半夏与其混淆品水半夏的鉴别

目的:鉴别半夏与其混淆品水半夏。方法:从性状、显微、理化三个方面进行鉴别。结果:半夏与混淆品水半夏具不同鉴别特征。结论:能准确地对半夏与混淆品水半夏进行鉴别。     

乌梅及其混淆品李子的蛋白多肽高效毛细管电泳法鉴别

目的 对乌梅及其混淆品进行蛋白多肽电泳鉴别。方法 采取高效毛细管电泳法对乌梅与其混淆品蛋白多肽进行分析。结果 乌梅及其混淆品蛋白多肽高效毛细管电泳图谱有明显的差异。结论 高效毛细管电泳可作为中药乌梅的生药鉴别方法。     

乌梅及其混淆品李子的蛋白多肽高效毛细管电泳法鉴别

目的 对乌梅及其混淆品进行蛋白多肽电泳鉴别。方法 采用高效毛细管电泳法对乌梅与其混淆品蛋白多肽进行分析。结果 乌梅及其混淆品蛋白多肽高效毛细管电泳图谱有明显的差异。结论 高效毛细管电泳可作为中药乌梅的生药鉴别方法。     

半夏药材中蛋白质IEF电泳图谱的研究

目的通过对半夏及其近缘植物的蛋白质电泳图谱比较,研究半夏药材的电泳鉴别方法。方法应用等电聚焦(isoe lectrofocus ing,IEF)技术,对不同产地半夏及其近缘植物块茎进行比较。结果半夏具有稳定的IEF电泳图谱,显示具有8条特征蛋白质带,并测定了其等电点(P I)值,半夏与其几种近缘植物的IEF谱有明显的区别。结论半夏IEF电泳图谱可作为半夏药材的鉴别依据,半夏特征蛋白质的P I值为半夏的鉴定和蛋白质分离纯化提供了参数。     

鸡内金及其混淆品的电泳图谱鉴定

目的:探讨不同生长阶段,不同性别的鸡内金及混淆品鸭内金、鸽子内金,建立鸡内金鉴别的简单方法。方法:用电极缓冲液超声提取样品中的蛋白质,经样品水解液加热水解后,用不连续SDS-PAGE法对不同生长阶段,不同性别的鸡内金及混淆品鸭内金,鸽子内金进行鉴别。结果:鸡内金与其混淆品鸭内金,鸽子内金有明显区别,不同生长阶段鸡内金SDS-PAGE图谱也有一定的区别。结论:该方法准确,可靠,重复性好,可对不同生长阶段,不同性别的鸡内金及混淆品的鉴别提供重要参数。     

半夏与其混淆品的鉴别

目的：准确识别中药饮片半夏,保证临床用药安全有效。方法：对中药行性状鉴别和粉末鉴别。结果：混淆品与药典所登载品种之间存在比较明显区别,容易识别。结论：通过性状鉴别和粉末鉴别可以有效区分半夏与其混淆品,保证临床用药安全。     

RAPD技术鉴定商品药材百合

目的鉴别商品药材百合及其混淆品,探讨商品药材鉴别的新方法。方法采用RAPD技术对商品药材百合进行了多态性分析,并构建聚类树型图。结果RAPD技术能从分子水平上检测种内差异,可以解决不同产地的商品药材百合与混淆品轮叶百合不易区分的难题。结论RAPD技术完全可以作为商品药材的一种较好的鉴别方法。     

三七及其混淆品蛋白多肽高效毛细管电泳法鉴别

目的：对三七及其混淆品进行蛋白多肽电泳鉴别。方法：采用高效毛细管电泳法对三七及其混淆品蛋白多肽进行分析。结果：三七及其混淆品蛋白多肽高效毛细管电泳谱图有明显的差异。结论：高效毛细管电泳可作为中药三七的生药鉴别方法。     

半夏栽培品遗传差异的AFLP分析

目的构建不同地区来源半夏栽培品的DNA指纹图谱,探讨利用AFLP分子标记在半夏遗传多样性、亲缘关系及种质鉴别上的可行性。方法运用扩增片段长度多态性技术(AFLP),对我国17个地区的51份半夏栽培品和4份掌叶半夏样品(外群)进行基因组DNA多态性分析。结果从64对引物组合中筛选出8对多态性丰富、鉴别效率高的AFLP引物组合,构建了51份半夏栽培品的AFLP指纹图谱。聚类分析结果表明:所有半夏栽培品完全被区分开,来源地相同的种质表现出相对密切的亲缘关系,浙江等华东地区的栽培半夏同其他地区半夏有着明显遗传差异,聚类分析结果获得了Bootstrap校验的支持。结论AFLP分子标记可用于半夏遗传多样性、亲缘关系及种质鉴别分析,浙江、江苏等华东地区栽培半夏的遗传特性相对独立。     

鹿鞭药材及伪品的SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别研究

目的：探讨不同品种、产地鹿鞭药材及伪品的定性鉴定方法.方法：用电极缓冲液提取样品中的蛋白质,经样品水解液加热水解后,用连续系统SDS-PAGE法（凝胶浓度10%、厚度1.5mm,磷酸缓冲系统及恒流电泳）,对9个不同品种、产地鹿鞭药材及伪品牛鞭进行鉴别.结果：鹿鞭与其伪品有明显区别,不同品种的鹿鞭其SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹图,也有较明显的区别.结论：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法,可用于鹿鞭药材与伪品的鉴别,以及不同品种鹿鞭药材的鉴别.     

5产区不同产地半夏主要化学组分含量测定及整体质量评价

[目的] 通过对5产区17个产地及样地半夏药材中各化学组分进行含量测定,阐明不同产地半夏的化学组分累积规律和整体质量特征。[方法] 电位滴定法测定总有机酸含量,UV-VIS法测定多糖及总生物碱含量,水溶性热浸法测定总浸出物含量,进行主成分分析。[结果] 基于药典指标成分琥珀酸含量（2.5 mg/g）,各产地于1.06~4.31 mg/g,其中5个产地含量低于药典标准;基于生物碱类含量,在0.50~0.70 mg/g,各产地含量水平相当;各产地样品间浸出物含量差异较大,其中湖北荆州含量高达497.76 mg/g;各产地多糖类含量差异较大,甘肃产区平均含量总体较高,西和县含量为214.19 mg/g;野生半夏的浸出物、多糖类、有机酸类含量均高于栽培半夏;硫熏后半夏浸出物、多糖类、有机酸类含量均下降,生物碱类的含量基本保持不变。[结论] 湖北荆州、甘肃西和为半夏的优质产地,两地药材各化学组分总体水平较高;与栽培品相比,野生品半夏化学组分累积量总体水平较高;硫熏过程导致半夏各组分含量下降。     

掌叶半夏凝集素的分离纯化及其在体内外对小鼠肉瘤S180细胞的影响

目的:优化掌叶半夏凝集素的分离纯化方案,研究其在体内外对S180肿瘤细胞增殖的影响及细胞周期分布的特点。方法:经硫酸铵分级沉淀、热处理、DEAE离子交换层析和SDS-PAGE电泳等方法对掌叶半夏凝集素进行分离纯化,并用荧光光谱分析等生物化学方法研究其理化性质;MTT法检测其对S180细胞增殖的影响;流式细胞术检测其对S180细胞周期的影响,而动物实验观察其体内抑瘤效应。结果:掌叶半夏凝集素是一种非糖蛋白,分子质量为9 067.5 U,能特异性的凝集兔和鼠红细胞;与S180细胞作用24 h后有一定的抑制作用,而对其细胞周期(G2/M期)和凋亡率的影响不明显,体内抑瘤实验显示其平均抑瘤率仅为11.55%。结论:掌叶半夏凝集素体外能抑制S180细胞生长,却并非通过促进其细胞凋亡途径实现,而对S180荷瘤小鼠体内的肿瘤细胞杀伤作用弱且无明显的免疫激活作用。     

不同产地半夏的初步药效学评价实验研究

目的:比较四川,云南,贵州,山东,陕西5个不同省份产半夏在止咳祛痰功效上的差异.方法:1 小鼠氨水致咳实验:以引发咳嗽的潜伏期和3 min内小鼠咳嗽次数为指标,比较不同产区半夏的止咳作用;2 小鼠气管酚红排泌量实验:以小鼠气管中排泌酚红的量来评价不同产区半夏的化痰作用差异.结果:小鼠氨水致咳实验表明:与空白组比较,四川产半夏高剂量和山东产半夏高剂量有延长小鼠咳嗽潜伏期的作用(P<0.05),贵州产半夏低剂量及其高剂量能够显著延长小鼠咳嗽潜伏期(P<0.01);云南产半夏高剂量、贵州产半夏低剂量及其高剂量、山东产半夏高剂量皆有抑制小鼠咳嗽作用(P<0.05).小鼠气管酚红排泌量实验结果显示:与空白组相较,四川产半夏高剂量能够增加气管酚红排泌量,具有祛痰作用(P<0.05);四川产半夏低剂量、云南产半夏、贵州产半夏、陕西产半夏和山东产半夏各高低剂量皆有明显的增加气管酚红排泌量,有极明显的祛痰作用(P<0.001).结论:贵州产半夏水提取物在抑制小鼠咳嗽潜伏期和降低小鼠咳嗽次数方面与其他4个不同产地半夏相比,效果更为明显.5个不同产地半夏.水提液在增加小鼠气管排泌量方面都有良好作用.     

基于HPLC指纹图谱的半夏及其伪品鉴别研究

目的?建立高效液相色谱法（HPLC）对半夏及其伪品进行指纹图谱分析,以鉴定半夏的真伪。方法?用SB-Aq色谱柱（4.6?mm×250?mm,5?μm）,以0.2%磷酸二氢铵溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,进样量20?μL,流速0.8?mL/min,柱温30?℃,采用双波长检测。结果?生半夏共有10个共有峰,通过对照品比对指认了其中5个共有峰;伪品半夏中同时含有8种有效成分;随机选取部分生半夏与伪品半夏样品建立叠加指纹图谱得出:虎掌南星于34~38?min出现2个特征峰;姜水半夏在32~34?min出现2个特征峰;而水半夏出峰整体峰高较低,峰面积偏小。结论?建立的指纹图谱特征性强,能明显区分半夏与其伪品水半夏及虎掌南星,可用于半夏的鉴别和质量控制。      

2种工艺姜半夏中氨基酸及无机元素含量的比较

目的:比较2种工艺姜半夏中总氨基酸和微量元素的含量。方法:氨基酸分析法;阳离子交换树脂层析法;等离子直读光谱法。结果:2种不同的炮制工艺炮制所得的姜半夏中总氨基酸含量、游离氨基酸含量,以正交法略高;2种姜半夏均含有与生半夏种类相同的无机元素,但Fe、Mg、Cr、Mn、Na、Ni、P、Sr、V的含量以正交法较高,而有害元素Al3 、Ba2 以药典法较高,半夏的其它炮制品中的微量元素均较正交法和药典法姜半夏低。单纯的姜汁煮半夏中未检出色氨酸。结论:正交法炮制工艺优于药典法。     

大鲵血清蛋白成分及其分子量的测定

目的 :为进一步确定大鲵的分类地位提供证据。方法 :用SDS -PAGE法进行大鲵血清蛋白组份的分离 ,通过与已知分子量的标准参照蛋白比较 ,确定各组份的分子量。结果 :大鲵血清蛋白可分离到 10种不同的成分 ,其分子量范围在 2 310 0 0～2 0 10 0Da之间。结论 :大鲵血清蛋白的组份及其分子量的测定结果具有一定的可信度 ,血清蛋白的遗传特征与鲤有明显的不同。     

基于叶绿体rbcL基因对不同产区浙贝母的PCR扩增体系及序列差异研究

目的:建立不同产区浙贝母的叶绿体rbcL基因的PCR扩增体系,并对产区间的序列差异进行分析。方法:将采集于27处不同产地的浙贝母鉴定、切碎、打粉后保存备用。总DNA提取方法采用试剂盒法,PCR扩增体系主要考察退火温度、Taq酶浓度、Mg~(2+)、dNTP浓度等因素。基因序列分析采用Conting Express和DNAman软件。结果:50μL反应体系中含Taq酶1 U,2.5 mmol/L Mg~(2+)、dNTP分别为2μL,退火温度为52℃。浙贝母rbcL序列全长599 bp,G+C含量为50.7%,浙贝母不同产区rbcL序列未发现突变位点。结论:所建立的体系可用于浙贝母rbcL序列分析,为浙贝母的rbcL序列研究奠定基础。研究结果提示rbcL序列在浙贝母种间或者产地间的分辨率较低,不适合作为浙贝母种间和产地间的鉴别方法。     

质粒辅助重组腺病毒相关病毒的制备和纯化

目的　探讨制备、纯化 2型重组腺病毒相关病毒 (rAAV2 )载体的简便、高效的方法。方法　采用磷酸钙方法将质粒辅助腺病毒相关病毒重组系统转染HEK2 93T细胞 ,重组rAAV ,通过氯仿 PEG80 0 0 /NaCl 氯仿法结合超滤纯化rAAV病毒。采用蛋白电泳和Western印迹检测病毒外壳蛋白 ,斑点杂交和病毒转染检测病毒的物理和感染滴度。结果　rAAV物理滴度为 2× 10 13 /ml,感染滴度为 5× 10 11/ml。结论　本实验方法简便、高效 ,不需要特殊的仪器设备 ,在普通实验室均可完成 ,制备的病毒纯度和滴度均可以满足动物实验需要。     

鼻咽癌细胞株HNE-1蛋白质二维电泳图谱的建立

目的 建立及优化聚丙烯酰胺二维凝胶电泳技术，结合分析软件，全面展示鼻咽癌细胞株HNE—1的蛋白质表达谱，为进一步开展鼻咽癌的蛋白质组学研究奠定了基础。方法 大规模培养HNE—1细胞，利用优化的蛋白质抽提技术获得HNE—1细胞的总蛋白。选用线性及非线性的不同pH梯度固相(IPG)干胶条对细胞总蛋白等电聚焦以及聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，初步建立了HNE—1细胞株总蛋白质的二维电泳(2—DE)图谱。结果 采用不同pH梯度范围的IPG胶条和优化的2—DE技术能够有效展示HNE—1细胞全蛋白质表达谱。结论 重叠窄pH梯度范围的IPG胶条提高了2—DE中蛋白质的分离效果。