p38MAPK信号通路与uPA在乳腺癌细胞及组织中表达的相关性

背景与目的:p38MAPK信号通路介导多种转移相关基因表达调控,尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)在肿瘤浸润和转移中发挥着重要作用.本实验研究人乳腺癌组织中3种信号分子p-p38、p-Akt、p-Erk及uPA表达与临床病理特征的关系,并分析它们与uPA表达的相关性,探讨p38MAPK通路对乳腺癌uPA蛋白表达的影响,分析p-p38和uPA表达与乳腺癌预后的关系.方法:应用免疫组织化学(SP)法检测p-p38、p-Akt、p-Erk和uPA在60例乳腺癌组织中的表达.Western blot检测人乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中p-p38及uPA蛋白表达及用p38MAPK特异性抑制剂SB203580阻断p38MAPK信号通路后uPA蛋白表达水平的变化.结果:p-p38、p-Akt、p-Erk、uPA蛋白在乳腺癌组织中表达阳性率分别为56.7%、95.0%、93.3%、60.0%.p-p38与uPA表达存在正相关(r=0.316,P＜0.05),并与乳腺癌的TNM分期及淋巴结转移状况相关(P＜0.05),而与患者年龄、肿瘤大小无明显相关性(P＞0.05).p-Akt、p-Erk与uPA表达无明显相关性,p-Akt和p-Erk蛋白表达与乳腺癌的淋巴结转移有关(P＜0.05)而与患者年龄、肿瘤大小、TNM分期均无明显关系(P＞0.05).乳腺癌细胞MDA-MB-231中p-p38及uPA蛋白表达水平高于MCF-7.用SB203580阻断p38MAPK通路可降低uPA蛋白表达水平,且随着SB203580浓度升高uPA表达水平逐渐降低.乳腺癌中p-p38和uPA蛋白的表达与肿瘤的预后显著相关(分别为log-rank=4.98、5.40,P=0.0256、0.0201).结论:p38MAPK信号通路可能通过上调uPA的表达促进乳腺癌的恶性进展,p38MAPK信号通路可能是乳腺癌侵袭和转移的重要途径,p-p38和uPA的表达可辅助用于乳腺癌的预后评估.     

卵巢癌细胞及组织中P38MAPK信号通路调控uPA蛋白的表达及临床意义

目的 探讨P38MAPK信号通路与uPA在卵巢癌细胞及组织中的表达及临床意义。方法 应用免疫组织化学法检测uPA、P38MAPK、ERK、AKT蛋白在49例卵巢癌组织中的表达,Westernblot检测HO8910及HO-8910PM细胞系中uPA、P38MAPK蛋白的表达,特异性抑制剂SB203580阻断P38MAPK信号通路后uPA蛋白表达水平的变化。结果 uPA、P38MAPK、ERK、AKT蛋白在卵巢癌组织中表达阳性率分别为61.22%、57.14%、53.06%、55.10%。uPA与p38MAPK蛋白表达呈正相关（r=0.8645,P=0.001）,且与卵巢癌组织的临床病理分期、分化、转移程度有关（P均<0.05）,而与患者的年龄、组织学类型无明显相关（P>0.05）。ERK、AKT蛋白表达与卵巢癌淋巴结转移、大网膜转移有关（P均<0.05）,而与患者的年龄、组织类型、病理分期无明显关系（P>0.05）。HO-8910PM细胞系中uPA蛋白的表达水平明显高于HO8910,SB203580阻断P38MAPK信号通路后可降低uPA蛋白的表达,且随着SB203580 浓度升高,uPA蛋白表达逐渐降低。P38MAPK及uPA蛋白的表达与卵巢癌的预后显著相关（r=3.897, 11.044, P=0.048,0.001）。结论 卵巢癌组织中P38MAPK信号通路处于激活状态;该通路的激活可上调uPA的表达,促进卵巢癌的恶性进展;P38MAPK信号通路和uPA可能在卵巢癌侵袭和转移的过程中发挥重要作用。P38MAPK和uPA蛋白有望成为卵巢癌预后评估的重要指标之一。     

P38MAPK信号通路与uPA在卵巢癌细胞及组织中表达的相关性

背景与目的：P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)信号通路参与多种肿瘤的发生、发展和转移过程,尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)在肿瘤浸润和转移中发挥着重要作用。本实验研究卵巢癌组织中P38MAPK、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(serine threonine kinase,AKT)及uPA的表达与临床病理特征的关系,并分析上述蛋白与uPA表达的相关性,探讨P38MAPK信号通路与uPA在卵巢癌细胞及组织中的表达及临床意义。方法：应用免疫组织化学法检测49例卵巢癌组织中uPA、P38MAPK、ERK和AKT蛋白的表达,采用蛋白［质］印迹法(Western blot)检测不同卵巢癌细胞系HO8910、HO-8910PM、SKOV3和CAOV3中uPA和P38MAPK蛋白的表达,使用特异性抑制剂SB203580阻断P38MAPK信号通路后检测uPA蛋白表达水平的变化。结果：uPA、P38MAPK、ERK和AKT蛋白在卵巢癌组织中的表达阳性率分别为61.22%、57.14%、53.06%和55.10%。uPA蛋白的表达与P38MAPK呈正相关(r=0.865,P=0.001),且与卵巢癌组织的临床病理分期(P=0.029)、分化(P=0.03)和转移程度(P_淋巴=0.022,P_大网膜=0.012)有关,而与患者的年龄(P=0.754)及组织学类型(P=0.652)无关。ERK、AKT蛋白的表达与卵巢癌淋巴结转移(P_ERK=0.011,P_AKT=0.022)和大网膜转移(P_ERK=0.006,P_AKT=0.000)有关,而与患者的年龄(P_ERK=0.000,P_AKT=0.022)、组织类型(P_ERK=0.771,P_AKT=0.245)及病理分期(P_ERK=1.000,P_AKT=0.254)无关。卵巢癌细胞系HO-8910PM中uPA蛋白的表达水平明显高于HO8910、SKOV3和CAOV3细胞系,使用SB203580阻断P38MAPK信号通路后可降低uPA蛋白的表达,且随着SB203580浓度升高uPA蛋白表达水平逐渐降低。卵巢癌中P38MAPK及uPA蛋白的表达与卵巢癌的预后显著相关(Log-rank=3.897和11.044,P=0.048和0.001)。结论：卵巢癌组织中P38MAPK信号通路处于激活状态;P38MAPK信号通路的激活可上调uPA的表达,促进卵巢癌的恶性进展;P38MAPK信号通路和uPA可能在卵巢癌侵袭和转移的过程中发挥重要作用。P38MAPK和uPA蛋白有望成为卵巢癌预后评估的重要指标。     

LRG1在乳腺癌组织中的表达及对MCF-7细胞侵袭和迁移的影响

目的:研究LRG1在乳腺癌组织中的表达及对MCF-7细胞侵袭和迁移的影响及相关分子机制。方法:免疫组化和免疫荧光染色分别观察乳腺癌组织中LRG1的分布、表达,并分析与临床病理因素的相关性;Transwell侵袭和细胞划痕实验检测LRG1抑制后对MCF-7细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot检测siRNA-LRG1片段对人乳腺癌MCF-7细胞中LRG1和p-p38 蛋白表达的影响,通过p38抑制剂SB202190进一步验证LRG1与p38/MAPK信号通路的关系。结果:LRG1主要分布于乳腺癌细胞质,癌组织中高表达的LRG1与患者年龄、组织学分级无关（P＞0.05）,而与TNM分期、淋巴结转移密切相关（P＜0.05）;Transwell侵袭和细胞划痕实验显示,下调LRG1表达后,MCF-7细胞侵袭和迁移能力明显减弱;与对照组相比,siRNA-LRG1片段能明显抑制MCF-7细胞中LRG1和 p-p38 蛋白表达（P＜0.05）,应用SB202190处理后,能够加强siRNA-LRG1对p-p38蛋白表达的抑制作用。结论:LRG1在乳腺癌中呈高表达并与肿瘤TNM分期和淋巴结转移密切相关;下调LRG1的表达可明显抑制MCF-7细胞侵袭和迁移能力,这可能通过抑制p38/MAPK信号通路来实现。     

乳腺癌细胞耐药过程中p38MAPK活性与细胞凋亡的关系

目的研究乳腺癌细胞耐药过程中p38MAPK活性与细胞凋亡的关系,探讨p38MAPK信号转导途径在其中的作用。方法 以p38MAPK特异性抑制剂SB203580处理乳腺癌耐药细胞MCF-7／ADM,采用流式细胞技术分析对细胞凋亡的影响;MTT检测MCF-7／ADM细胞对阿霉素的半数药物抑制浓度（IC50）;Western blot检测SB203580处理MCF-7／ADM和MCF-7两株细胞后p38MAPK蛋白表达水平;RT—PCR检测细胞内MDR-1 mRNA水平。结果SB203580（10μmol／L）干预24h后MCF-7／ADM细胞的凋亡率为（26．73±4．90）％,与未干预组和对照组凋亡率相比差异有显著统计学意义（F=143．80,P〈0．001）;MCF-7／ADM细胞对阿霉素的敏感性明显提高（F=148927．10,P〈0．001）,相对逆转率达68．45％;与对照组和未干预组相比,干预组的MDR1 mRNA（F=9139．24,P〈0．001）及p38MAPK（F=685．42,P〈0．001）蛋白表达水平明显降低。结论p38MAPK信号转导途径与乳腺癌耐药密切相关,其可能机制为p38MAPK保护人乳腺癌耐药细胞（MCF-7／ADM）逃避凋亡,阻断该通路可增强乳腺癌耐药细胞发生凋亡。     

白细胞介素-33对急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4凋亡和周期的调控作用及机制研究

目的  探讨白细胞介素-33（interleukin-33,IL-33）对急性髓系白血病细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法 急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4经外源性IL-33以及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）特异抑制剂（SB203580）处理72 h后,采用Annexin V/DAPI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞周期检测试剂盒检测细胞周期,Western blot 检测细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin-dependent kinases 1,CDK1）蛋白表达以及p38 MAPK的磷酸化水平。结果 与对照组相比,IL-33组的HL-60和NB4细胞经IL-33作用后,细胞凋亡水平降低（P<0.05）,细胞周期中S期比例升高（P<0.001）;而SB+IL-33组细胞经SB203580和IL-33联合处理后,细胞凋亡水平高于IL-33组（P<0.05）,S期细胞的百分比低于IL-33组（P<0.05）;Western blot检测结果表明,与对照组相比,IL-33组细胞的p38 MAPK磷酸化（p-p38 MAPK） 水平和CDK1蛋白表达水平均显著增高（均P<0.05）,而SB+IL-33组的p-p38 MAPK水平以及CDK1水平较IL-33组显著下降（均P<0.05）。 结论 IL-33可通过激活p38 MAPK,抑制急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4细胞的凋亡,抑制细胞周期停滞。     

虫草素抑制食管癌细胞Eca-109增殖、迁移和侵袭的作用及机制研究

目的:探讨虫草素对食管癌细胞Eca-109的作用及其潜在的机制。方法:不同浓度（35、70、140、280 μg/mL）虫草素分别处理Eca-109细胞24 h、48 h、72 h和96 h,CCK-8检测细胞活力,筛选虫草素最佳作用浓度（70 μg/mL）和时间（24 h）。实验分为4组:对照组、虫草素组（70 μg/mL虫草素）、SB203580组（10 μg/mL SB203580）和虫草素+SB203580组（70 μg/mL虫草素+10 μg/mL SB203580）。培养24 h后,CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力;qRT-PCR和Western blot分别检测细胞周期相关、凋亡相关和p38 MAPK信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与对照组相比,虫草素组、SB203580组和虫草素+SB203580组细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞发生G2期阻滞,凋亡率显著升高（P＜0.05）,cyclinB1、CDK4、p-p38、ERK1和ERK2的表达下调（P＜0.05）,CKI和Caspase-3的表达上调（P＜0.05）。结论:虫草素可抑制食管癌细胞Eca-109增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其作用机制与p38 MAPK信号通路有关。     

滋肾固髓汤通过调控p38MAPK/p53信号通路诱导结直肠癌HCT-116细胞凋亡

目的:探讨滋肾固髓汤对结直肠癌HCT-116细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:制备滋肾固髓汤含药血清,首先采用不同体积分数滋肾固髓汤含药血清处理HCT-116细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性;再将HCT-116细胞分为空白组、滋肾固髓汤低、中、高剂量组、SB203580(p38MAPK抑制剂)组和高剂量滋肾固髓汤+SB203580组,分别加入相应药物进行干预后,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡的形态学变化;Annexin V-FITC流式细胞术检测细胞的凋亡水平;Western blot检测细胞中p38MAPK、磷酸化(p)-p38MAPK(Thr180/Tyr182)、鼠双微染色体2(MDM2)、p53、Cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2等蛋白表达水平。结果:滋肾固髓汤可抑制HCT-116细胞增殖活性,并呈时间和浓度依赖性。不同浓度滋肾固髓汤处理可诱导HCT-116细胞呈现核聚集、皱缩或碎裂等凋亡形态变化,促进细胞凋亡,上调p-p38MAPK、p53、Bax和Cleaved caspase-3等蛋白表达水平,下调MDM2和Bcl-2蛋白表达水平。S...     

Regulation by p38 mitogen-activated protein kinase of adenylate- and uridylate-rich element-mediated urokinase-type plasminogen activator (uPA) messenger RNA stability and uPA-dependent in vitro cell invasion.

MDA-MB-231 cells are highly metastatic breast tumor cells. Their high invasiveness is thought to be due to constitutively high levels of urokinase-type plasminogen activator (uPA) and its receptor. Previously (R. Nanbu et al., C. Eur. J. Biochem., 247: 169-174, 1997), we showed that uPA mRNA in these cells is stable and that mRNA degradation mediated by an AU-rich element (ARE) is impaired. Here we report that treatment of MDA-MB-231 cells with SB203580, an inhibitor of the stress-activated p38 mitogen-activated protein (MAP) kinase, strongly destabilized uPA mRNA in an ARE-dependent manner. In contrast, in LLC-PK1 and HeLa cells, uPA mRNA is unstable, and an ARE present in the 3' untranslated region plays a role in its degradation. Enhanced ARE-mediated mRNA destabilization induced by SB203580 was also observed in both LLC-PK1 and HeLa cells with a globin chimeric mRNA harboring two copies of the ARE (globin-2ARE) from uPA mRNA. Overexpression of constitutively active MKK6, a p38 upstream activator kinase, increased the stability of the globin-2ARE message in LLC-PK1 cells, confirming the participation of p38 in the regulation of ARE-mediated mRNA decay. Interestingly, the half-life of the uPA mRNA in the three cell lines studied correlated with the basal levels of active p38. SB203580 treatment of MDA-MB-231 cells decreased cell-associated uPA activity and dramatically reduced in vitro cell invasiveness. These results suggest the participation of p38 in the control of invasiveness through regulation of the stability of uPA and uPA receptor mRNA, which is also destabilized by p38.     

P38 MAPK pathway is involved in the urokinase plasminogen activator expression in human gastric SNU-638 cells

Overexpression of urokinase plasminogen activator (uPA) is known to correlate closely with tumor cell invasion and metastasis. In gastric cancer, however, the mechanism for induction of uPA remains to be elucidated. In this study, we investigated the intracellular signaling for uPA expression in human gastric carcinoma cells (AGS, SNU-1, SNU-5, and SNU-638). SNU-638 cells which expressed a high level of uPA was found to be highly invasive on a matrigel, while AGS, SNU-1, and SNU-5 cells with low levels of uPA expression were only slightly invasive. SNU-638 cells showed a much higher P38 MAPK activity than the 3 other cell lines. However, there was no significant difference in the activities of P44/42 MAPK (Erk-1/2), JNK and Akt among the above cell lines. Treatment of SNU-638 cells with SB203580, a specific P38 MAPK inhibitor, reduced both the promoter activity and mRNA expression of uPA. Expression of a vector encoding a mutated-type P38alpha MAPK resulted in decrease in the uPA promoter activity in SNU-638 cells. These results suggest that P38 MAPK signaling pathway is important for uPA expression in gastric SNU-638 cells by enhancing the promoter activity of uPA.     

p38丝裂原活化蛋白激酶阻滞剂SB203580对白血病K562细胞周期的作用及机制

 目的　研究p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）阻滞剂SB203580对K562细胞周期的作用及机制。方法　以反转录-聚合酶链反应（RT-PCR ）和Western blotting方法检测SB203580处理K562细胞后p38、Cyclin D2、Cyclin E、p27 mRNA和蛋白的表达并以流式细胞术（FCM）检测其细胞周期的变化。结果　SB203580处理后K562细胞 p38、Cyclin D2、Cyclin E mRNA和蛋白表达降低;p27 mRNA和蛋白表达增高。G0／G1期细胞增多,S期细胞减少,与用药前相比差异均有统计学意义。结论　SB203580可能通过p38途径,影响细胞周期调控蛋白,最终抑制K562细胞的增生。     

Inhibition of the p38 MAPK pathway sensitises human colon cancer cells to 5-fluorouracil treatment

Colorectal cancer is the third most common cause of cancer-related deaths in the Western world. 5-Fluorouracil (5-FU) based chemotherapeutic regimes have been the mainstay of systemic treatment for disseminated colorectal cancer for many years. However, it only produces a 25% response rate due to the drug-resistance. The mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathway is involved in the anti-apoptotic process; its activation provides cancer cells with a survival advantage to escape the apoptotic challenge. This study assessed whether the p38 MAPK pathway is involved in 5-FU resistance in colorectal cancer cells. 5-FU only or 5-FU combined with a p38 MAPK pathway inhibitor (SB203580) was used to treat 5-FU-resistant colorectal cancer cells. The effect of the treatment on cell viability, death and caspase activities was assessed. Western blotting was used to investigate the responses of apoptosis-related proteins following the treatment. Results showed that p38 MAPK inhibitor significantly increased colorectal cancer cell sensitivity to 5-FU. SB203580 in combination with 5-FU significantly reduced cell viability (P<0.01), and increased cell death and cellular caspase activity (P<0.01). Western blotting data revealed that SB203580 sensitises cancer cells to 5-FU due to an increase in Bax expression. These findings suggest that p38 MAPK is involved in cancer cell survival, and that the inhibition of p38 MAPK can enhance 5-FU to kill colorectal cancer cells.     

Bisphosphonate Induced Growth Inhibition of Breast Cancer Cells is Augmented by p38 Inhibition

Bisphosphonates (BPs) inhibit osteoclast-mediated bone resorption. They also protect from cancer-induced osteolysis and inhibit breast cancer growth in vitro. Some breast cancer cell lines, however, are relatively resistant to the growth inhibitory effects of BPs. We studied the mechanism of BP resistance in human MDA-MB-231 breast cancer cells. We show that both pyrophosphate-resembling (p-) and nitrogen-containing (n-) BPs induce activation of p38 mitogen activated protein (MAP) kinase pathway in MDA-MB-231 cells in vitro. MDA-MB-231 cells stably expressing a dominant negative form of the p38 MAP kinase (p38/AF) exhibited a dramatic increase in growth inhibition in response to BPs in vitro, compared to control cells. SB203580, a specific inhibitor of the p38 MAP kinase, also augmented BP-induced growth inhibition of parental MDA-MB-231 cells. Similar results were obtained also in murine macrophage-like J774 cells in vitro. Finally, no BP-induced phosphorylation of p38, or augmentation of BP-induced growth inhibition by SB203580 were detected in MCF-7 or HCC38 breast cancer cells, which are more sensitive than MDA-MB-231 cells especially to n-BP induced growth inhibition. In conclusion, these results suggest that BPs activate the p38 pathway in MDA-MB-231 and J774 cells. This activation may be associated with increased survival or proliferation because inhibition of p38 augments BP-induced growth inhibition. These findings may apply to the development of novel approaches for the treatment of breast cancer.     

蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡机制的探讨

目的:探讨p38MAPK信号转导通路参与蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡的作用机制。方法:选取甲状腺癌细胞系,利用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的三种抑制剂抑制磷酸化途径,利用微小RNA干扰技术转染细胞,封闭p38MAPK。用蛋白质印迹法检测红系衍生的核因子2相关因子2(Nrf2)及p38MAPK的表达,实时定量PCR检测细胞内GCLC mRNA的表达,测定还原型谷胱甘肽的含量,流式细胞仪法检测甲状腺癌细胞凋亡率。结果:在甲状腺癌细胞系8305C细胞中,与对照组相比,p38MAPK的抑制剂SB203580和sip38MAPK均能够抑制蛋白酶体抑制剂诱导的Nrf2细胞核易位(P<0.01),并使随后的GCLC mRNA表达减少、GSH含量减少(P<0.01),显著提高蛋白酶体抑制剂诱导的甲状腺癌细胞凋亡率(P<0.01),而其他2种抑制剂和随机序列核酸siRNA无上述作用。结论:蛋白酶体抑制剂通过p38MAPK途径激活Nrf2的细胞核易位,进而导致GCLC的诱导作用和谷胱甘肽生成的连锁反应,成为蛋白酶体抑制剂在甲状腺癌细胞中的一种抗凋亡机制。     

原花青素对Aβ25-35介导的tau蛋白过度磷酸化及p38 MAPK信号通路的影响

目的：研究原花青素对β-淀粉样蛋白25-35片段（Aβ_25-35）介导SH-SY5Y细胞tau蛋白过度磷酸化及p38 MAPK信号通路的抑制作用。方法：采用1.0 μmol/L的Aβ_25-35诱导SH-SY5Y细胞建立体外阿尔茨海默病（AD）模型,并分别设立对照组（只含细胞和培养基）、Aβ_25-35染毒组、Aβ_25-35+不同浓度（0.1、1.0、2.5、5.0 μg/mL）的原花青素处理组以及p38通路阻断剂SB203580组、Aβ_25-35+SB203580组、Aβ_25-35+5.0 μg/mL原花青素干预组。四甲基噻唑蓝（MTT）法检测SH-SY5Y细胞存活率,TBA法检测细胞内MDA含量,WST-1法检测细胞内总SOD水平,Western blot法检测p-tau、tau蛋白的表达及应用p38通路阻断剂后p-tau、tau、p38、p-p38相应的蛋白表达。结果：原花青素对SH-SY5Y细胞无明显毒性作用,不同浓度Aβ_25-35均使SH-SY5Y细胞存活率降低,与对照组比较,1.0 μmol/L Aβ_25-35组SOD水平降低,MDA含量升高（P < 0.05）,p-tau （Ser396）和p-p38蛋白表达亦增加（P < 0.05）;给予不同浓度原花青素干预及p38通路阻断剂后,与1.0 μmol/L Aβ_25-35组比较,原花青素提高SH-SY5Y细胞生存率及细胞内总SOD水平,降低细胞内MDA含量（P均<0.05）,抑制Aβ_25-35介导的p-tau （Ser396）和p-p38蛋白过度表达（P均<0.05）,且Aβ+阻断剂组同样抑制相关蛋白的表达水平（P均<0.05）。结论：原花青素能够抑制Aβ_25-35介导的tau蛋白过度磷酸化,提高细胞生存率,降低氧化应激水平。此外,原花青素可通过抑制p38 MAPK信号传导途径来实现其抑制tau蛋白过度磷酸化的神经保护作用。     

p38 MAPK在喹乙醇诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的:研究p38 MAPK信号通路在喹乙醇诱导的HepG2细胞凋亡中的作用。方法:分别用不同浓度(0、200、400、800μg/ml)的喹乙醇染毒HepG2细胞24 h和800μg/ml喹乙醇染毒HepG2细胞不同时间(0、0.5、1、2、4、6、12、24 h)后,采用Westernblot法检测细胞内磷酸化p38蛋白和p38总蛋白的表达情况,以p38 MAPK磷酸化水平反映p38 MAPK信号通路的活性。分别采用0、10、20μmol/L的p38 MAPK特异性抑制剂SB203580预处理HepG2细胞1 h后,再用800μg/ml喹乙醇染毒24 h,采用Annexin VFITC/PI法检测细胞凋亡。结果:随着喹乙醇染毒浓度和时间的增加,HepG2细胞的p38磷酸化蛋白表达量逐步增加,其中800μg/ml喹乙醇染毒细胞24 h的实验组与对照组相比,p38磷酸化蛋白的表达量明显上调(P0.01)。10、20μmol/L的SB203580对喹乙醇诱导细胞凋亡有促进作用,细胞的凋亡率分别为35.4%±2.83%、40.2%±3.98%,较喹乙醇对照组(23.1%±3.59%)明显升高(P0.05)。结论:喹乙醇能激活p38 MAPK信号通路,且p38 MAPK信号通路的激活参与抑制喹乙醇介导的HepG2细胞凋亡的过程。     

脑胶质瘤细胞化疗耐药中p38MAPK信号通路的作用

探讨p38MAPK信号通路在脑胶质瘤细胞化疗耐药中的作用及相关机制。 方法 在 前期建立U251/TMZ胶质瘤耐药细胞株的基础上,用特异性阻断剂SB203580阻断耐药细胞株中 p38MAPK信号通路,替莫唑胺作用下检测耐药株的细胞活性变化,同时检测MDR1、TopoⅡ、BCL-2 等耐药相关基因的蛋白表达变化。 结果 阻断通路后替莫唑胺作用下细胞的抑制率明显低于未阻 断组,两组之间比较差异有统计学意义（P＜0.05）,阻断后耐药细胞中BCL-2、MDR1的表达明 显升高,TopoⅡ的表达明显降低,与未阻断的耐药细胞相比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结 论 U251/TMZ胶质瘤耐药细胞中p38MAPK信号通路被阻断后细胞的耐药性增强,其机制可能与耐药 株中耐药相关基因BCL-2、TopoⅡ、MDR1的表达变化有关。     

p38^MAPK对卵巢癌顺铂耐药作用及机制的探讨

目的：研究p38^MAPK在卵巢上皮癌顺铂化疗耐药中的作用,并探讨其作用机制。方法：蛋白质印迹法检测顺铂对卵巢癌中p38^MAPK的激活情况;MTT法检测p38^MAPK抑制荆SB203580处理后及p38shRNA干扰后细胞顺铂耐药指数的变化;实时定量PCR技术检测SB203580处理后及p38shRNA干扰后,耐药蛋白ERCCl、MDR、LRP、GST-π及凋亡蛋白Caspase3、Survivin等mRNA的表达变化。结果：在=定时间浓度梯度下,顺铂可诱导卵巢癌顺铂敏感株COCl及耐药株COC1／DDP细胞内p38^MAPK的激活,但耐药株的激活程度弱于敏感株;p38^MAPK抑制剂SB203580及p38shRNA干扰可增加卵巢癌细胞株的耐药指数（t=4．610,P=0．041;t=11．621,P=0．000）;SB203580及p38shRNA干扰后SurvivinmRNA（f=5．152,P=0．007;t=6．008,P=0．004）、ERCClmRNA（t=13．742,P=0．005;t=11．621,P=0．000）及LRPmRNA（t=8．173,P=0．001;￡=16．815,P=0．000）的表达明显上调。结论：p38^MAPK受抑制可能导致卵巢上皮性癌顺铂耐药的产生,其机制可能是通过上调Survivin、ERCC1及LRP的mRNA表达来实现。     

p38 MAPK在胃泌素诱导结肠癌细胞表达u-PA中的作用

目的研究胃泌素对人结肠癌细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)mRNA和蛋白表达的影响,探讨信号分子p38 MAPK在其中的作用。方法采用脂质体介导法,将胃泌素受体(CCK_2R)的真核表达载体pCR3.1/CCK_2R稳定转染人结肠癌细胞株colo320,上调胃泌素的作用;用胃泌素拮抗剂(L-365、260)下调胃泌素的作用。给予10nmo/L胃泌素刺激不同时间,阻断实验以SB203580阻断p38通路,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内u-PA mRNA的表达,采用Western blot检测细胞内u-PA和p38 MAPK蛋白表达的强度。结果胃泌素可明显增强colo320/ CCK_2R细胞u-PA mRNA和蛋白的表达,并可激活p38 MAPK蛋白的磷酸化,具有时间依赖性,但对colo320细胞的影响程度明显低于colo320/CCK_2R细胞。使用L-365、260后,胃泌素对u-PA和phospho p38 MAPK的诱导作用明显下降。SB203580可明显抑制胃泌素诱导的p38 MAPK激酶的磷酸化,用其阻断p38激酶信号通路后,胃泌素对u-PA的诱导作用受到显著的抑制,并且具有剂量依赖性。结论胃泌素与其受体结合后,可通过p38 MAPK信号转导通路诱导结肠癌细胞表达u-PA。