应用PCR技术快速鉴定申克孢子丝菌的实验研究

采用Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA,用申克孢子丝菌种特异性引物分别对21株申克孢子丝菌的基因组DNA进行PCR扩增.成功提取21株申克孢子丝菌基因组DNA,并用申克孢子丝菌种特异性引物分别从21株申克孢子丝菌基因组DNA中获得长度为320 bp的扩增产物.以申克孢子丝菌特异引物为基础的聚合酶链反应法鉴定申克孢子丝菌简便、快捷、特异,可用于临床诊断.     

申克孢子丝菌随机扩增DNA多态性分型研究

目前国际上采用分子生物学方法如线粒体DNA限制性片段长度多态性（RFLP）分析等进行菌株分型研究,对流行病学研究有很大促进作用。为了解我国北方地区申克孢子丝菌（Sporothrix schenckii）DNA水平的特点,笔者对黑龙江地区孢子丝菌病患者皮损中分离的29株申克孢子丝菌进行随机扩增DNA多态性（RAPD）分型,探讨不同感染部位的致病菌与RAPD型别之间的关系。     

阴囊孢子丝菌病1例及申克孢子丝菌基因型检测

孢子丝菌病是由申克孢子丝菌引发的一种皮肤、皮下组织和附近淋巴管的慢性感染性疾病,多发于四肢等容易暴露受伤的部位.本文报道1例发生于阴囊的固定型皮肤孢子丝菌病,并对申克孢子丝菌进行了形态学和分子生物学水平的鉴定.     

申克孢子丝菌基因型与临床表现型关系研究

目的了解申克孢子丝菌的基因学特征，探索其基因型特征与临床表现型的关系。方法收集不同临床型别孢子丝菌病的申克孢子丝菌分离株并提取DNA，再用随机扩增DNA多态性方法（RAPD）进行PCR扩增。结果①共选用10个随机引物进行扩增，筛选出4个具有较好扩增片段的引物。②不同菌株同-引物扩增均见-共有DNA片段。③不同临床型孢子丝菌病的申克孢子丝菌分离株带型有差异。结论随机扩增DNA多态性研究发现申克孢子丝菌具有一定的种内差异，其DNA带型与菌株的临床型有关。     

不同地区申克孢子丝菌基因分型研究

目的:探讨申克孢子丝菌基因分型特征与菌种来源的关系。方法:采用随机扩增DNA指纹方法(RAPD)对来源于不同地区的31株申克孢子丝菌临床分离株进行DNA多态性分析。结果:①筛选出4个具有较好扩增片段的引物。②31株菌的DNA带型不完全相同,具有一定的遗传变异性,与菌株的地区来源有关。③同一患者不同部位取材的菌株间DNA型可不同。结论:随机扩增DNA多态性方法可用于申克孢子丝菌的DNA分型,其DNA带型与菌株的地区来源有关。     

申克孢子丝菌的分子生物学研究进展

申克孢子丝菌是孢子丝菌病的致病菌，以双相致病真菌。发生孢子丝菌病是由于宿主体内酵母细胞增殖所致，同时还与宿主防御机制有关。对其基因分型、部分基因的鉴定、分子诊断方法及致病机理的分子基础等方面的研究进展进行了综述。     

申克孢子丝菌病3例报告

我科在1998年～2001年发现3例孢子丝菌病,现报告如下。1 病例报告 例1,患者,男,45岁,1998年7月就诊。病史6年,发病前是农民,有外伤史,现为个体户,广东籍。右踝部一鹤鹑蛋大紫红色呈疣状增生样结节,近半年来破溃、糜烂、与皮下粘连。近2个月     

申克孢子丝菌TPS基因生物信息学分析

目的:分析和预测申克孢子丝菌海藻糖磷酸合成酶(TPS)基因及其编码蛋白的生物信息学特征及功能。方法:利用生物信息学软件和网站分析预测申克孢子丝菌TPS基因及其编码蛋白的结构和功能特征。结果:申克孢子丝菌TPS基因全长为2 864 bp,编码905个氨基酸。Target P和MotifScan预测该蛋白定位于胞浆中,具有糖基转移酶、海藻糖磷酸酶两大功能域及丰富的修饰位点,其中磷酸化位点尤为丰富,包含cAMP依赖性磷酸激酶、蛋白激酶C(PKC)和酪氨酸激酶(CK2)磷酸化位点。TPS蛋白是亲水性蛋白,无跨膜结构,未发现信号肽。结论:预测申克孢子丝菌TPS基因编码蛋白位于胞浆中,具有糖基转移酶、海藻糖磷酸酶两大功能域及丰富的修饰位点的结构功能特点,可行相应小分子抑制剂筛选以开发新型抗真菌药物。     

申克孢子丝菌随机扩增 DNA多态性研究

目的 了解申克孢子丝菌的基因学特征,研究DNA分型与菌种来源和临床表现的关系。方法 以随机扩增DNA多态性方法对来源于不同地区及不同临床类型的24株申克孢子丝菌进行DNA多态性分析。结果 （1）筛选出3个具有较好扩增征段的引物,即引物OPAA11：5′-ACCCGACCTG-3′,OPD18：5′-GAGAGCCAAC-3′,OPBO7:5′-GGTGACGCAG-3′。（2）24株菌的DNA带型不完全相同,具一定遗传变异性。（3）不同菌株同一引物扩增均见一共有DNA片段,（4）播散型DNA带型与皮肤淋巴管型不同,结论 随机扩增DNA多态笥方法可用于申克孢子丝菌的DNA分型,其带型与菌株的地区来源和临床表现有关。     

申克孢子丝菌的分子生物学研究进展

申克孢子丝菌是孢子丝菌病的致病菌 ,为双相致病真菌。发生孢子丝菌病是由于宿主体内酵母细胞增殖所致 ,同时还与宿主防御机制有关。对其基因分型、部分基因的鉴定、分子诊断方法及致病机理的分子基础等方面的研究进展进行了综述     

应用PCR-RFLP进行申克孢子丝菌的分子生物学鉴定

目的　探索一种简单、快速的申克孢子丝菌的鉴定方法。方法　应用真菌通用引物ITS1和ITS4对来源于不同地区及不同临床型别孢子丝菌病的 2 8株申克孢子丝菌以及 9种其他临床上重要的真菌进行PCR扩增 ,利用限制性内切酶HaeⅢ对PCR产物进行酶切分析鉴定。结果　所有 2 8株申克孢子丝菌和其他 9种真菌均扩增出一条约 3 5 0bp的片段 ,其中 2 8株申克孢子丝菌RFLP带型一致 ,与 9种其他临床上重要的真菌RFLP带型差异较明显。 结论　PCR RFLP可以为建立一种简单、快速鉴定申克孢子丝菌的方法提供依据。     

种特异性引物鉴定申克孢子丝菌

目的 研究申克孢子丝菌的分子鉴定方法,为孢子丝菌感染的分子诊断奠定基础.方法 对22株申克孢子丝菌和12种12株暗色真菌临床分离株的核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)进行聚合酶链反应扩增.对10株来源于中国不同地区及1株来源于美国的申克孢子丝菌的扩增产物测序并进行分析,以获得的ITS2区序列为靶序列设计出申克孢子丝菌的种特异性引物(SSP),并用该引物扩增全部受试菌株.结果 序列分析显示,申克孢子丝菌rDNA的ITS2区相当保守,特异性引物对22株申克孢子丝菌可扩增出一条300bp的片段,其他受试菌株均为阴性.结论 应用设计出的种特异性引物,结合PCR方法,鉴定申克孢子丝菌特异、敏感、可靠,可用于临床诊断.     

山苍子油抗申克孢子丝菌的动物实验研究

目的探讨山苍子油灌胃治疗实验性小鼠皮肤孢子丝菌感染的疗效。方法制备小鼠皮肤孢子丝菌(包括临床分离固定株和淋巴管株)感染的动物模型,造模成功后给予山苍子油灌胃治疗,同时设10%K I治疗组和生理盐水治疗组(空白对照组),观察治疗前后皮损的直径变化。结果山苍子油灌胃治疗4周后,小鼠皮损明显缩小,甚至消退,其皮损直径变化与空白对照组比较差异有显著性,与10%K I治疗组比较差异无显著性。结论山苍子油灌胃治疗对小鼠皮肤孢子丝菌病有一定的疗效。     

从芦苇等植物及土壤中分离孢子丝菌的研究

目的　为掌握吉林省自然环境中孢子丝菌的分布状态。方法　深入该病高发区通榆、农安及低发区图们等地 ,采集腐烂芦苇、玉米秸、腐木及土壤 ,从中分离孢子丝菌。分离菌株再作继代培养 ,观察菌落形态、颜色、玻片培养镜下生长形态及双相试验等鉴定菌种。结果　共分离出 2 1株申克孢子丝菌。从玉米秸、腐木及土壤中分离出孢子丝菌 ,在国内为首次报道 ,从玉米秸中分离出孢子丝菌 ,在国外亦属首次。结论　在高发区的芦苇、玉米秸及土壤中有孢子丝菌寄生 ,在低发区的芦苇、腐木中也有孢子丝菌寄生。掌握孢子丝菌在我省自然环境中的分布状态 ,对防治该病有重要意义。     

Isolation of both Sporothrix schenckii and Nocardia asteroides from a mycetoma of the forefoot

Mycetoma is a localized primary subcutaneous infection due to fungi (eumycetoma) or aerobic actinomycetes (actinomycetoma). We report a patient who acquired an implantation infection on the forefoot following a motorcycle accident in Crete. Both Sporothrix schenckii and Nocardia asteroides were isolated simultaneously from the lesion. Under combined therapy with itraconazole and trimethoprim-sulphamethoxazole for 7 months the lesion healed completely. A combination of causative organisms in mycetomas is rare, and the combination of S. schenckii and N. asteroides together has not been reported from one lesion.     

申克孢子丝菌4Hppd基因结构功能的生物信息学分析

 目的:初步预测及分析申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii，Ss.)对羟苯基丙酮酸双加氧酶基因（4Hppd）编码蛋白的结构和生物学功能特征。方法：应用生物信息学在线工具预测分析Ss.4Hppd编码蛋白的理化性质及功能特征。结果：Ss.4Hppd基因编码蛋白含对羟苯基丙酮酸双加氧酶保守域，由477个氨基酸构成，理论分子量为52.0 kD，等电点为5.98，半衰期较长，该蛋白为非分泌蛋白，定位于线粒体中。其二级结构以无规则卷曲及α-螺旋为主，另外还存在乙二醛酶功能域及丰富的磷酸化位点，与其他致病真菌同源蛋白有较高的相似度。结论：预测Ss.4HppD位于线粒体中，具有乙二醛酶功能域结构功能特点及丰富修饰位点，可为其表达、晶体结构分析及小分子抑制剂开发提供参考。     

Sporothrix schenckii type 3D (mtDNA-RFLP): report of an osteoarticular case

Sporotrichosis is a frequent subcutaneous mycosis in Mexico and lymphocutaneous cases are the most common type. Extracutaneous or disseminated forms are exceptional and are usually seen in immunosuppressed hosts. We report the case of a 74-year-old immunocompetent male with osteoarticular involvement. The isolated Sporothrix schenckii was classified as type 3D according to restriction fragment length polymorphism analysis of the mitochondrial DNA (mtDNA-RFLP).     

32株孢子丝菌临床株两种基因分型方法比较

目的 确定哪种孢子丝菌基因分型的方法分辨力更高,所分基因型与临床表现及地域分布相关性更好。方法 以32株不同地区及临床类型的孢子丝菌菌株为研究样本,分别进行mtDNA RFLP分型,基因组DNA RAPD分型和rDNA RFLP-Southern blotting杂交分型,并进行比较。结果 mtDNA-RFLP方法将受试菌株分为5型,分别对应Ishizaki等命名的1,4,6,7,20五种基因型;RAPD方法将受试菌株分为7种基因型（I-VII型）; rDNA RFLP-Southern blotting杂交方法将受试菌株分为15种基因型（A-O型）,且其所分基因型与菌株的南北方分布及临床表现有一定相关性。结论 三种孢子丝菌基因分型方法中,rDNA RFLP-Southern blotting杂交方法分辨力较高,所分基因型与临床表现及地域分布相关性更好。