人胎盘15-羟基前列腺素脱氢酶的分离纯化

作者从人胎盘分离纯化依赖NAD的15-羟基前列腺素脱氢酶,纯化9300倍以上,收率为9.3％,比活性为6470.60nmol/min·mg,PAGE显示为单带,SDS-PAGE为两带,测得其分子量分别为26和52kd,经Western Blot分析、此两带皆能为该酶的多克隆和单克隆抗体识别。认为此酶由两条分子量相同的亚基组成。     

胃癌组织中15-羟基前列腺素脱氢酶的表达研究

15-羟基前列腺素脱氢酶（15-PGDH）广泛分布于人和哺乳动物的胃肠道、肺等正常组织中，可催化15-羟基前列腺素（PG）成为活性较弱的15-酮基PG，并可减少致癌物和前致癌物。最近研究显示15-PGDH表达缺失或减低与恶性肿瘤（如肠癌、肺癌等）的发生发展相关，但15-PGDH与胃癌之间的关系尚不清楚，本研究针对两者关系进行探讨。     

人胎盘泌乳素分离纯化及其鉴定的研究

本研究采用hPL-Sepharose 4B亲和层析技术,从胎盘匀浆中分离纯化出hPL抗原,经聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳、免疫电泳、双向交叉免疫试验,证实本室提纯的hPL抗原为单一成份。     

人类胎盘碱性磷酸酶的分离纯化

分离纯化人类胎盘碱性磷酸酶。２．方法 应用正丁醇抽提，丙酮沉淀，热处理，ＤＥＡＥ－纤维素和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析，从人类胎盘中提纯ＰＬＡＰ；聚丙烯酰胺凝胶电泳和高压液相层析鉴定其纯度；二十烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳测其亚基分子量。     

人胎盘催乳素的纯化与鉴定

以正常产妇的新鲜胎盘为原料，经过盐析、等电点沉淀、离心等粗提，再经ＤＥＡＥ─纤维素阴离子交换层析，Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－１００凝胶过滤，并首次利用圆盘制备电泳纯化。最后获得人胎盘催乳素纯品，其活性采用１２５Ｉ－ｈＰＬ放免检测药盒测定。     

人类胎盘碱性磷酸酶的分离纯化

①目的分离纯化人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ）。②方法应用正丁醇抽提、丙酮沉淀、热处理、ＤＥＡＥ－纤维素和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析，从人类胎盘中提纯ＰＬＡＰ；聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和高压液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳测其亚基分子量。③结果ＰＬＡＰ的纯化倍数为１６１倍，比活力为１３８ｍｍｏｌ·ｓ－１／ｇ；纯化的ＰＬＡＰ经ＰＡＧＥ鉴定为单一区带，ＨＰＬＣ分析为单一对称峰；测得酶的亚基分子量为６４．６９ｋｕ．④结论纯化的ＰＬＡＰ已达电泳纯和层析纯，可用于其结构与功能的研究     

白细胞介素1β刺激脑微血管内皮细胞内15-羟基前列腺素脱氢酶的经时变化

目的：探讨白细胞介素1β（IL-1β）刺激体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞（rCMEC）15-羟基前列腺素脱氢酶（15-PGDH）活性的经时变化。方法：建立rCMEC培养方法，进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞长至融合状态后，以30ng／ml浓度的IL-1β分别刺激0．5、1、2、4、8、12、24h，以放射免疫法测定各刺激时间点15-PGDH活性。结果：90％以上的培养细胞呈阳性，确定为rCMEC。加入IL-1β刺激后2h，细胞内15-PGDH活性与未刺激组比较有显著性差异（P〈0．05）；12h时达到最大值；24h时有所降低，但与未刺激组比较仍具显著性差异（P〈0．01）。结论：rCMEC经IL-1β刺激后，细胞内15-PGDH活性经历一个逐渐升高，到达峰值后缓慢下降的过程，IL-1β刺激12h内皮细胞15-PGDH活性达峰值。     

15 - 羟前列腺素脱氢酶在大肠腺瘤和腺癌组织中的表达

目的：探讨15-羟前列腺素脱氢酶（15-PGDH）在腺瘤和腺癌组织中的表达和意义。方法：选取肠镜检查和手术活检组织标本118例,其中正常大肠黏膜30例,大肠腺瘤43例,大肠腺癌组织45例。用Real Time PCR检测15-PGDH mRNA的表达,免疫组织化Elivision法检测组织中15-PGDH的蛋白表达。结果：15-PGDH在大肠腺癌组织中的mRNA的表达、阳性表达率及光密度值均低于大肠腺瘤及正常黏膜组（P〈0.05）;且大肠腺瘤组低于正常黏膜组（P〈0.05）。结论：15-PGDH表达降低或缺失,可能是大肠腺癌发生过程中的重要环节。     

人胎盘纤溶酶原的分离纯化

目的 建立从人胎盘组织中分离纯化天然型纤溶酶原的方法.方法 采用Lys-sepharose 4B亲和层析和 Sephadex G-25层析法分离纯化纤溶酶原.采用发色底物法测定纤溶酶原活性,SDS-PAGE鉴定纤溶酶原纯度.结果 获得电泳纯天然型纤溶酶原(Glu-plg),比活441.520%/mg.结论 该法原料来源丰富、成本低廉、操作简单,为获取纤溶酶原提供了新方法.     

人胎盘成份分析

对人胎盘粉硫酸水解液、水提液、乙醇提取液３种剂型的不同成份进行分析比较。     

11-β羟基类固醇脱氢酶在人类胎盘对糖皮质激素的屏障作用的研究进展

11-β羟基类固醇脱氢酶(11β-hydroxysteroid dehydrogenase,11β-HSD)是胎盘分泌的糖皮质激素(glucoeorticoids,GC)代谢酶,对胎盘与胎膜的作用有重要影响,同时阻挡着母体GC过多的进入胎儿,避免造成胎儿体质下降、日后并发糖尿病的危害.11β-HSD有两种亚型,11β-HSD1是一种亲和力较低的氧化还原酶,并且主要表现还原酶活性,主要是活化无活性的17-羟-11-脱氢皮质酮(cortisone,E)为有活性的皮质酮(cortisol,F),因此具有GC再生和增效的作用;11β-HSD2是一种亲和力较高的依赖性脱氢酶,表现单一氧化酶作用,它主要是催化皮质醇将其由有活性状态转化为无活性状态,从而阻挡母体浓度高于胎儿水平5~10倍的GC进入胎盘中,形成保障胎儿正常生长发育的GC屏障.     

人胎盘核糖核酸酶抑制因子纯化及活性测定

研究了人胎盘核糖核酶抑制因子的分离纯化及活性测定的方法。参照Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ的方法通过硫酸铵分级沉淀、透析、高速离心、亲和层析等步骤，从胎盘中提取核糖核酸酶抑制因子，并以ｙｅａｓｔ ＲＮＡ沉淀法为该抑制因子的活性测定方法，得到了平均比活性约３０００Ｕ／ｍｇ抑制因子。     

人足月胎盘滋养细胞分离培养方法的改良

目的:建立一种经济、高效的人足月胎盘滋养细胞分离培养方法。方法:收取正常足月剖宫产患者胎盘组织,DNA酶联合胰酶反复消化、网筛过滤、不连续密度梯度分离液分离纯化细胞;免疫细胞化学法鉴定细胞来源;对所培养的滋养细胞进行形态学观察;CCK-8增殖实验分析细胞体外增殖活力。结果:利用此法可成功体外培养胎盘滋养细胞,一次操作可获得大于107个细胞。体外培养时,滋养细胞增殖能力低下,3h开始贴壁,24h后逐渐开始融合成合体滋养细胞。结论:本研究改进了既往足月胎盘滋养细胞原代培养的方法,简化操作步骤,缩短操作时间,并且一次性可获得大量且纯度较好的胎盘滋养细胞。     

人胎盘核糖核酸酶抑制因子纯化及活性测定

研究了人胎盘核糖核酸酶抑制因子的分离纯化及活性测定的方法。参照Blackburn的方法通过硫酸铵分级沉淀、透析、高速离心、亲和层析等步骤，从胎盘中提取核糖核酸酶抑制因子，并以yeastRNA沉淀法为该抑制因子的活性测定方法，得到了平均比活性约30000U／mg的抑制因子。     

兔乳酸脱氢酶C4的分离纯化及动力学研究

建立兔乳酸脱氢酶Ｃ４（ＬＤＨ－Ｃ４）分离纯化的新方法，研究该酶的动力学特性。采用Ｂｌｕｅ Ｄｅｘｔｅｒａｎ和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ交联制成Ｂｌｕｅ Ｄｅｘｔｒａｎ－Ｓｅｐｈａｑｒｏｓｅ ４Ｂ染料配体亲和层析柱，结合ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ４５０离子交换层析分离兔ＬＤＨ－Ｃ４，以作图法测定该酶动力学数据。