SARS灭活试验疫苗免疫小鼠后CD4+与CD8+T细胞动态变化

以甲醛灭活SARS冠状病毒F6 9株 ,分别与福氏佐剂、氢氧化铝、CpG佐剂配伍 ,制备灭活疫苗 ,免疫实验动物。SPF级BALB c小鼠 ,雌雄各半 ,随机分为高、中、低 3个剂量组 ;初次免疫时 ,疫苗接种体积分别为 0 .3ml、0 .2ml和0 .1ml,腹腔 皮下接种小鼠 ;14d后进行第 2次免疫 ,免疫剂量减半。 2次免疫10d后 ,以不含佐剂的疫苗进行加强免疫。初次免疫后第 4、8、12、19、2 6、34天 ,各组小鼠取 3只断尾取血 ,肝素抗凝 ,流式细胞仪分析CD4 + 、CD8+ T细胞百分比。结果表明 ,中剂量含福氏佐剂的SARS灭活试验疫苗免疫小鼠后 ,外周血中CD4 + …     

卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞比例增高的可能机制

近期研究发现,人体内有一个具独特免疫调节功能的T细胞亚群———CD4 CD2 5 调节性T细胞,这群调节性细胞具有免疫无能和免疫抑制两大特性,即对高浓度的IL 2单独刺激或经TCR的刺激无应答,而活化的CD4 CD2 5 T细胞能抑制CD4 和CD8 T细胞的活化与增殖〔1,2〕。为阐明卵巢癌患者免疫受抑的可能机制,为卵巢癌免疫治疗提供一个有效的靶点,我们检测了卵巢癌患者体内CD4 CD2 5 T细胞及其比例变化,并观察卵巢癌细胞株(SKOV3 )培养上清液对这类细胞的影响,以探讨CD4 CD2 5 T细胞在卵巢癌免疫抑制中的作用。材料和方…     

CD4+ CD25+调节性T细胞AICD机制的研究

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞活化诱导的细胞死亡（AICD）发生的机制。方法CD4^＋CD25^＋T细胞以磁性细胞分离器（MACS）从BALB／c小鼠或DO11．10小鼠的静息T细胞分离纯化。体外细胞增殖抑制实验证实其免疫调节作用。CD4^＋CD25^＋T细胞的AICD以CD3／CD28单克隆抗体活化或以特异性OVA323-339肽、抗原提呈细胞活化等两种方法获得。CD4^＋CD25^＋T细胞凋亡相关基因的表达通过实时定量PCR检测。流式细胞仪检测细胞的凋亡率。进一步观察FasL中和抗体、TRAIL中和抗体及caspase抑制剂zVAD-fmk对CD4^＋CD25^＋T细胞凋亡的影响。结果MACS成功分离CD4^＋CD25^＋T细胞，纯度可达98％，该细胞可特异性表达Foxp3基因，能明显抑制效应性T细胞的体外增殖。CD3／CD28抗体以及OVA特异性抗原活化8d的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞AICD达39％～45％。活化前后的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞死亡受体家族表达发生明显变化；FasL、TRAIL中和抗体及zVAD-fmk可明显抑制CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的凋亡。结论FasL／Fas及其他凋亡相关分子可能参与了CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的凋亡。     

人CD4+CD25+调节性T细胞系的建立与功能分析

目的：建立可在体外长期培养的人CD4^ CD25^ 调节性T细胞系并研究其免疫生物学特性。方法：用流式分选的方法从健康人外周血淋巴细胞中得到CD4^ CD25^ T细胞，并对其进行体外长期培养、扩增；淋巴细胞转化实验分析其免疫抑制功能，流式细胞法分析其表型。结果：经对人CD4^ CD25^ T细胞的长期培养扩增，获得具有免疫抑制功能的调节性T细胞系。该T细胞系对经TCR的刺激不敏感，且能抑制同一来源或同种异型CD4^ CD25^ T细胞的活化，大剂量IL－2可以逆转其抑制功能。长期培养的CD4^ CD25^ T细胞，膜表面CD25和CTLA－4分子持续高表达，而CD4^ CD25^ T细胞CD25和CTLA－4分子的表达呈周期性变化。结论：将CD4^ CD25^ T细胞体外扩增培养成系，其功能和表型与同一来源的CD4^ CD25^ T细胞显著不同。     

胃肠肿瘤患者外周血树突状细胞功能失调与CD4+CD25+T细胞失衡的临床意义

目的：探讨胃肠肿瘤（GIC）患者外周血单个核细胞（PBMCs）来源树突状细胞（DCs）和CD4^＋CD25^＋T细胞（Tregs）的免疫功能状态，以及其与肿瘤临床病理分期和手术的关系。方法：收集早期胃肠癌（Ⅰ／Ⅱ期）患者术前、术后第7天以及晚期癌（Ⅲ／Ⅳ期）患者外周血，以健康成人外周血为对照。提取单个核细胞（PBMCs），流式细胞术（FACS）分别检测Tregs占CD4^＋T细胞的比例。PBMCs经贴壁法分离提取DCs，经rhGM。CSF、rhIL-4体外扩增培养至第5天，获得未成熟DCs（imDCs），FACS检测表型；imDCs经rhTNF-α诱导培养至第7天，获得成熟DCs（mDCs），MTT法和ELISA法分别检测mDCs与自体T细胞混合培养时mDCs刺激T细胞增殖能力以及上清液中IFN-γ的含量。结果：晚期胃肠癌患者imDCs表型HIA-DR、CD80及CD86均显著低于健康成人和早期癌患者（P〈0．01）；早期胃肠癌术后第7天患者imDC8表型HIA-DR及CD86表达显著低于健康成人（P〈0．05）。晚期胃肠癌患者mDCs刺激自体T细胞增殖及分泌IFN-γ的能力与健康成人相比均有所减弱（P=0．073，P=0．182）CD4^＋T细胞中Tregs的比例显著低于健康成人和早期癌患者（P〈0．001）；早期胃肠癌患者术后Tregs比例略低于术前（P=0．148）及健康成人（P=0．068）。HLA-DR、CD86表达与Tregs比例呈负相关性。结论：胃肠肿瘤患者尤其晚期和术后患者外周血DCs功能失调以及Tregs失衡可能和机体抗肿瘤细胞免疫耐受密切相关。     

CD4+CD25+调节性T细胞及相关细胞因子的研究进展

胸腺来源的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）是机体维持自身免疫耐受的重要组成部分，约占CD4^＋T细胞的5％-10％。它具有免疫抑制及免疫无能的特性，是最重要的Treg细胞的亚群之一。近年发现CD4^＋CD25^＋Treg细胞主要通过分泌一些抑制性细胞因子和抑制自身反应性T细胞的免疫应答等方式在维持自身免疫耐受中扮演着重要的角色，其数量的缺乏或功能紊乱会导致各种自身免疫性疾病的发生。     

CD4+ CD25+调节性T细胞对树突状细胞的杀伤作用

目的 探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是否对树突状细胞发挥免疫调节作用及其可能的机制。方法 用MACS（magnetic cell sorting）从BALB／c小鼠静息T细胞分离纯化CD4^＋CD25^＋T细胞，体外细胞增殖实验观察其对CD4^＋CD25^＋T细胞的免疫抑制作用；GM-CSF／IL-4培养自体小鼠骨髓来源DC，FACS（fluorescence-activated cell sorting）鉴定其表面分子特性；以CD3／CD28单克隆抗体活化CD4^＋CD25^＋调节性T细胞，FACS体外杀伤实验研究其对自体DC的调节作用，并观察穿孔素抑制剂EGTA对上述作用的影响。结果 用MACS法成功分离出CD4^＋CD25^＋T细胞，纯度可达98％，特异性表达而Faxp3基因，能明显抑制CD4^＋CD25^＋T细胞的体外增殖；骨髓来源的DC表达CDllc、MHCⅡ及少量协同刺激分子CD80、CD86；FACS体外杀伤实验证实以CD3／CD28抗体体外活化的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对自体DC有显著杀伤作用（P〈0．05），穿孔素抑制剂EGTA能部分抑制该杀伤效应（P〈0．05）。结论 CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可通过杀伤作用对自体DC发挥免疫调节作用，穿孔素／颗粒酶杀伤途径可能参与其中。     

献血员CD8^＋T细胞的增另对CD4^＋T细胞的抑制作用

实验发现６５％体检合格的献血员外周血ＣＤ８＾＋Ｔ细胞数量明显增加,并伴随ＣＤ１６＾＋淋巴细胞数量的增加。这些异常的淋巴细胞与葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）共同２６ｄ,ＣＤ４＾＋Ｔ细胞无增殖反应。预先用抗ＣＤ８抗体去除ＣＤ８＾＋Ｔ细胞（去除率〉９０％）再用ＳＥＢ刺激淋巴细胞,其应答能力恢复正常,增殖的细胞是ＣＤ４＾＋Ｔ细胞,它们由３４．０４％增加到９９．３４％。ＣＤ８＾＋Ｔ细胞由最初的９．５７％降低到０     

CD4+CD25+调节性T细胞的生物学特性及功能

对自身抗原产生免疫耐受是防止发生自身免疫病的关键。自1995年日本学者Sakaguchi等首次报道CD4^＋CD25^＋调节性T（Treg）细胞以来，越来越多的研究证明这群T细胞在自身耐受的维持中发挥着重要的作用。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞具有以下特点：①自身免疫防御作用；②自然条件下是处于无能（Anergy）状态；③抑制其他CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞的生物活性；④抑制活性是抗原非特异性的；⑤抑制方法可能通过细胞与细胞间直接接触，或经分泌抑制性细胞因子发挥免疫抑制效应；     

CD4+CD25+T细胞在肿瘤及移植中的作用

机体对自身抗原的天然耐受机理一直是一个重要的、困惑着免疫学家和临床医生的难题。对调节性T细胞的认识，也经历了一个漫长而颇具争议的历程。20世纪60年代末，Nishizuka等曾报道，出生后第3天被切除胸腺(d3TX)的小鼠将发生自身免疫病，表明来自胸腺的部分T细胞有维持自身免疫耐受的功能，但该结论并没有马上得到同行们共识。直到90年代中，Sakaguchi等将除去了CD25^ 细胞的CD4单阳性T细胞过继转移给裸鼠，结果裸鼠发生     

急性冠脉综合征患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的检测及意义

目的 探讨急性冠脉综合征(ACS)患者外周血中CIM CD25 调节性T细胞(Treg)的异常与疾病的关系.方法 28例ACS患者(ACS组)、26例稳定性心绞痛(SAP)患者(SAP组)和30例正常人(对照组)作为入选对象,均采用流式细胞术检测各组外周血中Treg表达百分比,并检测各组Tred的功能状态,EILSA法检测循环及上清液中细胞因子TNF-α和IL-10浓度,常规检测循环CRP及血脂水平.结果 外周血中Treg表达百分比水平及功能ACS组显著低于SAP组(P＜0.05)和对照组(P＜0.05),CRP、TNF-α的水平ACS组显著高于SAP组(P＜0.05)和对照组(P＜0.05),ACS组IL-10的水平显著低于SAP组(P＜0.05)和对照组(P＜0.05).结论 ACS患者外周血中Treg比例减少及功能的降低可能破坏了外周免疫耐受的平衡,参与炎症反应激活致动脉粥样硬化发生发展这一病理过程.     

传染性非典型肺炎患者CD4阳性T细胞在发病早期显著下降

为了解传染性非典型肺炎患者早期的免疫状态 ,采用流式细胞仪以三色荧光标记的单克隆抗体 (CD4 FTTC/CD8 PE/CD3 PC5 )检测入院时 30例非典型肺炎或疑似患者的外周血T细胞亚群比例 ,并作绝对计数和计算CD4 +/CD8+比值。结果表明 ,11例非典型肺炎患者的CD3+、CD4 +T淋巴细胞比例、CD4 +/CD8+比值和CD3+、CD4 +和CD8+T淋巴细胞计数均明显低于 34例健康人 (P <0 0 0 1)。如CD4 +T细胞比例从健康人的 4 0 6 %降至 14 5 % ,细胞计数从健康人的 712 1/mm3 降至 15 1 1/mm3。患者CD8+T淋巴细胞比例也有一定程度的下降 (从健康人的 2 8 7%降至 2 2 6 % ,P <0 0 5 )。 19例疑似患者的上述大部分指标亦较健康人群有明显降低 (P <0 0 0 1)。非典型肺炎患者组与疑似患者组比较 ,前者CD3+T细胞和CD4 +T细胞比例进一步下降 (P <0 0 1) ,CD4 +/CD8+比例也倒置至 0 70。患者病程早期CD4 +T细胞比例下降可引起T细胞免疫功能低下 ,表明非典型肺炎和免疫功能失调有关。     

CD38+ CD45RBlow CD4+ T cells: a population of T cells with immune regulatory activities in vitro

An antibody reactive with CD38 revealed both phenotypic and functional heterogeneity amongst CD45RB^low cells. Functional analysis of the CD38⁺ and CD38⁻ fractions showed that the latter contained T cells which responded to recall antigens and produced high levels of cytokine in response to polyclonal stimulation. In contrast, the CD38⁺ population failed to proliferate or to produce detectable levels of cytokines. Despite appearing unresponsive, the CD38⁺ population significantly inhibited anti-CD3-induced proliferation and cytokine secretion by the reciprocal CD38⁻ population. Immune suppression required stimulation through the TCR and was dependent on a physical interaction between regulatory and responding CD4⁺ populations. It did not involve killing of the responding T cells or secretion of IL-10 or TGF-β. Despite some similarities there is no direct correlation between the in vitro suppression characteristic of the CD38⁺ CD45RB^low subset and in vivo suppression which has been shown to be mediated by unseparated CD45RB^low CD4⁺ T cells. However, these results demonstrate that two functionally distinct subsets of T cells reside within the antigen-exposed or CD45RB^low CD4⁺ T cell population and are thus generated in vivo: (1) conventional memory T cells which proliferate and secrete cytokines in response to activation and (2) a population of regulatory T cells which inhibit T cell activation in vitro. Antibodies reactive with CD38 may provide a useful tool with which to study the role of these T cell subsets in the induction and regulation of the immune response.     

慢性乙型肝炎患者CD4~+和CD8~+T细胞亚群的研究

目的:比较不同感染状态慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD4+和CD8+T细胞亚群的差异。方法:收集CHB患者78例,根据感染状态分为乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性且肝功能正常、HBeAg阳性且肝功能异常和HBeAg阴性3组。13例健康志愿者(正常对照组)来自曙光医院体检中心。应用流式细胞术(FCM)检测不同感染状态CHB患者外周血中CD4+CD25+、CD8+CD28-、CD4+CD95+、CD8+CD95+细胞亚群的分布情况,并对各亚群分布情况与HBeAg和HBVD-NA水平的相关性进行分析。结果:与正常对照组相比,HBeAg(+)肝功能正常组的CD4+CD25+/CD4+和CD4+CD95+/CD4+明显升高(P<0.01,P<0.05),3个感染组CD8+CD28-/CD8+值均明显升高(P<0.01);与HBeAg(+)肝功能正常组相比,HBeAg(+)肝功能异常组和HBeAg(-)组的CD4+CD25+/CD4+明显降低(P<0.01),HBeAg(-)组CD8+CD95+/CD8+明显降低(P<0.05),HBeAg(+)肝功能异常组的CD8+CD95+/CD8+明显降低(P<0.01)。CD4+CD25+/CD4+,CD4+CD95+/CD4+与HBVDNA呈正相关(P<0.01,P<0.05),CD8+CD28-/CD8+与HBVDNA和HBeAg均呈正相关(P<0.01)。结论:CHB患者外周血中CD4+CD25+、CD8+CD28-T、CD4+CD95+细胞表达频率增加,可能对慢性乙肝病毒感染过程中的免疫耐受起一定作用。     

Circulating CD4+CD8+ T lymphocytes in patients with Kawasaki disease

We serially monitored cell surface antigen expression on mononuclear cells in peripheral blood isolated from patients with Kawasaki disease (KD), and found, for the first time, that a markedly increased number of CD4⁺CD8⁺ T lymphocytes was present in some of the patients (11 of the 24 cases). The cases of five of these 11 patients were complicated with coronary artery lesion (CAL); the 13 patients with normal numbers of CD4⁺CD8⁺ T lymphocytes did not have CAL. The patients' age, sex and grade of systemic inflammation evaluated by peripheral leucocyte count and serum C-reactive protein levels were not correlated to the number of CD4⁺CD8⁺ T lymphocytes. Other cell surface antigen characteristics of the CD4⁺CD8⁺ T lymphocytes included CD3⁺, CD45RA⁺, CD45RO⁺, CD16^?, and HLA-DR⁺. These results indicate that the surface antigen characteristics of the KD peripheral blood examined were the same as those of Epstein–Barr virus infection without CD45RA⁺. These findings provide useful information for the analysis of the pathogenesis of KD.     

强直性脊柱炎患者外周血CD4+调节性T细胞的变化及意义

目的 探讨强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者外周血中CD4+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的表达、功能及意义.方法 采用流式细胞术检测78例AS患者和50例健康志愿者外周血中CD4+CD25+CD127lo/- Treg、细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)和NK细胞,采用ELISA法检测血清中β型转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平.从患者外周血单个核细胞中磁珠分选出CD4+CD25+ Treg细胞,混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture, MLC)分析其免疫抑制功能.结果 AS活动期患者外周血中CD4+CD25+CD127lo/-Treg占CD4+ T淋巴细胞的百分比为(4.36±1.21)%,MLC中CD4+CD25+ Treg抑制同种异体T淋巴细胞增殖功能低下,与其Treg分泌TGF-β减少相关,CD4+ Treg含量及功能均低于健康志愿者(P<0.05).AS患者外周血中CD4+CD25+CD127lo/- Treg水平与TGF-β呈正相关,与TNF-α呈负相关.结论 AS患者外周血中Treg表达水平低,且存在功能缺陷,导致体内诱导免疫耐受机能不足,可能参与AS免疫发病.     

CD4+ CD25+调节性T细胞在流产中的研究进展

CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)是一个具有独特免疫调节功能的T细胞亚群.Tr免疫学特性主要在于抑制自身反应性T细胞的活化,并参与外周免疫耐受,对维持机体内环境的稳定起重要作用.Tr在流产中发挥重要的免疫调节作用.     

CD4+CD25+调节性T细胞在肿瘤免疫中的作用

CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)是体内自然发生的调节性T细胞的重要亚群,具有无反应性和免疫抑制两大特性,主要通过与靶细胞的直接接触而起作用,其在体内不仅参与自身免疫性疾病、移植排斥反应等,还在肿瘤的发生、发展及免疫治疗中发挥重要作用.近几年来,Tr在肿瘤免疫中的作用倍受关注.