竹节参总皂苷通过线粒体途径保护H_2O_2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤

目的:探讨竹节参总皂苷对SH-SY5Y细胞的保护作用机制。方法:SH-SY5Y细胞随机分为正常对照组,H2O2模型组(600μmol/L H2O2),药物干预组(600μmol/L H2O2+0.1、1、5、20μg/m L竹节参总皂苷)。竹节参总皂苷预处理12 h后,再加入H2O2继续培养12 h。JC-1法检测线粒体膜电位变化,Western blotting检测Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的表达。结果:600μmol/L H2O2与SH-SY5Y共同孵育12 h后,线粒体膜电位下降,Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达下调,预孵育竹节参总皂苷能明显提高细胞线粒体的膜电位,增强Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达。结论:竹节参总皂苷对H2O2致SH-SY5Y神经细胞损伤具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能及自噬相关蛋白有关。     

竹节参总皂苷通过线粒体途径保护H_2O_2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤北大核心CSCD

目的:探讨竹节参总皂苷对SH-SY5Y细胞的保护作用机制。方法:SH-SY5Y细胞随机分为正常对照组,H2O2模型组(600μmol/L H2O2),药物干预组(600μmol/L H2O2+0.1、1、5、20μg/m L竹节参总皂苷)。竹节参总皂苷预处理12 h后,再加入H2O2继续培养12 h。JC-1法检测线粒体膜电位变化,Western blotting检测Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的表达。结果:600μmol/L H2O2与SH-SY5Y共同孵育12 h后,线粒体膜电位下降,Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达下调,预孵育竹节参总皂苷能明显提高细胞线粒体的膜电位,增强Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达。结论:竹节参总皂苷对H2O2致SH-SY5Y神经细胞损伤具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能及自噬相关蛋白有关。     

芍药苷对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的 探讨芍药苷对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SYSY细胞氧化损伤的保护作用及其可能机制.方法 MTT法测定细胞存活率;Hoechst 33342染色检测细胞凋亡;罗丹明123(Rho123)染色检测线粒体膜电位(MMP)改变.结果 1.5mmol/L H2O2可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,导致SH-SY5Y细胞核形态改变和MMP改变.经过31.25和62.5 μg/ml浓度的芍药苷处理后,H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡明显减少,同时减少H2O2引起的MMP改变.结论 芍药苷可抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,减少H2O2引起的MMP改变.     

人参多糖对D-半乳糖诱导的PC12细胞拟老化模型自噬和相关信号通路的影响

目的:探讨人参多糖对D-半乳糖(D-Gal)诱导的大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞衰老损伤后自噬和相关信号途径的影响。方法:将PC12细胞分为正常对照组、模型组、人参多糖组。除正常对照组外,其余各组用含20 mg/mL D-Gal的培养基损伤24 h;人参多糖组加入终浓度分别为65、75μg/mL人参多糖作用24 h。CCK-8法检测人参多糖对细胞活力的影响;β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老;流式细胞仪检测细胞周期、活性氧(ROS)及线粒体膜电位(MMP);Seahorse代谢分析系统结合ATP生成量评估线粒体功能;免疫蛋白印迹法检测自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3B(LC3B-Ⅱ)、泛素结合蛋白P62(P62)]和自噬相关信号通路Parkin、PINK 1蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,D-Gal可引起细胞衰老,表现为细胞活力降低,β-半乳糖苷酶阳性染色率增加,细胞周期G_1阻滞;与模型组比较,人参多糖75μg/mL组线粒体膜电位升高,活性氧降低,ATP及最大呼吸量升高(P0.05～P0.01);与模型组比较,人参多糖组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平上升,P62表达下降(P0.001),Parkin、PINK1蛋白的表达趋势与LC3Ⅱ/Ⅰ的结果一致(P0.05～P0.001)。结论:人参多糖可能通过影响PINK1/Parkin途径调控线粒体自噬,维系线粒体稳态改善D-Gal引起的PC12细胞衰老,保护受损细胞。     

基于PINK1-Parkin介导的线粒体自噬研究当归芍药散对AD大鼠的影响

基于PINK1-Parkin信号通路，探讨当归芍药散对链脲佐菌素(streptozocin, STZ)诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)大鼠模型线粒体自噬影响的作用机制。通过双侧侧脑室注射STZ构建AD大鼠模型，实验分为正常组、模型组、当归芍药散低剂量组(12 g·kg^-1·d^-1)、当归芍药散中剂量组(24 g·kg^-1·d^-1)、当归芍药散高剂量组(36 g·kg^-1·d^-1)。Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆功能，透射电镜和免疫荧光共定位检测线粒体自噬情况，免疫印迹法(Western blot)检测PTEN诱导的激酶1 (PTEN induced putative kinase 1,PINK1)、Parkin、LC3BⅠ/LC3BⅡ、p62蛋白的表达。与正常组比较，模型组大鼠学习记忆功能显著降低(P<0.01),PINK1、Parkin表达降低(P<0.05),而LC3BⅠ/LC3BⅡ、p62表达显...     

脾气虚大鼠胃黏膜细胞线粒体自噬相关蛋白表达的研究＊

目的 通过检测PTEN诱导激酶1（PTEN-induced putative kinase protein 1，PINK1）-Parkin通路及自噬相关蛋白表达，探讨脾气虚胃黏膜细胞线粒体损伤的可能机制。方法 16只雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚证模型组（模型组），每组8只；透射电镜观察胃黏膜细胞线粒体形态，JC-1法测量其膜电位（ΔΨm）；比色法测定其ATP含量和呼吸链复合物（respiratory chain complex，RCC）I-IV活性；Western blot法检测其RCCV、PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein light chain 3，LC3）-I和II及p62等表达。结果 与正常组比较，模型组胃黏膜细胞的线粒体嵴减少，ΔΨm和ATP水平下降，RCCI和IV活性降低，RCCV、PINK1、Parkin和LC3-II表达下降，但LC3-I和p62表达上升。结论 脾气虚胃黏膜细胞线粒体结构和功能损伤与PINK1-Parkin通路抑制所导致的线粒体自噬水平低下有关。     

活血荣络方对脑缺血再灌注损伤大鼠PINK1/Parkin信号通路的影响

目的观察活血荣络方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠PINK1/Parkin信号通路的影响,从线粒体自噬角度探讨其干预CIRI的作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、活血荣络方(HXRLF)组和自噬激活剂(RAP)组,采用线栓法建立CIRI大鼠模型。HXRLF组于造模前36 h开始灌胃活血通络方药液11.7 g/kg,每24 h灌胃1次,共3次;RAP组于再灌注同时腹腔注射雷帕霉素1.5 mg/kg。再灌注24 h后,对大鼠神经功能进行评分,尼氏染色检测大鼠皮质区完整神经元数目,JC-1荧光探针检测皮质区线粒体膜电位(MMP),透射电镜观察大鼠皮质区超微结构,免疫组化和Western blot检测皮质区p62、LC3B、TOMM20蛋白表达,Western blot和RT-PCR分别检测皮质区PTEN诱导激酶1(PINK1)、帕金蛋白(Parkin)蛋白和m RNA水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分明显升高,神经功能缺损严重;皮质区完整神经元数量明显减少,自噬小体数目增多,MMP降低;皮质区p62、LC3B蛋白表达升高,TOMM20蛋白表达降低,PINK1、Parkin蛋白和m RNA表达升高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。与模型组比较,HXRLF组和RAP组大鼠神经功能评分明显降低,神经功能缺损改善;皮质区完整神经元数量明显增多,自噬小体数目增多,MMP升高;皮质区p62、TOMM20蛋白表达降低,LC3B蛋白表达升高,PINK1、Parkin蛋白和m RNA表达升高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论活血荣络方可能通过激活PINK1/Parkin信号通路上调线粒体自噬,减轻大鼠神经功能损害,从而发挥神经保护作用。     

基于线粒体质量控制的荭草苷抗心肌缺血/再灌注损伤的机制研究

目的探讨荭草苷对心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞内线粒体质量的调控作用。方法 75只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、不同剂量(1.0、2.0、4.0 mg/kg)荭草苷预处理组。除假手术组外,其余各组大鼠均通过结扎冠状动脉左前降支致缺血30 min,再灌注120 min,制备MIRI模型。酶标仪检测线粒体膜电位(MMP)和线粒体通透性转换孔(mPTP)开放程度,分光光度法测定线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ~Ⅳ活性,TUNEL法检测心肌细胞凋亡水平,Western blotting法检测心肌细胞内凋亡与线粒体自噬相关蛋白的表达水平,免疫共沉淀法检测心肌细胞内Parkin与p62结合程度。结果荭草苷可显著恢复MIRI诱导的MMP、m PTP开放阈值和粒体呼吸链酶复合物Ⅰ~Ⅳ活性降低,减少心肌细胞凋亡;并能抑制心肌细胞内凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达水平,减弱Parkin与p62的结合程度。结论荭草苷对MIRI大鼠心肌细胞内线粒体具有明显保护作用,其机制可能通过Parkin依赖性和Parkin非依赖性信号通路抑制心肌细胞内线粒体自噬过度激活有关。     

黄芪甲苷对缺血再灌注诱导的大鼠心肌细胞及线粒体自噬的调节作用机制研究

目的:研究黄芪甲苷对缺血再灌注诱导的大鼠心肌细胞及线粒体自噬的调节作用机制。方法:选取75只SD健康大鼠,10只作为空白组,其余大鼠建立心肌缺血再灌注模型。最终建模成功64只,将建模成功大鼠分为模型组、低、中、高剂量组各16只。模型组和低、中、高剂量组建立心肌缺血再灌注大鼠模型。建模成功后,低、中、高剂量组大鼠腹腔注射1 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg的黄芪甲苷。在大鼠给药1周后检测大鼠指标变化。结果:高剂量组大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、心肌磷酸肌酸激酶(CK)以及谷草转氨酶(AST)心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数、心肌细胞自噬体数量、Bax、Caspase-3、PINK1、Parkin、p62、LC3Ⅱ表达量均低于低剂量组、中剂量组,Bcl-2表达量高于高于低剂量组、中剂量组(P<0.05)。结论:黄芪甲苷通过作用于PINK1/Parkin通路,共同调控自噬蛋白和凋亡蛋白,进而起到调节心肌缺血再灌注大鼠线粒体自噬,抑制心肌细胞凋亡的作用,且呈剂量依赖。     

南葶苈子抑制氧化应激与自噬通路抗H_2O_2诱导的H9c2细胞损伤作用研究

目的探究南葶苈子水提物(DS)对H_2O_2诱导的心肌H9c2细胞损伤的保护作用及潜在机制。方法使用高效液相色谱与质谱联用方法分析鉴定DS中主要成分峰。采用H_2O_2处理制备H9c2细胞损伤模型,分为对照组、模型组、普罗布考组及DS 100、200、400μg/m L组,MTT法检测H9c2细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞自噬水平、线粒体膜电位;试剂盒检测细胞氧化应激相关指标;Incell-Western法检测凋亡通路关键蛋白和自噬标志性蛋白表达水平。结果共分析鉴定了DS中含量最高的7种成分。与模型组比较,DS可以提高H9c2细胞活力(P0.05、0.01)与细胞存活率(P0.01),改善线粒体膜电位水平(P0.01),调节凋亡通路关键蛋白Caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达(P0.01),抑制心肌细胞凋亡;并能极显著降低细胞自噬水平(P0.01),升高自噬标志性蛋白自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、p62表达水平(P0.01),抑制心肌细胞自噬;降低心肌活性氧(ROS)水平(P0.01),调节细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平(P0.01),改善心肌细胞氧化应激。结论 DS可以有效保护由H_2O_2引起的H9c2细胞损伤,其机制可能与改善细胞的氧化应激、抑制细胞凋亡和自噬有关,其物质基础可能与所含的黄酮苷类成分有关。     

两种脾虚证大鼠肝脏线粒体自噬及细胞凋亡的比较研究

目的比较脾气虚证和脾不统血证两种脾虚证模型大鼠肝脏线粒体自噬及细胞凋亡水平，探讨脾虚证发生发展过程中，肝脏细胞状态变化及可能的机制。方法32只SD大鼠随机分为4组：正常对照组（8只）、低分子肝素钠对照组（8只）、脾气虚组（8只）、脾不统血组（8只）。采用劳倦过度加饮食失节的方法复制脾气虚证大鼠模型，在脾气虚证的基础上采用低分子肝素钠诱导出血的方法构建脾不统血证大鼠模型；使用化学发光法检测大鼠肝组织三磷酸腺苷（ATP）含量；JC-1荧光探针法检测大鼠肝组织线粒体膜电位；Western Blot法检测各组大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平和细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、线粒体外Cyt-C的表达水平；使用荧光定量法检测PINK1、Parkin、Bcl-2 、Bax mRNA水平。结果与正常对照组及低分子肝素钠组比较， 两种脾虚证大鼠肝组织线粒体膜电位，ATP含量，PINK1、Bcl-2蛋白及mRNA水平显著降低（P<0.05， P<0.01）， 线粒体外Cyt-C蛋白水平、Bax mRNA水平显著升高（P<0.01）。与正常对照组比较，两种脾虚证大鼠LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值、Parkin蛋白水平显著降低（P<0.01）。与脾气虚证大鼠比较，脾不统血证大鼠肝组织线粒体膜电位、ATP含量降低（P<0.05， P<0.01），线粒体外Cyt-C蛋白水平、Bcl-2蛋白及mRNA 水平下降 （P<0.05， P<0.01），Cleaved caspase-3 蛋白水平、Bax 蛋白及mRNA 水平上升（P<0.05）。结论脾虚证大鼠肝组织细胞凋亡可能机制为，线粒体过度损伤导致线粒体自噬紊乱，进一步导致了细胞凋亡，随着脾虚证的加重，肝组织细胞凋亡程度加深。     

麝香保心丸调节PINK1/Parkin信号通路对糖尿病视网膜病变大鼠的影响

[目的] 探讨麝香保心丸（SBP）对糖尿病视网膜病变（DR）大鼠线粒体自噬及PTEN诱导激酶蛋白1（PINK1）/细胞质E3-泛素连接酶（Parkin）信号通路的影响。[方法] 建立DR大鼠模型,将大鼠随机分为正常组（Control组）、模型组（DR组）、麝香保心丸低剂量组（SBP-L组）、麝香保心丸高剂量组（SBP-H组）、麝香保心丸高剂量+雷帕霉素组（SBP-H+RAP组）。检测各组大鼠空腹血糖（FPG）及总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平;苏木精-伊红（HE）染色观察各组大鼠DR情况;酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组大鼠血管内皮生长因子（VEGF）、高迁移率族蛋白1（HMGB1）水平;透射电镜观察各组大鼠细胞线粒体形态;免疫组化检测线粒体自噬相关蛋白选择性自噬接头蛋白sequestosome-1（SQSTM1/P62）、微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3-Ⅱ）的表达;蛋白免疫印迹法检测各组大鼠PINK1、Parkin蛋白表达。[结果] 与Control组比较,DR组视网膜结构破坏严重,细胞排列紊乱,水肿明显,细胞间隙变宽,线粒体损伤、肿胀明显,形态异常,FPG、TC、TG、LDL-C、VEGF、HMGB1、LC3-Ⅱ、PINK1、Parkin表达水平显著升高,SQSTM1/P62表达水平显著降低（P＜0.05）;与DR组比较,SBP-L组、SBP-H组视网膜细胞结构改善,细胞排列逐渐整齐,细胞水肿减轻,细胞、线粒体形态均趋于正常,线粒体肿胀减轻,FPG、TC、TG、LDL-C、VEGF、HMGB1、LC3-Ⅱ、PINK1、Parkin表达水平显著降低,SQSTM1/P62表达水平显著升高（P＜0.05）;与SBP-H组相比,SBP-H+RAP组视网膜细胞结构破坏加重,细胞排列紊乱,水肿明显,线粒体肿胀加重,形态异常,FPG、TC、TG、LDL-C、VEGF、HMGB1、LC3-Ⅱ、PINK1、Parkin表达水平显著升高,SQSTM1/P62表达水平显著降低（P＜0.05）。[结论] 麝香保心丸通过抑制PINK1/Parkin信号通路抑制DR大鼠线粒体自噬。     

京尼平苷对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞的保护作用及相关机制研究

目的研究京尼平苷对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞的保护作用并探讨其作用机制。方法实验分为对照组、京尼平苷组、Aβ_(1-42)组、京尼平苷+Aβ_(1-42)组。将SH-SY5Y细胞株接种于96孔板,对照组采用无血清培养基培养,其他组加入相应药物进行干预培养。MTT法检测各组细胞存活率,Western blot法检测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Atg7的表达情况。结果 Aβ_(1-42)组SH-SY5Y细胞存活率及SH-SY5Y细胞中GDNF、Atg7蛋白表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均明显低于对照组和京尼平苷组(P均0.05),京尼平苷+Aβ_(1-42)组SH-SY5Y细胞存活率及SH-SY5Y细胞中GDNF、Atg7蛋白表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均明显高于Aβ_(1-42)组(P均0.05),对照组和京尼平苷组SH-SY5Y细胞存活率及SH-SY5Y细胞中GDNF、Atg7蛋白表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论京尼平苷对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞具有保护作用,这种作用可能与其增强自噬活性及神经营养因子的表达有关。     

电针对帕金森病小鼠SIRT3/PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬的影响

目的：观察电针“风府”“太冲”“足三里”对帕金森病（PD）小鼠中脑黑质沉默调节蛋白3(SIRT3及其下游PTEN诱导的假定激酶1(PINK1)、PARK2基因编码蛋白（Parkin）介导的线粒体自噬的影响,探讨电针治疗PD的可能机制。方法：C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、电针组、假电针组,每组12只。采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶复制PD小鼠模型。电针组小鼠给予针刺“风府”“太冲”“足三里”,每天1次,每次20 min,连续12 d。以旷场实验评估各组小鼠的运动能力;免疫组织化学法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶（TH）、α-突触核蛋白（α-syn）阳性表达;透射电镜观察黑质区神经元超微结构;免疫荧光染色法检测小鼠黑质自噬轻链蛋白3(LC3)的阳性表达;实时荧光定量PCR法检测小鼠黑质TH、α-syn、SIRT3、PINK1、Parkin和线粒体自噬受体蛋白P62、Beclin-1、LC3ⅡmRNA表达水平;Westernblot法检测小鼠黑质TH、α-syn、SIRT3、PINK1、Parkin、P62、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平。结...     

天麻素调控PINK1/Parkin-VDAC1信号改善CoCl2诱导的HT22细胞凋亡

目的：探讨天麻素对二氯化钴(CoCl₂)诱导的HT22细胞凋亡作用机制。方法：体外建立CoCl₂损伤HT22的细胞模型。分组为空白组,模型组,天麻素低、中、高剂量组,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率、JC-1检测线粒体膜电位(MMP)、DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平、二硫代硝基苯甲酸(DTNB)检测谷胱甘肽(GSH)含量;VDAC1基因过表达以及使用Parkin活性抑制剂后,Western Blot检测凋亡相关蛋白表达水平。结果：天麻素降低HT22细胞凋亡率,抑制HT22细胞MMP降低,抑制HT22细胞ROS水平升高和GSH含量降低。Western Blot显示,天麻素抑制PINK1、Parkin和VDAC1表达,同时也能降低凋亡相关蛋白(Bax/Bcl-2比率、Cleaved-Caspase 3、Caspase 3、Cytochrome-c)表达水平;VDAC1过表达以及使用Parkin活性抑制剂Suramin后,PINK1与Parkin的蛋白表达水平不受影响,天麻素仍然表现出抑制凋亡相关蛋白水平的作用。结论：...     

基于海马神经元线粒体自噬探讨脾气虚心神不足的可能机制

目的:通过检测脾气虚大鼠行为学及其海马神经元线粒体超微结构、基本功能和自噬水平,探讨脾气虚所致心神不宁的可能机制。方法:16只雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚组(模型组),每组8只;旷场实验检测大鼠行为学;透射电镜观察海马神经元线粒体超微结构;JC-1法检测海马神经元线粒体膜电位;ELISA法检测海马神经元线粒体ATP和反应性氧簇(ROS)水平; Western blot法检测海马线粒体PTEN诱导激酶1 (PINK1)、Parkin、微管相关蛋白轻链3(LC3)-I和II表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠在旷场的中心活动时间明显延长,周边活动时间缩短,运动距离和直立次数显著减少;海马神经元部分线粒体嵴消失,自噬样结构减少;海马神经元线粒体的ATP水平和膜电位下降明显,PINK1、Parkin和LC3-II表达及LC3-II/I比值均显著下降。结论:脾气虚所致心神不足与海马神经元线粒体损伤及其自噬水平低下有关。     

熊果酸通过促进自噬保护H2O2 诱导的H9C2 大鼠心肌细胞氧化应激损伤

目的研究熊果酸（Ursoic acid,UA）对过氧化氢（H2O2）诱导的H9C2 大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护 作用及对细胞自噬的调节作用。方法以200 μmol·L-1 H2O2 诱导24 h 建立H9C2 心肌细胞氧化应激损伤模 型。将H9C2 细胞随机分为6 组：正常组、溶剂组、模型组及熊果酸高、中、低剂量（10、5、2.5 μmol·L-1） 组。采用CCK-8 法检测细胞存活率;EdU 法检测细胞增殖能力;TBA 法检测丙二醛（MDA）脂质氧化水平; WST-8 法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性;Western Blot 法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值及p62 的表达水 平。结果与正常组比较,模型组细胞的存活率及EdU 阳性细胞（红色荧光）百分比均明显降低（P＜0.05）;细 胞内MDA 脂质氧化水平明显升高（P＜0.05）,SOD 活性明显降低（P＜0.05）;LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值明显上调 （P＜0.05）,p62 蛋白表达明显下调（P＜0.05）。与模型组比较,熊果酸高、中、低剂量均能明显提高H9C2 的 细胞存活率及EdU 阳性细胞百分比（P＜0.05）;降低MDA 水平（P＜0.05）,提高SOD 活性（P＜0.05）;上调 LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值（P＜0.05）,下调p62 蛋白表达水平（P＜0.05）。结论熊果酸对H2O2 诱导的H9C2 大 鼠心肌细胞氧化应激损伤具有明显保护作用,可能与其促进细胞自噬有关。     

芍药苷对黑素细胞氧化损伤分子机制的研究

目的 观察芍药苷各组抑制B16黑素细胞氧化损伤的分子机制。方法 体外细胞实验分为对照组、模型组、不同浓度芍药苷干预组。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡细胞的核变化,激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体膜电位,底物荧光法检测Caspase-3/9的活性,Western blot法测定细胞凋亡Bcl-2、Cyt-c蛋白的表达。结果 (1)与正常对照组相比,模型组凋亡率明显增高(P<0.01);Caspase-3/9的活性显著增高;Cyt-c蛋白表达量升高;Bcl-2蛋白表达量降低。(2)与模型组相比,芍药苷各组凋亡率明显降低(P<0.01);Caspase-3/9的活性降低,Cyt-c蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量升高,均以芍药苷高剂量组最好。结论 该文揭示了线粒体信号转导通路可能是芍药苷干预氧化应激诱导B16黑素细胞凋亡的调控机制之一。     

自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响

目的:探讨自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响。方法:以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素或联合5 mol·L~(-1)自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对HepG2细胞作用24,48 h,以四甲基偶氮唑盐(methye thiazolye telrazlium,MTT)比色法检测细胞活力;以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素单用或联合3-MA对HepG2细胞作用48 h,Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜观察细胞凋亡形态,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annxin V/propidium iodide,PI)双染检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色检测线粒体膜电位,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白Beclin-1,LC3,半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)的活性表达。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,使pro-Caspase-3,Bcl-2,LC3-Ⅰ蛋白表达降低(P0.01),升高cleaved Caspase-3,Bax,Beclin-1,LC3-Ⅱ蛋白的表达(P0.01);3-MA可增强双去甲氧基姜黄素所诱导的HepG2细胞凋亡,提高凋亡率(P0.01),增加其降低线粒体膜电位作用(P0.01),明显下调pro-Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达(P0.01),并上调Beclin-1,LC3,cleaved Caspase-3蛋白的表达(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可经线粒体机制诱导HepG2细胞凋亡,并诱导细胞自噬,自噬对凋亡有抑制作用。     

联合microRNA测序及体外实验探究miR-15b介导PINK1/Parkin线粒体自噬通道在心力衰竭过程中的作用机制*

目的：探究miR-15b介导PINK1/Parkin线粒体自噬通道在心力衰竭过程中的作用机制,寻找防治心衰的新靶点。方法：通过高通量测序检测心衰患者与健康志愿者体内表达差异micro RNA;体外实验培养HL-1心肌细胞,通过Ang II诱导心肌细胞损伤模型,采用细胞转染技术过表达和抑制miR-15b水平,利用q RT-PCR检测miR-15b转染效能及在各组的表达水平;使用双荧光素酶报告基因实验验证miR-15b与PINK1靶标关系;运用Western Blot检测自噬蛋白Beclin-1、LC3B及线粒体自噬通道蛋白PINK1、Parkin等表达水平;运用免疫荧光法检测心肌细胞PINK1、Parkin蛋白表达情况。结果：心衰患者和健康志愿者外周血中micro RNA表达存在明显差异,其中心衰患者外周血清miR-15b水平上调明显[log2(Fold＿change)>1; P<0.01],通过对miR-15b靶基因进行预测,发现PINK1是其靶标,并通过双荧光素酶报告基因实验进一步确定miR-15b与PINK1之间的靶向关系。细胞实验中,与空白组相比,模型组miR-15b...