mRNA表达的影响

目的 观察救心胶囊对损伤的内皮细胞（CEC）纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）mRNA表达的影响。方法 采用EC体外培养方法，建立缺氧和LDL损伤EC模型。运用细胞原位杂交技术，检测EC的PAI-1 mRNA阳性率。结果 缺氧或LDL造成EC损伤后，PAI-1mRNA表达率皆显著升高（与正常组比较，P〈0.01；救心胶囊有降低PAI-1mRNA表达的作用（与损伤组比较，P〈0.01）。结论 救心胶囊能明显抑制EC在损伤状态下PAI-1mRNA表达率的升高，参与了抗血凝机制。     

冠心病患者血小板CD31及血浆纤维蛋白原表达水平的测定及其意义

目的检测冠心病(CHD)患者血小板内皮细胞黏附分子1(CD31)及血浆纤维蛋白原(FIB)水平,分析其与CHD严重程度的相关性并探讨其临床意义。方法入选研究对象97例,分为稳定型心绞痛(SAP)组(21例),急性冠脉综合征(ACS)组(43例)和正常对照组(33例)。采用流式细胞术检测血小板CD31,凝固法测定血浆FIB的表达水平。结果 ACS组血小板表面活性标志物CD31[(93.85±14.84)%],血浆FIB水平[(3.66±0.91)g/L]均明显高于对照组[(78.69±27.09)%,(3.06±0.62)g/L]和SAP组[(82.80±28.00)%,(3.14±0.56)g/L(均为P<0.05)];而对照组与SAP组CD31、FIB表达水平差异无统计学意义(均为P>0.05)。相关分析显示CD31与FIB呈显著正相关(r=0.337,P<0.01)。结论检测CHD患者CD31、FIB水平,能较好地反映CHD严重程度,对临床有重要的应用价值。     

Staurosporine对尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞表达t-PA与PAI-1的影响

目的 通过观察不同浓度Staurosporine (STS)对尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)表达组织型纤溶酶原激活物(tissue type plasminogen activator,t-PA)与1型纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)mRNA及蛋白的影响,探讨尼古丁所致内皮细胞纤溶紊乱的机制.方法 将体外培养的3～6代HUVECs随机分为对照组、尼古丁组及不同浓度STS组,STS组分别以20、50、100μmol/L STS预处理细胞30 min,再与100 μmol/L尼古丁孵育24 h.酶联免疫吸附双抗体夹心法检测细胞上清液t-PA与PAI-1蛋白含量,RT-PCR检测PAI-1 mRNA表达.结果 尼古丁组PAI-1 mRNA与蛋白表达较对照组升高(P值均＜0.05);不同浓度STS组PAI-1 mRNA与蛋白表达较尼古丁组降低(P值均＜0.05),且呈浓度依赖性,以100 μmol/L STS组作用为著,但PAI-1 mRNA与蛋白表达仍高于对照组(P值均＜0.05).各组间t-PA蛋白差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论 STS通过阻断蛋白激酶C通路的信号传导可部分减弱尼古丁诱导的血管内皮细胞纤溶功能紊乱.     

流体切应力对人内皮祖细胞组织纤溶酶原激活物基因表达的影响

目的研究不同流体切应力务件下,内皮祖细胞组织纤溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator,t-PA)基因表达的变化。方法分离健康志愿者外周血的单个核细胞并诱导分化成内皮祖细胞,并通过相差显微镜和免疫荧光标记等方法进行形态学观察和鉴定。种植内皮祖细胞到小径人工血管表面后,分为静态组、低切应力组(0．5 Pa)、中切应力组(1．5 Pa)和高切应力组(2．5 Pa)4个不同处理组,之后用ELISA各组不同时间点培养液中t-PA的水平,并用半定量RT-PCR测定切应力处理25 h后,不同切应力组内皮祖细胞t-PA的基因表达。结果外周血单个核细胞在体外诱导分化成为内皮祖细胞,ac-LDL吞噬及lectin抗体荧光标记双阳性,FLK-1和vWF免疫荧光抗体染色均为阳性。提高流体切应力可以增加t-PA的分泌,上调内皮祖细胞t-PA的基因表达。结论提高流体切应力能明显促进内皮祖细胞t-PA的分泌和基因表达,有助于改善内皮祖细胞的生理功能。     

Effects of humic acid on the viability and coagulant properties of human umbilical vein endothelial cells

We have previously shown that humic acid (well-water humic acid, HA, and synthetic humic acid, SHA) enhances cell surface expression of tissue factor (TF). Here we report that incubation of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) for 2 hr with HA or SHA cause a rapid rise in TF mRNA levels, as shown by Northern blot analysis. To understand the cytotoxic and fibrinolytic effects of HA and SHA on cultured HUVEC, the cells were treated with varying concentrations of HA and SHA for various periods of time. Both HA and SHA (10–200 μg/ml) inhibited the viability of subconfluent HUVEC, cultured in the presence or absence of 20% FBS (Fetal Bovine serum) in the culture medium, in a dose-dependent manner. Both HA and SHA induced surface changes in the HUVEC as revealed by scanning electron micrography (SEM). However, protocatechuic acid, the monomer of SHA, did not significantly inhibit cell growth, and showed a cytotoxic effect only at 200 μg/ml. Furthermore both HA and SHA stimulated HUVEC to produce plasminogen activator inhibitor (PAI-1) and tissue plasminogen activator (t-PA) in a dose and time dependent fashion; the amount of PAI-1 produced was found to exceed that of t-PA. The monomer of SHA did not have this stimulatory effect. These results distinctly suggest that in addition to the inhibition of viability HA is involved in TF induction and PAI-1 synthesis in HUVEC and these may be some of the plausible mechanisms underlying the thrombotic disorders in Blackfoot disease. © 1996 Wiley-Liss, Inc.     

吡格列酮对人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)作用下,吡格列酮对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达的影响。方法将培养的第4代HUVECs分5组:空白组(无干预);ox-LDL组(80 mg/L ox-LDL);低浓度组(1μmol/L吡格列酮+80 mg/L ox-LDL);高浓度组(10μmol/L吡格列酮+80 mg/Lox-LDL);对照组(10μmol/L吡格列酮),各组培养24 h后,采用流式细胞仪检测LOX-1的表达,采用RT-PCR检测LOX-1 mRNA的表达。结果与空白组比较,对照组LOX-1及LOX-1 mRNA表达均无明显改变(P0.05),ox-LDL组、低浓度组和高浓度组LOX-1及LOX-1 mRNA表达明显增多(P0.01);与ox-LDL组比较,低浓度组和高浓度组LOX-1及LOX-1 mRNA表达明显降低(P0.01);高浓度组较低浓度组降低更明显(P0.05)。结论吡格列酮能降低ox-LDL刺激下的HUVECs LOX-1及LOX-1 mRNA的表达,提示吡格列酮可能通过干预ox-LDL的病理生理过程起到抗动脉硬化的作用。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞纤溶系统的影响

目的探讨同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）对血管内皮细胞纤溶系统影响。方法（1）将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）分为10个实验组（0、10、50、200、500μmol／L Hcy组及叶酸和上述各Hcy点共同培养组）,培养24h后,酶联免疫吸附实验法（ELISA）测定各组细胞上清液中纤溶酶原激活剂（plasminogen activator,tPA）及纤溶酶原激活物抑制剂1（plasminogen activator inhibitor1,PAI-1）抗原含量,逆转录聚合酶链反应分析（RT-PCR）法分析各组tPA及PAI-1的mRNA表达水平。（2）急性心肌梗死（AMI）患者53例及健康对照组48例,ELISA测定空腹血浆tPA及PAI-1含量,高效液相色谱法测定血浆Hcy水平。结果（1）500μmoL／L Hcy组PAI-1抗原及mRNA表达水平均明显增高（P〈0．05）。（2）以单纯培养基为对照组,生理浓度Hcy组内皮细胞tPA抗原合成及mRNA表达明显增高（P〈0．05）,而以10μmoL／L Hcy组为对照组时,500μmoL／L Hcy组tPA抗原合成及mRNA表达水平则明显减少（P〈0．05）。（3）500μmoL／L Hcy与叶酸共同培养组和单纯Hcy组相比,可以明显提高内皮细胞tPA抗原的合成及mRNA表达,减少PAI-1抗原合成及mRNA表达（P〈0、05）。（4）AMI组Hcy、tPA及PAI-1均明显高于健康对照组（P〈0．05）。结论在体外细胞时,超生理浓度Hcy可以通过下调tPA、上调PAI-1的mRNA表达,减少内皮细胞tPA抗原的分泌及增加PAI-1抗原的合成,可能降低纤溶系统的活性。叶酸则可以减少Hcy引起内皮细胞纤溶系统的损害,起到保护作用。Hcy是AMI的一个独立危险因素。     

去天冬氨酸血管紧张素-1对人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的观察天冬氨酸血管紧张素-1(des-aspartate-angiotensin1,DAA-1)对过氧化氢致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法实验分为正常对照组,过氧化氢模型组,过氧化氢加DAA-1组(低剂量、中剂量、高剂量组)。倒置显微镜下观察细胞形态、密度。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,比色法测定细胞培养液中超氧化物歧化酶,活性、丙二醛及乳酸脱氢酶浓度。免疫细胞化学方法测定组织纤维蛋白溶酶原激活物,Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子表达量。逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定细胞内皮素1和血栓调节蛋白mRNA的表达。结果DAA-1能明显抑制过氧化氢所致的细胞活力的降低[0.443±0.024vs.0.317±0.024,P0.01],减少细胞内乳酸脱氢酶释放[(102.35±9.87)U/Lvs.(242.78±16.10)U/L,P0.01],提高超氧化物歧化酶活力[(19.10±2.33)U/mLvs.(8.16±3.48)U/mL,P0.01],并呈剂量依赖性作用;能明显减少内皮细胞在氧化过程中丙二醛的生成[(1.35±0.19)U/mLvs.(2.33±0.48)U/mL,P0.01],增加组织纤维蛋白溶酶原激活物蛋白表达,减少Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子蛋白表达;并能明显抑制内皮素mRNA的表达和提高血栓调节蛋白mRNA的表达。结论DAA-1对过氧化氢所致人脐静脉内皮细胞损伤具有明显的保护作用。     

t-PA基因修饰的内皮祖细胞对大鼠急性心肌梗死的治疗作用

目的探讨组织型纤溶酶原激活物(t-PA)基因修饰的脐血内皮祖细胞(EPCs)移植治疗对大鼠急性心肌梗死的治疗作用。方法体外扩增EPCs,将构建的t-PA基因慢病毒表达载体转染脐血EPCs,建立大鼠心肌梗死模型,实验随机分为PBS组、空载体EPCs组、单纯EPCs组和t-PA EPCs组。大鼠急性心肌梗死术后3 h开始移植治疗,t-PA EPCs组、EPCs组和空载体EPCs组静脉注射t-PA基因转染的EPCs、单纯EPCs和空载体EPCs。移植4周后,采用心脏超声评价心脏功能及检测血浆N末端B型脑钠钛前体(NT-Pro-BNP)的表达水平,Western-blot检测心肌组织中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2/基质金属蛋白酶9(MMP-2/MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)的表达水平;移植8 h后,ELISA法检测血清中t-PA、D-二聚体、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)和纤维蛋白原(Fib)表达情况。结果与PBS组、空载体EPCs组以及单纯EPCs组比较,t-PA基因修饰EPCs可明显改善心肌梗死后大鼠的心肌组织病理改变,大鼠急性心肌梗死心功能各参数改善最为显著; t-PA EPCs组NT-Pro-BNP的表达水平显著低于其他各组; t-PA EPCs组VEGF和TIMP的表达水平显著高于其他各组;相反,基质金属蛋白酶(MMP-2/MMP-9)的表达水平显著低于其他各组。t-PA EPCs组t-PA、D-二聚体表达均显著高于其他各组,而PAI-1、Fib表达均显著低于其他各组。结论 t-PA基因修饰的EPCs移植能有效治疗大鼠急性心肌梗死,其具体治疗作用与其改善心脏功能、促进血管新生、抑制心室重构、抑制血栓形成或增加溶栓作用等有关。     

血管紧张素II对培养的人脐静脉内皮细胞产生纤溶因子的影响

摘要：　目的 探讨血管紧张素II(angiotensin II，Ang II)对内皮细胞纤溶功能的影响及缬沙坦的干预作用。方法 用酶消化法收集并培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)，将10-6，10-7，10-8，10-9mol/L Ang II分别与HUVECs共同孵育12 h；10-7mol/L Ang II和HUVECs分别孵育0，2，6，12，24，48 h；10-7mol/L Ang II和10-5，10-6，10-7，10-8mol/L缬沙坦(与HUVECs孵育12 h；10-6mol/L缬沙坦与HUVECs孵育12 h。用酶联免疫吸附法测定上清液中组织型纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator，tPA)和1型纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)抗原浓度。结果 Ang II呈浓度依赖性升高HUVECs的PAI-1水平，最大效应浓度10-7mol/L；10-7mol/L AngII对HUVECs作用，孵育2 h PAI-1含量即升高，12 h达高峰 198μg/L；缬沙坦呈浓度依赖性降低Ang II促HUVECs分泌PAI-1，缬沙坦最大效应浓度10-6mol/L； AngII和缬沙坦对HUVECs分泌tPA没有明显影响。结论 AngII通过促进HUVECs分泌PAI-1而降低纤溶活性；缬沙坦通过抑制AngII的促PAI-1分泌作用而提高纤溶活性，提示有助于动脉粥样硬化血栓性疾病的防治。     

人脂肪组织抵抗素mRNA的表达与代谢综合征无关

用一步法半定量RT-PCR技术检测2型糖尿病代谢综合征患者、非糖尿病代谢综合征患者以及正常对照者大网膜及腹部皮下脂肪组织抵抗素mRNA表达。结果显示脂肪组织抵抗素mRNA表达与代谢综合征无关。