重庆市儿童哮喘α1-抗糜蛋白酶遗传缺陷基因频率及基因分析研究

哮喘发病具有明显的遗传倾向 ,国外研究显示α1 抗糜蛋白酶 (α1 ＡＣＴ)遗传缺陷是哮喘发病的重要因素[1] 。为探讨α1 抗糜蛋白酶遗传缺陷在中国儿童哮喘发病中的作用 ,本研究对90例重庆市汉族儿童哮喘血浆α1 ＡＣＴ含量、Ｂｏｎｎ 1和Ｂｏｃｈｕｍ 1变异体进行了初步探讨 ,取得如下结果。1　资料与方法1.1　资料1.1.1　研究对象选择及血样本来源　　按文献 [3]选择汉族哮喘儿童 90例作为哮喘组 ,年龄 0 .2 5～ 12 .75岁 ;并选择汉族健康儿童 180例作为儿童对照组 ,年龄 0 .0 3～ 13 .4岁 ;健康献血员 2 0 0例作为成人对照组。 5 18份血…     

儿童哮喘α1-抗糜蛋白酶杂合缺失研究

目的 探讨α１－抗糜蛋白酶（α１－ａｎｔｉｃｈｙｍｏｔｒｙｐｓｉｎ，α１－ＡＣＴ＿杂合缺失是否为儿童哮喘发病的遗传因素。方法 应用火箭免疫电泳技术检测９０例哮喘儿童、１８０例健康儿童及２００例健康成人血浆α１－ＡＣＴ含量，家系调查确定α１－ＡＣＴ事缺失，统计学方法分析α１－ＡＣＴ杂合缺失和非缺失患儿的有关临床资料。结果 哮喘组、儿童对照组以及成人的对照组α１－ＡＣＴ杂合缺失频率依次为４．４％、０．     

人B淋巴细胞电压依赖性K^＋通道及ATP敏感性Cl^—通道的膜片钳研究

研究人Ｂ细胞电压依赖性钾通道（Ｋｖ） 及ＡＴＰ敏感性Ｃｌ－ 通道的存在及其调节。以人Ｂ细胞（Ｄａｕｄｉｃｅｌｌｓ）为研究对象,膜片钳技术做全细胞记录。结果表明,①全细胞ｖｏｌｔａｇｅｒａｍｐｐｒｏｔｏｃｏｌ 证实有Ｋｖ 通道的存在,该Ｋｖ 通道对钾通道阻断剂ｑｕｉｎｉｎｅ １００μｍｏｌ·Ｌ－ １ 及ｃｈａｒｙｂｄｏｔｏｘｉｎ（ＣＴＸ）１００ｎｍｏｌ·Ｌ－ １ 敏感。②灌流液中加入ＡＴＰ１ｍｍｏｌ·Ｌ－ １ 后,Ｋｖ 失活,并激活一外向性整流电流。在有ｑｕｉｎｉｎｅ 或ＣＴＸ存在时,该外向性电流仍然存在,但可被Ｃｌ－ 通道阻断剂ＤＩＤＳ１００μｍｏｌ·Ｌ－ １ 及Ｐ２ 受体阻断剂ｓｕｒａｍｉｎ １００μｍｏｌ·Ｌ－ １ 阻断。③电极液中加入ＰＩＰ２ ５μｍｏｌ·Ｌ－ １ ,也可明显削弱该外向性电流。提示人Ｂ细胞膜上有Ｋｖ 通道及ＡＴＰ敏感性Ｃｌ－ 通道的表达,Ｐ２ 受体及ＰＩＰ２ 可能参与其信息转导过程。     

抑制素α、βA、βB亚基肽段的人工合成(摘要)

采用固相多肽合成法、应用Ｂｏｃ化学和Ｆｍｏｃ化学从Ｃ端逐步合成,ＤＣＣ／ＨＯＢｔ缩合,合成好的肽树脂经裂解得粗肽,粗肽经ＨＰＬＣ分离,氨基酸分析鉴定。已合成抑制素α、βＡ和βＢ亚基的５个片段：Ｉｎｈｉｂｉｎ（ＩＮＨ）α（３７－６５）,ＩＮＨβＡ（１－２８）,ＩＮＨβＡ（８２－１１４）,ＩＮＨβＢ（１－２８）,ＩＮＨβＢ（８５－１１５）。产物结构如下：ＩＮＨα（３７－６５）,２９ａａＩｌｅＳｅｒＰｈｅＧｌｎＧｌｕＬｅｕＧｌｙＴｒｐＧｌｕＡｒｇＴｒｐＩｌｅＶａｌＴｙｒＰ…     

中国人胰岛素依赖型糖尿病与HLA—DQ基因的相关性研究

本研究采用聚合酶链式反应和序列特异性寡核苷酸探针杂交方法，对北京地区汉族４９例胰岛素依赖型糖尿病患者及４８名健康对照者ＨＬＡ－ＤＱＢ１基因和２７例ＩＤＤＭ患者及２９名对照者ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因的研究提示：（１）ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因的Ａ４等位基因（ＲＲ＝１１．７，Ｐｃ＜０．０２）与ＩＤＤＭ易感性呈显著正相关，（２）ＨＬＡ－ＤＱＢ１基因的ＤＱＢ１０６０１（ＤＱＷ１．１２）等位基因与ＩＤＤＭ抵抗性相关（     

O-糖基化HBV Pre-S(2)CTL表位分子模建及免疫学活性研究

目的 研究Ｏ－糖基化（Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）修饰对ＨＢＶ Ｐｒｅ－Ｓ（２）上ＣＴＬ表位结构及其免疫学活性的影响。方法 选择ＨＢＶ Ｐｒｅ－Ｓ（２）上公认的ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位４４～５３（ＳＩＬＳＫＴＧＤＰＶ）,以Ｓｅｒ４４为糖基化位点,进行计算机分子模建,并利用糖肽合成技术,固相合成α－ＧａＩＮＡｃ－糖基化可改变表位形态使之更适宜与ＨＬＡ－Ａ２类分子结合,糖基部分基团可从ＨＬＡ－Ａ２     

血脂和载脂蛋白A1,B100测定对NIDDM血管病变的诊断价值

测定３５２例有或无血管病变的非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）病人及４４例正常人的血清甘油三酯（ＴＧ）、总胆固醇（ＴＣ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－ｃｈ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－ｃｈ），载脂蛋白Ａ１（ＡｐｏＡ１）、载脂蛋白Ｂ（１００）（ＡｐｏＢ（１００））的水平。分析了这些指标与ＮＩＤＤＭ并发血管病变的相关性。结果：ＮＩＤＤＭ并发血管病变各组与ＮＩＤＤＭ无并发症组及正常对照组之间比较ＬＤＬ－ｃｈ和ＡｐｏＢ（１００）水平升高；ＡｐｏＡ１／ＡｐｏＢ（１００）比值降低。提示上述指标可作为ＮＩＤＤＭ并发血管病变的预测指标。     

钴-4,5-二溴邻硝基苯基荧光酮-CTMAB-Triton X-100四元体系的研究及应用

目的：研究测定微量钴的新体系。方法：分光光度法。结果：在ｐＨ９３～９８介质中，在表面活性剂ＣＴＭＡＢ和ＴｒｉｔｏｎＸ－１００存在下，Ｃｏ（Ⅱ）与４，５－二溴邻硝基苯基荧光酮（ＤＢ－ｏ－ＮＰＦ）形成组成比为１∶３蓝紫色配合物，其最大吸收波长６２０ｎｍ，表观摩尔吸光系数ε＝１４１×１０５，Ｃｏ（Ⅱ）含量在０～５μｇ／２５ｍｌ范围内符合比尔定律。结论：建立了测钴的分光光度新方法。该法操作简便，灵敏度高，可直接用于ＶＢ１２中钴的测定，分析结果令人满意     

内蒙古地区汉族人群ＨＬＡ－ＤＱＢ１基因多态性与支气管哮喘相关性研究

目的：探讨内蒙古地区汉族人群中人类白细胞抗原ＨＬＡ－ＤＱＢ　１基因多态性与支气管哮喘的相关
性。方法：采用序列特异性引物聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）法对５０例汉族哮喘病人与５０例汉族健康者进行人
类白细胞抗原ＨＬＡ－ＤＱＢ　１等位基因频率检测。结果：汉族支气管哮喘ＨＬＡ－ＤＱＢ　１０６０２基因频率高于汉族
健康对照组（Ｐ＜０．０１,ＯＲ＝６．１６３）。结论：ＨＬＡ－ＤＱＢ　１０６０２基因可能是内蒙古地区汉族支气管哮喘病人的
易感基因。     

乙型肝炎病毒核心抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞作用的靶细胞的建立

目的建立ＨＢｃＡｇ特异性ＣＴＬ作用的靶细胞系统,为进一步研究ＨＢＶ基因变异对ＣＴＬ细胞毒效应的影响奠定基础。方法采用两种质粒ｐＸＴ１和ＥＢＯ－ｐｌｐｐ构建ＨＢＶＣ基因真核细胞表达载体并转染水生化Ｂ细胞,ＤＮＡ分析和流式细胞仪检测ＨＢＶＣ基因在宿主细胞中的复制、表达。结果在转染重组质植ｐＸＴ１－ＨＢＶｃ和ＥＢ０－ｐｌｐｐ－ＨＢＶｃ的Ｂ细胞中,均能检测到目的基因;分另有８９．８１％和８８．５１％的宿主细胞能检测到ＨＢｃＡｇ;连续培养３周后,分别有８８．３０％和７２．１９％的宿主细胞表达ＨＢｃＡｇ。结论重组逆转录病毒表达载体ｐＸＴ１－ＨＢＶｃ和ＥＢ病毒表达载体ＥＢＯ－ｐｌｐｐ－ＨＢＶｃ转染的永生化人外周血Ｂ细胞能有效地表达靶抗原（ＨＢｃＡｇ）,可作为较为理想的ＨＢＶ特异性ＣＴＬ作用的靶细胞。     

东北地区健康汉族人群Dystropin基因内含子49的（CA）n多 …

目的：探讨中国东北地区健康汉族人群Ｄｙｓｔｒｏｐｉｎ基因内含子４９的二核苷酸ＣＡ重复多态分布。方法：应用同位素（α－＾３２ＰｄＣＴＰ）掺入的聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）方法，对无遗传关系的东北地区汉族女性４２人，男性５人，共８９条Ｘ染色体的Ｄｙｓｔｒｏｐｉｎ基因内含子４９的（ＣＡ）ｎ多态做了研究。结果：内含子４９的（ＣＡ）ｎ多态中共检测到１２个等位片段     

中国人α1型干扰素基因新变种的cDNA序列测定及其表达

为了逐步阐明中国人ＩＦＮ－α基因结构与功能的特点,将从一中国汉族正常胎儿肝细胞染色体ＤＮＡ中获得的一组ＰＣＲ克隆产物（ＰＣＲＡ０１、ＰＣＲＡ０２）分别进行核苷酸序列测定。结果表明,以上两次ＰＣＲ产物序列完全相同,它们与过去分离的ＩＦＮ－α１和ＩＦＮ－αＤ基因之间的氨基酸序列差异小于１％,为ＩＦＮ－α１基因的不同变种。ＰＣＲＡ０１、ＰＣＲＡ０２开放读码框架完全相同,与ＩＦＮ－α１和ＩＦＮ－αＤ基因相比较,其第２９９位为Ｔ,与其相应编码的第１００位氨基酸为Ｖａｌ。该基因为继黎孟枫等１９９１年所分离的ＩＦＮ－α１Ｃ基因之后所发现的又一中国人α１型干扰素基因新变种——ＩＦＮ－α１／１００Ｖ,建议命名为ＩＦＮ－α１ｄ基因。将该基因克隆于原核表达载体ＰＢＶ２２０,测定其抗病毒活性为２．４×１０７Ｕ／Ｌ。为进一步研究ＩＦＮ－α１亚型的生物学特性和其在基因进化上的关系奠定了基础     

多重等位基因特异性PCR—HLA—Ⅱ DNA分型

目的：对人类组织相容性抗原（Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｓｙｓｔｅｍ）Ⅱ类进行高分辨基因分析。方法：用多重ＰＣＲ和等位基因特异性ＰＣＲ技术相结合＾［１,２］,建立多重等位基因特异性。结果：２４对引物成功在分辨４３份ＤＮＡ的ＨＬＡ－ＤＲＢ１、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５＾＊５１个等位基因和ＱＤＢ１＾＊１５个等位基因的４位数字特异性,识别基因片段长度为２８１ｂｐｏ。结论：多重等位基因特异性ＰＣ     

小鼠电针镇痛模型的建立与实验观察

目的：建立小鼠电针镇痛模型,在不同品系小鼠上观察各种电针参数引起的电针镇痛效果。方法：应用ＬＨ型ＨＡＮＳ刺激仪,采用辐射热甩尾测痛法,比较了６种品系小鼠的电针镇痛效应。结果：（１）品系的差异：１００Ｈｚ电针时ＤＢＡ／２品系的镇痛效果显著优于其它品系,２Ｈｚ电针时ＤＢＡ／２品系和ＢＡＬＢ／ｃ品系显著优于ＩＣＲ品系;（２）性别差异：２Ｈｚ电针ＤＢＡ／２、Ｃ５７、ＢＡＬＢ／ｃ３种品系的雌鼠优于雄鼠,１００Ｈｚ电针仅ＢＡＬＢ／ｃ品系的雌鼠优于雄鼠;（３）刺激强度方面：１２２ｍＡ组针效显著优于０．５１．５２．５ｍＡ组或１１．５２ｍＡ组;（４）ＤＢＡ／２和Ｃ５７品系小鼠的电针镇痛与吗啡镇痛呈正相关性;（５）纳洛酮翻转：剂量为１ｍｇ·ｋｇ－１的纳络酮能翻转２Ｈｚ电针效果;而翻转１００Ｈｚ电针效果,则需剂量为２５ｍｇ·ｋｇ－１的纳络酮。结论：小鼠电针镇痛存在品系（遗传背景）和性别差异。阿片受体参与了小鼠电针镇痛,低频和高频电针镇痛分别由不同亚型的阿片受体介导。     

Physiological and pathophysiological significance of coexistence of three subtypes of α_1adrenoceptor in heart and blood vessels

Ｗｅｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙｐｒｏｖｅｄｔｈａｔα１ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ（α１ＡＲ）ｃｏｎｔａｉｎｅｄｔｗｏｓｕｂｔｙｐｅｓ—α１Ａａｎｄα１Ｂ－Ｔｈｅα１ＡＡＲｓｈｏｗｅｄｈｉｇｈａｆｆｉｎｉｔｙｔｏａｓｅｒｉｅｓｏｆｓｅｌｅｃｔｉｖｅａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓａｎｄｗａｓｎｏｔａｌｋｙｌａｔｅｄｂｙｃｈｌｏｒｏｅｔｈｙｌｃｌｏｎｉｄｉｎｅ（ＣＥＣ）－Ｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆα１ＡＡＲｉｎｄｕｃｅｄｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｏｌａｎｄｉｔｓｍｅｄｉａｔｅｄｓｍ…     

造血干细胞移植治疗白血病和淋巴瘤

目的：探讨造血干细胞移植治疗白血病和淋巴瘤的疗效、移植过程中的并发症及其预防和移植后的植活证据及微小残余病灶检测等问题。方法：２例行同胞间异基因骨髓移植（Ａｌｌｏ－ＢＭＴ）、５例行自体外周血干细胞移植（ＡＰＢＳＣＴ）。采用ＣｓＡ＋ＭＴＸ预防ＧＶＨＤ;ＰＧＥ１＋潘生丁预防ＨＶＯＤ;以ＡＰＯＢ、ＳＭ７和Ｄ１Ｓ８０三个位点多态性分析作为植活证据;以ｂｃｒ／ａｂｌ、ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因或ＩｇＨ基因重排     

8-氯腺苷对HL-60细胞端粒酶活性的影响

目的：观察比较大鼠心室与左心房 α_１肾上腺素受体（α_１－ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ, α_１－ＡＲ）３种亚型的分布。方法：放射配体结合实验。结果：大鼠心室与左心房每毫克蛋白中α_１－ＡＮ含量分别为（８１±１３） ｆｍｏｌ和（８６±１５） ｆｍｏｌ;在心室和左心房α_１－ＡＮ的 ３种亚型。α_１Ａ、α_１Ｂ－和α_１Ｄ－ＡＲ分别约占受体总密度的 ２５％,４５％和 ３０％。结论：α_１－ＡＲ ３种亚型在心室肌与左心房分布基本一致。     

BPI23—Fcγ1重组蛋白核表达载体的构建、表达和生物学活性的测定

目的：构建ｐＢＶ－ＢＰＩ６００－Ｆｃγ１７００重组表达载体,转化大肠杆菌ＤＨ５α,诱导表达ＢＰＩ２３－Ｆｃγ１抗菌重组蛋白。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从ＨＬ－６０细胞和正常人白细胞ｍＲＮＡ中扩增编码ＢＰＩ２３和ＩｇＧ１Ｆｃ（Ｆｃγ１）的基因;通过连接反应构建重组克隆载体和重组表达载体;转化感受态大肠杆菌ＤＨ５α,通过温控诱导表达ＢＰＩ２３－Ｆｃγ１重组蛋白;测定ＢＰＩ２３－Ｆｃγ１重组蛋白的抗菌及免疫学活性。结果：⑴ＲＴ－ＰＣＲ获得预期的扩增产物－ＢＰＩ６００ｂｐ和Ｆｃγ１７００ｂｐ基因片段;⑵成功构建ｐＵＣ１８－ＢＰＩ１８０、ｐＵＣ１８－ＢＰＩ４２０和ｐＵＣ１８－Ｆｃγ１７００重组克隆载体,ＤＮＡ测序结果与文献报道一致;⑶成功构建ｐＢＶ－ＢＰＩ６００－Ｆｃγ１７００重组表达载体,酶切图谱分析与预期结果相符;     

中国人胰岛素依赖型糖尿病与HLA－DQ基因的相关性研究

本研究采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）和序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＳＳＯＰＨ）方法（ＤＱＡｌ，共用９个探针，ＤＯＢ１，共１０个探针），对北京地区汉族４９例胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）患者及４８名健康对照者ＨＬＡ－ＤＯＢｌ基因和２７例ＩＤＤＭ患者及２９名对照者ＨＬＡ－ＤＱＡｌ基因的研究提示：（１）ＨＬＡ－ＤＱＡｌ基因的Ａ４等位基因（ＲＲ＝１１．７，Ｐｃ＜０．０２）与ＩＤＤＭ易感性呈显著正相关。（２）ＨＬＡ－ＤＱＢ１基因的ＤＯＢ１＊０６０１（ＤＱＷ１．１２）等位基因与ＩＤＤＭ抵抗性相关（ＲＲ＝０．０３，Ｐｃ＜０．００２）。（３）ＨＬＡ－ＤＱ６５７天门冬氨酸［ＨＬＡ－ＤＱβ５７Ａｓｐ（＋）纯合子基因型与ＩＤＤＭ易感性降低有关，而ＨＬＡ－ＤＱβ５７非天门冬氨酸［ＨＬＡ－ＤＱＢ５７Ａｓｐ（－）］纯合子基因型与ＩＤＤＭ易感性增强有关，说明ＨＬＡ－ＤＱβ链第５７位氨基酸在决定ＩＤＤＭ易感性方面的重要作用。同其它人种相比，ＨＬＡ－ＤＱβ５７Ａｓｐ（－）纯合子基因型频率在中国人群中的减少及ＨＬＡ－ＤＱβ５７Ａｓｐ（＋）纯合子基因型频率在中国人群中的增多可能同中国人群ＩＤＤＭ发病率低有关。     

合成衣原体属特异LPS决定簇糖结合物的抗原性分析

合成衣原体属特异脂多糖（ＬＰＳ）的四糖链α－２－酮基－３－脱氧辛酸（ＫＤＯ）（２→８）－α－ＫＤＯ（２→４）－α－ＫＤＯ（２→６）－β－ＧｌｃＮＡｃ与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）共价结合，制成糖－ＢＳＡ结合物抗原，用其免疫小鼠所制备的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）经间接血凝试验、血凝抑制试验、ＥＬＩＳＡ、免疫荧光试验和免疫印渍等试验分析，结果把这些ＭｃＡｂ分为两组：一组与衣原体ＬＰＳ和Ｒｅ型ＬＰＳ有交叉反应；另一组为衣原体特异性抗体，其中ＫＤＯ３特异抗体与衣原体原体ＭｃＡｂ有共同决定簇特异性，但亲和力却高于后者１００多倍。表明合成糖－ＢＳＡ结合物与衣原体ＬＰＳ有相似的抗原性。