多伞阿魏体外抗胃癌活性筛选、细胞凋亡及周期阻滞机制

目的:研究确定新疆特色维族药多伞阿魏体外抗胃癌活性部位及其敏感胃癌细胞系,并探讨多伞阿魏诱导胃癌细胞凋亡和细胞周期阻滞情况,为其进一步在抗胃癌方面的研究、开发与应用提供实验依据。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同质量浓度多伞阿魏不同提取物(挥发油,95%乙醇提取物,及其石油醚部位,三氯甲烷部位,乙酸乙酯部位,正丁醇部位,水部位)分别对5种胃癌细胞系(AGS,MKN-45,BGC-823,MGC-803,SGC-7901)的增殖抑制作用;采用Hoechst33258荧光染色法观察多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位对胃癌细胞AGS和SGC-7901的影响情况;并应用细胞流式仪检测多伞阿魏不同提取部位作用胃癌细胞AGS和SGC-7901的凋亡和周期阻滞影响情况。结果:与空白组比较,多伞阿魏挥发油,95%乙醇提取物,石油醚部位,三氯甲烷部位,乙酸乙酯部位对5种胃癌细胞均有不同程度的增殖抑制作用(P0.05),并呈现浓度依赖关系。挥发油对胃癌细胞AGS呈现出较强的增殖抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为(7.98±2.62)mg·L~(-1),三氯甲烷部位对5种胃癌细胞系均具有较好的敏感性,对胃癌细胞SGC-7901最为敏感,其IC50为(8.73±0.55)mg·L~(-1),而正丁醇部位和水部位未呈现出明显的细胞增殖抑制作用;多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位作用胃癌细胞AGS和SGC-7901后,细胞核被Hoechst33258染色呈亮蓝色,且随着药物浓度的增加蓝色荧光越强;流式细胞凋亡检测结果显示,多伞阿魏不同提取部位诱导胃癌细胞AGS和SGC-7901发生不同程度的凋亡(P0.05),且随着药物浓度的增加,细胞总凋亡率明显增高;流式细胞周期检测结果显示,与空白组比较,多伞阿魏挥发油使胃癌细胞AGS的周期发生明显改变,细胞休眠期/DNA复制前期(G0/G1期)细胞比例增高,DNA复制期(S期)细胞比例降低,DNA复制后期/有丝分裂期(G2/M期)比例降低(P0.05);与空白组比较,多伞阿魏三氯甲烷部位使胃癌细胞SGC-7901的周期也发生显著改变,G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例增高,G2/M期比例降低(P0.05)。结论:多伞阿魏挥发油对胃癌细胞AGS呈现出较强的细胞毒活性,三氯甲烷部位对5种胃癌细胞均具有较好的增殖抑制作用,尤其对胃癌细胞SGC-7901最为敏感;多伞阿魏各提取部位诱导胃癌细胞AGS和SGC-7901主要发生晚期凋亡,而多伞阿魏乙酸乙酯部位诱导胃癌细胞AGS主要发生细胞早期凋亡;多伞阿魏挥发油能够将胃癌细胞AGS阻滞于G0/G1期,阻止细胞进入S期及G2/M期;伞阿魏三氯甲烷部位将胃癌SGC-7901细胞周期阻滞于S期。研究表明多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位具有较好的抗胃癌活性作用,具有潜在的研究价值和开发利用空间,并为多伞阿魏体内抗胃癌及其抗胃癌机制研究提供了一定的科学依据。     

波罗蜜属药用植物单体化合物ACR-2 ACR-3抗肿瘤作用的实验研究

目的:采用Alamar blue法及MTT法观察波罗蜜属药用植物单体化合物(ACR-2、ACR-3)对人肝癌细胞(SMMC-7721)和胃腺癌细胞(SGC-7901)增殖的影响。方法:用Alamar blue法和传统MTT法检测ACR-2、ACR-3对细胞SMMC-7721、SGC-7901的增殖抑制作用。结果:ACR-2作用于细胞SMMC-7721和细胞SGC-7901的IC50(mmol/L)分别为0.013和0.059;ACR-3作用于细胞SMMC-7721和细胞SGC-7901的IC50(mmol/L)分别为0.029和0.169。其中ACR-2、ACR-3对细胞SMMC-7721的增殖抑制作用最强,对细胞SGC-7901也表现出较强的增殖抑制作用。时量曲线检测结果显示:ACR-2、ACR-3对细胞SMMC-7721、SGC-7901的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,其增殖抑制作用以48h时最强。结论:波罗蜜属药用植物单体化合物ACR-2、ACR-3对人肝癌细胞SMMC-7721、胃腺癌细胞SGC-7901有明显的增殖抑制作用,且有时间和剂量依赖性。     

健脾化瘀方对胃癌细胞SGC-7901凋亡和周期的影响

目的:观察健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:①采用MTT法观察不同浓度健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制作用;②用Annexin V/PI荧光双染法检测健脾化瘀方诱导肿瘤细胞进入凋亡的影响;③用流式细胞仪检测健脾化瘀方对SGC-7901细胞周期的阻滞效应。结果:①健脾化瘀方能抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,随着药物浓度的增大以及作用时间的延长,其对细胞的抑制率也明显增强,呈现剂量及时间依赖性。②当2mg/ml和4mg/ml健脾化瘀方作用于人胃癌SGC-7901细胞48h可显著诱导细胞凋亡的产生。③细胞周期方面,健脾化瘀方作用于人胃癌细胞SGC-7901后G2/M期比例与阴性对照组相较显著上升,G0/G1期稍有上升,而S期比例下降,表明细胞被阻滞于G2/M期。结论:健脾化瘀方可明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖作用并能够诱导该细胞凋亡,改变细胞周期。     

鬼臼毒素诱导胃癌细胞株SGC-7901凋亡的实验研究

目的:研究鬼臼毒素诱导胃癌细胞株SGC-7901凋亡,为鬼臼毒素用于临床治疗胃癌提供依据。方法:用不同浓度的鬼臼毒素处理SGC-7901细胞后,采用MTT比色法检测其对SGC-7901细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞的凋亡率;用Hoechst 33258染液染色,在荧光显微镜下观察细胞凋亡形态。结果:鬼臼毒素可以抑制SGC-7901细胞增殖,呈剂量依赖性。能够诱导SGC-7901细胞凋亡,并使SGC-7901细胞阻滞于G2/M期,细胞凋亡率呈剂量依赖性。通过荧光显微镜可以明显的观察到凋亡小体。结论:鬼臼毒素能抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,诱导SGC-7901细胞凋亡,此为鬼臼毒素临床治疗胃癌提供了科学依据。     

中药蛇六谷提取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖影响的实验研究

目的:观察蛇六谷提取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,探讨其可能的作用机理。方法:采用系统溶剂法初步提取分离蛇六谷不同提取物,运用MTT法和生长曲线法观察不同浓度的各提取物对人胃癌SGC-7901细胞的增殖的影响,流式细胞仪检测蛇六谷石油醚萃取物对该细胞周期分布及凋亡的影响。结果:蛇六谷醇提取物、石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物均具有一定的抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的作用,以石油醚萃取物的抑制作用最为明显,呈现较好的剂量-效应曲线。生长曲线法观察发现蛇六谷石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用有一定的时间-效应曲线;流式细胞仪检测发现蛇六谷石油醚萃取物可阻滞SGC-7901细胞周期于G0/G1期,分析表明其作用机理可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。结论:蛇六谷石油醚萃取物可能是该药抗肿瘤的有效部位之一。     

参麦有效部位对血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨参麦中提取的总皂苷、总多糖对血管内皮细胞增殖和迁移的影响。方法:用MTT法检测不同浓度的总皂苷、总多糖及总皂苷 总多糖对ECV-304、胃癌SGC-7901细胞增殖及SGC-7901条件培养液诱导ECV-304增殖的影响;用琼脂糖刮除法检测它们对血管内皮细胞迁移的影响。结果:当参麦总多糖浓度为0.18~2.44mg/mL时,对ECV-304、胃癌SGC-7901增殖及SGC-7901诱导ECV-304增殖均无影响;当参麦总皂苷浓度为0.05~0.8mg/mL时,对胃癌SGC-7901增殖无影响,而对ECV-304及SGC-7901条件培养液诱导ECV-304增殖有抑制作用,抑制率为13.16%~62.77%。参麦总多糖对ECV-304迁移没有影响,参麦总皂苷对ECV-304迁移有明显抑制作用,抑制率为42%~80%。总皂苷 总多糖抑制ECV-304增殖和迁移作用与参麦总皂苷相比差异无显著性。结论:参麦中提取的总皂苷对血管内皮细胞和胃癌细胞条件培养液诱导的血管内皮细胞增殖具有抑制作用,并能抑制血管内皮细胞的迁移,是参麦抗血管生成的有效部位。     

砂生槐种子生物碱诱导SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的:研究砂生槐生物碱对SGC-7901细胞系的增殖抑制和凋亡诱导作用.方法:MTT比色法检测生物碱对SGC-7901胃癌细胞增殖的抑制作用;荧光显微镜观察细胞的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡过程中DNA碎片的形成;流式细胞仪分析并测定细胞凋亡率.结果:砂生槐生物碱在0.6～4.8mg·mL.的范围内对SGC-7901胃癌细胞的增殖有明显抑制作用,与SGC-7901细胞株共培养24h后,观察到典型的细胞凋亡形态学特征,DNA凝胶电泳呈现梯形条带,流式细胞仪检测形成一个DNA含量＜2n的分布区,即"亚G1峰".结论:砂生槐生物碱在体外明显抑制SGC-7901胃癌细胞的增殖,诱导SGC-7901细胞系凋亡的作用,并呈浓度、时间的依赖关系.     

扶正抑瘤汤含药血清对胃癌SGC-7901细胞生长和凋亡的影响

目的:探究扶正抑瘤汤含药血清对胃癌SGC-7901细胞生长和凋亡的影响,并初步分析其作用机制。方法:将40只SD大鼠随机分为空白组和扶正抑瘤汤低、中、高剂量(10g/kg、20g/kg、30g/kg)组,各组10只,灌胃处理3天后制备含药血清,使用含药血清培养胃癌SGC-7901细胞。采用MTT法检测SGC-7901细胞存活能力;采用Hoechest法检测SGC-7901细胞的凋亡;采用qRT-PCR法检测SGC-7901细胞中Bcl-2、Bax mRNA的表达;采用Western blot法检测SGC-7901细胞中Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:与空白组相比,扶正抑瘤汤低、中、高剂量组可以抑制SGC-7901细胞的增殖,并促进SGC-7901细胞的凋亡,下调SGC-7901细胞中Bcl-2/Bax水平,均具有剂量依赖性。结论:扶正抑瘤汤含药血清可以抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,促进其凋亡,可能通过下调Bcl-2/Bax通路,促进SGC-7901细胞程序性死亡。     

蛇六谷乙酸乙酯萃取物A1组分对人胃癌SGC-7901细胞增殖及bcl-2 Bax基因表达的影响

目的：探讨蛇六谷乙酸乙酯萃取物A1组分对人胃癌SGC-7901细胞株的增殖抑制作用及其作用机制。方法：用MTT法检测不同浓度A1组分对SGC-7901细胞的增殖抑制作用,光镜学观察A1组分对SGC-7901的细胞形态学变化,RT-PCR法观察A1组分对SGC-7901细胞bcl-2及Bax基因表达的影响。结果：A1组分对SGC-7901细胞增殖抑制作用为剂量依赖性,并具有明显的细胞形态学改变;RT-PCR结果显示,随着A1组分剂量的增加,具有明显的下调bcl-2基因及上调Bax基因水平的作用。结论：A1组分对人胃癌SGC-7901细胞的增殖具有明显的抑制作用,其抑制作用可能与下调bcl-2基因及上调Bax基因水平作用有关。     

了哥王抗肿瘤活性部位筛选

目的:研究了哥王95%、75%、50%乙醇提取物、水提物及95%乙醇提取物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取部位对肿瘤细胞的增殖抑制作用,确定了哥王抗肿瘤活性部位。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法考察了哥王不同提取物及95%乙醇提取物的不同溶剂萃取部位对Hela、SGC-7901、Bel-7402细胞的抗肿瘤活性。结果:了哥王95%乙醇提物对Hela、SGC-7901细胞有良好的抗肿瘤活性,其石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取部位对Hela、SGC-7901细胞均有不同程度的抗肿瘤活性。结论:石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取部位有较强的抗肿瘤活性,初步确定为了哥王抗肿瘤活性部位。     

桑葚花色苷诱导人胃癌SGC-7901细胞自噬凋亡的研究

目的:观察桑葚花色苷对人胃癌SGC-7901细胞自噬和凋亡的作用及机制。方法:MTT法检测桑葚花色苷对SGC-7901细胞增殖的作用;流式细胞术分析桑葚花色苷对SGC-7901细胞凋亡的影响;Hoechst33342/PI活细胞染色观察凋亡细胞核形态学变化;透射电镜观察SGC-7901细胞的超微结构变化。Western blot检测SGC-7901细胞自噬分子标记物LC3、Beclin1和凋亡蛋白BAX、BCL-2及Caspase-8的表达。结果:桑葚花色苷能抑制SGC-7901细胞增殖,流式细胞术及Hoechst33342/PI双染结果显示桑葚花色苷可诱导SGC-7901细胞凋亡。透射电镜观察显示桑葚花色苷干预后的SGC-7901细胞发生自噬。Western blot证实桑葚花色苷可提高SGC-7901细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,BAX/BCL-2比值以及Beclin1、Caspase-8的表达。结论:桑葚花色苷能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,诱导细胞出现凋亡和自噬,其机制与上调SGC-7901细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,BAX/BCL-2比值及Beclin1、Caspase-8的表达有关。     

加减血癥汤对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡及周期的影响

目的:探讨加减血癥汤对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:采用甲基噻唑(MTT)比色法和生长曲线测定不同浓度加减血癥汤在不同作用时间内对在体外培养的SGC-7901细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测凋亡率及细胞增殖周期的变化。结果:加减血癥汤可明显抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈时间-剂量依赖性;相同作用时间下,加减血癥汤的浓度越高,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高,处于G0/G1期的细胞比例逐渐增多,S期细胞比例出现相对减少。结论:加减血癥汤能抑制人胃癌细胞SGC-7901生长,诱导细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于G0-G1期。     

黄芩苷抑制胃癌细胞SGC-7901增殖及机制研究

目的:探讨黄芩苷对人胃癌细胞SGC-7901增殖抑制作用及机制研究。方法:MTT法检测黄芩苷对人胃癌细胞SGC-790活力的影响;细胞周期检测试剂盒检测黄芩苷对人胃癌细胞SGC-7901细胞周期的影响;Western blot分析细胞周期蛋白cyclin A1、cyclin D1含量变化,及AKT蛋白含量变化。结果:MTT法显示黄芩苷(50、100、200μmol·L-1)可显著抑制胃癌细胞SGC-7901的活力,在48 h抑制程度最高。黄芩苷使胃癌细胞SGC-7901细胞周期阻滞在G1期。Western blot结果显示黄芩苷能下调cyclin A1、cyclin D1表达;并且抑制AKT磷酸化。结论:黄芩苷可使胃癌细胞SGC-7901细胞周期阻滞在G1期,下调cyclin A1、cyclin D1表达,可能与AKT信号通路有关。     

蝙蝠葛酚性碱抗胃癌作用及机制研究

目的:探讨蝙蝠葛酚性碱对SGC-7901胃癌细胞的作用机制。方法:采用MTT比色法检测不同浓度的蝙蝠葛酚性碱对SGC-7901胃癌细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测不同浓度的蝙蝠葛酚性碱对SGC-7901胃癌细胞周期的影响。结果:与空白组相比,PAMD浓度≥75μg/m L时,可对SGC-7901胃癌细胞产生较强的抑制作用,其抑制率随着药物浓度的增加与时间的延长而增加,P0.05;当PAMD浓度为75~600μg/m L时,G1期细胞所占百分比呈逐渐上升趋势,P0.05;S期细胞所占百分比逐渐下降,P0.05;不同浓度组G2期细胞所占百分比差异不大,P0.05。结论:蝙蝠葛酚性碱可抑制SGC-7901胃癌细胞的增殖,将其细胞周期阻滞在G1期,从而达到抑制肿瘤细胞增殖、生长的目的。     

松萝烟酰胺对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、细胞周期及迁移的影响

目的探讨松萝烟酰胺对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用及机制。方法体外培养SGC-7901细胞,分为对照组和不同浓度的松萝烟酰胺实验组,显微镜观察各组细胞形态;MTT法测定SGC-7901细胞增殖;AnnexinV/PI双染和DAPI荧光染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;细胞划痕实验检测细胞的迁移。结果松萝烟酰胺处理SGC-7901细胞后,细胞发生皱缩、变形,贴壁细胞脱落;MTT结果显示,松萝烟酰胺对SGC-7901增殖抑制作用呈明显的浓度依赖性和时间依赖性;AnnexinV/PI双染结果显示,松萝烟酰胺使SGC-7901细胞的晚期凋亡率增加,且DAPI染色可观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核碎裂;流式结果显示,松萝烟酰胺使SGC-7901细胞周期停滞在S期;划痕实验显示,随着时间的延长、浓度的增加,松萝烟酰胺使SGC-7901细胞迁移率下降越明显。结论松萝烟酰胺对SGC-7901细胞具有增殖抑制作用,其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡、阻滞细胞于S期,从而抑制细胞的迁移。     

解毒益气方对胃癌细胞SGC-7901凋亡及相关基因的影响

目的:观察解毒益气方体外对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡及凋亡相关基因的影响。方法:1应用MTT法检测解毒益气方体外对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响;2应用Annexin V/PI检测该方对胃癌细胞早期凋亡率的影响;3RT-PCR法检测该方体外对胃癌细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:1解毒益气方对SGC-7901有良好的增殖抑制作用。2解毒益气方大、小剂量组作用胃癌细胞SGC-7901后早期凋亡率分别为27.79%、11.09%。3解毒益气能上调凋亡相关基因Bax表达,下调Bcl-2的表达。结论:解毒益气方对胃癌SGC-7901有明显的抑制增殖、促进凋亡的作用,其分子机制可能与上调Bax表达,下调Bcl-2表达有关。     

夏龙方对人胃癌SGC-7901细胞黏附和侵袭的影响

目的:观察夏龙方对胃癌细胞SGC-7901黏附、侵袭、移动等转移生物学行为的影响。方法:体外培养SGC-7901细胞,分为夏龙方50,100,200 mg·L-1(低、中、高剂量)组和对照组,采用Cytoselect 48-Well Cell Adhesion Assay检测胃癌细胞与基质黏附能力;利用Transwell侵袭转移模型评价夏龙方对胃癌细胞侵袭能力的影响、划痕实验观察夏龙方对SGC-7901细胞移动能力的影响。结果:终浓度100,200 mg·L-1夏龙方能显著降低SGC-7901细胞黏附能力,50～200 mg·L-1可抑制SGC-7901细胞侵袭,终浓度50 mg·L-1夏龙方可显著抑制SGC-7901细胞迁移。结论:夏龙方可降低SGC-7901细胞的黏附能力,侵袭能力,抑制细胞迁移。     

益气补肾方对胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力影响的实验研究

目的:通过研究益气补肾方体外对胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力的影响,探究益气补肾方抗胃癌转移作用的可能机理。方法:采用MTT法检测益气补肾方水煎液对细胞增殖的影响;应用细胞黏附试验、细胞体外侵袭实验、细胞趋化运动试验,研究益气补肾方不同浓度下对SGC-7901细胞的黏附、运动以及侵袭能力的影响。结果:益气补肾方对SGC-7901细胞的增殖具有抑制作用;益气补肾方不同浓度处理SGC-7901细胞后,体外黏附、运动以及侵袭能力呈剂量依赖性下降。结论:益气补肾方具有明显的抗肿瘤作用,体外能抑制胃癌细胞株SGC-7901的侵袭和转移。     

扶正消癥方药液诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究扶正消方药液对人胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡的诱导作用,探讨扶正消方药液治疗胃癌的可能作用机理。方法:MTT法检测扶正消方药液对SGC-7091细胞增殖的影响;应用电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:扶正消方药液能抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖。在实验浓度范围内,随着剂量的增加,抑制作用更加明显;同一剂量下,72小时内药物作用时间越长,抑制作用越明显。流式细胞仪检测在细胞周期G1期前出现低于2倍体的凋亡峰,电镜检测到胃癌细胞SGC-7901发生典型的凋亡形态学改变。结论:扶正消方药液能够抑制人胃癌细胞SGC-7901的体外生长,其作用机制可能与抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖和诱导细胞凋亡有关。     

新疆多伞阿魏对胃癌细胞SGC-7901增殖抑制作用研究

目的:研究新疆多伞阿魏提取物对胃癌细胞株SGC-7901增殖抑制作用及作用机制。方法:采用二苯基四氮唑溴盐比色法(MTT法)检测新疆多伞阿魏不同提取物对SGC-7901细胞增殖的抑制作用,筛选出抑制作用最强的提取物W3。光镜下观察W3不同浓度对SGC-7901细胞形态的影响,TUNLE凋亡染色实验检测W3诱导SGC-7901细胞凋亡作用,流式细胞仪进一步检测其对细胞凋亡率的影响。结果:多伞阿魏提取物W3能显著抑制SGC-7901细胞增殖,同时具有诱导细胞凋亡作用,且呈剂量依赖关系。结论:多伞阿魏提取物W3抑制胃癌细胞增殖作用可能与诱导细胞凋亡有关。