荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变研究

目的 对荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变方法进行临床研究,评价其检测效能及在国境口岸应用价值.方法 应用荧光PCR熔解曲线法检测结核病人临床分离标本,与传统药物敏感性试验对比,衡量该方法的灵敏度、特异性.结果 对347例结核病人临床分离培养样本,药敏试验检出271例利福平敏感标本,76例利福平耐药标本;...     

荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变研究

目的对荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变方法进行临床研究,评价检测能力及在国境口岸的应用价值。方法应用荧光PCR熔解曲线法检测结核病人临床分离结核分枝杆菌,以传统药物敏感性试验为标准,获得该方法的灵敏性、特异性。结果对347例结核病人临床分离培养样本,传统药物敏感性试验检出271例利福平敏感标本,76例利福平耐药标本。荧光PCR熔解曲线法检出269例利福平敏感标本,78例利福平耐药标本,灵敏性为93.42%,特异性为97.42%,符合率为96.54%。结论荧光PCR熔解曲线法检测速度快速、灵敏度高、特异性强,可用于结核分枝杆菌利福平耐药突变的快速检测,适于国境口岸对耐多药结核病的快速筛查。     

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性价值及耐药特征分析

目的 评价荧光PCR熔解曲线法(熔解曲线法)对结核分枝杆菌(MTB)耐药性检测价值。方法 采用熔解曲线法与传统液体药敏法同时检测156例临床分离培养MTB对抗结核药物利福平(RFP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)和氟喹诺酮类药物耐药情况,并对2种检测方案结果进行比较。结果 与液体药敏检测相比,熔解曲线法对5种抗结核药物耐药性检测结果差异无统计学意义(P> 0.05),以液体药敏检测为金标准,熔解曲线法检测RFP、INH、EMB、SM以及氟喹诺酮类药物耐药性的灵敏度分别为100.00%、75.86%、61.54%、75.00%、90.00%,特异度分别为97.10%、95.28%、99.30%、96.21%、100.00%,Kappa值分别为0.885、0.721、0.707、0.724、0.944,表明2种检测方法一致性好。结论 荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物RFP、INH、EMB、SM及氟喹诺酮类的耐药性与液体药敏法检测效果一致,灵敏度、特异度均较高,具有较好的临床应用价值。     

Xpert MTB/RIF技术检测肺结核病人痰菌阳性结果分析

目的 Xpert MTB/RIF在肺结核病人痰菌阳性标本检测中的应用价值。方法 2015年10月~2016年9月我所收治肺结核痰菌阳性患者427例,分别进行Xpert MTB/RIF实验法、PNB生长实验、比例法药敏实验。结果Xpert MTB/RIF实验法与PNB生长实验培养、比例法药敏实验相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论在结核病诊断中采用Xpert MTB/RIF法敏感性、特异性均较高,其能够快速判断分枝杆菌菌种及利福平耐药状况,临床医生可将其作为初治结核病痰菌阳性患者诊断首选方法。     

高分辨率熔解曲线技术检测耐利福平结核杆菌

目的建立1种基于荧光定量PCR扩增原理的联合高分辨率熔解曲线技术(qPCR-HRM),用于耐利福平结核杆菌(RR-TB)的快速检测。方法选取GenBank中结核杆菌rpoB基因序列(利福平耐药决定域),分别设计2对特异性引物rpoB-1R/F、rpoB-2R/F扩增rpoB基因的不同片段,构建荧光定量PCR反应体系,加入HRM饱和荧光染料监测扩增产物进行HRM分析。以H_(37)R_a菌株为阴性对照,检测240株临床诊断肺结核培养菌株对利福平(RFP)的耐药性;以传统的药敏实验结果为金标准,对qPCR-HRM法检测RR-TB的灵敏度、特异度、重复性进行评估。结果 qPCR-HRM法检测RR-TB灵敏度为84.8%,特异度为96.5%,批内、批间变异系数均1%,检测时间为2h以内。结论 qPCR-HRM法检测RR-TB耗时较短、特异度强、灵敏度高、快速易操作,适合在有条件的基层医疗机构进行推广。     

荧光PCR熔解曲线法分析宜昌地区非结核分枝杆菌感染的流行特征

目的 应用荧光PCR熔解曲线法分析宜昌地区非结核分枝杆菌(NTM)的感染趋势、分布特征、流行状况,为该地区NTM感染的防治提供参考依据。方法 收集2016—2020年间宜昌地区在某院就诊的疑似结核病患者的胸腔积液、腹腔积液、痰、支气管肺泡灌洗液标本,经萋-尼抗酸染色涂片、MGIT 960快速培养和改良罗氏培养检出的所有分枝杆菌阳性标本进一步经荧光PCR熔解曲线法鉴定结核分枝杆菌(MTB)及NTM菌种。以全基因组测序(WGS)为金标准,对比分析荧光PCR熔解曲线法鉴定MTB及NTM的准确性,总结该地区NTM感染患者的临床特征。结果 共收集7 496份分枝杆菌阳性标本,经荧光PCR熔解曲线法鉴定,检出6 997株(93.34%)MTB与499株(6.66%)NTM。NTM菌种鉴定共确定469株(93.99%)NTM菌种,其余30株(6.01%)为未知菌种。检出最多的NTM为胞内分枝杆菌(189,37.88%),其次依次为脓肿分枝杆菌(68株,13.63%)、戈登分枝杆菌(25株,5.01%)。选择荧光PCR熔解曲线法鉴定的22株MTB和18株NTM行WGS,符合率为98.15%,灵敏度为9...     

Xpert MTB/RIF快速检测结核分枝杆菌技术的应用

目的探讨Xpert MTB/RIF快速检测结核分枝杆菌技术的应用效果,提高肺结核病原学诊断水平。方法收集确诊的2 596例肺结核患者痰液,进行痰涂片检查,同时对其中1 509例痰液进行Xpert MTB/RIF快速检测,对两种检测方法进行比较。结果 2 596例肺结核患者痰涂片阳性率29.89%,其中1 509例患者同时进行了Xpert MTB/RIF快速检测,阳性率(46.12%)高于同期痰涂片(30.88%),差异有统计学意义(P0.01);阳性菌株利福平耐药率为4.60%(32/696)。两种方法男性阳性率均高于女性,差异均有统计学意义(P值均0.01)。15～、45～、≥65岁组痰涂片阳性率随年龄增长而升高(P0.01);各年龄组间Xpert MTB/RIF快速检测阳性率间差异无统计学意义(P=0.060)。与痰涂片检查结果相比,Xpert MTB/RIF快速检测的灵敏度和符合率分别为88.67%、79.66%,kappa系数为0.58,检测时间在2h内。结论 Xpert MTB/RIF快速检测耗时短,有助于提升结核病病原学诊断阳性率,与传统方法符合率较高,可在日常工作中推广。     

高分辨率熔解曲线检测结核分枝杆菌 对利福平耐药性研究

摘要：目的　评价高分辨率熔解曲线（ｈｉｇｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｍｅｌｔ,ＨＲＭ） 技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药 性的临床应用价值。方法　用传统结核分枝杆菌药敏试验对新疆石河子大学人畜共患病实验室保存的５０株 临床分离菌进行耐药性检测。以狉狆狅犅基因的利福平耐药决定区为靶标设计引物进行高分辨率熔解曲线分 析,判断分离出的结核分枝杆菌是否对利福平耐药。应用ＳＰＳＳ１７．０分析,以传统结核分枝杆菌药敏试验 结果为标准,计算两种方法的符合率。用χ ２ 检测分析比例法药敏结果与高分辨率熔解曲线检测结果的差异 性。用Ｋａｐｐａ检测分析两种结果的一致性。结果　药敏试验结果显示,５０ 株菌中有１ 株为非结核分枝杆 菌;４９株中有２０株同时对利福平和异烟肼耐药、１株仅对利福平耐药;ＨＲＭ 检测结果显示,２１株对利福 平耐药,２８株为敏感株。以传统药敏试验为参考,ＨＲＭ 检测利福平耐药性的敏感性为８６．３６％,特异性 为９２．５９％,经Ｋａｐｐａ检验显示,两种方法检测结果具有高度一致性。结论　ＨＲＭ 可快速检测结核分枝杆 菌对利福平的耐药性,具有较高灵敏度,在耐药结核病的早期诊断上有一定的应用价值。 关键词：高分辨率熔解曲线（ＨＲＭ）;结核分枝杆菌;利福平;耐药性;药敏试验;狉狆狅犅基因;分子诊断 中图分类号：Ｒ４４６．５　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１９）０３ ０１６１ ０４     

GeneXpert MTB/RIF技术在肺结核诊断及利福平耐药检测中的意义研究

目的探讨Gene Xpert MTB/RIF技术在肺结核诊断及利福平耐药检测中的意义。方法选取我院120例疑似结核病患者,根据临床诊断结果将其均分为结核组和非结核组,两组患者均进行Gene Xpert MTB/RIF实验、T-spot实验、液体培养以及药敏试验,比较各项检测的敏感性和特异性。结果 Gene Xpert MTB/RIF法、T-spot、痰涂片、液体培养检测结核分枝杆菌敏感性分别为71.67%、66.67%、51.67%、53.33%,特异性分别为96.67%、95.00%、96.67%和100.00%,其中Gene Xpert MTB/RIF法检测的敏感性明显高于痰涂片、液体培养法(P均<0.05)。与传统药敏试验比较,Gene Xpert MTB/RIF检测利福平耐药结核病的敏感性和特异性分别为83.33%、90.00%。结论 Gene Xpert MTB/RIF技术在肺结核诊断及利福平耐药检测中具有较好的敏感性和特异性,值得推广。     

Xpert MTB/RIF试验快速诊断结核病的研究进展

<正>结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的慢性传染病,仍然是全世界公共卫生面临的重大威胁。据世界卫生组织统计~([1-2]),我国2014年的新发肺结核人数位居全球第三位,是22个全球结核病高负担国家之一。目前肺结核的诊断主要依靠痰涂片抗酸染色,但由于痰涂片对标本的含菌量要求高,导致其诊断结核病的敏感度较低。诊断结核病的金标准是MTB培     

高分辨率熔解曲线分析检测家蝇kdr基因突变

目的探讨kdr基因在家蝇溴氰菊酯抗性增加中的作用。方法首次将高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析与半定量PCR相结合,用于分析家蝇抗性基因kdr扩增和突变情况。对扩增的PCR产物进行测序来验证HRM准确性。结果与敏感品系家蝇相比,kdr的mRNA表达量在现场品系家蝇中没有显著改变(P>0.05)。使用HRM对kdr进行突变分析,发现所有样本均为同一基因型。经核酸测序,该扩增片段没有突变位点。结论杭州家蝇溴氰菊酯抗性增加与kdr基因无关。     

Xpert MTB/RIF检测技术用于耐多药结核分枝杆菌利福平耐药检测分析

目的了解利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)用于福建省耐多药结核病(MDRTB)利福平耐药检测的可行性。方法对来源于福建省结核病耐药性监测30个监测点纳入的79株耐多药和40株全敏感结核分枝杆菌分离菌株进行Xpert MTB/RIF检测,同时用PCR测序验证是否存在利福平耐药位点突变。结果119株菌Xpert MTB/RIF检测结果均为结核分枝杆菌。以比例法药物敏感试验结果作为对照,Xpert MTB/RIF检测MDR结核分枝杆菌利福平耐药的敏感度为97.47%(77/79),特异度为100.00%(40/40),Xpert MTB/RIF检测结果与PCR测序结果的一致性达到100%。结论 Xpert MTB/RIF方法用于耐多药结核分枝杆菌利福平耐药检测的意义较大,可用于福建省MDR-TB的快速筛查。     

Xpert MTB/RIF在肺结核和利福平耐药诊断中的价值研究

目的探讨Xpert MTB/RIF在肺结核和利福平耐药诊断中的价值。方法以临床诊断肺结核(60例)、可疑肺结核(48例)、可疑耐药肺结核(40例)病例为研究对象,分为临床诊断肺结核组、可疑肺结核组、可疑耐药肺结核组,采集痰标本进行抗酸染色涂片和Xpert MTB/RIF,行液体培养和液体药敏实验。对照金标准(临床确诊结果),比较不同方法结核分枝杆菌的诊断效能;对照金标准(液体药敏实验结果),评价Xpert MTB/RIF诊断效能;计算灵敏度、特异度、阴性预测值、阳性预测值,并进行统计分析。结果共纳入研究对象148例,临床诊断肺结核组肺结核确诊率为93.33%,高于可疑肺结核组(70.83%)、可疑耐药肺结核组(82.50%),3组差异有统计学意义(P0.05);可疑耐药肺结核组伴有结核病史的比例为100.00%,高于临床诊断肺结核组(25.00%)、可疑肺结核组(8.33%),3组差异有统计学意义(P值均0.05)。3组乙胺丁醇、异烟肼、利福平、链霉素、均敏感患者检出率,差异均有统计学意义(P0.05),3组耐多药检出率分别为6.25%、4.76%、33.33%,差异有统计学意义(χ~2=10.108,P0.05)。与临床确诊结果对照发现,Xpert MTB/RIF诊断的灵敏度和特异度分别为69.92%、100.00%,与液体药敏培养(66.67%、100.00%)差异均无统计学意义(P值均0.05),较抗酸染色涂片灵敏度(45.53%)升高,差异有统计学意义(P0.05);与液体药敏实验对照发现,Xpert MTB/RIF诊断灵敏度和特异度分别为90.00%、93.10%。3种方法诊断结核分枝杆菌的阳性预测值和阴性预测值差异均无统计学意义(P值均0.05)。结论采用Xpert MTB/RIF技术可准确、迅速测定结核分枝杆菌和利福平耐药情况,有较高的灵敏度和特异度,具有较高的诊断效能,值得临床推广应用。     

102株耐利福平分枝杆菌耐药模式的分析

为了探讨近年来耐利福平分枝杆菌同时耐其它几种抗结核药物的耐药模式供临床、防治结核病参考，采用绝对浓度法对临床分离的１８１ 株分枝杆菌进行１０ 种药物的敏感性试验。结果：初始耐药率为５０ ．７ ％ ，获得性耐药为９０ ．２ ％ ，耐利福平及其以上分枝杆菌占耐药菌株的７５ ％ ，耐 Ｈ＋ Ｒ 及以上分枝杆菌占５２ ．９ ％ 。结论：耐利福平分枝杆菌多数是多耐菌株，在治疗中应高度重视，以控制或降低初始和获得性耐药的高耐率。     

南平市2019—2021年584株结核分枝杆菌耐药状况

目的 了解南平市结核病耐药状况,为治疗和防控工作提供依据。方法 收集2019—2021年南平市10个县(市、区)结核病定点医院培养的阳性菌株,用固体比例法对9种抗结核药物链霉素(SM)、利福平(RFP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、卡那霉素(Km)、氧氟沙星(Ofx)、卷曲霉素(CPM)、丙硫异烟胺(TH1321)、对氨基水杨酸(PAS)进行药敏试验。结果 南平市2019—2021年纳入研究的584例肺结核患者,初治占92.3%、男性占74.3%、40～59岁占40.9%;菌株总耐药率19.2%(112/584),其中复治患者总耐药率(31.1%)高于初治患者(18.2%);耐药谱共29种组合,其中单耐药9种、多耐药11种、耐多药9种(含广泛耐药1种),INH总耐药率最高(8.9%),初治患者中INH最高(8.2%),复治患者中RFP最高(20.0%);单耐药率为11.6%,以Ofx最高(4.5%);多耐药率为3.6%,以INH+Sm组合最高(1.9%);耐多药率为3.3%,以INH+RFP+EMB组合最高(0.9%)。结论 南平市结核病总耐药率仍较高,耐药谱复杂多样,须继续...     

1例痰标本的Xpert MTB/RIF检测与药敏试验结果对比分析

目的分析传统药敏试验与利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)检测结果差异的原因。方法对1例涂片阳性痰标本,同时进行Xpert MTB/RIF检测、培养及药敏试验。结果标本Xpert MTB/RIF检测结果为结核分枝杆菌(MTB)检出低、利福平耐药RIF;药敏试验菌群鉴定为非结核分支杆菌、利福平耐药。结论 Xpert MTB/RIF检测在实验室诊断中仍需结合传统的涂片镜检、分离培养、药敏试验等,才能使检测结果更加准确、全面。     

高分辨率熔解曲线分析技术及其应用进展

高分辨率熔解曲线（high-resolution melting,HRM）是一种基于单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线的基因分析新技术,具有极高的敏感性,可以检测出单个碱基的差异,并且成本低、通量高、速度快、结果准确、不受检测位点的局限,实现了真正的闭管操作。在突变扫描、单核苷酸多态性分析、甲基化研究、基因分型、序列匹配等方面HRM分析技术发挥着重要作用。     

泉州市1068例结核杆菌利福平耐药状况分析

目的了解泉州市结核分枝杆菌(结核杆菌)对利福平的耐药情况以及利福平耐药结核病的流行特征,为制定防控策略提供依据。方法对2012—2015年收集的1068例结核杆菌分离株进行4种一线抗结核药敏试验,并对利福平耐药结核病疫情资料进行分析。结果在1068株结核杆菌分离株中,利福平耐药212株,总耐药率19.9%;初治耐药率7.7%,复治耐药率高达33.1%。利福平耐多药菌株占75.0%(159/212);不同性别、年龄和户籍患者的耐药率差异无统计学意义.结论泉州市利福平耐药结核病的耐药形势不容乐观,应加强对初治病人规范化治疗管理。耐利福平可作为泉州地区耐多药结核病的初筛指标,可根据初筛指标制定合理治疗方案,防止耐多药结核病发生。     

阜阳市316株结核分枝杆菌耐药情况分析

正我国是全球22个结核病流行严重的高负担国家之一,也是全球27个耐药结核病高负担国家之一,耐多药结核病患病人数高居全球第1位~([1])。耐药、耐多药结核患者的增多已经成为现代结防工作中非常严峻的问题,对公共卫生造成了巨大威胁。所以,对结核分枝杆菌耐药情况的分析,对控制耐药和耐多药结核病有重要意义~([2])。阜阳市疾控中心结核病实验室于2012年7月开展耐多药结核病可疑者的菌株分离培养与药敏工作。本文对近两     

MGIT 960系统快速检测结核分枝杆菌药物敏感性的应用评价

[目的]评价液体培养及快速药敏检测技术(BACTEC MGIT 960系统)检测结核分枝杆菌对一线、二线8种抗结核药物敏感性的效果. [方法]用BACTEC MGIT 960系统对结核分枝杆菌临床分离株进行一线、二线8种抗结核药物的药物敏感性试验,以传统的L-J比例法药敏试验作对照,从结果报告时间和符合率等方面进行评价.统计学分析分别采用配对f检验和Kappa检验. [结果]用MGIT 960法与L-J比例法同时对202株结核分枝杆菌临床分离株进行一线药物异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇的药物敏感性检测,该两种方法对此4种药物的符合率分别为98.0％(198/202)、96.5％(195/202)、94.1％(190/202)和83.7％(169/202);而该两种方法对77株结核分枝杆菌临床分离株进行二线药物卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫异烟胺的药物敏感性检测符合率,分别为87.0％(67/77)、93.5％(72/77)、97.4％(75/77)和68.8％(53/77).MGIT 960法完成一线、二线药物药敏试验的时间中位数分别为11d和8d,而比例法规定判读时间为28 d,二者检测时间差异有统计学意义(P＜0.01). [结论]与传统比例法相比,BACTEC MGIT 960系统能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对一线、二线抗结核药物的敏感性,有利于耐药结核病的早期诊断和治疗.