盐酸埃他卡林对内皮素系统的影响

目的　研究新型抗高血压药物盐酸埃他卡林 (iptakaimhydrochloride,Ipt)对内皮素 (ET)系统的作用。方法　以放射免疫法测定大鼠血浆内皮素水平和培养的血管内皮细胞释放的内皮素量;以RT PCR技术,测定内皮素及其转化酶(ECE)基因表达的变化;在离体血管标本上,观察内皮素对血管平滑肌张力的影响;在麻醉大鼠上,插入肺内动脉导管测定肺动脉压。结果　①在SHRsp上,Ipt0 25 ~4 0m·kg-1,po, 1次 /d, 3个月,可对抗血浆中内皮素水平的病理性增高;②在培养的新生小牛主动脉内皮细胞 (BAEC)上Ipt在 1~1000μmol·L-1浓度范围内,能剂量依赖性地抑制培养的新生小牛主动脉内皮细胞分泌内皮素;③并能抑制培养的新生小牛主动脉内皮细胞内皮素和内皮素转化酶基因的表达;④在离体大鼠主动脉标本上,Ipt0 5 ~100μm·L-1可浓度依赖性地对抗ET 1的缩血管作用,此作用在无钙营养液中明显减弱;⑤在麻醉的SD大鼠上,经肺内动脉注入ET 1可以诱发肺动脉收缩,肺动脉压增高。Ipt0 5和1 0mg·kg-1可对抗肺动脉内注射ET 1诱发的肺动脉高压,但对正常肺动脉压无明显影响。结论　盐酸埃他卡林可对抗内皮素系统的功能,其特征包括抑制血管内皮细胞内皮素转化酶和内皮素基因的表达,抑制内皮素的释放,对抗高血压状态下血浆内皮素水平的病理性增?     

盐酸埃他卡林对内皮素-1诱导的大鼠肺动脉高压的影响

目的研究埃他卡林(iptakalim,IPT)对内皮素-1(ET-1)诱导的大鼠肺动脉环收缩、肺动脉高压的影响及其机制.方法正常SD大鼠肺动脉环建立ET-1的浓度反应曲线,研究IPT累积给药的舒张血管效应;通过微型导管直接向麻醉大鼠肺动脉注射药物,四道生理记录仪记录大鼠肺动脉平均压(mPAP)、平均动脉压(mAP)和心率(HR);直接向肺动脉注射ET-1,测定注射后5、10、20、30、60min的平均肺动脉压;观察注射ET-1前或注射后2 min给予IPT对肺动脉压的影响.结果在0.05～50 mol·L-1浓度范围内,ET-1呈浓度依赖性地引起肺动脉环收缩,其EC50±L95为10.48±1.52 mol·L-1,b±Sb为0.82±0.085,r=0.97.在10-13～10-3nmol·L-1浓度时,IPT呈浓度依赖地拮抗ET-1诱导的肺动脉环收缩,其IC50为5.84 nmol·L-1.预先注入IPT(1.0和0.5 mg·kg-1)可以拮抗ET-1诱导的肺动脉高压;预先注入选择性KATP拮抗剂格列本脲20 mg·kg-1则可阻断IPT的作用.给予ET-1后2 min经肺动脉注入IPT(1.0 mg·kg-1)可阻断ET-1诱导的肺动脉压升高.结论IPT可显著拮抗或逆转ET-1诱导的肺动脉高压,其机制在于开放KATP通道,预先给予IPT的效果优于肺动脉高压形成后给药,IPT是一个富有潜力的治疗肺动脉高压的候选药物.     

盐酸埃他卡林对内皮素1诱导人离体肺动脉收缩的拮抗作用

目的 研究新型ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂埃他卡林(IPT)对内皮素1(ET-1)诱导的人离体肺动脉收缩的影响及其机制.方法 建立ET-1诱导人离体肺动脉收缩的量效反应曲线和时效反应曲线,以吡那地尔(PIN)为阳性对照,研究IPT不同浓度累积给药的舒张血管效应.结果 在0.05～50 nmol/L浓度范围内,ET-1呈浓度依赖性地引起肺动脉收缩.其半数有效浓度±95%可信区间(EC50±L95)为(10.19±1.26) nmol/L,曲线斜率±标准差(b±sb)为0.905±0.186,相关系数r=0.91.在10-13～10-3 nmol/L浓度累积给药时,IPT呈浓度依赖性地拮抗ET-1诱导的肺动脉环收缩.其半数抑制浓度IC50为27.11 nmol/L.结论 IPT可以显著拮抗ET-1诱导的肺动脉收缩,其机制在于开放肺动脉平滑肌细胞上的KATP通道.IPT可以有效舒张人肺血管.     

盐酸埃他卡林对血管内皮细胞分泌功能的影响

目的 :研究新型抗高血压药物盐酸埃他卡林(Ipt)对血管内皮细胞分泌功能的影响。方法 :采用灌流消化法分离小牛主动脉内皮细胞 (BAEC) ,观察Ipt对BAEC分泌内皮素 1(ET 1)、前列环素 (PGI2 )和一氧化氮 (NO)的影响 ,同时观察Ipt对培养的BAEC胞浆游离Ca2 浓度的影响。结果 :在Ipt浓度为 10 -6mol·L-1及以上时 ,能够剂量依赖性地抑制培养的BAEC合成分泌ET 1,并在Ipt 10 -5mol·L-1及以上时促进NO的合成分泌 ,同时在Ipt浓度为10 -4mol·L-1及以上时 ,显著地增高BAEC胞浆游离Ca2 浓度。结论 :Ipt通过抑制内皮细胞合成分泌ET 1和促进NO的合成分泌 ,从而使ET和NO的平衡状态得到改善 ;尚能增加内皮细胞 [Ca2 ]i,有利于内皮细胞合成NO增加 ,从而增强内皮介导的舒血管效应。     

埃他卡林对长期低氧大鼠肺组织eNOS mRNA和蛋白表达的影响

目的研究长期低氧对大鼠肺组织eNOS mRNA及蛋白表达的影响及新型ATP敏感性钾(KATP)通道开放剂埃他卡林(iptakalim,IPT)的作用。方法SD♂大鼠60只,随机分成对照组、低氧组、IPT低剂量组(IPT0.75mg.kg-1.d-1,ig)、IPT高剂量组(IPT1.5mg.kg-1.d-1,ig),每组15只。将低氧组、IPT低剂量和高剂量组大鼠放入常压低氧舱内[O2(10%±0.5%)],每周6d,每天8h,4wk后测定平均肺动脉压(mPAP)、RV/(LV+S)和血浆NO浓度。采用RT-PCR技术,分析各组肺组织eNOS mRNA表达;采用Western blot技术,分析各组肺组织eNOS蛋白表达。结果①低氧组大鼠mPAP和RV/(LV+S)高于对照组,IPT低剂量组和高剂量组较低氧组下降,P均<0.05。②低氧组大鼠血浆NO浓度低于正常对照组,IPT低剂量和高剂量组较低氧组上升,P均<0.05。③低氧组eNOS mRNA及蛋白水平均低于对照组(P<0.05),IPT低剂量和高剂量组eNOS高于低氧组(P<0.05),其中高剂量组更加明显。结论长期低氧导致肺血管内皮细胞功能障碍,NO生成减少、eNOS mRNA和蛋白水平表达下降,而IPT可改善内皮细胞功能障碍,增加eNOS的表达和NO的释放,逆转低氧性肺动脉高压。     

埃他卡林对长期低氧大鼠肺动脉平滑肌KATP mRNA的影响

目的 :研究慢性低氧对大鼠肺动脉平滑肌ATP敏感钾通道 (KATP)mRNA表达的影响及新型KATP开放剂盐酸埃他卡林的作用。方法 :SD雄性大鼠 16只随机分成对照组、低氧组、低剂量治疗组 (盐酸埃他卡林 0 .75mg·kg-1·d-1,ig)、高剂量治疗组(盐酸埃他卡林 1.5mg·kg-1·d-1,ig)。将低氧组和治疗组大鼠放入常压低氧舱制备动物模型 ;采用RT PCR技术 ,分析各组肺动脉主干平滑肌KATP mR NA表达。结果 :低氧组SUR2mRNA水平显著低于正常组 ,高剂量治疗组SUR2显著高于低氧组 ,各组Kir 6 .1没有显著差异。结论 :慢性低氧抑制KATP 通道表达 ,而盐酸埃他卡林能提高表达 ,可从肺动脉高压发病机制上理解该药物治疗价值。     

新型K_(ATP)开放剂埃他卡林对慢性低氧诱导大鼠体内肺动脉平滑肌K_(ATP)通道mRNA表达变化的影响

目的研究慢性低氧对大鼠肺动脉平滑肌KATP通道mRNA表达的影响及新型KATP开放剂埃他卡林(Iptakalim,IPT)的作用。方法将清洁级SD大鼠30只随机分成对照组、低氧组、IPT组,每组10只。将低氧组与IPT组放入常压低氧舱制备动物模型;采用右心导管测量大鼠肺动脉压;用实时荧光定量PCR检测(Real time PCR)技术分析各组肺动脉平滑肌KATP通道Kir6.1与SUR2B mRNA表达。结果低氧组大鼠肺动脉平均压高于对照组和IPT组(P<0.05),低氧组SUR2B亚基mRNA水平低于对照组(P<0.05),IPT可逆转慢性低氧对SUR2B的作用,各组Kir6.1亚基mRNA表达水平无差异(P>0.05)。结论慢性缺氧导致大鼠肺动脉平滑肌KATP通道SUR2B mRNA表达减少,IPT能拮抗慢性缺氧对KATP通道SUR2B mRNA基因表达的抑制作用。     

埃他卡林对兔肺动脉平滑肌内皮细胞钙浓度的影响

目的观察埃他卡林(IPT)对内皮素1(ET-1)诱导培养的兔肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法应用细胞培养、氚-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)参入实验、Fluo-3和激光扫描共聚焦显微镜技术评价IPT对ET-1诱导的兔PASMC增殖及PASMC[Ca2+]i调节的作用。结果ET-1(10-7mol.L-1)使PASMC[3H]-TdR参入量增加146.8%,与对照组比较,差异有显著性(P<0.01);在相同条件下,加入ET-1的同时,分别向培养基中加入IPT10-7、10-6、10-5mol.L-1,细胞[3H]-TdR参入量分别下降(19.8±4.6)%、(41.2±9.5)%、(54.7±10.1)%,与ET-1组比较差异有显著性(P<0.01);对照组PASMC[Ca2+]i荧光强度和荧光光密度值较低;ET-1组中[Ca2+]i荧光光密度值明显增高,从73.7±10.1增加到143.8±28.2,两者比较差异有显著性(P<0.01);而IPT组细胞内荧光光密度值明显降低,仅从74.30±10.2增加到86.03±9.82,与ET-1组比较差异有显著性(P<0.01)。结论IPT可明显抑制ET-1诱导的兔PASMC增殖、DNA合成;减少钙通道的开放时间,抑制细胞内Ca2+浓度增加。     

埃他卡林对慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺组织HIF-1α mRNA和蛋白表达的影响

目的 研究新型ATP敏感性钾通道开放剂(KATP CO)埃他卡林(IPT)对大鼠肺组织中低氧诱导凶子1α(HIF-1α)表达的影响.方法 36只清洁级SD大鼠随机分成对照组、低氧性肺动脉高压(HPH)模型组和IPT处理组,每组12只.HPH模型组及IPT处理组于(10.0±0.5)%氧浓度的常压低氧舱内饲养,每天8 h,每周6 d,共4周.IPT处理组给予IPT 1.5 mg·kg-1·d-1灌胃;对照组及HPH模型组给予0.9%氯化钠5 ml·kg-1·d-1灌胃.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织HIF-1α mRNA表达,用Western blot方法检测肺组织HIF-1α白的表达.结果 HPH模型组大鼠肺动脉平均压、右室/(左室+室间隔)重量比和HIF-1α mRNA和蛋白表达均高于对照组和IPT处理组(P＜0.01).IPT处理组与对照组的HIF-1α mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IPT降低肺动脉压可能与抑制HPH大鼠肺组织中的HIT-1α表达有关.     

肿瘤坏死因子刺激牛脑微血管内皮细胞释放内皮素-1及粉防己碱的拮抗作用

目的:观察肿瘤坏死因子（TNF）对培养的牛脑微血管内皮细胞释放内皮素-1（ET－1）的刺激作用及粉防己碱（Tet）对ET－1释放的抑制作用。方法：放免测定法。结果：TNF在（l～100μg·L(-1)）之间能剂量依赖性的促进牛脑微血管内皮细胞释放ET-1，Tet（10(－6)～10(－4)mol·L(－1)）能拮抗TNF诱导的ET－1释放并呈量效关系。     

新型KATP开放剂埃他卡林对原代培养人肺动脉平滑肌细胞ERK1／2磷酸化的影响

目的：研究新型ATP敏感性钾通道（KATP）开放剂埃他卡林（I阴）对内皮素-1（ET-1）诱导的原代培养人肺动脉平滑肌细胞细胞外信号调节激酶1和2（ERK1／2）磷酸化的影响。方法：原代培养人肺动脉平滑肌细胞,用Western blot方法检测磷酸化细胞外信号调节激酶1和2（p-ERK1／2）。培养液中加入ET-1（10nmol／L）,孵育0、1、2、5、10、30、60min。培养液中加入ET-1（10nmol／L）前30min分别加入0．1、1．0和10．0umol／LIPT．孵育10min。培养液中加入ET-1（10nmol／L）和IPT（10umol／L）前30min加入格列本脲（CU）（10umol／L）,孵育10min。结果：在2min至30min之间,ET-1呈时间依赖性促进人肺动脉平滑肌细胞ERK1／2磷酸化,10min时最明显。IPI、呈浓度依赖性拮抗ET-1对ERK1／2磷酸化的影响。特异性KATP阻断剂GLI逆转IPT的作用。结论：IPT可能通过激活KATP通道,抑制ET-1诱导的原代培养人肺动脉平滑肌细胞ERK1／2磷酸化,可能可用于肺血管重构、肺动脉高压的治疗。     

硫化氢对人胚肺成纤维细胞缺氧后增殖活力及细胞凋亡的影响

目的探讨内源性及外源性硫化氢(H2S)对缺氧诱导下人胚肺成纤维细胞增殖效应及凋亡率的影响。方法以2%O2-93%N2-5%CO2体外培养人胚肺成纤维细胞24h,制备细胞缺氧模型。细胞培养分为6组:①缺氧(N2)组;②N2+600μmol.L-1NaHS组;③N2+1200μmol.L-1NaHS组;④N2+6400μmol.L-1NaHS组;⑤N2+400μmol.L-1L-半胱氨酸(Cys)组;⑥N2+200μmol.L-1S-腺苷甲硫氨酸(SAM)组。各组细胞24h缺氧培养后,采用MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖活力和细胞凋亡率。结果与N2组相比,600和1200μmol.L-1NaHS(H2S供体)可降低缺氧后人胚肺成纤维细胞的增殖活力(P<0.01),但对细胞凋亡率无影响(P>0.05);而6400μmol.L-1NaHS虽然不影响细胞缺氧后的增殖活力(P>0.05),但却增加其凋亡率(P<0.05);胱硫醚-β-合酶(H2S合成酶)底物Cys和激动剂SAM对缺氧后人胚肺成纤维细胞增殖活力无影响(P>0.05);但它们却使缺氧后人胚肺成纤维细胞凋亡率高于N2组(P<0.05)。结论内源性及外源性H2S可降低缺氧诱导的人胚肺成纤维细胞增殖活力、促进细胞凋亡,提示内源性H2S还可能通过肺成纤维细胞,抑制缺氧导致的肺血管结构重建发挥其保护作用。     

吡格列酮对脂多糖引起大鼠大脑皮质神经元损伤的抑制作用

目的探讨吡格列酮对脂多糖(LPS)引起的神经元损伤的抑制作用,并探讨其信号传导机制。方法取培养7d的大鼠大脑皮质神经元细胞,除正常对照组外,其余各组先给予相应的处理30min～1h后,再加LPS10mg.L-1处理4～24h。MTT法测定细胞存活率;Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;免疫荧光染色法测定磷酸化c-Jun氨基端激酶1(JNK1)细胞内定位;Western蛋白印迹法检测活性胱天蛋白酶3(caspase3)蛋白表达和磷酸化JNK1水平;Griess法测定细胞培养上清液中一氧化氮(NO)含量。结果与对照组相比,LPS可使体外培养神经元细胞存活率明显下降,(100.0±10.9)%vs(72.3±2.1)%;凋亡细胞百分率明显增加,(11.5±4.2)%vs(39.5±8.2)%;活性caspase3蛋白表达和磷酸化JNK1水平增加;细胞培养上清液中NO含量明显增加。吡格列酮0.01,0.1和1μmo.lL-1可明显对抗LPS引起的培养神经元细胞存活率下降,并呈一定浓度依赖性。吡格列酮0.1和1μmol.L-1也可明显对抗LPS引起的培养神经元凋亡细胞百分率、活性caspase3蛋白表达、磷酸化JNK1水平和NO含量增加。LPS+吡格列酮(1μmo.lL-1)组,细胞存活率为(97.8±9.7)%,凋亡细胞百分率为(20.6±5.0)%,NO含量为(6.8±1.3)μmol.L-1。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的特异性阻断剂GW9662不能去除吡格列酮对LPS引起的神经元细胞损伤的抑制作用,在LPS+吡格列酮(1μmol.L-1)+GW9662(10μmo.lL-1)组,细胞存活率为(90.7±6.9)%,凋亡细胞百分率为(23.4±4.1)%,NO含量为(5.8±0.7)μmol.L-1。GW966210μmol.L-1对LPS引起的细胞存活率降低没有影响。与LPS组相比,JNK特异性阻断剂SP6001255μmol.L-1可明显对抗LPS引起的神经元损伤,细胞存活率明显增加,(72.3±2.1)%vs(109.8±11.8)%;凋亡细胞百分率降低,(39.5±8.2)%vs(19.1±4.8)%;NO含量降低,(21.1±5.0)μmol.L-1vs(4.0±1.3)μmol.L-1。结论吡格列酮能明显抑制LPS引起的皮质神经元损伤,这种作用可能与抑制JNK信号传导通路有关,与PPARγ激活无关。     

Iptakalim inhibited endothelin-1-induced proliferation of human pulmonary arterial smooth muscle cells through the activation of K(ATP) channel

To determine whether iptakalim inhibited endothelin-1(ET-1)-induced proliferation of human pulmonary arterial smooth muscle cells (PASMCs) through the activation of ATP-sensitive potassium (K(ATP)) channel, the effect of iptakalim on the ET-1-induced proliferation of human PASMCs was examined by [3H]thymidine incorporation, staining with propidium iodide and flow cytometry analyses, measurement of cytosolic free Ca2+ concentration ([Ca2+]cyt) and Western blot for the phosphorylation of extracellular signal-regulated kinases 1 and 2 (ERK1/2) in vitro. The results showed that iptakalim inhibited the ET-1-induced proliferation of human PASMCs, including [3H]thymidine incorporation and the transition of cell cycle phase, and blocked the ET-1-induced transient raise of [Ca2+]cyt, and the ET-1-induced phosphorylation of ERK1/2 in the human PASMCs. Iptakalim exerted a similar role as pinacidil did in human PASMCs and both inhibited the [3H] thymidine incorporation and the transition of cell cycle phase induced by ET-1 in the human PASMCs. Furthermore, we found that the inhibition of iptakalim and pinacidil on the ET-1-induced proliferation of human PASMCs was blocked by glyburide, a selective K(ATP) channel antagonist. These findings provide a strong evidence to support that iptakalim acts as a specific K(ATP) channel opener to antagonize the proliferating effect of ET-1 in the human PASMCs. This study provides further evidence that iptakalim may serve as another candidate drug to treat pulmonary hypertension.     

Iptakalim prevents rat pulmonary hypertension induced by endothelin‐1 through the activation of KATP channel in vivo

Iptakalim has been previously characterized as a novel, selective ATP‐sensitive potassium channel opener. In the present study, to determine whether iptakalim can prevent the pulmonary hypertension induced by endothelin‐1 (ET‐1) through the activation of K_ATP channel in vivo, the effects of iptakalim and glibenclamide (a selective K_ATP channel blocker) on the mean pulmonary pressure (mPAP) induced by ET‐1 were examined in rats. Treatment of the animals with exogenous ET‐1 (via the pulmonary artery at a dose of 1.5 µg/kg) induced a pulmonary hypertension in vivo, whereas the administration of iptakalim (via the pulmonary artery at doses of either 0.5 mg or 1.0 mg/kg) prior to ET‐1 prevented pulmonary hypertension induced by ET‐1 in vivo. The ability of iptakalim to prevent pulmonary hypertension induced by ET‐1 was abolished by glibenclamide (via the femoral artery at a dose of 20 mg/kg) in vivo. These findings provide strong evidence that iptakalim acts as a specific K_ATP channel opener to antagonize the vasoconstrictor effect of ET‐1 in the pulmonary circulation. Thus, iptakalim may be developed as a therapeutic option for the treatment of pulmonary hypertension. Drug Dev Res 69: 89–94, 2008. © 2008 Wiley‐Liss, Inc.     

氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的抑制作用及机制研究

目的观察氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7周期、周期蛋白相关基因及产物表达的影响,探讨氨氯地平对人乳腺癌MCF-7细胞周期的影响及其机制。方法MTT检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR技术检测细胞周期相关基因cyclinD1、p21mRNA的表达;Western blot检测细胞周期蛋白cyclinD1、p21的蛋白表达。结果氨氯地平剂量和时间依赖性的抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,IC50为14.439μmol.L-1。经7.22μmol.L-1(1/2IC50)、14.439μmol.L-1(IC50)、28.88μmol.L-1(2IC50)的氨氯地平作用人乳腺癌MCF-7细胞48h,G0/G1期细胞较对照组明显增高(P<0.05);并使人乳腺癌MCF-7细胞中cyclinD1mRNA及蛋白表达降低;p21mRNA及蛋白表达升高。结论氨氯地平对人乳腺癌MCF-7细胞具有抗增殖作用,并使细胞阻滞于G1期。其G1阻滞机制可能与调控细胞周期相关基因cyclinD1、p21mRNA及蛋白的表达相关。     

芍药苷对MPP~+所致大鼠黑质脑片多巴胺能神经元损伤的保护作用

目的研究芍药苷(paeoniflorin,PF)对MPP+所致大鼠黑质脑片多巴胺能神经元损伤的保护作用,并观察PF对α-synuclein(α-syn)mRNA表达水平的影响。方法离体培养SD大鼠黑质器官型脑片,培养的d10给予不同浓度的MPP+(0.1、0.5、1.0mmol·L-1)处理24h,并在0.5mmol.L-1MPP+处理的基础上,给予1μmol·L-1或10μmol·L-1的PF进行干预。免疫组化法计数黑质致密部酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞数,定量RT-PCR法检测α-syn mRNA的表达丰度。结果MPP+(0.1、0.5、1.0mmol.L-1)处理导致黑质致密部TH+细胞数较正常对照组减少,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);MPP+(0.5mmol.L-1)使α-syn mRNA的表达水平明显升高(P<0.01)。PF(10μmol·L-1)有效增加了TH+细胞的数量(P<0.01),并明显下调了α-syn mRNA的表达(P<0.05)。结论PF能有效拮抗MPP+导致的多巴胺能神经元受损死亡,其机制可能与下调α-syn的表达有关。     

Endothelin-1 is induced by cytokines in human vascular smooth muscle cells: evidence for intracellular endothelin-converting enzyme

Endothelin-1 (ET-1) is the predominant endothelin isopeptide generated by the vascular wall and therefore appears to be the most important peptide involved in regulation of cardiovascular events. Many pathologic conditions are associated with elevations of ET-1 in the blood vessel wall. Because these conditions are often cytokine driven, we examined the effects of a mixture of cytokines on ET-1 production in human vascular smooth muscle cells (VSMCs) derived from internal mammary artery and saphenous vein (SV). Incubation of IMA and SV VSMCs with tumor necrosis factor-alpha (10 ng/ml) and interferon-gamma (1000 U/ml) in combination for up to 48 h markedly elevated the expression of mRNA for prepro-ET-1 and the release of ET-1 into the culture medium. This cytokine-stimulated release of ET-1 was inhibited by a series of dual endothelin-converting enzyme (ECE)/neutral endopeptidase inhibitors, phosphoramidon, CGS 26303, and CGS 26393, with an accompanying increase in big ET-1 release but with no effect on expression of mRNA for prepro-ET-1. These same compounds were 10 times more potent at inhibiting the conversion of exogenously applied big ET-1 to ET-1. ECE-1b/c mRNA is present in SV VSMCs, however no ECE-1a is present in these cells. Thus VSMCs most probably contain, like endothelial cells, an intracellular ECE responsible for the endogenous synthesis of ET-1. Under the influence of pro-inflammatory mediators the vascular smooth muscle can therefore become an important site of ET-1 production, as has already been established for the dilator mediators nitric oxide, prostaglandin I2, and prostaglandin E2.