CD14基因多态性与严重烧伤患者T淋巴细胞免疫功能的相关性研究

目的 探讨严重烧伤患者CD14基因多态性与T淋巴细胞免疫功能的关系.方法 采集77例烧伤体表总面积大于30%患者血标本,通过聚合酶链反应.限制性片段长度多态性方法检测CD14-159C/T基因多态性,观察其外周血T淋巴细胞增殖反应和白细胞介素-2(IL-2)的产生能力,并通过流式细胞仪检测T淋巴细胞CD4+/CD8+的比值、CD4+细胞的凋亡率.结果 严重烧伤后患者T淋巴细胞增殖能力明显下降,与CC纯合子患者比较,TT、TC基因型患者伤后第5、21、28天T淋巴细胞对丝裂原刺激增殖反应显著受抑(P<0.05或P<0.01).烧伤后携带TC、TT型患者IL-2产生一直处于较低水平,而CC型在伤后14 d分泌IL-2逐渐上升.与CC型患者比较,携带TT、TC型患者T淋巴细胞比值均降低,尤其在伤后第1、3、14、21、28天差异明显(P<0.05或P<0.01).三型CD3+CD4+T淋巴细胞凋亡率比较,TT型患者伤后第5、7、21天凋亡率显著高于CC型患者(P<0.05),TC型患者伤后7、14 d其凋亡率高于CC型患者(P<0.05),而,TT、TC型之间上述免疫功能指标比较均无显著差异(P>0.05).结论 CD14-159C/T多态性可影响大面积烧伤患者T淋巴细胞免疫功能状态,进而参与了严重感染并发症的发生与发展过程.     

多器官功能障碍小鼠高迁移率族蛋白1释放对单个核细胞免疫相关指标的影响

目的 分析多器官功能障碍综合征(MODS)小鼠血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)含量的变化与外周血中单个核细胞免疫相关指标变化的关系,观察MODS发生、发展中HMGB1释放的规律及其对细胞免疫功能的影响.方法 腹腔注射酵母多糖复制小鼠MODS模型,用Westernblot法检测病程不同阶段血清HMGB1含量、流式细胞术测定外周血单核细胞表面组织相容性复合体-Ⅱ类分子(MHC-Ⅱ类分子,IAb)的表达量及T淋巴细胞亚群的比值(CD4+/CD8+).结果 在酵母多糖所致小鼠MODS模型中,当血清HMGB1含量升高时,外周血单核细胞IAb表达量及CD4+/CD8+比值下降;当血清HMGB1含量回复接近正常时,单核细胞IAb表达量及CIM4+/CD8+比值也趋于恢复正常.结论 在MODS的发生、发展过程中,HMGB1可能通过影响血中单个核细胞MHC-Ⅱ类分子(IAb)表达及T淋巴细胞的活性参与免疫调节过程,导致免疫失衡或免疫抑制.     

烧伤大鼠淋巴液细胞因子及淋巴结T淋巴细胞亚群的变化

目的 观察烧伤对大鼠淋巴液细胞因子及淋巴结T淋巴细胞亚群的影响. 方法 取18只Wistar大鼠,将每只鼠单侧后腿浸于70℃热水30 s,造成约4％ TBSA深Ⅱ度烫伤(烧伤组);对侧后腿浸于22℃温水30 s模拟烫伤(假伤组).分别于伤后6、24、72 h按随机数字表法取6只大鼠,收集2组髂总淋巴结及其输出淋巴管内的淋巴液,ELISA法检测淋巴液中TNF-α、γ干扰素、IL-4水平并计算γ干扰素/IL-4比值,流式细胞术检测淋巴结中CD4+、CD8+T淋巴细胞百分比并计算CD4 +/CD8+比值.对数据进行t检验. 结果 (1)大鼠伤后6、24、72 h,烧伤组淋巴液TNF-α水平分别为(51.6±5.4)、(27.4±2.6)、(23.0±2.7)pg/mL,明显高于假伤组的(17.8±1.6)、(16.4±1.2)、(17.2±2.0)pg/mL,t值分别为15.346、11.854、4.189,P值均小于0.01.(2)伤后6、24、72 h,烧伤组与假伤组γ干扰素水平比较,差异无统计学意义(t值分别为2.059、-0.805、-0.415,P值均大于0.05);烧伤组IL-4水平明显高于假伤组(t值分别为9.141、11.669、6.940,P值均小于0.01),γ干扰素/IL-4比值(2.27±0.34、1.54±0.19、1.60±0.16)明显低于假伤组(3.33±0.25、3.34±0.22、2.52±0.24,t值分别为-6.298、-11.313、-8.893,P值均小于0.01).(3)伤后6、24 h,烧伤组与假伤组CD4+、CD8+T淋巴细胞百分比及CD4 +/CD8+比值比较,差异无统计学意义(t值为- 2.486 ～-0.215,P值均大于0.05).伤后72 h,烧伤组CD4+T淋巴细胞百分比及CD4 +/CD8+比值分别为(38.6±2.3)％、2.13±0.16,明显低于假伤组的(48.9±2.9)％、2.68±0.12,t值分别为-7.551、-5.068,P值均小于0.01;CD8+T淋巴细胞百分比与假伤组比较,差异无统计学意义(t=0.845,P＞0.05). 结论 烧伤能够引起大鼠局部引流淋巴液γ干扰素/IL-4比值和局部引流淋巴结内CD4+/CD8+比值降低,抑制其局部免疫功能.     

大面积烧伤脓毒症患者T淋巴细胞免疫功能的改变及临床意义

目的 了解大面积烧伤脓毒症患者T淋巴细胞免疫功能的变化，探讨其与脓毒症的关系。方法 选择59例烧伤面积≥30％TBSA的患者，分为脓毒症组43例和非脓毒症组16例。采集两组患者伤后1、3、5、7、14、21、28d的外周静脉血，检测T淋巴细胞增殖能力和白细胞介素2（IL-2）的分泌水平，并行相关性分析；通过流式细胞仪检测CD3^＋／CD4^＋ T淋巴细胞的百分率及其凋亡率，并行相关性分析。结果 与非脓毒症组比较，脓毒症组患者伤后l、14、2l、28dT淋巴细胞增殖能力和IL-2的分泌水平均显著下降（P〈0．05或P〈0.01），两指标呈显著正相关（r=0．82，P〈0．01）。伤后1、5、14、21、28d，脓毒症组患者CD3^＋／CD4^＋T淋巴细胞百分率明显低于非脓毒症组，而其凋亡率呈相反趋势（P〈0.05或P〈0．01），两指标呈显著负相关（r=-0.66，P〈0．05）。结论 大面积烧伤脓毒症患者T淋巴细胞免疫功能持续处于抑制状态，T淋巴细胞凋亡参与了脓毒症细胞免疫紊乱的病理生理过程。     

围手术期静脉营养治疗对胃恶性肿瘤患者细胞免疫功能的影响

目的探讨围手术期静脉营养治疗对胃癌患者细胞免疫功能的影响. 方法 57例随机分为两组对照组不给予营养治疗,实验组手术前后给予静脉营养治疗各1周.观察比较手术前后外周血淋巴细胞总数,T细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+)及CD4+/ CD8+比值的变化. 结果对照组术后外周血淋巴细胞总数增加(P<0.05),CD4+/ CD8+比值升高(P<0.01).实验组术后外周血淋巴细胞总数、T细胞亚群及CD4+/ CD8+比值均明显改善(P<0.01).实验组的细胞免疫功能明显优于对照组(P<0.01). 结论围手术期使用静脉营养治疗可明显改善胃癌患者的细胞免疫功能.     

烫伤大鼠脾脏高迁移率族蛋白B1表达对调节性T淋巴细胞免疫功能的影响

目的 探讨严重烫伤大鼠延迟复苏后脾脏高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达对调节性T淋巴细胞(Treg)表型及其介导T淋巴细胞免疫功能的影响.方法 将104只Wistar大鼠按随机对照表法分为正常对照组8只、假烫组32只、烫伤组32只、丙酮酸乙酯(EP)治疗组32只.后2组大鼠造成30%TBSAⅢ度烫伤,伤后6 h腹腔注射林格液或EP液延迟抗休克,伤后12 h起每隔12 h给予4 mL林格液或EP液至伤后48 h;假烫组除于37℃模拟烫伤外其余处理同烫伤组.于伤后1、3、5、7 d处死各致伤组大鼠,另处死正常对照组大鼠,免疫磁珠法分离大鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg,ELISA法检测脾脏HMGBI含量及T淋巴细胞上清液中IL-2水平,采用流式细胞仪检测Treg表面分子细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)表达,同时检测T淋巴细胞增殖活性(数据以吸光度值表示).对数据进行多组间方差分析和2组独立样本间的t检验.结果 (1)烫伤组大鼠脾脏HMGBI含量伤后1～7 d显著高于假烫组,其中第1天达峰值[(46.7±8.3)ng/mg蛋白];EP治疗组大鼠脾脏HMGBI含量伤后1～7 d明显低于烫伤组.(2)与假烫组比较,烫伤组大鼠伤后1～5 d CTLA-4表达明显增强(t值分别为10.459、12.051、4.029,P<0.05或P<0.01);EP治疗组伤后1～7 d CTLA-4表达较烫伤组显著降低(t值分别为2.796、9.913、9.581、10.022,P<0.05或P<0.01).(3)与假烫组比较,烫伤组大鼠伤后1～7 d脾脏T淋巴细胞增殖活性明显受抑,其中伤后1 d达低谷(0.167±0.059);IL-2水平伤后1～7 d显著下降,其中伤后5 d达低谷(44±24)pg/mL.与烫伤组比较,EP治疗组伤后各时相点脾脏T淋巴细胞增殖受抑状态明显缓解,且IL-2水平明显上升.结论 严重烫伤后HMGB1产生可诱导Treg向成熟发展,从而介导T淋巴细胞增殖反应低下,免疫功能抑制.EP通过抑制HMGB1的合成与释放,改善烫伤延迟复苏大鼠的细胞免疫功能紊乱.     

严重烧伤患者CD14基因多态性对高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的 了解LPS受体CD14C-159T基因多态性对严重烧伤患者伤后高迁移率族蛋白B1(HMGB1)合成、释放的影响以及与脓毒症的关系.方法 采集35例烧伤总面积大于或等于30%TBSA患者伤后1、3、5、7、14、21、28 d静脉血.另设11名志愿者作为健康对照组.采用PCR-限制性片段长度多态性方法检测CD14-159C/T基因多态性,ELISA法检测血浆HMGB1水平,RT-PCR法检测HMGB1 tuRNA表达.对数据行χ~2检验、方差分析和t检验.结果 35例患者的CD14基因C-159T基因型中,CC纯合子型7例占20.0%、TC杂合子型16例占45.7%、TT等位基因纯合子型12例占34.3%.T等位基因和C等位基因分布的频率为57.2%和42.8%.验证表明,此研究群体达到了Hard-Weinberg平衡.在CD14C-159T基因型中,CC纯合子型患者发生脓毒症的概率较TC杂合子型、TT等位基因纯合子型低.3例CC纯合子型脓毒症患者中,仅1例死亡;9例TC杂合子型脓毒症患者中4例死亡;7例TT等位基因纯合子型脓毒症患者中4例死亡.与健康对照组比较伤后1 d患者血浆HMGB1水平即迅速升高,伤后14、21、28 d TC杂合子型、TT等位基因纯合子型患者血浆HMGB1水平均显著高于CC纯合子型(F值为3.5671、4.2035、3.8529,P<0.05或P<0.01).伤后14 d脓毒症组患者外周血白细胞HMGB1 mRNA表达量为1.5±0.5,显著高于非脓毒症组患者(1.2±0.4,t=-2.205,P<0.05).伤后7、21 d脓毒症组患者血浆HMGB1水平分别为(44±29)、(25±15)ng/mL,均高于非脓毒症组患者的(26±12)、(10±6)ng/mL(t值分别为-2.355、-3.872,P<0.05或P<0.01).结论 CD14C-159T基因多态性可显著影响严重烧伤后HMGB1的合成与释放,并与烧伤患者脓毒症易感性有关.     

两种麻醉方法对直肠癌患者术后免疫功能的影响

目的:观察两种麻醉方法下直肠癌患者术后免疫功能的变化.方法:选择40例直肠癌手术病人,随机分为两组,每组20例:A组采用静脉麻醉;B组采用硬膜外阻滞复合静脉全麻.分别于麻醉前(T0)、切皮后2h(T1),术后6h(T2)、术后48 h(T3)测定CD4+%、CD8+%、血清白介素-2(IL-2)和可溶性白介素-2受体(sIL-2R).结果两组CD4+%、CD4+/CD8+比值JL-2水平下降(P＜0.05),T1至T3时B组CD4+%明显高于A组(P＜0.05),T2至T3时B组CD4+/CD8+比值、IL-2水平明显高于A组(P＜0.05);两组sIL-2R水平A组T1时显著高于T0,T2达最高峰;而B组各时间点与T0比较差异无统计学意义(P＞0.05);两组间比较,T1至T3时A组sIL-2R水平明显高于B组(P＜0.05).结论:硬膜外阻滞配合全麻可减轻围手术期直肠癌患者的细胞免疫功能抑制.     

高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞与CD4+CD25-T细胞相互作用的影响

目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对调节性T细胞(Treg)与CD4+CD25-T细胞相互作用的影响,并初步探讨其影响Treg抑制功能的机制.方法 免疫磁珠法分离正常BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+Treg及CD4+CD25-T细胞.采用固相包被抗CD3/可溶性抗CD28进行辅助活化,以不同时间及浓度HMGB1刺激Treg,ELISA法分析HMGB1刺激对Treg分泌IL-10的影响.将HMGB1(1000μg/L)刺激后的Treg与CD4+CD25-T细胞共培养,MTT法观察其对Treg抑制CD4+CD25-T细胞反应的作用,并分析HMGB1刺激后的Treg对CD4+CD25-T细胞IL-2生成及细胞功能极化的影响.结果 经抗CD3/CD28辅助活化的CD4+CD25+Treg在HMGB1作用下IL-2生成无显著差异(P＞0.05),但随时间延长及剂量增加,IL-10生成明显减少(P＜0.05).经HMGB1刺激的Treg对CD4+CD25-T细胞增殖的抑制反应减弱,同时诱导CD4+CD25-T细胞IL-2产生及细胞功能极化的能力均下降(P＜0.05).结论 HMGB1可通过诱导Treg抑制功能的下调,从而影响CD4+CD25-T细胞功能,进而调节炎症反应过程.     

右美托咪定对胃癌根治术患者围术期白细胞介素-6、皮质醇及T淋巴细胞亚群的影响

目的观察右美托咪定对胃癌根治术患者围术期白细胞介素-6(IL-6)、皮质醇(Cor)及T淋巴细胞亚群的影响。方法 40例择期全麻下行胃癌根治术患者,随机均分为右美托咪定组(D组)和对照组(C组)。两组分别于麻醉诱导时在15min内静脉泵入1μg/kg右美托咪定和等容量的生理盐水,随后持续静脉输注右美托咪定0.2～0.7μg·kg-1·h-1和生理盐水0.125ml·kg-1·h-1。检测麻醉诱导前(T0)、切皮前(T1)、手术1h(T2)、术毕(T3)、术后1d(T4)和术后3d(T5)血清IL-6、血浆Cor浓度及外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)水平。结果与T0时比较,C组T2～T4时血清IL-6和T2、T3时血浆Cor浓度升高(P<0.05);T1～T5时CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+显著下降(P<0.05);D组血清IL-6及血浆Cor浓度无明显变化,T2和T3时CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+显著上升(P<0.05)。结论全麻期间持续静脉输注右美托咪定可有效抑制胃癌根治术患者围术期的应激反应,减少细胞免疫功能的抑制。     

严重烧伤患者人白细胞抗原DR定量表达的临床意义

目的探讨严重烧伤患者人白细胞抗原DR（HLA—DR）定量表达的变化规律及其临床意义。方法采集77例烧伤大于体表总面积30％的患者的血样,通过流式细胞技术对患者烧伤后不同时段CD14^＋单核细胞表面HLA—DR结合量进行动态的定量分析。结果严重烧伤患者伤后第1天开始CD14^＋单核细胞表面HLA—DR结合量明显低于正常对照组（P〈0．05）,其表达均值与烧伤面积呈显著负相关（r=-0．7232,P〈0．05）。并发多脏器功能障碍综合征（MODS）者其CD14^＋单核细胞表面的HLA—DR表达量持续下降,其中伤后第3、14、21、28天显著低于非MODS组（P〈0．05）。随着CD14^＋单核细胞HLA—DR表达水平的下降,MODS发生频率增加,患者预后不良。结论大面积烧伤可导致机体CD14^＋单核细胞HLA—DR表达严重受损和免疫功能障碍,动态观察其表达水平有助于烧伤后MODS的病程监测及患者预后判断。     

烧伤后多器官功能障碍综合征患者新喋呤的变化及预警价值

目的 探讨严重烧伤后多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfumction syndrome,MODS）患血清新喋呤的变化规律及预警价值。方法 烧伤面积大于70％（70％－100％）的患29例,按是否并发MODS分组,并参照Goris等提出的计分法对MODS进行评分。采用放射免疫分析法检测患血清新喋呤含量的动态变化,并计算新喋呤诊断MODS的有效性和实用性。结果 严重烧伤后第3、7、14和21天,MODS组血清新喋呤水平明显高于非MODS组（P＜0.05－0.01）。相关分析显示,伤后第3、7、21天MODS患新喋呤含量与MODS积分值呈显正相关（r=0.470-0.811）。根据血清新喋呤的预警阈值（35.0nmol/L）,其诊断MODS的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为81.1%、89.9%、81.1%和89.9%。结论 循环新喋呤的持续和显升高,与严重烧伤后MODS的发生与发展密切相关,动态观察其改变可能有助于MODS病理过程的监测与早期诊断。     

Glutamine granule-supplemented enteral nutrition maintains immunological function in severely burned patients

Glutamine is an important energy source for immune cells. It is a necessary nutrient for cell proliferation, and serves as specific fuel for lymphocytes, macrophages, and enterocytes when it is present in appropriate concentrations. The purpose of this clinical study was to observe the effects of enteral nutrition supplemented with glutamine granules on immunologic function in severely burned patients. Forty-eight severely burned patients (total burn surface area 30-75%, full thickness burn area 20-58%) who met the requirements of the protocol joined this double-blind randomized controlled clinical trail. Patients were randomly divided into two groups: burn control group (B group, 23 patients) and glutamine treated group (Gln group, 25 patients). There was isonitrogenous and isocaloric intake in both groups, Gln and B group patents were given glutamine granules or placebo (glycine) at 0.5 g/kgd for 14 days with oral feeding or tube feeding, respectively. The plasma level of glutamine and several indices of immunologic function including lymphocyte transformation ratio, neutrophil phagocytosis index (NPI), CD4/CD8 ratio, the content of immunoglobulin, complement C3, C4 and IL-2 levels were determined. Moreover, wound healing rate of burn area was observed and then hospital stay was recorded. The results showed significantly reduced plasma glutamine and damaged immunological function after severe burn Indices of cellular immunity function were remarkably decreased from normal controls. After taking glutamine granules for 14 days, plasma glutamine concentration was significantly higher in Gln group than that in B group (607.86+/-147.25 micromol/L versus 447.63+/-132.38 micromol/L, P<0.01). On the other hand, cellular immunity functions were improved in Gln group, such as lymphocyte transformation ratio, NPI, CD4/CD8 ratio and IL-2 compared those in the B group (P<0.05-0.01). However, for humoral immunity function such as the concentration of IgG, IgM, C3, C4, no marked changes were seen compared with the B group (P>0.05). In addition, wound healing was better and hospital stay days were reduced in Gln group (46.59+/-12.98 days versus 55.68+/-17.36 days, P<0.05). These indicated that immunological function damage is present after severe burn; supplemented glutamine granules with oral feeding or tube feeding abate the degree of immunosuppression, improve immunological function especially cellular immunity function, ameliorate wound healing and reduce hospital stay.     

腹部外科手术后MODS患者内分泌及免疫功能的改变

目的 探讨腹部外科手术后MODS患者内分泌及免疫功能的改变。方法检测MODS组20例及非MODS组34例患者术前及术后1、3、7d外周血清TNF，IL-6，T3，T4，rT3，FT3，FT4，GH，C3，C4，CRP水平，进行统计学分析。结果MODS患者内分泌及免疫功能的改变大于非MODS患者。T3，T4，FT3，FT4较非MODS组显著性下降（P〈0．05），rT3，GH较非MODS组显著性升高（P〈0．05）。TNF，IL-6，CRP较非MODS组显著性升高（P〈0．05）。C3，C4较非MODS组显著性下降（P〈0．05）。结论MODS状态下出现的内环境紊乱，不仅有免疫失衡，神经及内分泌功能也有不同程度的改变。     

严重创伤患者白细胞介素—2及其受体变化与多器官功能障碍综合 …

目的 探讨血清白介素－２（ＩＬ－２）与可溶性白介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）在创伤后多器官功能障碍综合征（ＭＯＤＳ）发生、发展中的作用机制。方法 应用ＥＬＩＳＡ法动态监测５９例严重创伤患者血清ＩＬ－２与ｓＩＬ－２Ｒ水平变化,比较ＭＯＤＳ与非ＭＯＤＳ组间ＩＬ－２、ｓＩＬ－２Ｒ变化之差异。结果 ５９例患者血甭ｓＩＬ－２Ｒ水平显著升颃是ＩＬ－２明显下降,且升 峰值与降低之谷值在ＭＯＤＳ组更为明显,与非ＭＯ     

Differential regulation of T- and B-lymphocyte activation in severely burned patients.

We studied the in vitro expression and regulation of the CD23 and CD25 (Tac) surface antigens by peripheral blood lymphocytes (PBL) from severely burned patients (burn injuries ranging from 25% to 72% TBSA) in order to evaluate T- and B-lymphocyte activation processes after thermal trauma. The spontaneous and cytokine (IL-4, IL-2)-induced expression of CD23 which represents a B-cell activation marker was significantly reduced during the second to fifth week postburn when compared to healthy donors. In contrast, CD25, which is expressed on activated T cells, showed a marked increase both spontaneously, indicating an in vivo activation, and after stimulation with IL-2 or PHA. Concomitantly, T-cell proliferation induced by PHA or Con A was suppressed. However, the number of T and B cells remained unchanged. The data demonstrate the impairment of early events in the lymphocyte program in severely burned patients. The activation of B cells is downregulated, since they become refractory to external helper signals. In addition, T cells are highly activated but fail to proceed to proliferation in response to mitogenic stimuli.