姜黄素对人子宫内膜癌细胞增殖抑制的初步研究

目的观察姜黄素对体外培养的人子宫内膜癌(HEC-1-B)细胞增殖和细胞周期分布的影响。方法将体外培养的HEC-1-B细胞随机分为5组:对照组、姜黄素Ⅰ组、姜黄素Ⅱ组、姜黄素Ⅲ组和姜黄素Ⅳ组。分别给予不同浓度的姜黄素(0,10,20,40,80)μmol/L培养48 h。采用MTT法和Western blot法检测HEC-1-B细胞的增殖程度;流式细胞仪进行细胞周期时相分析。结果①MTT法显示培养48 h后,姜黄素组的吸光度值A490 nm低于对照组(P<0.01),且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。②Western blot法结果显示,与对照组比较,姜黄素作用48 h后,姜黄素各组的PCNA表达减少(P<0.01),且在10～80μmol/L范围内呈剂量依赖性。提示姜黄素可抑制HEC-1-B细胞内PCNA的表达。③流式细胞仪检测显示培养48 h后,姜黄素组的G2/M比例高于对照组(P<0.01),且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。结论在一定浓度(10～80μmol/L)范围内,姜黄素可抑制体外培养的HEC-1-B细胞增殖,阻止细胞周期进展。这可能是姜黄素抗HEC-1-B细胞作用的机制之一。     

黄芪注射液对人子宫内膜癌细胞β-catenin和E-cadherin表达的影响

目的研究黄芪注射液对子人宫内膜癌HEC-1-B 细胞β-catenin 和E-cadherin 基因和蛋白表达的影响。方法分别采用RT-PCR和免疫组化的方法检测β-catenin和E-cadherin基因和蛋白的表达。用含不同浓度的黄芪注射液的条件培养基分别培养人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B 24、48 、72 h后,应用RT-PCR检测各组细胞中β-catenin、E-cadherin基因表达,应用免疫细胞化学法检测HEC-1-B中β-catenin、E-cadherin蛋白表达。结果RT-PCR显示,随着子宫内膜癌细胞在含有黄芪注射液的条件培养基中培养时间的延长,细胞中E-cadherin基因表达逐步增强（P＜0.05）,而β-catenin基因表达逐步减弱（P＜0.05）。免疫组化染色结果显示,与对照组比较,黄芪注射液可明显降低子宫内膜癌HEC-1-B细胞中β-catenin蛋白的表达、增加E-cadherin蛋白的表达（P＜0.05）,而且黄芪注射液浓度越高处理时间越长β-catenin表达更低（P＜0.05）,黄芪注射液浓度越高E-cadherin表达更高（P＜0.05）。结论黄芪注射液可呈剂量和时间依赖性促进E-cadherin基因和蛋白的表达、抑制β-catenin基因和蛋白的表达,从而使WNT信号通路受到抑制。这可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

MAPK信号通路调控子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-1-B,采用MTT法检测增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell试验检测细胞侵袭能力,划痕试验检测细胞迁移能力,Western印迹法检测细胞中磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达水平的影响。结果:p38MAPK信号通路抑制剂SB203580对子宫内膜癌细胞HEC-1-B的增殖具有抑制作用,且随着作用浓度的升高抑制作用增强(P0.05)。与对照组比,施加抑制剂SB203580能够导致G0/G1期HEC-1-B细胞比例增多,S期和G2/M期细胞比例减少,细胞侵袭抑制率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞中p-p38MAPK, PCNA,MMP-2蛋白表达下调,差异具有统计学意义(P0.05)。且抑制剂SB203580组间比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:抑制MAPK信号通路能够抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与下调细胞中PCNA,MMP-2蛋白表达有关。     

抗肿瘤药物雷帕霉素调控子宫内膜癌细胞增殖、分化、凋亡的研究机制

目的雷帕霉素对子宫内膜癌细胞增殖、分化、凋亡的影响及机制。方法 5 nmol/L、10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的雷帕霉素作用于子宫内膜癌HEC-1B细胞24 h、48 h、72 h后,CCK8检测细胞增殖,计算IC50;36 nmol/L的雷帕霉素作用于HEC-1B细胞0 d、1 d、3 d、5 d、7 d后,RT-PCR检测细胞中ALP的mRNA表达;36 nmol/L的雷帕霉素作用于HEC-1B细胞48 h,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Cleaved caspase3、m TOR、p-p70S6K蛋白表达。结果随着时间及浓度的增加,10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的雷帕霉素组细胞存活率均显著低于对照组(P0.01),根据IC50值选择36 nmol/L的雷帕霉素作为后续研究对象;ALP在1 d、3 d、5 d、7 d的mRNA表达均显著高于对照组(P0.01);与对照组比较,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达均显著升高,m TOR、p-p70S6K蛋白表达显著下调(P0.01)。结论雷帕霉素能显著抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖,诱导细胞分化及促进细胞凋亡,其机制与抑制m TOR/p70S6K信号通路有关。     

促红细胞生成素预防人脐静脉内皮细胞凋亡的作用

目的 建立氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡模型,探讨促红细胞生成素(EPO)对ox-LDL诱导HUVECs凋亡的影响.方法 取体外培养3～6代的HUVECs用于实验.实验分为两组:一组细胞予以不同浓度(6.25、50、100 kU/L)重组人促红细胞生成素(rhEPO)预处理24 h,再加入100 mg/L ox-LDL孵育48 h;另一组细胞加入反式或顺式LOX-1 mRNA预处理24 h,再加入 100 mg/L 的ox-LDL孵育12 h.采用存活率、凋亡率和Bcl-2/Bax比值评价细胞凋亡情况.结果 与ox-LDL组比较,随rhEPO浓度的递增,细胞存活率增高,细胞凋亡率降低,凋亡蛋白Bcl-2/Bax比值增高(P均<0.05),呈剂量依赖性.反式LOX-1 mRNA(0.5 μmol/L)预处理组凋亡蛋白Bcl-2/Bax比值较ox-LDL组明显增高(P<0.05);顺式LOX-1 mRNA(0.5 μmol/L)预处理组Bcl-2/Bax比值与ox-LDL组则无明显差异.结论 ox-LDL可以诱导HUVECs凋亡,并且通过LOX-1 mRNA来调节,rhEPO可增高Bcl-2/Bax比值,抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡.     

塞来昔布对子宫内膜癌细胞生长的抑制作用

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长的作用.方法:通过细胞生长曲线及MTT试验研究不同浓度的塞来昔布对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的作用.结果:塞来昔布能够有效地抑制HEC-1-B细胞的生长,并呈一定的剂量和时间依赖关系.结论:塞来昔布能够抑制子宫内膜癌细胞HEC-1-B的生长.     

姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法将人类绒毛膜癌细胞JEG-3细胞株随机分为对照组和姜黄素干预组。姜黄素干预组加入100μl不同浓度的姜黄素与细胞孵育24 h;对照组只加入PRMI 1640培养液与等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT检测检测细胞抑制率。姜黄素干预组加入100μl姜黄素(终浓度为40μmol/L)与细胞孵育24 h后,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot检测增殖相关蛋白Ki-67和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达,以及凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(Bax)的表达。结果与对照组相比,姜黄素干预组JEG-3细胞培养24 h后吸光度显著下降(P 0. 05);姜黄素对JEG-3细胞抑制作用呈药物浓度依赖性,半抑制浓度(IC50)为(39. 33±1. 02)μmol/L;与对照组相比,JEG-3细胞的凋亡率明显升高,增殖相关蛋白Ki-67和Cyclin D1的表达显著降低(P 0. 05),凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的蛋白表达量显著升高(P 0. 05),Bcl-2的表达量显著降低(P 0. 05)。结论姜黄素可以下调人类绒毛膜癌细胞增殖相关蛋白的表达,上调凋亡相关蛋白的表达,调控其增殖和凋亡。     

过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的作用

目的探讨过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移的影响。方法通过RT-PCR检测人子宫内膜上皮细胞HEEC和子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平。用Lipofiectamine~(TM)2000将miR-132-3p mimics及NC分别转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,分为miR-132-3p mimics组、NC组以及对照组,对照组不做处理。通过CCK8法检测24 h、48 h、72 h后,三组Ishikawa细胞的增殖情况。流式细胞仪检测转染后三组Ishikawa细胞的凋亡情况。Transwell小室检测三组Ishikawa细胞侵袭、迁移情况。Western-blot检测三组Ishikawa细胞B淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、BCL2-Associated X(Bax)、细胞增殖抗原标记物Ki-67(Ki-67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果与人子宫内膜上皮细胞HEEC相比,子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平显著下降。CCK8结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖受到抑制,Ki-67蛋白表达水平显著下降(P0.05)。流式检测结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa的凋亡率显著升高,Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。Transwell结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa侵袭及迁移能力受到抑制,MMP-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论 miR-132-3p在子宫内膜癌细胞Ishikawa中低表达,过表达miR-132-3p能够抑制细胞增殖、侵袭及迁移,并促进细胞凋亡。     

As2O3对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B皮下移植瘤抗肿瘤作用

目的检测不同浓度As2O3对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞裸鼠皮下移植瘤的抗肿瘤作用及对瘤细胞内磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶（p-ERK）表达的影响,进一步探讨As2O3的抗肿瘤机制。方法建立人子宫内膜癌HEC-1-B细胞皮下移植瘤模型,随机分为实验组,即As2O3低剂量（1.0 mg/kg）、中剂量（2.5 mg/kg）、高剂量（5.0 mg/kg）剂量组,生理盐水（NS）组及顺铂组（5 mg/kg）,腹腔内注射给药,连续8 d。观察用药前后裸鼠体质量改变。剥取瘤组织,计算药物的抑瘤率。检测用药后裸鼠的肝肾功能及血常规。透射电镜观察细胞变化,流式细胞仪检测细胞凋亡周期和细胞凋亡率,免疫组化法检测p-ERK的表达。结果不同浓度As2O3和顺铂均有不同程度抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡的作用,其中As2O3低剂量组的抑瘤率为34.3%,p-ERK的表达率为37.5%,该组在亚G1期出现典型的凋亡峰,且As2O3低剂量组与NS组比较,凋亡率、瘤质量差异均有显著意义（F=27.20、33.92,q=9.19、13.34,P〈0.05）。As2O3低剂量组与顺铂组相比,无明显血液及肝肾毒性。结论低剂量As2O3组能明显抑制肿瘤细胞HEC-1-B生长,且毒副作用轻,可能与阻滞细胞周期,抑制p-ERK表达有关。     

促性腺激素释放激素拮抗剂在诱导HEC-1A子宫内膜癌细胞株生长抑制中MAPK的活性

目的调查促性腺激素释放激素（GnRH）拮抗剂Cetrorelix对HEC-1A子宫内膜癌细胞株生长是否具有直接抑制作用,并探讨它的作用机制。方法应用RT-PCR法测定在子宫内膜癌细胞株促性腺激素释放激素及它的受体mRNA的表达。应用5-溴-2’-脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2’-deoxyuridine,BrdU）免疫组化标记技术测定细胞增殖变化。应用Western免疫印迹技术测定与信号传导相关的丝裂原活化蛋白激酶/MAPK的蛋白水平。结果 HEC-1A细胞株表达GnRH及其受体。GnRH拮抗剂Cetrorelix在浓度10^-5mol/L下,体外作用24h后抑制了HEC-1A细胞的生长。Cetrorelix在浓度10^-6mol/L与10^-5mol/L之间作用于HEC-1A细胞6h,磷酸化丝裂原活化蛋白激酶/ERK1/2蛋白水平增长,并持续24h,这个增长被提前加入丝裂原或化蛋白激酶/MEK抑制剂U0126而阻止。而磷酸化p38、JNK蛋白水平没有变化。结论结果表明持续的ERK1/2活性在Cetrorelix抑制HEC-1A细胞生长中发挥重要作用。     

清解扶正颗粒对大肠癌SW620细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:探讨清解扶正颗粒(QFG)对大肠癌SW620细胞增殖、凋亡和迁移的影响及作用机制。方法:体外培养人大肠癌SW620细胞,用不同浓度的QFG(0、0.5、1、2 mg/mL)作用于细胞,采用MTT法检测24、48 h后QFG对细胞增殖的抑制能力;在倒置显微镜下观察24 h后细胞形态变化;采用流式细胞术检测24 h后细胞周期;通过Hoechst 33258染色实验检测24 h后细胞凋亡情况;采用划痕实验检测0、6、12、24 h后细胞的迁移能力;通过Western blot方法检测24 h后细胞Ki-67、MMP-2及Cleaved-Caspase-3蛋白的表达。结果:①0、0.5、1、2 mg/mL浓度范围内,QFG对大肠癌SW620细胞增殖抑制率随时间及浓度的增加而增大,明显高于同一时间点对照组的细胞,差异具有统计学意义(P0.05)。②0.5、1、2 mg/mL QFG作用SW620细胞24 h后,细胞形态发生明显的改变,随着给药浓度的增高,细胞密度逐渐减少,悬浮细胞增多,部分细胞皱缩变圆。③流式细胞术检测细胞周期发现,0.5、1、2 mg/mL QFG组细胞G1期降低,S期增高,而G2期并没有明显的变化,各时期百分比与对照组比较差异有统计学意义(P0.01),但并不呈剂量依赖关系。④Hoechst33258染色结果显示,随着QFG作用浓度增加,SW620细胞凋亡的形态学表现越明显。⑤划痕实验发现,0.5、1、2 mg/mL QFG能降低SW620细胞的迁移能力,划痕愈合率随着作用时间和QFG浓度增加而逐渐降低,呈现明显的时间和剂量依赖作用;与对照组比较,12 h和24 h划痕愈合率差异有统计学意义(P0.01)。⑥与对照组比较,0.5、1、2 mg/mL QFG能显著降低Ki-67和MMP-2的蛋白表达,增加Cleaved-Caspase-3的蛋白表达,且呈现明显的剂量依赖性,差异有统计学意义(P0.01)。结论:QFG具有抑制大肠癌SW620细胞增殖、诱导凋亡及抑制迁移的作用,其作用机制可能与下调Ki-67和MMP-2蛋白表达及上调CleavedCaspase-3蛋白表达有关。     

高三尖杉酯碱对HL60细胞程序性凋亡的影响及机制研究

目的探究高三尖杉酯碱(HHT)对人急性髓系白血病HL60细胞凋亡的影响及其机制。方法以人急性髓系白血病HL60细胞系作为研究对象,实验分为对照组和HHT处理组,对照组不加HHT,处理组分别加入0.2、0.4、0.6、1.2mg/L HHT并分别培养24、48、72、96h,制作细胞生长曲线;通过细胞克隆形成试验计算0.1、0.3、0.6mg/L HHT处理后HL60细胞克隆形成率;蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、原癌基因(c-myc)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;流式细胞仪检测HL60细胞的凋亡情况。结果随着HHT处理浓度的增加,细胞抑制率逐渐升高,与HHT处理成剂量依赖性,1.2mg/L时细胞抑制效果最佳。随着HHT处理浓度的增加,细胞克隆形成率逐渐下降,与处理剂量呈依赖性,0.6mg/L处理时,细胞克隆形成率最低。1.2mg/L HHT处理HL60细胞48h后,Bcl-2、c-myc蛋白表达水平下降,caspase-3、Bax蛋白表达量升高。细胞流式仪检测HL60细胞经0.6mg/L HHT处理48h后,细胞出现大量凋亡。结论 HHT能够抑制HL60细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与上调caspase-3、Bax蛋白及下调Bcl-2、c-myc蛋白表达相关。     

三氧化二砷对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的作用及机制研究

目的研究三氧化二砷(arsenictrioxide,ATO)对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖及凋亡的影响并探讨其机制.方法采用CCK-8法检测ATO作用后对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;ELISA法检测RPMI8226细胞分泌VEGF的水平;Westernblot检测ATO作用后Bcl-2蛋白、ERK1/2及其磷酸化蛋白水平变化.结果 ATO对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖抑制呈剂量-时间依赖性.选取不同浓度ATO作用于RPMI8226细胞24h及48h,ATO诱导RPMI8226细胞凋亡,呈时间依赖性和浓度依赖性(P<0.05).随着ATO浓度的增加,G1期细胞数逐渐增多,提示ATO将RPMI8226细胞阻滞在G1期.此外,与空白对照组相比,ATO作用于细胞后,VEGF表达及分泌量越少,细胞内Bcl-2蛋白表达下降,ERK1/2及其磷酸化蛋白在RPMI8226细胞内稳定表达,其表达水平无变化.结论 ATO对RPMI8226细胞具有明显的抑制增殖及诱导凋亡作用;ATO将RPMI8226细胞阻滞在G1期;ATO作用后,细胞的VEGF表达及分泌量越少,Bcl-2蛋白表达下降,而对ERK1/2及其磷酸化蛋白表达无影响.     

穿膜肽-凋亡蛋白融合蛋白导入人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌Anip973细胞的生物学特性

目的:在大肠杆菌内表达穿膜肽与凋亡蛋白的融合蛋白,观察其诱导肺腺癌Anip973细胞凋亡的活性,并了解其是否有剂量依赖性。方法:实验于2005-08/2006-01在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。①在大肠杆菌中表达穿膜肽-凋亡蛋白并用IDA-Ni2 亲和层析纯化。②细胞增殖抑制实验:取对数生长期人脐静脉内皮细胞和Anip973细胞接种于96孔培养板中,培养12h后加入终浓度分别为0,10,20,30,40,50mg/L融合蛋白培养48h,弃上清,每孔中加入四甲基偶氮唑盐溶液穴5g/L雪20μL,继续孵育4h,检测吸光度,计算肿瘤生长抑制率。③取对数生长期人脐静脉内皮细胞、Anip973细胞,每种细胞分成两组:给药组加入终浓度为30mg/L穿膜肽-凋亡蛋白,对照组加入相同体积的磷酸盐缓冲液,继续培养48h。苏木精-伊红染色,光镜下观察细胞形态;溴乙啶/丫啶橙荧光染色观察细胞凋亡率。结果:①细胞增殖抑制实验结果表明浓度为10～50mg/L穿膜肽-凋亡蛋白对人脐静脉内皮细胞没有明显抑制作用,对Anip973细胞呈剂量依赖性抑制作用,半数抑制浓度为27mg/L。②30mg/L穿膜肽-凋亡蛋白作用48h后,人脐静脉内皮细胞形态没有显著改变,对照组和给药组的凋亡率分别为穴2.9±0.4雪%和穴3.1±0.6雪%,没有显著差异(P>0.05);Anip973细胞可见到细胞皱缩,染色质浓缩和出现凋亡小体等凋亡特征性形态变化,给药组和对照组凋亡率分别为穴36.8±1.7雪%和穴6.7±0.5雪%,差异显著(P<0.01)。结论:穿膜肽-凋亡蛋白能诱导肿瘤细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖性,而对正常细胞没有毒性作用。     

链球菌蛋白诱导胶质母细胞瘤BT325细胞周期阻滞及凋亡的机制研究

目的探讨链球菌蛋白诱导人脑多形性胶质母细胞瘤BT325细胞周期阻滞及凋亡的相关作用机制。方法体外培养人脑多形性胶质母细胞瘤BT325细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,倒置显微镜下观察细胞形态变化,原位染色后荧光显微镜下观察凋亡细胞,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡率及线粒体膜电位(MMP),蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果链球菌蛋白(10~100 mg/L)可显著抑制细胞增殖,使细胞周期阻滞于G2/M期,呈时间和剂量依赖性;链球菌蛋白作用细胞24 h后,MMP显著下降(P0.01),凋亡细胞逐渐增多,48 h时各实验组凋亡率明显高于对照组(P0.01);链球菌蛋白(50 mg/L)呈时间依赖性增强细胞P53蛋白表达,抑制B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达,促使细胞色素C(CytC)从线粒体进入胞质,从而激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3前体(Procaspase-3)。结论链球菌蛋白可显著抑制人脑多形性胶质母细胞瘤BT325细胞增殖,影响细胞周期分布,通过线粒体途径诱导细胞发生凋亡,由此发挥其抗肿瘤活性作用。     

大蒜素对LM-8细胞Bcl-2及Bax表达的影响

背景:有研究证实,大蒜素对LM-8细胞增殖及凋亡有影响.目的:观察大蒜素干预C3H小鼠骨肉瘤细胞株LM-8细胞Bcl-2、Bax凋亡蛋白的表达,以及LM-8细胞的形态学变化与Bcl-2及Bax变化的关系.设计:随机分组,非盲法,细胞水平体外实验.单位:实验于2006-09/2007-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成.材料:实验所用C3H小鼠LM-8骨肉瘤细胞株购自解放军第四军医大学实验动物中心.大蒜素为武汉汇海公司产品,是从大蒜球茎中分离出的硫化物.Cell Counting Kit-8试剂购于上海同仁化学研究所,Bcl-2和Bax抗体及SP试剂盒购于福州迈新生物技术开发公司.方法:以含体积分数为0.1新生牛血清的1640完全培养基,培养LM-8细胞,制作细胞爬片.SP免疫细胞组织化学技术检测细胞爬片中Bcl-2和Bax蛋白表达;倒置显微镜下观察5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度大蒜素作用前后LM-8细胞形态变化;将LM-8细胞调整至7.5×107L-1接种于96孔板,用1.0,5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度的大蒜素处理细胞,设立不加任何处理因素的对照组及不含细胞和药物的培养基空白组,孵育24,48,72 h后取出培养板,加入CCK-8测定吸光度值,计算LM-8细胞生长抑制率:以5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度大蒜素干预LM-8细胞24,48,72 h,消化离心收集细胞,以流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化.主要观察指标:LM-8细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达;LM-8细胞形态及增殖、凋亡情况.结果:①Bcl-2和Bax蛋白表达:大蒜素可以降低Bcl-2表达,增强Bax表达,经15.0mg/L大蒜素作用72h,Bcl-2和Bax蛋白表达阳性率及Bcl-2/Bax表达与对照组比较,差异有显著性意义(P＜0.01).②LM-8细胞的形态:经不同质量浓度大蒜素干预后均出现明显凋亡表现.③LM-8细胞的增殖:大蒜素能明显抑制LM-8细胞的增殖,当大蒜素浓度从1.0 mg/L增加到15.0 mg/L,LM-8细胞72 h时生长抑制率由(23.87±3.26)%增至(58.32±5.38)%,在72 h其药物半数抑制率浓度是11.09 mg/L.④LM-8细胞的凋亡:5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度的大蒜素作用72 h后可诱导LM-8细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P＜0.05).结论:①大蒜素可抑制LM-8细胞增殖,该效应与大蒜素的浓度和时间有关.②大蒜素可诱导LM-8细胞凋亡,作用呈浓度依赖性.③大蒜素抑制LM-8细胞增殖和诱导LM-8细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达有关.     

米非司酮增加宫颈癌Caski细胞对顺铂敏感性的研究

目的：探讨米非司酮作用于人宫颈鳞癌Caski细胞后对顺铂敏感性的影响和机制。为临床应用米非司酮治疗宫颈鳞癌提供实验依据。方法：体外培养人宫颈鳞癌Caski细胞，分别或联合应用不同浓度的米非司酮、顺铂处理Caski细胞，采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定米非司酮对Caski细胞增殖活性的作用及其对顺铂敏感性的影响；流式细胞术观察各组细胞凋亡率，并分析细胞周期的变化；异硫氰酸荧光素（FITC）荧光标记流式细胞术（FCM）法测定米非司酮对Caski细胞HPV—E6，p53，Bcl-2，Bax蛋白的表达变化。结果：四甲基偶氮唑蓝比色法结果显示，1．25、2．5mg／L的米非司酮对Caski细胞无显著的抑制作用，其与顺铂合用时能增强顺铂对Caski细胞增殖抑制作用。流式细胞术结果显示，米非司酮（1．25mg／L）对Caski细胞无明显的诱导凋亡作用，但能促进顺铂（1．0、2．0、4．0mg／L）诱导其凋亡。FITC荧光标记FCM法结果显示，米非司酮作用于Caski细胞后，HPV—E6、Bcl-2蛋白表达下调，p53、Bax蛋白表达上调，呈浓度依赖方式。结论：米非司酮能增强顺铂对Caski细胞的增殖抑制和诱导凋亡并对Caski细胞有增殖抑制和化疗增敏作用，与下调HPV16-E6、Bcl-2蛋白表达，上调p53、Bax蛋白表达有关。     

二氧化碳作为膨宫介质在不同压力下对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡影响的体外研究

目的 研究膨宫介质二氧化碳在不同作用压力下对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 实验分为对照组和低(40 mmHg)、中(70 mmHg)、高(100 mmHg)压力3个实验组.实验组将人子宫内膜癌细胞(HEC-1-B)置于压力容器中,向容器内充入100%二氧化碳气体,使容器内压力分别达到40、70和100mmHg,各维持1 h.1 h后取出子宫内膜癌细胞,作好实验各组的压力标记,放入普通二氧化碳孵育箱继续培养.对照组则将子宫内膜癌细胞置于普通二氧化碳孵育箱环境中1 h.经上述处理后的连续7 d,每隔24 h采用四唑盐比色试验(MTT)测量各实验组和对照组子宫内膜癌细胞的增殖变化情况,采用流式细胞仪碘化丙啶(PI)活细胞染色法测量各实验组和对照组子宫内膜癌细胞凋亡变化的情况.结果 ①对照组、低压组、中压组、高压组内膜癌细胞MTT比色的OD值均呈逐渐上升趋势,对照组的上升趋势较实验各组明显,差异有显著性(P<0.05).低压组与中压组、低压组与高压组比较.差异有显著性(P<0.05),中压组与高压组的差异无显著性(P>0.05).②对照组、低压组、中压组、高压组内膜癌细胞pI染色的凋亡细胞百分比均逐渐上升,实验各组的上升趋势较对照组明显,差异有显著性(P<0.05),低压组与高压组、中压组与高压组比较,差异有显著性(P<0.05).低压组与中压组比较,差异无显著性(P>0.05).结论 二氧化碳在40～100mmHg压力范围内,能够抑制子宫内膜癌细胞的增殖,促进子宫内膜癌细胞的凋亡,且随着压力的增加,二氧化碳对子宫内膜癌细胞增殖抑制和促进凋亡作用愈明显.     

miR-375在子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的生物学功能

目的:探讨miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及对HEC-1-B细胞增殖、凋亡的影响.方法:miRNA芯片分析Ⅱ型子宫内膜癌miRNA表达谱.利用lipofectamine2000转染HEC-1-B细胞.实时荧光定量PCR检测转染后miR-375的表达.CCK-8检测转染后细胞增殖能力的改变.流式细胞仪检测细胞转染效率及转染后细胞凋亡情况.结果:miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌组织中低表达.转染效率达73.43％.转染后实验组miR-375表达量较NC组和对照组明显增加(P＜0.05).实验组较NC组生长明显受抑(P＜0.05).实验组较NC组、对照组凋亡明显增加(P＜0.05).结论:初步证明miR-375抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖并促进凋亡,可能成为Ⅱ型子宫内膜癌基因治疗的靶点.     

阿卡波糖对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡与细胞周期的影响

目的 探讨阿卡波糖对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡与细胞周期的影响。方法 将处于生长对数期的人脐静脉内皮细胞分为正常组(给予不含任何药物的培养基),模型组(给予33.3 mmol/L葡萄糖),阿卡波糖组(给予33.3 mmol/L葡萄糖+1μg/L,3μg/L,10μg/L阿卡波糖)。MTT法及流式双染检测细胞活力及细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p21及细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达量。结果 与正常组比较,模型组中细胞活力降低,细胞凋亡率提高,细胞周期阻滞在G1期,Bax及p21表达量上调,Bcl-2及Cyclin D1表达量下调;与模型组比较,阿卡波糖组中细胞活力提高,细胞凋亡率降低,G1期延长,Bax及p21表达量下调,Bcl-2及Cyclin D1表达量上调,且呈剂量依赖性。结论 阿卡波糖能抑制高糖诱导的HUVEC凋亡,并缩短G1期,与调节细胞凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白表达有关。