荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变研究

目的对荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变方法进行临床研究,评价检测能力及在国境口岸的应用价值。方法应用荧光PCR熔解曲线法检测结核病人临床分离结核分枝杆菌,以传统药物敏感性试验为标准,获得该方法的灵敏性、特异性。结果对347例结核病人临床分离培养样本,传统药物敏感性试验检出271例利福平敏感标本,76例利福平耐药标本。荧光PCR熔解曲线法检出269例利福平敏感标本,78例利福平耐药标本,灵敏性为93.42%,特异性为97.42%,符合率为96.54%。结论荧光PCR熔解曲线法检测速度快速、灵敏度高、特异性强,可用于结核分枝杆菌利福平耐药突变的快速检测,适于国境口岸对耐多药结核病的快速筛查。     

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变研究

目的 对荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变方法进行临床研究,评价其检测效能及在国境口岸应用价值.方法 应用荧光PCR熔解曲线法检测结核病人临床分离标本,与传统药物敏感性试验对比,衡量该方法的灵敏度、特异性.结果 对347例结核病人临床分离培养样本,药敏试验检出271例利福平敏感标本,76例利福平耐药标本;...     

高分辨率熔解曲线检测结核分枝杆菌对利福平耐药性研究

目的评价高分辨率熔解曲线(high resolution melt,HRM)技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的临床应用价值。方法用传统结核分枝杆菌药敏试验对新疆石河子大学人畜共患病实验室保存的50株临床分离菌进行耐药性检测。以rpoB基因的利福平耐药决定区为靶标设计引物进行高分辨率熔解曲线分析,判断分离出的结核分枝杆菌是否对利福平耐药。应用SPSS 17.0分析,以传统结核分枝杆菌药敏试验结果为标准,计算两种方法的符合率。用χ~2检测分析比例法药敏结果与高分辨率熔解曲线检测结果的差异性。用Kappa检测分析两种结果的一致性。结果药敏试验结果显示,50株菌中有1株为非结核分枝杆菌;49株中有20株同时对利福平和异烟肼耐药、1株仅对利福平耐药;HRM检测结果显示,21株对利福平耐药,28株为敏感株。以传统药敏试验为参考,HRM检测利福平耐药性的敏感性为86.36%,特异性为92.59%,经Kappa检验显示,两种方法检测结果具有高度一致性。结论 HRM可快速检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性,具有较高灵敏度,在耐药结核病的早期诊断上有一定的应用价值。     

Xpert MTB/RIF技术对结核分枝杆菌检测和耐多药结核快速筛查的研究

目的探讨Xpert MTB/RIF技术检测涂阳痰标本结核分枝杆菌和利福平耐药性的效能,分析该技术在不同利福平耐药率患者中进行耐多药结核诊断的应用价值。方法连续纳入769例涂阳肺结核患者的痰标本,分别进行涂片镜检、固体培养、分枝杆菌初步菌型鉴定、比例法药敏试验和Xpert MTB/RIF检测。结果 Xpert MTB/RIF技术检测结核分枝杆菌的灵敏度为98.15%,特异度为70.00%。检测利福平耐药性与比例法药敏结果比较,Kappa值为0.859,灵敏度为93.04%,特异度为95.71%,复治涂阳患者特异度低于初治涂阳患者,阳性预测值和阴性预测值分别为85.47%和98.07%。结论 Xpert MTB/RIF技术能够快速检测出涂阳痰标本中结核分枝杆菌和利福平耐药性,具有较高的灵敏度和特异度。在云南省用于耐多药结核病患者快速筛查时,优先用于利福平耐药率较高的定点医院以及罹患耐多药高危人群。     

Xpert MTB/RIF检测技术在结核病患者痰标本中的应用价值分析

目的评价Xpert MTB/RIF技术对临床标本中结核分枝杆菌及利福平耐药检测的应用价值。方法对80份痰标本采用Xpert MTB/RIF系统进行结核分枝杆菌与利福平耐药基因rpoB的突变检测,以培养结果及表型药敏试验为金标准,判断Xpert MTB/RIF检测的敏感度、特异度、95%CI。结果对临床确诊为结核病患者的80份临床标本中,Xpert MTB/RIF系统的结核分枝杆菌阳性检出率为76.2%;42份培养阳性标本中,Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的敏感度为97.6%;38份培养阴性标本中,Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的敏感度为52.6%;以传统表型药敏试验为金标准,采用Xpert MTB/RIF系统行利福平耐药性检测的敏感度为95.4%,特异度为95.1%。结论 Xpert MTB/RIF是一种简便、快速、准确,且能够同时对结核临床标本行结核分枝杆菌检测与利福平耐药性检测的分子检测技术,对及时发现病情与耐药结核病患者诊断具有重要价值。     

1例痰标本的Xpert MTB/RIF检测与药敏试验结果对比分析

目的分析传统药敏试验与利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)检测结果差异的原因。方法对1例涂片阳性痰标本,同时进行Xpert MTB/RIF检测、培养及药敏试验。结果标本Xpert MTB/RIF检测结果为结核分枝杆菌(MTB)检出低、利福平耐药RIF;药敏试验菌群鉴定为非结核分支杆菌、利福平耐药。结论 Xpert MTB/RIF检测在实验室诊断中仍需结合传统的涂片镜检、分离培养、药敏试验等,才能使检测结果更加准确、全面。     

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术在肺结核快速诊断中的应用价值

目的探讨Xpert MTB/RIF检测肺结核及利福平耐药性的应用价值。方法收集200例疑似肺结核患者的痰标本,进行痰涂片抗酸染色显微镜镜检、改良罗氏固体培养、比例法药敏试验和Xpert MTB/RIF检测,分析Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌及其利福平耐药性的敏感度和特异度,与"金标准"进行一致性检验。结果以改良罗氏固体培养为"金标准",Xpert MTB/RIF检测痰标本MTB的敏感度和特异度分别为88.30%和87.74%;以痰涂片抗酸染色法为"金标准",Xpert MTB/RIF检测痰标本MTB的敏感度和特异度分别为88.18%和100.00%;以比例法药敏试验为"金标准",Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为83.33%和100.00%;Xpert MTB/RIF法和改良罗氏固体培养、痰涂片抗酸染色法、比例法药敏试验均具有较好的一致性(K值分别为0.76、0.87、0.77)。结论 Xpert MTB/RIF在肺结核快速诊断中具有较高的诊断效能,在我国结核病实验室中具有较好的应用前景。     

GeneXpert MTB/RIF技术在结核性胸膜炎诊断及利福平耐药检测中的价值

目的探讨GeneXpert MTB/RIF技术在结核性胸膜炎诊断及利福平耐药检测中的应用价值。方法收集结核性胸膜炎369例患者胸腔积液,利用集菌涂片法、结核分枝杆菌培养法和GeneXpert MTB/RIF法3种方法检测,对其阳性率进行比较;并对培养阳性菌株采用比例法检测利福平的药敏情况,结果与GeneXpert MTB/RIF法对比。结果 369例胸腔积液集菌涂片法、结核分枝杆菌培养法和GeneXpert MTB/RIF法阳性检出率分别为14.6%(54/369)、16.5%(61/369)和77%(284/369),GeneXpert MTB/RIF法和涂片法、培养法方法比较,差异有统计学意义(χ~2=288.76、270.68,P0.01)。GeneXpert MTB/RIF法特异度为100%,敏感度为77%。369例标本采用结核分枝杆菌培养法测得阳性为61例,分别取其菌落用比例法检测利福平耐药情况,结果与GeneXpert MTB/RIF法检测结果一致。结论GeneXpert MTB/RIF技术操作简便、快速、安全,敏感度和特异度较高,对早期诊断结核性胸膜炎以及判定利福平的耐药情况具有较大价值。     

泉州市新发肺结核患者Xpert MTB/RIF检测结果分析

目的了解泉州市新发肺结核患者耐药结核分枝杆菌感染情况,评价Xpert MTB/RIF检测技术在基层定点医院结核门诊的应用价值。方法对泉州市2016—2018年登记治疗的新发肺结核患者开展Xpert MTB/RIF检测,对检出结果为利福平耐药、未检出结核分枝杆菌的痰标本,同时开展传统的罗氏固体培养、菌种鉴定和比例法药敏试验。结果Xpert MTB/RIF检测新发肺结核患者的利福平耐药率为6.2%(33/537);涂片阴性的新发肺结核患者中Xpert MTB/RIF检出分子生物学阳性率为21.9%(43/196);以比例法为金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感性为92.3%(12/13),特异性为83.8%(31/37),两种方法差异无统计学意义(χ~2=2.29,P0.05),Kappa一致性检验表明两者类似(Kappa值0.677,P0.01)。结论 Xpert MTB/RIF检测对提高肺结核病人病原阳性率、早期发现利福平耐药及NTM感染有一定意义。     

Xpert MTB/ RIF技术在贵州地区耐药结核病诊断中的应用价值

目的:探讨利用Xpert MTB/RIF技术直接快速检测结核分枝杆菌利福平药物敏感性的可行性及作为新的分子药敏试验方法的应用价值。方法:选取贵州地区耐药监测点分离培养的阳性菌株217株,用Xpert MTB/RIF技术和国际标准比例法同时检测,比较一致性,评价Xpert MTB/RIF技术的敏感度及特异度。结果:检测利福平耐药的灵敏度为100%,特异度为100%。结论:Xpert MTB/RIF技术可用于结核分枝杆菌利福平药物敏感性的直接快速检测,是快速发现耐药结核分枝杆菌的有效方法。     

Xpert MTB/RIF技术在基层实验室结核病诊断中的应用研究

目的评估结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)在基层实验室结核病诊断中的可行性与准确性。方法对1 042例来自区级结核病防治单位门诊初诊者的痰液样品,分别进行涂片镜检、固体培养、传统比例法药敏试验和Xpert MTB/RIF检测,分析比较Xpert MTB/RIF法和传统方法检测痰标本中的Mtb及其耐药性的敏感度、特异度及检测耗时。结果以固体培养试验结果作为金标准,Xpert Mtb/RIF方法检测痰标本Mtb的敏感度和特异度分别93.7%(655/699)和87.5%(300/343)。以传统比例法药敏试验结果为金标准,Xpert Mtb/RIF方法检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为86.8%(79/91)和95.3%(531/557)。Xpert MTB/RIF系统平均检测耗时为2 h。结论 Xpert Mtb/RIF检测操作简单、快速,检测敏感度高于涂片镜检法,与固体培养法有极好的一致性,同时该方法可以诊断患者是否对利福平耐药,在我国县(区)级实验室具有非常好的应用前景。     

GeneXpert MTB/RIF技术在肺结核诊断及利福平耐药检测中的意义研究

目的探讨Gene Xpert MTB/RIF技术在肺结核诊断及利福平耐药检测中的意义。方法选取我院120例疑似结核病患者,根据临床诊断结果将其均分为结核组和非结核组,两组患者均进行Gene Xpert MTB/RIF实验、T-spot实验、液体培养以及药敏试验,比较各项检测的敏感性和特异性。结果 Gene Xpert MTB/RIF法、T-spot、痰涂片、液体培养检测结核分枝杆菌敏感性分别为71.67%、66.67%、51.67%、53.33%,特异性分别为96.67%、95.00%、96.67%和100.00%,其中Gene Xpert MTB/RIF法检测的敏感性明显高于痰涂片、液体培养法(P均<0.05)。与传统药敏试验比较,Gene Xpert MTB/RIF检测利福平耐药结核病的敏感性和特异性分别为83.33%、90.00%。结论 Gene Xpert MTB/RIF技术在肺结核诊断及利福平耐药检测中具有较好的敏感性和特异性,值得推广。     

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性价值及耐药特征分析

目的 评价荧光PCR熔解曲线法(熔解曲线法)对结核分枝杆菌(MTB)耐药性检测价值。方法 采用熔解曲线法与传统液体药敏法同时检测156例临床分离培养MTB对抗结核药物利福平(RFP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)和氟喹诺酮类药物耐药情况,并对2种检测方案结果进行比较。结果 与液体药敏检测相比,熔解曲线法对5种抗结核药物耐药性检测结果差异无统计学意义(P> 0.05),以液体药敏检测为金标准,熔解曲线法检测RFP、INH、EMB、SM以及氟喹诺酮类药物耐药性的灵敏度分别为100.00%、75.86%、61.54%、75.00%、90.00%,特异度分别为97.10%、95.28%、99.30%、96.21%、100.00%,Kappa值分别为0.885、0.721、0.707、0.724、0.944,表明2种检测方法一致性好。结论 荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物RFP、INH、EMB、SM及氟喹诺酮类的耐药性与液体药敏法检测效果一致,灵敏度、特异度均较高,具有较好的临床应用价值。     

高分辨率熔解曲线检测结核分枝杆菌 对利福平耐药性研究

摘要：目的　评价高分辨率熔解曲线（ｈｉｇｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｍｅｌｔ,ＨＲＭ） 技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药 性的临床应用价值。方法　用传统结核分枝杆菌药敏试验对新疆石河子大学人畜共患病实验室保存的５０株 临床分离菌进行耐药性检测。以狉狆狅犅基因的利福平耐药决定区为靶标设计引物进行高分辨率熔解曲线分 析,判断分离出的结核分枝杆菌是否对利福平耐药。应用ＳＰＳＳ１７．０分析,以传统结核分枝杆菌药敏试验 结果为标准,计算两种方法的符合率。用χ ２ 检测分析比例法药敏结果与高分辨率熔解曲线检测结果的差异 性。用Ｋａｐｐａ检测分析两种结果的一致性。结果　药敏试验结果显示,５０ 株菌中有１ 株为非结核分枝杆 菌;４９株中有２０株同时对利福平和异烟肼耐药、１株仅对利福平耐药;ＨＲＭ 检测结果显示,２１株对利福 平耐药,２８株为敏感株。以传统药敏试验为参考,ＨＲＭ 检测利福平耐药性的敏感性为８６．３６％,特异性 为９２．５９％,经Ｋａｐｐａ检验显示,两种方法检测结果具有高度一致性。结论　ＨＲＭ 可快速检测结核分枝杆 菌对利福平的耐药性,具有较高灵敏度,在耐药结核病的早期诊断上有一定的应用价值。 关键词：高分辨率熔解曲线（ＨＲＭ）;结核分枝杆菌;利福平;耐药性;药敏试验;狉狆狅犅基因;分子诊断 中图分类号：Ｒ４４６．５　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１９）０３ ０１６１ ０４     

Xpert MTB/RIF检测技术用于耐多药结核分枝杆菌利福平耐药检测分析

目的了解利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)用于福建省耐多药结核病(MDRTB)利福平耐药检测的可行性。方法对来源于福建省结核病耐药性监测30个监测点纳入的79株耐多药和40株全敏感结核分枝杆菌分离菌株进行Xpert MTB/RIF检测,同时用PCR测序验证是否存在利福平耐药位点突变。结果119株菌Xpert MTB/RIF检测结果均为结核分枝杆菌。以比例法药物敏感试验结果作为对照,Xpert MTB/RIF检测MDR结核分枝杆菌利福平耐药的敏感度为97.47%(77/79),特异度为100.00%(40/40),Xpert MTB/RIF检测结果与PCR测序结果的一致性达到100%。结论 Xpert MTB/RIF方法用于耐多药结核分枝杆菌利福平耐药检测的意义较大,可用于福建省MDR-TB的快速筛查。     

Xpert MTB/RIF技术在结核病诊断及耐药检测中的应用

目的评估Xpert MTB/RIF技术在结核病诊断及耐药检测中的应用价值。方法对369例门诊初诊者的痰液进行荧光染色镜检、固体培养、传统比例法药敏实验和Xpert MTB/RIF检测,分析Xpert MTB/RIF技术对痰标本中结核分枝杆菌(MTB)及利福平(RIF)耐药性检测的灵敏度、特异性及一致性。结果以固体培养为金标准,Xpert MTB/RIF检测MTB的灵敏度为99.03%,特异度为83.76%,符合率为88.43%。以传统比例法药敏为金标准,Xpert MTB/RIF检测RIF耐药情况的灵敏度为100.00%,特异度为98.97%,一致性为99.01%。结论 Xpert MTB/RIF技术操作简便快速、结果判读简便,检测MTB和RIF耐药性均具有较高的灵敏度和特异度,适合在基层结核病诊疗机构推广。     

PCR熔解曲线法筛查结核分枝杆菌链霉素和乙胺丁醇耐药性

目的 利用PCR熔解曲线法快速筛查结核分枝杆菌(MTB)对链霉素、乙胺丁醇耐药性,并与药敏试验结果比较,评价其应用价值.方法 收集深圳市2007-2009年331株MTB临床分离株,应用PCR熔解曲线法检测embB基因306、378～380、406和497、rpsL基因43、88及rrs基因513～517、905 ～ 908位点耐药突变,并与药敏试验结果比较.结果 以药敏试验结果为标准,PCR熔解曲线法检测MTB链霉素耐药突变的敏感性为78.6％、特异性为90.1％、准确性为86.7％;检测MTB乙胺丁醇耐药突变的敏感性为83.0％、特异性为93.3％、准确性为91.8％.PCR熔解曲线法与药敏试验检测结果具有很好的一致性.结论 PCR熔解曲线法能够快速、特异地检测MTB对链霉素、乙胺丁醇耐药突变,可用于临床筛查.     

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术对结核分枝杆菌及利福平耐药快速诊断的评价

目的探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF,简称Xpert)对呼吸道标本结核分枝杆菌(MTB)及利福平(RIF)耐药性快速检测的应用价值。方法采集2018年1～12月济宁市市级结核病定点医院就诊患者的痰标本,分别进行涂片检测、Xpert检测、960液体培养并对培养阳性的菌株进行比例法药敏试验。结果就诊的355例疑似结核病患者,确诊257例,其中Xpert检测阳性率(56.42%)明显高于涂片法(29.57%),(P0.01)。涂阴肺结核患者的Xpert检测阳性率(38.12%)明显高于960液体培养阳性率(23.20%)(P0.01).比例法药敏试验和Xpert检测对利福平耐药性检测一致性良好(Kappa值为0.91)。结论 Xpert检测技术敏感度高特异性好,耗时短,操作简便,能够快速准确的检测出患者是否感染MTB及对RIF的耐药情况。     

应用GeneXpert MTB/RIF对耐多药MTB及RIF耐药性的快速检测

目的探讨利福平耐药实时荧光定量PCR(GeneXpert)结核分枝杆菌(MTB)/利福平(RIF)技术在检测MTB、耐多药MTB(MDR-TB)及RIF耐药性方面的作用。方法选取2015年12月-2016年7月在医院就诊的520例疑似肺结核病患者,对其痰标本分别进行金胺"O"荧光染色镜检、液体培养及药敏试验、罗氏培养及比例法药敏试验和Xpert法检测。结果 520例疑似肺结核患者中,共确诊387例肺结核,其中男性确诊率77.14%,女性确诊率68.82%;除痰涂片镜检外,其他三种方法检测MTB的敏感性均高于40.00%,四种方法的特异性均高于90.00%;其中,Xpert检测的敏感性明显高于痰涂片镜检(P<0.01),而与罗氏培养和MGIT培养均无统计学差异(两者敏感性分别为41.86%和45.22%);RIF耐药性试验显示,肺结核分枝杆菌对RIF的耐药率低于10.00%;GeneXpert MTB/RIF检测RIF的耐药率与比例法和液体药敏相比,差异无统计学意义;以比例法为金标准,检测出31株MDR-TB,GeneXpert MTB/RIF对MDR-TB的检出率达到86.11%。结论 Xpert法适用于MTB及其对RIF耐药性的快速筛查;同时可作为检测MDR-TB的一种指标。     

GeneXpert MTB/RIF系统在疑似结核病患者中的诊断价值

目的评价GeneXpert MTB/RIF系统在临床疑似结核病患者中的诊断价值。方法对临床疑似结核病患者的220份标本分别进行抗酸涂片镜检、结核分枝杆菌培养、鉴定及比例法药敏试验、GeneXpert MTB/RIF系统检测结核分枝杆菌及利福平敏感性。应用统计学方法分析GeneXpert MTB/RIF系统检测结果。结果 GeneXpert MTB/RIF系统与罗氏培养法检测结核分枝杆菌之间的差异无统计学意义(P0.05),并且通过Kappa检验2种方法检测的结果,一致性较好(Kappa=0.944)。GeneXpert MTB/RIF系统与抗酸涂片镜检检测结核分枝杆菌之间的差异有统计学意义(P0.05)。Kappa检验2种方法检测的结果,一致性一般(Kappa=0.726)。以结核培养为金标准,220份疑似结核病患者的标本中,GeneXpert MTB/RIF系统检测结核分枝杆菌的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为96.92%、97.92%、95.45%、98.60%。结论 GeneXpert MTB/RIF系统在临床疑似结核病患者的诊断中具有重要价值。