人脑胶质瘤干细胞的培养及分离方法

目的探讨人脑胶质瘤干细胞的培养和分离方法。方法取脑胶质瘤手术标本,制成单细胞悬液用无血清培养基培养,加入表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）进行诱导分化;用免疫组化法检测巢蛋白（Nestin）和胶质原性纤维酸蛋白（GFAP）;用免疫磁珠分选系统进行细胞分离,流式细胞仪检测分化前后CD133阳性细胞的比率。结果培养出悬浮生长的人脑胶质瘤干细胞球,Nestin表达呈阳性,分化后GFAP表达呈阳性;分离前CDm阳性细胞百分比为4．66％±0．55％,分离后为87．21％±6．17％,P〈0．05。结论无血清培养法、免疫磁珠分选系统可成功培养和分离人脑胶质瘤干细胞。     

卵巢癌CD90^＋肿瘤细胞的分离及其肿瘤干细胞生物学特性观察

目的：分离人卵巢癌细胞系SKOV3和原代卵巢癌细胞中的CD90^＋细胞,并观察其肿瘤干细胞的生物学特性。方法从卵巢癌患者腹水中分离原代卵巢癌细胞,采用流式细胞术检测人卵巢癌细胞系SKOV3和原代卵巢癌细胞的CD133、CD90阳性率。流式分选得到CD90^＋、CD90^-细胞后,采用RT-PCR法检测其干细胞及上皮间质化（EMT）相关基因mRNA相对表达,Transwell小室侵袭试验观察细胞侵袭力,克隆形成试验观察细胞增殖分化能力,悬浮成球试验观察干细胞潜能,免疫缺陷小鼠体内有限稀释成瘤试验观察成瘤时间和成瘤率。结果人卵巢癌细胞系SKOV3的CD133和CD90阳性率均低于原代卵巢癌细胞,P均＜0．05。在人卵巢癌细胞系SKOV3和原代卵巢癌细胞中,CD90^＋细胞干细胞相关基因（CD133、OCT4）和EMT间质标志相关基因（N-cadherin、Vimentine、MMP9）相对表达、穿到膜背面的细胞数、细胞克隆数、悬浮成球数均高于CD90^-细胞,EMT上皮标志相关基因E-cadherin相对表达均低于CD90^-细胞,P均＜0．05。随着接种细胞数目的增加,CD90^＋、CD90^-细胞的成瘤率和成瘤时间均升高,CD90^＋细胞升高更明显。结论卵巢癌细胞中,CD90^＋细胞高表达间质属性基因和干细胞相关基因,具备更高的侵袭力、增殖分化能力、体内成瘤能力和干细胞潜能,CD90^＋细胞分离可能成为卵巢癌干细胞分离的新方法。     

胰腺癌肿瘤干细胞的悬浮培养法

目的 建立无血清悬浮培养分离人胰腺癌细胞系PANC1干细胞球的方法.方法 采用无血清悬浮法培养PANC1细胞,显微镜下观察干细胞球形成率;流式细胞仪检测细胞CD133表达和细胞周期;以含10%FBS培养基诱导干细胞球细胞分化,荧光显微镜下观察细胞形态及CK18的表达;干细胞球细胞接种NOD/SCID小鼠皮下,观察其成瘤能力.结果 在无血清悬浮培养条件下存活的PANC1细胞形成干细胞球,体外连续传代培养20代始终保持4%0～5%0的干细胞球形成率.干细胞球细胞CD133表达率(5.91±0.7)%,G0/G1期细胞占(80.99±2.60)%,与原代PANC1细胞的(1.44±0.52)%和(69.01±5.03)%相差显著(P＜0.05).将于细胞球细胞置含血清培养基中培养.细胞逐渐恢复原代细胞形态,并表达上皮标志蛋白CK18,2×103的干细胞即在NOD/SCID小鼠皮下成瘤.结论 无血清悬浮法培养PANC1细胞可分离出肿瘤干细胞,其具有自我更新、多向分化和成瘤能力.     

粒细胞集落刺激因子动员对CD34^＋细胞黏附分子表达的影响

目的探讨粒细胞集落刺激因子（G—CSF）动员对CD34^＋细胞黏附分子表达的影响。方法应用流式细胞仪检测健康供者稳态及G—CSF动员过程中骨髓、外周血CD34^＋细胞的黏附分子表达变化，并应用结晶紫染色测定CD34^＋细胞的黏附功能。结果G-CSF动员后CD34^＋CD49d^＋细胞比例无显著下降，外周血CD34^＋CD621．^＋、CD34^＋CD54^＋和CD34^＋CDlla^＋细胞比例增高。动员后CD34^＋细胞表面CD49d的平均荧光强度显著减弱，但CD49e、CD62L、CDlla、CD54的平均荧光强度虽呈减弱趋势，却无统计学差异。动员后CD34^＋细胞黏附纤连蛋白能力下降。结论G—CSF通过降低造血干细胞与骨髓基质的黏附而产生动员效应。     

生长因子分步诱导法在大鼠脂肪干细胞向神经细胞分化中的应用观察

目的：观察生长因子分步诱导法在大鼠脂肪干细胞（ADSCs）向神经细胞分化中的应用效果。方法取SD大鼠腹股沟及腹膜后脂肪,体外分离培养ADSCs,取消化、离心的第3代ADSCs,首先以DMEM／F12＋2％B27＋20 ng／mL EGF＋20 ng／mL bFGF的神经干细胞培养基诱导7 d,后以DMEM／F12＋1μmol／L RA神经诱导培养基诱导7 d。免疫荧光法鉴定分化后神经细胞特异标志物中神经细胞特异标志物巢蛋白（ Nestin ）、微管相关蛋白2（MAP2）、神经元核抗原抗体（NeuN）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。结果从大鼠脂肪组织中成功提取AD-SCs,其能够连续传代且稳定增殖;流式细胞检测显示CD34表达率为0．36％,CD73为99．17％,CD90为98．61％,CD105为96．20％。经生长因子诱导7 d后细胞聚集成球,Nestin高表达;14 d后MAP2、NeuN高表达,而GFAP低表达。结论 ADSCs能够稳定增殖传代,生长因子分步诱导可高效诱导ADSCs定向分化为神经细胞。     

脑胶质瘤干细胞的体外培养与生物学特性观察

目的体外培养人脑胶质瘤干细胞并观察其生物学特性。方法应用无血清培养技术,从手术中获取的人脑胶质瘤组织培养得到肿瘤干细胞,诱导其分化后与原肿瘤组织细胞进行比较。应用细胞免疫荧光技术鉴定肿瘤干细胞表面标志物。结果分别在间变性星形细胞瘤和胶质母细胞瘤中培养得到悬浮生长的肿瘤干细胞球,其能在体外自我更新、增殖,形成新的克隆性细胞球,保持连续稳定的传代,能表达神经干细胞表面标志物CD 133。在含血清培养基中能够分化为与原肿瘤组织相似的贴壁生长的细胞。结论人脑胶质瘤中存在一定量的肿瘤干细胞,能够自我更新增殖、诱导分化、表达干细胞标志物CD 133。为探讨脑胶质瘤的发病机制奠定了基础。     

HepG2细胞抗原对脐血CD34^＋造血干细胞诱导分化的树突细胞免疫功能的影响

背景：树突细胞（DC）是体内功能最强的抗原呈递细胞,可激活初始型T细胞,生成辅助性T细胞和杀伤性T细胞。DC具有特异性呈递肿瘤抗原的能力,在肿瘤免疫中发挥重要作用。目的：探讨HepG2细胞抗原对脐血CD34^＋造血干细胞诱导分化的DC免疫功能的影响。方法：分离培养脐血CD34^＋造血干细胞后,加入细胞因子组合诱导生成DC并将其分成HepG2细胞抗原负载组和对照组．以流式细胞仪测定DC生成率和免疫表型,以酶联免疫吸附测定（ELISA）检测干扰素-γ（IFN-γ）含量,以MTT法检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL细胞）对HepG2细胞的杀伤作用。结果：DC生成率为60．2％±9．4％。与对照组相比,HepG2细胞抗原负载组DC免疫表型CD1a^＋／CD40^＋、CD83^＋／CD86^＋、CD14^＋／HLA-DR^＋比例显著增高（57．6％±5．4％对33．2％±6．0％、32．5％±3．9％对26．0％±2．8％、38．1％±2．6％对29．1％±2．1％,P〈0．01）;IFN-γ含量呈时间依赖性增高;CTL细胞对HepG2细胞的杀伤作用显著增强（43.3％±11.3％对13．9％±4．6％,P〈0．01）。结论：应用HepG2细胞抗原孵育脐血CD34^＋造血干细胞可诱导分化成熟DC,DC可促进异基因淋巴细胞活化分泌IFN-γ,并产生特异性CTL细胞,杀伤肝癌HepG2细胞。     

成人骨髓源内皮祖细胞的体外分离培养及鉴定

目的探讨成人骨髓源内皮祖细胞（EPCs）体外分离培养的可行性。方法抽取成年男性骨髓,体外全骨髓培养,传代后采用免疫微珠分选方法收集CD南细胞,EGM—MV2条件培养基诱导培养EPCs,观察细胞形态、生长情况;采用流式细胞技术检测分选细胞纯度,免疫荧光法检测EPCs特殊分子标志物CD34,CD133和VE-cadherin表达,透射电子显微镜观察分选细胞超微结构,UEA-1和Dil-ac-LDL双染色法检测分选细胞的吞噬功能。结果分选后细胞培养第3天出现集落样生长,集落边缘细胞形态伸展呈梭形或多边形,传代后呈现串珠样排列;培养至5～6d,细胞连接成大片条索状结构;CD34^＋、CD133^＋细胞百分率分别为24．13％、93．29％,其表面特异性表达CD133、CD34、VE-cadherin,具有EPCs形态特征,能吞噬Dil-ac-LDL并结合UEA-1。结论成人骨髓来源的EPCs经体外培养后形态、增殖率、生存能力、表面标志表达、功能等均较为稳定,可作为心血管组织工程种子细胞或用于干细胞治疗。     

ALDH1作为卵巢癌干细胞标志物的实验研究

目的探讨含生长因子无血清培养基(SFM)培养的卵巢癌细胞株(SKOV3)细胞悬浮球对CD133与乙醛脱氢酶1(ALDH1)表达的影响以及ALDH1是否可作为卵巢癌干细胞(CSC)的标志物。方法用含生长因子的无血清培养基对卵巢癌SKOV3细胞进行培养作为实验组,以含血清培养基(SSM)组作为对照,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)及平板克隆形成实验、Transwell侵袭实验检测两组细胞的自我增殖、克隆形成及侵袭能力,通过流式细胞技术检测卵巢癌SKOV3细胞和悬浮球中ALDH1、CD133表达情况;体外化疗实验富集ALDH1high细胞初步探索ALDH1在卵巢癌细胞中的作用。结果实验组自我增殖、克隆形成及侵袭能力明显高于对照组(P0.05);实验组ALDH1high、CD133+细胞比例明显高于对照组(P0.05);体外化疗实验表明顺铂连续作用于卵巢癌SKOV3细胞72 h后,实验组ALDH1high、CD133+细胞比例明显增加,ALDH1high细胞比例增加了3.23倍,CD133+细胞比例增加了2.34倍,与对照组相比较差异显著(P0.05)。结论含生长因子的无血清培养基培养卵巢癌SKOV3细胞能够形成肿瘤干细胞球及高表达ALDH1,ALDH1可能是卵巢癌干细胞的标志物之一。     

肝癌细胞株SMMC7721中CD133＋和CD133-亚群生物学特性的比较

背景：肝癌是常见的恶性肿瘤之一,易复发、转移,术后5年生存率较低。目前肿瘤干细胞学说已成为肿瘤研究的热点．CD133是一种肿瘤干细胞的标记物。目的：比较肝癌细胞株SMMC7721中CD133＋和CD133一亚群的生物学特性差异．并初步探讨CD133＋亚群的干细胞特性。方法：采用免疫磁珠法（MACS）分选SMMC7721细胞中CD133＋和CD133一亚群．以流式细胞术检测CD133表达量,平板克隆形成实验检测CDl33体外增殖能力,裸鼠成瘤实验检测体内致瘤性．CCK-8法检测对5-氟尿嘧啶（5-Fu）的敏感性。结果：MACS分选并培养1周后,CD133＋亚群中CD133表达量明显下降。与CD133-亚群相比．CD133＋亚群的体外克隆形成率明显增高,裸鼠肿瘤的体积明显升高,对5-Fu的敏感性降低．差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：肝癌SMMC7721细胞中CD133＋亚群较CD133-亚群更具有肿瘤干细胞的特性．     

1型糖尿病患者外周血中CD4^＋CD25^＋与CD8^＋CD28^-调节性T细胞水平的研究

流式细胞仪检测1型糖尿病（T1DM）患者外周血CD4^＋CD25^＋与CD8^＋CD28^-调节性T细胞的水平,发现其外周血CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞水平[（2．02±0．43）％]显著低于2型糖尿病（T2DM）组[（6．79±1．75）％]和健康对照（NC）组[（7．84±1．45）％],而CD8^＋CD28^-调节性T细胞水平三组间无差异。     

大鼠部分肝移植后自体骨髓干细胞动员的研究

目的 探讨大鼠部分肝移植后骨髓干细胞动员的情况。方法 建立大鼠性别交叉部分肝移植模型，分为部分肝移植组、全肝移植组和假手术组，分别与术后1、3、5、7d取标本。用流式细胞法检测骨髓中干细胞标记的细胞群体的数量变化，荧光原位杂交检测移植肝脏内Y染色体特异的Sry基因的表达，免疫组织化学法检测移植肝脏内干细胞标志CD34，c—kit和Thy-1．1的表达。结果 与全肝移植组相比，部分肝移植组术后第1天，骨髓细胞中，β2微球蛋白（β2m）／Thy-1．1^＋，CD45^＋／CD34^＋有不同程度的升高，然后呈递减趋势。免疫组织化学检测汇管区和炎性灶周围可见CD34、c—kit和Thy-1．1单个核细胞表达，并于第5至7天后减少。同时免疫组织化学双染可检出CD34^＋／CD45^＋细胞。全肝移植组汇管区CD34、c—kit和Thy-1．1表达较少，假手术组CD34、c-kit和Thy-1．1偶见表达。在部分肝移植物可检出Sry^＋细胞，但Srg^＋／CD34^＋，Sry^＋／Thy-1．1^＋细胞较少。全肝移植组Sry^＋偶见。结论 部分肝移植中，骨髓源性的干细胞发生动员；同时肝内有干细胞被激活，其中外源性干细胞较少。     

骨髓间质干细胞对系统性红斑狼疮患者调节性T细胞的免疫调节作用

目的探讨自体与异体骨髓间质干细胞（MSCs）对系统性红斑狼疮（SLE）患者调节性T细胞的免疫调节作用。方法用Percoll密度梯度离心法从14例SLE患者和15例健康人骨髓中分离MSCs,同时用免疫磁珠（MACS）分离SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞。将SLE患者外周血分离的淋巴细胞或CD4^＋CD25^＋T细胞与自体、异体MSCs共培养,观察MSCs对淋巴细胞及CD4^＋CD未T细胞增殖的影响,同时测CD4^＋CD25^＋T细胞分泌IL-10、转化生长因子（TGFβ）水平及细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）表达。结果自体与异体MSCs均抑制淋巴细胞增殖,其抑制率分别为56．32％、65．46％。MSCs以数量依赖性方式促进纯化CD4^＋CD25^＋T细胞增殖,分泌IL-10、TGFβ水平升高。结论MSCs可纠正SLE活动时CD4＋CD25^＋T细胞免疫缺陷,并抑制淋巴细胞过度活化,可能在自身免疫病的外周血造血干细胞和间质干细胞共移植或MSCs单独移植中发挥重要的免疫调节作用。     

IL-5诱导CD34+造血干细胞嗜酸性粒细胞分化的信号传导机制研究

目的 应用体外实验探讨骨髓中CD34^＋细胞定向分化为EOS的信号传导机制。方法 应用 MiniMACS磁性分离仪从体外脐血干细胞中分离CD34^＋细胞并应用流式细胞仪进行鉴定，将分离出的细胞进行培养并分成4组，即阴性对照组，定向分化组，和两种信号抑制组。各组细胞培养28d后应用western blot检测JAK1，STAT2的表达强度，同时观察各组CD34^＋分化为EOS的能力及EOS体外的活性。结果 在IL-5诱导下CD34^＋细胞培养至第28d时，EOS细胞已经占总细胞的87．2％左右，与B组比较，C组细胞在JAK1、 STAT2表达强度、ES比例、EPO活性、Eos脱颗粒能力差异均有统计学意义（P〈0．05），与C组比较，D组细胞在STAT2表达强度、ES比例、EPO活性、Eos脱颗粒能力差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论 体外实验CD34^＋细胞定向分化为EOS是通过JAK1-STAT2途径介导的。JAK1-STAT2途径不但介导了EOS细胞数量上的增加，而且介导了EOS细胞活性的增强。     

HT29和HCT116结肠癌细胞无血清培养形成肿瘤干细胞球特性的差异性研究

目的比较HT29和HCT116两种结肠癌细胞系中肿瘤干细胞的差异，初步探讨结肠癌干细胞研究模型。方法以无血清培养法培养HT29和HCT116细胞，观察其在不同时间形成肿瘤干细胞球的差异，用限制性稀释法计算两者的成球率；流式细胞术分析HT29和HCT116细胞系中CD44／CD24的表达情况；裸鼠体内成瘤实验鉴定HT29细胞球与HCT116细胞球成瘤能力。结果无血清培养法发现HCT116较HT29更易形成肿瘤干细胞球且所需时间更短，即HT29在无血清培养的第7天开始形成规则的球体，而HCT116则在第5天就已形成规则的球体，HCT116成球率（11．4±1．15）％高于HT29（3．31±0．27）％，且差异有统计学意义（P〈0．05）；HT29和HCT116中CD44±／CD24±各细胞含量有显著差异，结果显示具有干细胞特性的CD44＋／CD24＋结肠癌细胞在HCT116中所占比例（60．33±5．75）％明显高于HT29（9．23±2．15）％，差异有统计学意义（t=13．939，P〈0．05）；体内成瘤实验发现HCT116细胞球在裸鼠体内的成瘤能力明显强于HT29细胞球，HCT116细胞球的成瘤速度及瘤体生长速度都较HT29细胞球快。结论与HT29相比，HCT116结肠癌细胞系更适合作为肿瘤干细胞研究的模型。     

MiR-590-3p在胰腺癌干细胞中的表达

目的 应用无血清培养基分离胰腺癌干细胞,检测其miR-590-3p的表达。方法 运用无血清培养基克隆培养ASPC-1、PANC1细胞,检测其单克隆形成、分化及细胞周期、半数抑制浓度(IC50)和表面标记物CD24+、CD44+表达。实时定量PCR法检测细胞miR-590-3p的表达。结果 经无血清培养基培养,(0.94±0.53)％的ASPC-1细胞和(0.57±0.12)％的PANC1细胞能存活,呈克隆球样悬浮生长,并可以在体外连续传代。加入血清后细胞球又重新贴壁生长。ASPC-1细胞球G0/G1期比例和CD24+、C44+、CD24+ CD44+的细胞比例及IC50分别为(75.3±5.4)％、0.96％～2.01％、27.52％～34.47％、0.35％ ～0.44％和(224.37±5.71) μg/ml,均显著高于亲本细胞的(43.7±3.8)％、0.38％～0.42％、17.65％ ～ 18.25％、0.05％～ 0.08％、(11.43±2.10) μg/ml(P值均＜0.05)。PANC1细胞球G0/G1期比例和CD24+、CD44+、CD24 +CD44+的细胞比例及IC50分别为(80.1±4.7)％、5.31％ ～9.84％、72.05％ ～93.06％、4.91％ ～5.21％、(296.58±4.27) μg/ml,均显著高于亲本细胞的(46.1±5.3)％、4.09％～4.97％、47.71％～55.66％、1.48％ ～2.63％、(26.17±3.81) μg/ml(P值均＜0.05)。ASPC-1、PANC1细胞球miR-590-3p表达分别是亲本细胞的4.67和4.52倍。结论 应用无血清培养基可以从ASPC-1、PANC1细胞系中分离出具有干细胞特性的胰腺癌细胞球,其miR-590-3p表达上调,该基因可能是胰腺癌干细胞特性维持的关键基因。     

急性脑梗死患者自体外周血造血干细胞水平及其与神经损伤的关系

目的 动态观察急性脑梗死患者自体造血干细胞水平的变化及其与神经损伤等因素问的关系。方法 选择急性脑梗死患者和年龄、性别组成具有均衡性的正常人各40例，分别在发病后或入组后第3、7、10、14天取肝素抗凝血，采用Ficoll密度梯度离心法提取单个核细胞，流式细胞术检测CD34^＋CD38^-细胞百分率；同时用适用于脑梗死急性期的Fugl-Meyer量表对患者的神经功能进行评定。结果 脑梗死发病后2W内随着病程的增加，CD34^＋CD38^-细胞水平；神经功能损伤越严重，CD34^＋CD38^-细胞水平越高，反之亦然；两性间及不同年龄患者CD34^＋CD38^-细胞水平均无差别。结论 急性脑梗死患者外周血造血干细胞水平在病程2W内呈现逐渐升高的趋势；神经功能损害严重者的外周血造血干细胞水平较高；外周血造血干细胞很可能参与了脑梗死的病理生理过程。     

IL－2／抗IL－2抗体复合物体外诱导扩增外周血CD56^＋淋巴细胞的实验研究

目的探索一种在体外从人外周血单个核细胞（PBMC）扩增CD56^＋淋巴细胞的方法。方法以干细胞培养基（SCGM）为基础培养基,设计IL-2／抗IL-2抗体（IL-2／抗IL-2抗体质量比为1／20）实验组以及IL-2＋IL-15、相应因子浓度的IL-2和抗IL-2抗体三个对照组,从PBMC中诱导扩增CD56^＋淋巴细胞,流式细胞仪检测第7、10天CD3／CD56表达率,四甲基偶氮唑蓝法检测CD56^＋细胞对肿瘤细胞株K562的杀伤活性。结果培养第7、10天时,CD56^＋细胞分别扩增了（24．67±3．14）和（31．63±5．01）倍,其中CD3^＋CD56^＋和CD3^-CD56^＋细胞分别扩增（110．93±19．10）、（7．8±1．17）和（157．60±46．31）、（12．03±1．64）倍,实验组与对照组比较扩增倍数差别有统计学意义（P〈0．05）。培养第10天,效／靶比10：1时,实验组CD56^＋细胞对K562细胞的杀伤率为（83．46±1．56）％,与对照组比较具有更强细胞毒性作用（P〈0．05）。结论在SCGM为基础培养基条件下,IL-2／抗IL-2抗体复合物能更有效地扩增CD56^＋细胞毒性免疫效应细胞,为肿瘤过继免疫治疗提供了一种扩增外周血CD56^＋淋巴细胞的新方法。     

无血清悬浮法培养结肠癌HT29细胞系及肿瘤干细胞样亚群筛选

目的:研究无血清培养基悬浮培养人结肠癌细胞系HT29,筛选并鉴定HT29结肠癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群。方法:通过无血清培养基筛选结肠癌细胞系肿瘤干细胞相关亚群。应用克隆形成实验、表面标志检测、双苯酰亚胺(Hoechst)33342染色检测来确定培养细胞中肿瘤干细胞比例及其培养后的肿瘤干细胞含量变化。结果:结肠癌细胞系HT29中约50%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由飘浮的细胞球。细胞球可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,分化后细胞与培养储存的HT29细胞形态无明显差异。流式细胞仪检测表面标志,HT29细胞系中CD44+细胞含量为(44.18±2.18)%,而细胞球中CD44+细胞含量为(83.41±11.21)%;双苯酰亚胺33342染色检测提示HT29中侧群(sidepopulation,SP)细胞含量为(3.82±0.08)%,而细胞球中含量明显增高。结论:结肠癌细胞系HT29可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系。该细胞系中含有一定比例的具有增殖和自我更新能力的结肠癌干细胞样细胞亚群。表面标志以及双苯酰亚胺33342检测差异提示细胞球中仅部分细胞具有干细胞的功能。     

单克隆培养法分离、培养胶质瘤干细胞

目的 观察单克隆培养法从人脑胶质瘤细胞系SHG44中分离、培养肿瘤干细胞的结果.方法 取对数生长期SHG44细胞,用无血清培养基进行肿瘤干细胞的分离培养及单克隆培养,免疫荧光染色法对分化前后的肿瘤球行CD133、神经巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白质(GFAP)、小管蛋白3-Tubulin染色,MTT法检测肿瘤于细胞的增殖情况,流式细胞术检测CD133阳性细胞比例.结果 单克隆分离培养的细胞球表达CD133及Nestin干细胞标记物,分化后表达星形胶质细胞GFAP及神经元β-Tubulin标记物,细胞球生长约第5天增殖率达到峰值.结论 单克隆培养法可成功分离培养出胶质瘤干细胞,分化前后的细胞球可表达干细胞标记物、神经胶质细胞及神经元标记物,肿瘤球具有较强的增殖及分化能力,并含有一定数量的CD133阳性细胞.