高原低氧环境对小鼠海马神经元自噬的影响及意义

目的研究6000 m海拔高度下,不同时长的高原低氧暴露对小鼠负性情绪、海马神经元损伤、海马神经元自噬的影响,探讨其相互关系。方法利用低压氧舱模拟6000 m海拔高原低氧环境,实验组给予不同时长的高原低氧处理,对照组置饲养于舱外。采用高架十字迷宫实验评估高原低氧环境对小鼠负性情绪的影响,HE染色观察海马神经元病理学变化,Western Blot法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及自噬标志性蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3-II(LC3-II)在海马组织的表达变化。结果高原低氧1、3、14 d暴露明显减少了小鼠高架十字迷宫开臂滞留时间百分比和开臂进入次数百分比;HE染色显示,高原低氧1、3、14 d组小鼠海马CA1区的神经元排列紊乱、细胞间隙变大、胞体不规则、核固缩表现明显,而高原低氧7 d组海马CA1区神经元的损伤表现相对较轻;Western Blot结果显示,海马HIF-1α、Beclin-1及LC3-II的表达在高原低氧暴露1 d后即达到高峰,后逐渐下降。至高原低氧处理第7天,HIF-1α和LC3-II表达与对照组已无显著差异。结论高原低氧环境下,小鼠负性情绪的增加与海马神经元的损伤密切相关,而自噬的激活可能参与了急性高原低氧期海马神经元的损伤。     

自噬抑制剂3-MA对机械性神经元损伤后神经元凋亡的影响

目的研究自噬抑制剂6-氨基-3-甲基嘌呤(3-MA)对机械性损伤后神经元凋亡的影响。方法小鼠皮层神经元原代培养2 w后,采用机械性神经元损伤模型,通过蛋白印迹法(Western blot)定量分析损伤后不同时间点自噬相关分子微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅰ/Ⅱ的表达情况;通过免疫荧光染色分析机械性损伤后24 h神经元自噬相关分子LC3的表达情况;小鼠皮层神经元原代培养2 w后,用自噬抑制剂3-MA预处理1 h,采用机械性神经元损伤模型,通过乳酸脱氢酶(LDH)活性测定及碘化丙啶(PI)/Hoechst 33342双染测定神经元损伤程度以及3-MA的保护作用,并通过Western blot研究凋亡相关指标caspase-3和自噬相关指标微管相关蛋白轻链3(LC3)和Beclin-1的表达变化。结果Western blot方法和免疫荧光组化同时证明机械性神经元损伤后24 h LC3Ⅱ表达明显增加;LDH活性测定表明3-MA能抑制机械性损伤造成的LDH活性的增高;PI/Hoechst 33342双染表明3-MA可以明显减少机械性损伤后神经元的凋亡;通过Western blot法证明3-MA抑制LC3Ⅱ,并导致cleaved caspase-3表达明显降低。结论自噬抑制剂3-MA可能通过抑制自噬而减少机械性神经元损伤后神经元凋亡,进而对机械性损伤后神经元起保护性作用。     

PI3K／Akt信号通路对神经元机械性损伤诱导的自噬调节作用

目的研究机械性神经元损伤后自噬的发生情况以及磷脂酰肌醇3激酶（P13K）／蛋白激酶B（Akt,即PKB）信号通路对其发挥的调节作用。方法小鼠皮层神经元原代培养2W后,采用机械性神经元损伤模型,通过蛋白印迹法（Westernblot）定量分析损伤后不同时间点自噬相关分子微管相关蛋白轻链3（LC3）I／II、Beclin-1和Akt蛋白磷酸化的表达情况;使用不同浓度的P13K抑制剂LY294002预处理神经元1h后给予机械性损伤,通过Westernblot来研究自噬相关分子LC3I／Ⅱ和Beclin-1的表达情况。结果自噬相关分子LC311于机械性神经元损伤后3h表达开始逐渐增加,而Beclin-1无明显变化;p-Akt的表达于损伤后3h达到高峰,此后逐渐恢复到正常水平;用P13K抑制剂LY294002预处理神经元,可以使损伤后神经元的自噬相关分子LC3lI和Beclin-1的表达上调。结论机械性神经元损伤可以诱导自噬发生,且PI3K／Akt信号通路在其中可能发挥调节作用。     

PINK1介导的线粒体自噬在小鼠皮层神经元氧糖剥夺后表达和意义

目的探究不同时长氧糖剥夺(OGD)后小鼠皮层神经元中线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导的假定激酶1(PINK1)表达的时空动态改变。方法 C57BL/6J小鼠皮层神经元原代培养7 d,以OGD不同时长(0 h、2 h、4 h、6 h、8 h)作为观察时间点。倒置显微镜下观察神经元形态变化;MTT比色法检测神经元存活率;蛋白印迹法(Western blot,WB)观察LC3-Ⅱ、PINK1和Parkin表达的时间变化;免疫荧光观察PINK1OGD后表达的空间改变。结果 OGD严重损伤神经元活性,且随着时间延长细胞活性呈进展性下降趋势;OGD后自噬标志性分子LC3-Ⅱ和PINK1开始升高(4 h达到峰值)(P0.05),后进行性下降,而Parkin表达逐渐下降(P0.05);PINK1在胞浆可见均匀表达,在OGD后荧光强度短暂增高,并随OGD时间逐渐减弱。结论不同时长OGD可造成不同程度神经元损伤,并激活PINK1介导的线粒体自噬,PINK1可能通过影响线粒体在脑缺血损伤的病理生理过程中发挥作用。     

低氧诱导因子1α过表达对PC12细胞在CoCl2拟缺氧模型中凋亡的影响

目的 研究CoCl2处理拟缺氧损伤条件下低氧诱导因子1α(HIF-1α)过表达对PC12神经细胞凋亡状态的影响.方法 分化后的PC12细胞分为2组,实验组转染pEGFPC1-HIF-1α△ODD表达质粒,对照组转染pEGFPC1.CoCl2处理模拟细胞缺氧损伤条件;Western blotting检测2组细胞常氧和缺氧时HIF-1α的表达;Hochest33342染色、流式细胞仪和Caspase-3活性检测3种方法观察神经细胞拟缺氧损伤时HIF-1α的过表达对细胞凋亡的影响.结果 50 μmol/L及100μmol/L CoCl2处理PC12细胞12 h、24 h可以诱导细胞拟缺氧损伤模型,实验组细胞常氧和缺氧时HIF-1α表达均高于对照组.Hochest33342染色结果提示实验组凋亡细胞明显少于对照组细胞.50 μmol/L CoCl2处理24 h后,流式细胞仪结果显示实验组细胞凋亡率为(5.41±3.29)%,对照组为(8.35±2.59)%,差异有统计学意义(P＜0.05).加入50μmol/LCoCl2处理12 h后,实验组细胞中Caspase-3活性的增加倍数明显低于实验组细胞.结论 适量CoCl2处理的神经细胞系拟缺氧损伤模型中,HIF-1α的过表达对细胞凋亡有显著的抑制作用.     

高压氧对大鼠颅脑爆震伤后皮层脑组织自噬与凋亡变化的影响

目的 观察高压氧治疗颅脑爆震伤后大鼠皮层脑组织自噬与凋亡表达的变化,探讨高压氧对脑细胞自噬和凋亡表达的影响及其意义. 方法 SD大鼠54只按照随机数字表法分为对照组(n=6)、爆震伤组(n=24)及爆震伤后高压氧治疗组(治疗组,n=24),对照组不进行致伤,爆震伤组和治疗组用600 mg TNT电雷管在大鼠头部正上方垂直距离12 cm处爆炸致伤,爆震伤组伤后不做任何治疗,治疗组分别于伤后3 h、22h及以后每天同一时间行高压氧处理,爆震伤组和治疗组分别于6 h、24 h、3 d、7 d采用RT-PCR和Western blotting检测皮层脑组织中Beclin-1和caspase-3的表达情况. 结果 与对照组相比,爆震伤组及治疗组各个时间点的Beclin-1和caspase-3表达均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);同一时间点上,治疗组中Beclin-1和caspase-3表达则较爆震伤组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 高压氧降低脑细胞的自噬和凋亡表达,此可能是其治疗颅脑损伤的机制之一.     

β-淀粉样蛋白诱导海马神经元自噬通路启动及二苯乙烯苷的干预

目的 探讨在阿尔茨海默病(AD)脑损伤中,β-淀粉样蛋白(Aβ)神经毒性对大鼠行为学、自噬相关蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的影响及何首乌提取物二苯乙烯苷(TSG)的干预作用.方法 选Wistar大鼠80只,随机数字表法分为对照组、假手术组、模型组、TSG组,各20只.采用立体定向仪下于海马部位注射微量Aβ1-42造模,Y电迷宫及Moms水迷宫检测行为学变化,反转录聚合酶链反应及Western blot法检测制模后第21天海马神经元内自噬相关蛋白Beclin-1和LC3 -Ⅱ的mRNA及蛋白表达变化.结果 在模型组中,大鼠Y电迷宫躲避所需的电刺激次数增加,Morris水迷宫测试中潜伏期延长,游泳路程增加及穿越平台次数减少;Beclin-1和LC3-Ⅱ的mRNA及蛋白的表达一致,在21 d时,模型组Beclin-1蛋白(0.51±0.03),LC3-Ⅱ蛋白(0.68 ±0.04)与对照组(0.31±0.01、0.31±0.02)比较,差异有统计学意义(t=28.2843、37.0000,均P＜0.05);TSG干预后,大鼠躲避所需的电刺激次数减少,潜伏期缩短,游泳路程缩短,穿越平台次数增加;Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达强度较模型组减弱,差异有统计学意义(t=9.8387、16.2698,均P＜0.05).结论 海马神经元在受到Aβ刺激后,可上调自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ因子表达,启动自噬通路;TSG可通过减轻内质网应激损害,下调Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达来抵抗Aβ的神经毒性,改善大鼠行为学表现,发挥脑保护作用.     

雷公藤甲素与甲泼尼龙调节细胞自噬和凋亡促进脊髓损伤修复的比较研究

目的探讨雷公藤甲素（TP）与甲泼尼龙（MP）调节细胞自噬和凋亡促进脊髓损伤（SCI）修复的作用机制,为临床替代MP治疗SCI提供理论依据和新的可选择性药物。 方法选取60只雌性Thy-YFP转基因小鼠建立SCI模型,按照随机数字表法分为假手术组（Sham组）、DMSO溶液处理组（DMSO组）、MP实验组和TP实验组,每组15只。TP实验组、DMSO组及Sham组小鼠分别于术后立即腹腔注射TP（0.002 mg/10 g）、等量5%DMSO、0.9%NaCl溶液,连续给药7 d;MP实验组小鼠于术后30 min、6 h、24 h腹腔注射MP溶液（0.3 mg/10 g）。采用BMC评价运动功能,HE染色及Nissl染色法检测脊髓组织学变化,采用免疫印迹及免疫荧光染色检测自噬相关蛋白（Beclin-1、LC3B、p62）及凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、caspase-3）的水平。 结果TP实验组干预后SCI小鼠BMS运动功能评分随着时间推移逐渐升高,神经元数量增多,自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B上调且p62降低,细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax降低且抗凋亡蛋白Bcl-2升高;无论是运动功能评价、组织学变化,还是SCI后细胞自噬增强、细胞凋亡减少,TP实验组均优于DMSO组（P<0.05）,但与MP实验组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论TP在急性SCI中通过上调自噬、抑制凋亡可以促进损伤后的脊髓运动功能恢复,与MP相比对SCI具有相同的潜在保护作用。     

外周血单核细胞自体吞噬相关基因表达与高血压颈动脉IMT的关系

目的研究高血压患者外周血单核细胞的自体吞噬相关蛋白与颈动脉内膜中层厚度(IMT)的关系。方法 99例高血压患者分为对照组53例和IMT增厚组46例,用RT-PCR方法检测2组外周血单核细胞中自噬相关基因Beclin-1和LC3mRNA的表达,用Western blot技术检测相应蛋白的表达水平。结果 IMT增厚组自噬基因Beclin-1、LC3 ⅡmRNA(2.19±0.84)、(2.49±0.94)较对照组(1.00±0.37)、(1.02±0.44)表达升高(P0.01),相应蛋白IMT增厚组Beclin-1(1.80±0.67)、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(1.90±0.68)表达较对照组Beclin-1(1.07±0.32)、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(0.91±0.23)表达升高(P0.05)。结论高血压颈动脉IMT增厚患者外周血自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的mRNA及相应蛋白表达增强,可能参与了颈动脉IMT增厚的进展。     

低氧和(或)高糖对小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2a活性的影响及自噬机制研究

目的观察低氧和(或)高糖对小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2a活性的影响,并探讨其自噬相关机制。方法 Neuro-2a细胞分为4组:正常对照组、高糖组、低氧组和高糖低氧组。使用MTS方法检测细胞活性;透射电镜、免疫印记、免疫荧光染色检测各组细胞自噬水平。结果相较于正常对照组,低氧组、高糖低氧组的Neuro-2a细胞活性明显下降(P0.01),胞质内LC3B蛋白明显聚集;细胞内自噬囊泡样物质增加;自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、P62蛋白水平均升高(P0.05)。自噬抑制剂(bafilomycin A1)处理后,正常对照组、高糖组Neuro-2a细胞LC3B-Ⅱ、P62蛋白水平升高(P0.05),活性显著下降(P0.01)。结论低氧可以降低Neuro-2a细胞活性,可能是通过抑制自噬降解途径发挥作用。     

线粒体分裂抑制剂通过抑制自噬加重OGD/R损伤

目的探讨线粒体分裂抑制剂(Mdivi-1)处理对原代培养的皮层神经元缺血再灌注损伤的作用及其机制研究。方法在原代培养的小鼠皮层神经元上建立氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)模型模拟体内缺血再灌注损伤,根据再灌注时间长短检测自噬的发生情况,并进一步选取自噬发生最明显的时间点。然后分别采用自噬抑制剂-3-MA、自噬激动剂-雷帕霉素(rapamycin)、Mdivi-1以及联合rapamycin和Mdivi-1进行干预,分别从mRNA以及蛋白水平检测自噬相关分子的改变,并同时检测神经元损伤情况。结果 OGD/R处理后,神经元自噬随再灌注时间增长而上调,在OGD 2 h/R 24 h时,Beclin 1以及微管相关轻链蛋白3 II/I(LC3 II/I)比值均达峰值(P0.001,P0.01)。细胞活力结果显示,rapamycin可减轻OGD/R损伤(P0.01),Mdivi-1则会加重OGD/R损伤(P0.05),但rapamycin可通过增加自噬来减轻Mdivi-1造成的损伤(P0.05)。蛋白检测结果显示,OGD/R处理后,Mdivi-1可明显降低神经元细胞内Beclin 1和LC3 II的表达(P0.05)。结论 Mdivi-1可能通过抑制自噬的发生,从而加重神经元OGD/R损伤。     

氧化应激对脑缺血再灌注损伤后自噬调控机制

目的研究小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后早期自噬的变化和活性氧调控自噬的作用机制。方法线栓法制作小鼠短暂性大脑中动脉闭塞（tMCAO）模型56只,随机分成假手术组,对照组（仅建立tMCAO损伤）、tMCAO＋N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）组和tMCAO＋雷帕霉素组。Western blotting检测皮质和纹状体再灌注后不同时间点（再灌注后1、3、6、12、24 h）自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin-1的表达。双氢溴乙啶染色检测细胞内活性氧水平及对自噬活性的影响,免疫荧光染色观察NAC或雷帕霉素诱导下的自噬变化。2,3,5-氯化三苯四氮唑染色观察脑梗死面积的变化。结果与假手术组比较,缺血再灌注损伤后1 h Beclin-1开始升高,6 h LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达上调。与对照组对比,NAC条件下LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1表达趋势明显升高。缺血再灌注损伤后1 h活性氧开始升高,给予NAC后表达下降。在NAC和雷帕霉素干预下,梗死面积缩小。结论小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后自噬表达上调,活性氧水平升高,抗氧化剂可能通过激活细胞的自噬途径保护神经细胞,减小脑梗死面积。     

大鼠脑缺血再灌注后大脑海马区自噬的研究

目的检测大鼠脑缺血再灌注后海马神经细胞损伤及自噬变化,并比较海马CA_1及CA_3区的自噬情况。方法用线栓法制作大鼠脑局部缺血再灌注模型,实验动物随机分为:对照组(Control组)、假手术组(Sham组)和大脑中动脉栓塞再灌注组(MCAO组)。HE染色检测大鼠海马神经细胞损伤。透射电镜下观察海马神经元内自噬小体。免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1的表达水平。结果与Control组及Sham组比较,大鼠脑缺血再灌注后,海马神经细胞损伤严重;海马神经元内有自噬体形成;自噬标记物LC3、Beclin-1蛋白表达水平显著增加,且CA_1区的表达量明显高于CA_3区(差异均具有统计学意义P0.05)。结论脑缺血再灌注可激活海马神经细胞内的自噬,并进一步引起细胞损伤;模型动物海马CA_1区的自噬水平显著高于CA_3区,暗示CA_1区对脑缺血损伤具有较高的敏感度。     

缺氧对乳鼠脊髓神经元低氧诱导因子-1α的影响

目的研究缺氧对脊髓神经元低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达和凋亡的变化,探讨HIF-1α在耐受缺氧和诱导凋亡机制中的作用。方法以体外培养的乳鼠脊髓神经元细胞为研究对象。采用激光共聚焦显微镜(LCSM)、DNA琼脂糖凝胶电泳观察缺氧诱导脊髓神经元凋亡的变化;免疫组化检测HIF-1α在缺氧脊髓神经元中的表达;流式细胞术(FCM)检测缺氧对脊髓神经元p53、Bcl-2蛋白水平表达的影响。结果持续缺氧显著抑制脊髓神经元细胞的生长;荧光显微镜下可见脊髓神经元细胞呈典型凋亡的形态学改变。脊髓神经元缺氧2、4 h时HIF-1α、P53、Bcl-2表达上调(P<0.01),8 h时其表达下调(P<0.05)。结论缺氧预处理诱导的HIF-1α的表达,在脊髓神经元的耐受缺氧和诱导凋亡机制中起着重要的作用。     

ADDLs对原代培养小鼠皮层神经元及星形胶质细胞混合培养体系Notch-1信号转导及HIF-1α表达的影响

目的探讨Aβ寡聚体(ADDLs)对原代培养小鼠皮层神经元及星形胶质细胞混合培养体系Notch-1信号转导及HIF-1α蛋白表达的影响。方法在原代培养小鼠皮层神经元及星形胶质细胞混合培养体系的基础之上应用CCK-8法观察Aβ寡聚体对混合培养体系细胞活力的影响,并应用免疫印迹的方法检测Aβ寡聚体对混合培养体系的NICD及HIF-1α水平的影响。另外,应用qPCR的方法检测凋亡相关caspase-3mRNA水平。结果 Aβ寡聚体干预浓度在高于2μM的情况下可使混合培养体系细胞活力水平明显降低,并呈现浓度依赖。10μM的ADDLs明显升高了原代混合培养体系的NICD及HIF-1α蛋白表达水平,且均呈现出相对的时间依赖性,同时这两种蛋白表达水平的变化表现出基本一致的趋势。同时,10μM的ADDLs明显上调了混合体系的caspase-3 mRNA水平。结论 Aβ寡聚对原代培养小鼠皮层神经元及星形胶质细胞混合培养体系的毒性作用与上调NICD及HIF-1α表达水平密切相关。     

自噬在大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中作用的实验研究

目的探讨大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)模型中,应用激动剂rapamycin(RAP)增强自噬后观察SAH后早期大鼠神经功能评分、脑水肿和血-脑屏障(BBB)通透性的变化,以及应用抑制剂3-Methyladenine(3-MA)减弱自噬后上述指标的变化。探讨自噬在SAH后早期脑损伤(EBI)中可能的作用。方法雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、SAH组、SAH+vehicle组、SAH+RAP组和SAH+3-MA组5组,每组12只,于24 h时间点处死动物后取颞底脑皮层,利用western blot法测定自噬标志物LC3和Beclin-1的表达变化,分别观察各组大鼠神经功能评分的变化,并测定各组大鼠脑水肿和BBB通透性的变化。结果 SAH后脑皮层中LC3和Beclin-1表达较对照组明显增加(均P0.01),同时伴有明显的脑水肿(P0.01)及BBB通透性破坏(P0.01);与SAH+vehicle组相比SAH+RAP组LC3和Beclin-1的表达明显增加(均P0.05),脑水肿指数下降(P0.01),BBB通透性好转(P0.01),同时大鼠的神经功能评分明显好转(P0.01)。而SAH+3-MA组与SAH+vehicle组相比,LC3和Beclin-1的表达明显下降(均P0.01),大鼠神经功能评分变差(P0.05)。结论应用RAP干预自噬后,LC3和Beclin-1的表达明显增高,自噬明显增强,同时大鼠神经功能评分明显好转,脑水肿指数明显下降,BBB通透性明显好转。自噬增强后能减轻SAH后的EBI;3-MA的应用可使EBI加重。     

亚硒酸钠对脑缺血再灌注损伤大鼠HIF-1α表达的影响

目的 研究亚硒酸钠对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马神经细胞凋亡的保护作用及其对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响.方法 48只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(模型组)及亚硒酸钠治疗组,每组16只,采用线栓法建立脑缺血再灌注模型,治疗组于再灌注后给予亚硒酸钠0.625 mg/(kg·d)腹腔注射7 d.各组大鼠经组织处理后用亚甲兰尼氏体染色及TUNEL染色,分别观察大鼠海马CA1区神经元存活和凋亡情况,Western Blot实验测定缺血组织HIF-1α水平的表达.结果 脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元数目明显减少,凋亡细胞明显增加(P<0.001),亚硒酸钠治疗后海马神经细胞存活数目明显增多,凋亡细胞明显减少(P<0.01);与假手术组比较,模型组大鼠海马HIF-1α水平表达明显增加(P<0.01),而经亚硒酸钠治疗后大鼠海马HIF-1α水平表达较模型组明显降低(P＜0.05).结论 亚硒酸钠可减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡,同时能抑制组织HIF-1α的过度表达.     

干预癫痫大鼠自噬活性对小胶质细胞激活状态及肿瘤坏死因子-α分泌的影响及意义

目的观察干预癫痫大鼠自噬活性对小胶质细胞激活状态及分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化的影响,探讨其对神经元以及癫痫状态的影响。方法 Wistar大鼠随机分为正常对照组(6只)与癫痫组(24只);癫痫组大鼠采用戊四氮制作癫痫模型,造模成功后随机分为致痫对照组、3-甲基嘌呤(3-MA)组及雷帕霉素(RAPA)组,每组各6只。观察记录各组大鼠行为学及脑电图变化,采用HE及Nissl染色观察CA1区神经元损伤情况,免疫荧光染色及Western blot检测海马组织LC3、CD68及TNF-α的表达。结果致痫对照组显示癫痫可导致神经元损伤,LC3、CD68、TNF-α的表达较正常对照组显著增加(P0.05)。3-MA组与致痫对照组相比癫痫发作等级降低;神经元损伤数目减少;LC3、CD68、TNF-α的表达显著降低(P0.05)。RAPA组大鼠癫痫发作等级、CD68和TNF-α的表达较致痫对照组无明显变化(P0.05);但神经元损伤数目及LC3的表达进一步增加(P0.05)。结论癫痫过程中存在自噬现象,其可激活小胶质细胞,促进TNF-α分泌,导致神经元损伤;而抑制自噬活性可调控小胶质细胞,减少TNF-α的分泌,保护神经元,从而减轻癫痫发作状态。     

自噬及Rab9在阿尔茨海默病神经元变性过程中的作用

目的以12月龄的APPswe/PS1d E9双转基因小鼠为对象,研究自噬及Rab9在阿尔茨海默病神经元变性过程中的作用。方法以同窝同龄同性别野生型小鼠脑组织为对照,采用免疫荧光检测12月龄APPswe/PS1d E9转基因小鼠脑组织中Aβ1-16、LC3B和Rab9的表达;采用Western Blot对脑组织中LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ和Rab9蛋白表达进行定量分析。结果 12月龄APPswe/PS1d E9双转基因小鼠的皮质及海马区域有大量典型"有致密核心"的老年斑分布。12月龄的APPswe/PS1 d E9双转基因小鼠脑内LC3 B和LC3 B-Ⅱ的表达较对照组明显增多,差异具有统计学意义(LC3 B:0.819±0.034 vs.0.390±0.047,P=0.0005;LC3 B-Ⅱ:0.162±0.004 vs.0.067±0.001,P0.0001)。12月龄的APPswe/PS1 d E9双转基因小鼠脑内Rab9呈粗颗粒状,聚集为"半月形",分布于核周区,与在对照组小鼠脑内分布的形态不同;但两组在Rab9表达水平上差异无统计学意义(0.481±0.071 vs.0.508±0.064,P0.05)。结论阿尔茨海默病神经元变性过程中存在自噬诱导的增加和Rab9的功能和/或分布异常。     

缺氧后胚鼠神经元自噬及凋亡相关蛋白的表达

目的观察缺氧致胚鼠神经元损伤后,凋亡和自噬的发生及变化情况,并探讨其在脑细胞缺血缺氧中的意义。方法取大鼠的胚鼠皮质神经元进行体外原代培养,建立缺氧(oxygen deprivation,OD)损伤模型,通过Western blot方法检测不同缺氧时间点自噬微管相关蛋白轻链3抗体(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)以及半胱天冬蛋白酶3(caspase-3)的表达情况。结果神经元于缺氧后可观察到自噬的发生,同时凋亡也随之出现,两者的标志蛋白于OD 0.5h开始表达,并且表达逐渐增加,于OD 4h时间点到达高峰,OD 6h时后凋亡标志蛋白caspase-3继续上调,自噬的标志蛋白LC3表达不再增强。结论 (1)除凋亡外,单纯缺氧能诱导胚鼠神经元发生自噬现象;(2)缺氧所致神经元的损伤过程中,凋亡与自噬同时发生,且表达趋势在OD 4h内一致,OD 4h后细胞凋亡增强。