罗格列酮对体外培养的PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素抵抗的影响

目的:探讨罗格列酮改善PCOS卵巢局部胰岛素抵抗的作用。方法:收集行IVF-ET治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后黄素化颗粒细胞行体外培养,分别用不同浓度罗格列酮(0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10000nmol/L)处理细胞48h,采用RT-PCR和Westernblotting分别检测卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2mRNA的表达及蛋白含量。结果:①基础状态下,PCOS组IRS-1mRNA表达及蛋白含量较对照组显著增加;IRS-2mRNA表达及蛋白含量较对照组显著降低(P<0.05);②不同浓度罗格列酮作用后,PCOS组IRS-1mRNA及蛋白表达显著降低,IRS-2mRNA及蛋白表达显著增加,并呈剂量依赖性,而正常对照组无变化。结论:PCOS患者卵巢局部存在胰岛素抵抗,其原因可能与IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白表达异常有关;罗格列酮可通过提高黄素化颗粒细胞IRS-2的表达,降低IRS-1的表达,改善PCOS患者卵巢局部胰岛素抵抗。     

PCOS患者脂肪组织IRS-1、IRS-2蛋白表达及其酪氨酸磷酸化的研究

目的:研究多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者脂肪组织胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)及胰岛素受体底物-2(insulin recep-tor substrate-2,IRS-2)蛋白的表达及其酪氨酸磷酸化,探讨PCOS产生胰岛素抵抗(insulinresistance,IR)的分子机制。方法:用放射免疫法检测各实验组血清促黄体生成素(luteini-zing hormone,LH)、促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)、睾酮(testosterone,T)、血清空腹胰岛素(fasting insulin,FIN)的水平;用葡萄糖氧化酶法测定血浆空腹血糖(fast-ing plasma glucose,FPG);用HOMA(homeostasis model assessment,HOMA)模型计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);用Western blot检测IRS-1及IRS-2蛋白的表达,应用免疫沉淀及增强化学发光法检测二者的酪氨酸磷酸化程度。结果:(1)PCOS IR组患者血清LH、LH/FSH、T、FIN及HOMA-IR均显著高于PCOS非IR组与对照组(均P(0.05);(2)PCOSIR组与PCOS非IR组及对照组相比,IRS-1蛋白表达量明显下降(P(0.05),IRS-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);(3)PCOS IR组IRS-1及IRS-2蛋白质酪氨酸磷酸化程度显著降低(均P(0.05)。结论:PCOS患者脂肪组织IRS-1蛋白表达下降,IRS-1及IRS-2蛋白质酪氨酸磷酸化程度降低,由此导致的受体后信号转导障碍可能是产生胰岛素抵抗的机制之一。     

卵巢黄素化颗粒细胞瘦素信号转导分子STAT3磷酸化在多囊卵巢综合征发病中的作用

目的:探讨瘦素在多囊卵巢综合征(PCOS)发病中的作用。方法:选择行IVF-ET治疗的30例PCOS患者根据体重指数(BMI)分为肥胖者(BMI≥24)15例和非肥胖者(BMI<24)15例,及同期排卵功能正常或单纯输卵管因素不孕的非PCOS肥胖者和非肥胖者各15例,采用ELISA检测各组血清瘦素水平;采用放射免疫法检测各组空腹血清胰岛素(FIN)水平;采用葡萄糖氧化酶法测定各组空腹血糖(FPG)水平,利用稳态模型(HOMA)计算胰岛素抵抗指数(即HOMA-IR);采用Western blotting检测卵巢黄素化颗粒细胞信号转导分子STAT3磷酸化水平;同法检测不同浓度的瘦素(0ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)体外对正常人卵巢黄素化颗粒细胞STAT3磷酸化(p-STAT3)的影响。结果:①血清瘦素水平PCOS肥胖者最高,其后依次为对照组肥胖者、PCOS非肥胖者和对照组非肥胖者,各组之间两两比较,差异均具有显著性(P<0.05);②PCOS患者血清瘦素水平与BMI和HOMA-IR均呈显著正相关(r=0.707,P<0.01;r=0.761,P<0.01);③STAT3水平肥胖PCOS组最高,其后依次为肥胖对照组、非肥胖PCOS组和正常对照组,各组间两两比较,差异均具有显著性(P<0.05);④正常人卵巢黄素化颗粒细胞经不同浓度瘦素处理48h后,p-STAT3水平呈不同程度增加,至瘦素浓度达到100ng/ml时,p-STAT3水平达到高峰,随后呈下降趋势。结论:瘦素可能通过激活JAK2/STAT3信号传导通路参与PCOS排卵障碍的发生。     

多囊卵巢综合征患者脂联素、C反应蛋白水平的变化及其意义

目的:探讨脂联素(APN)、C反应蛋白(CRP)的变化对多囊卵巢综合征(PCOS)发病的意义。方法:按体重指数(BMI≥25kg/m2或<25kg/m2)分别将PCOS患者52例、对照组47例分为PCOS肥胖组(25例)、非肥胖组(27例)和对照肥胖组(23例)、对照非肥胖组(24例)4组。用ELISA法测定4组的APN水平、散射比浊法测CRP水平,葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FPG)、化学发光法测空腹胰岛素(FIN)水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果:①PCOS组APN水平低于对照组(P<0.05),且同组肥胖者低于非肥胖者。②PCOS组CRP水平高于对照组(P<0.05),且肥胖者高于非肥胖者。③APN水平与BMI、HOMA-IR水平呈明显负相关(P<0.05)。结论:PCOS组APN水平降低,CRP水平升高,且以肥胖者明显。APN水平降低、CRP水平升高与PCOS患者胰岛素抵抗密切相关。     

胰岛素增敏剂对多囊卵巢综合征患者卵巢局部胰岛素抵抗的影响

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢局部胰岛素抵抗状态及胰岛素增敏剂——曲格列酮(troglitazone)对改善卵巢局部胰岛素抵抗的作用。方法收集11例PCOS患者(PCOS组)和排卵功能正常的33例输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后卵巢黄素化颗粒细胞(卵巢细胞),进行体外培养,并经不同浓度的胰岛素及胰岛素样生长因子1(IGF-1)作用后,观察卵巢细胞糖原和DNA合成的变化,同时观察卵巢细胞胰岛素受体(IR)、IGT-1受体(IGF-1R)、胰岛素受体底物(IRS)的表达。结果(1)不同浓度IGE-1作用后,PCOS组卵巢细胞的DNA合成增加约为对照组的2倍,曲格列酮可抑制IGF-1的这一作用。(2)胰岛素作用后,PCOS组卵巢细胞的糖原合成量与对照组比较,明显降低;而曲格列酮作用后,两组卵巢细胞中胰岛素促糖原合成作用均增加。(3)与对照组比较,PCOS组卵巢细胞：[RS-1的表达(相对灰度,下同)升高,IRS-2表达降低。曲格列酮可降低IRS-1的表达水平,升高IRS-2的表达水平。结论(1)PCOS患者存在卵巢局部的胰岛素抵抗现象。(2)卵巢局部胰岛素抵抗与PCOS患者卵巢高反应状态相关。(3)曲格列酮可增加卵巢细胞对胰岛素的敏感性。     

抗苗勒氏管激素(AMH)对离体人卵巢黄素化颗粒细胞干细胞因子(SCF)表达负调控的研究

目的:研究人卵巢黄素化颗粒细胞中抗苗勒氏管激素(AMH)对干细胞因子(SCF)表达的影响。方法:收集15例年龄<35岁因男方因素行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者的卵巢颗粒细胞,经原代培养,加入不同浓度基因重组人抗苗勒氏管激素(rhAMH),分别于培养的第4日与第6日采用实时定量PCR(RT-PCR)和免疫组织化学检测空白对照组与各实验组SCFmRNA及蛋白的表达。结果:RT-PCR和免疫组织化学均证实人卵巢黄素化颗粒细胞在不同浓度rhAMH干预后,SCFmRNA及蛋白的表达显著减少(P<0.05),其中15 ng/ml rhAMH抑制作用最明显;实验组第4日与第6日颗粒细胞表达SCFmRNA及蛋白无明显差异(P>0.05)。结论:AMH可有效抑制人卵巢黄素化颗粒细胞SCF mRNA及蛋白的表达。     

控制性超促排卵周期多囊卵巢综合征患者生长分化因子-9和骨形成蛋白-15的初步研究

目的:探讨控制性超促排卵(COH)周期多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)的表达及其与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结局的关系。方法:选择接受IVF-ET治疗的PCOS患者45例,同期输卵管因素不孕患者103例作为对照组。应用免疫组织化学、Real-time PCR技术检测患者卵巢颗粒细胞GDF-9、BMP-15蛋白和mRNA的表达,并分析与IVF-ET的临床结局关系。结果:GDF-9、BMP-15蛋白在PCOS组和对照组患者卵巢颗粒细胞胞质均呈阳性表达,PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。多元线性回归分析显示,颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平与优质胚胎数呈正相关关系(P0.05)。临床妊娠组的颗粒细胞GDF-9mRNA、BMP-15 mRNA表达水平高于未妊娠组(P0.05)。结论:COH周期PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平可能与胚胎发育潜能存在相关性。     

多囊卵巢综合征患者脂肪组织磷脂酰肌醇-3激酶的表达与活性研究

目的:研究多囊卵巢综合征(PCOS)患者脂肪组织磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)的表达及酶活性的改变,探讨PCOS胰岛素抵抗(IR)的分子机制。方法:采用Western blot检测PCOS IR 组(19例)、PCOS非IR组(17例)及对照组(20例)PI-3K亚单位P85蛋白在三组脂肪组织中的表达,RT-PCR方法检测各组脂肪组织PI-3K亚单位P85 mRNA的表达;采用免疫沉淀、薄层层析及γ液闪计数方法检测PI-3K的活性,并进行分析比较。结果:①PCOS IR组PI-3K亚单位P85蛋白质及mRNA的表达与PCOS非IR组和对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。②PCOS 组PI-3K的活性显著下降,而PCOS IR组激酶活性的下降尤为明显(P<0.01),与HOMA-IR呈显著负相关(P<0.01)。结论:PCOS IR患者PI-3K亚基的P85转录及翻译水平均无改变,该激酶活性的降低,影响胰岛素信号通路中信号分子的生物学作用,是导致IR形成的重要机制。     

Kisspeptin对多囊卵巢综合征来源颗粒细胞雌孕激素分泌调节的研究

目的:探讨PCOS患者卵泡微环境中kisspeptin、KISS-1 mRNA及KISS-1R mRNA表达水平的差异及kisspeptin对卵巢颗粒细胞雌激素和孕激素分泌功能的影响。方法:ELISA法检测17例PCOS患者及20例正常女性卵泡液中kisspeptin水平,RT-PCR检测颗粒细胞中KISS-1/KISS-1R mRNA表达。ELISA法检测kisspeptin处理后对颗粒细胞分泌雌激素和孕激素的影响。结果:PCOS患者取卵日卵泡液kisspeptin水平[(28405±2170.4)ng/ml]显著高于正常女性[(206729±2450.8)ng/ml],差异有统计学意义(P0.05)。PCOS患者组颗粒细胞KISS-1 mRNA水平(7.32±1.68)高于对照组(2.25±0.36),差异有统计学意义(P0.05)。Kisspeptin处理黄素化的颗粒细胞后,颗粒细胞分泌雌激素和孕激素增加。结论:Kisspeptin可能参与了PCOS患者卵巢微环境病理改变过程。     

热休克蛋白10、27和47在多囊卵巢综合征患者卵巢中的表达

目的:探索热休克蛋白(heat shock protein,HSP)10、27和47在多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢组织中的表达及其意义。方法:采用荧光实时定量PCR(SYBR GREEN Iassay)、Western blot和免疫组织化学技术分别对3例正常妇女(对照组)、3例无排卵PCOS患者(PCOS组)卵巢组织的HSP10、HSP27和HSP47的mRNA及蛋白进行测定。结果:①HSP10 mRNA在PCOS患者卵巢组织的表达与对照组相比,差异无显著性(P>0.05);HSP10蛋白在PCOS患者卵巢组织的表达与对照组相比,表达降低,差异有显著性(P<0.05);免疫组化结果显示HSP10表达于对照组卵巢的所有细胞,而在PCOS组仅在卵泡膜细胞表达水平较高。②HSP27 mRNA和蛋白在PCOS患者卵巢组织的表达降低与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);免疫组化结果显示HSP27高表达于对照组卵巢原始卵泡的卵母细胞。③HSP47 mRNA和蛋白在PCOS患者卵巢组织的表达高于对照组,PCOS组卵巢,差异有显著性(P<0.05);免疫组化结果显示HSP47高表达于PCOS组卵巢的卵母细胞、颗粒细胞和间质细胞。结论:HSP10、HSP27和HSP47在PCOS患者卵巢和正常人卵巢中存在差异表达。     

胰岛素受体底物1蛋白表达及其酪氨酸磷酸化程度与多囊卵巢综合征发病的关系

目的　研究多囊卵巢综合征 (polycysticovarysyndrome ,PCOS)患者脂肪组织胰岛素受体底物 1(insulinreceptorsubstrate 1,IRS 1)蛋白的表达及其酪氨酸磷酸化程度 ,探讨PCOS患者产生胰岛素抵抗 (insulinresistance ,IR)的分子生物学机制。方法　采用放射免疫法检测PCOS伴IR者19例 (A组 )、PCOS无IR者 10例 (B组 )及单纯子宫肌瘤患者 15例 (对照组 )的血清黄体生成素(luteinizinghormone ,LH)、卵泡刺激素 (folliclestimulatinghormone ,FSH )及睾酮的水平 ;采用放射免疫法测定各组空腹血清胰岛素 (fastinginsulin ,FIN)水平 ;采用葡萄糖氧化酶法测定各组空腹血糖(fastingplasmaglucose ,FPG)水平 ;采用稳态模型 (homeostasismodelassessment,HOMA)计算IR指数(即HOMAIR) ;采用蛋白印迹法检测IRS 1蛋白表达水平 ,同时应用免疫沉淀方法检测IRS 1的酪氨酸磷酸化程度。结果　 (1)A组患者血清LH、LH /FSH、睾酮、FIN及HOMAIR分别为 (15 8±2 8)U/L、2 8± 0 6、(4 3± 0 9)nmol/L、(2 5 2± 3 8)mU/L、1 56± 0 2 5;均显著高于B组的(13 9± 1 9)U/L、2 3± 0 4、(3 6± 0 4)nmol/L、(13 4± 3 8)mU/L、0 87± 0 2 8及对照组的 (7 3± 2 1)U /L、1 3± 0 3、(0 9± 0 2 )nmol/L、(9 5± 2 6     

CHOP/GADD153在多囊卵巢综合征患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达

目的:探讨内质网应激相关因子CHOP/GADD153在多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达。方法:收集因PCOS不孕、行IVF-ET取卵时的黄体颗粒细胞(PCOS组,n=45)及因男方因素不孕、行IVF/ICSI-ET取卵时的黄体颗粒细胞(对照组,n=45),应用RT-PCR和Western blotting方法检测患者卵巢黄体颗粒细胞CHOP/GADD153的表达。结果:PCOS组CHOP/GADD153 mRNA水平(0.45±0.20)及蛋白水平(0.62±0.26)均较对照组(分别为0.40±0.18、0.56±0.17)有增高趋势,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:内质网应激标志蛋白CHOP/GADD153在PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达无明显改变,推测PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞内质网应激尚处于保护性阶段。     

TGF-β_1在PCOS卵巢间质纤维化形成中的作用

目的:探讨TGF-β1在PCOS大鼠卵巢间质纤维化、包膜硬化形成中的作用。方法:利用脱氢表雄酮(DHEA)皮下注射的方法建立PCOS病理模型大鼠20只,用微粒子酶免分析法测定血清性激素E2、T、LH、FSH、LH/FSH、空腹胰岛素(FINS)水平,及光镜下观察PCOS大鼠卵巢的病理结构,透射电镜观察细胞超微结构来验证模型。采用免疫组化法检测PCOS组(n=20)卵巢细胞因子TGF-β1的表达,并与20只正常大鼠相比照。结果:TGF-β1在PCOS组各阶段卵泡卵母细胞、颗粒细胞的表达强度与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。而在窦状卵泡膜细胞和卵巢间质细胞中的表达,PCOS组显著高于对照组(P<0.01,P<0.05)。结论:多囊卵巢中TGF-β1表达异常,可能是导致多囊卵巢间质纤维化、包膜增厚的原因之一,TGF-β1也参与PCOS卵泡发育、闭锁的调控。     

多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗患者脂肪组织胰岛素受体底物2蛋白的表达及酪氨酸磷酸化的研究

目的检测多囊卵巢综合征(PCOS)患者脂肪组织胰岛素受体底物(IRS)2蛋白表达及其酪氨酸磷酸化的程度,探讨发生PCOS合并胰岛素抵抗(IR)的机制。方法采用蛋白印迹(Westernblot)法,检测PCOS合并IR患者19例(PCOS合并IR组)、PCOS非IR患者17例(PCOS非IR组)及因单纯子宫肌瘤行子宫切除术的患者20例(对照组)的IRS2蛋白的表达;并采用免疫组化技术,检测IRS2在脂肪组织中的分布;采用免疫沉淀及增强化学发光法,检测IRS2的酪氨酸磷酸化程度。结果(1)PCOS合并IR组、PCOS非IR组及对照组IRS2蛋白表达分别为115±026、113±026及100±025,3组比较,差异无统计学意义(P>005)。(2)PCOS合并IR组、PCOS非IR组及对照组IRS2蛋白酪氨酸磷酸化程度分别为077±016、091±025及100±012,3组比较,差异有统计学意义(P<005);PCOS非IR组与对照组比较,差异无统计学意义(P>005)。结论PCOS合并IR患者脂肪组织的IRS2蛋白酪氨酸磷酸化程度的降低,可能是发生IR的机制之一。