艾灸对类风湿性关节炎家兔滑膜细胞JAK-STAT通路负反馈调节家族细胞因子信号抑制因子的影响

目的:观察艾灸对实验性类风湿性关节炎(RA)家兔的抗炎消肿作用,探索艾灸抗炎效应的滑膜细胞JAK-STAT信号通路负反馈调节机制。方法:日本大耳白兔随机分为对照组、模型组和艾灸组,各14只。福氏完全佐剂注入兔双后膝关节腔复制RA模型。艾灸组动物采用艾粒施灸两侧"肾俞"穴各5壮,每日1次,6d为一疗程,共治疗3个疗程。治疗后观测各动物左、右后膝关节周长,运用免疫组化法检测细胞因子信号抑制因子1(SOCS 1)、SOCS 3的表达。结果:造模后各个时间点模型组动物的左、右后膝关节周长均较对照组明显增加(P<0.01),治疗后艾灸组动物左、右后膝关节周长均较模型组降低(P<0.05)。模型组与对照组比较,滑膜细胞SOCS 1、SOCS 3蛋白含量显著升高(P<0.01);艾灸组与模型组比较,滑膜细胞SOCS 1、SOCS 3蛋白含量降低(P<0.01)。结论:艾灸对实验性RA具有抗炎效应,艾灸对滑膜细胞JAK-STAT信号通路中相关负反馈调节因子SOCS 1、SOCS 3表达的调节可能是其实现抗炎效应的机制之一。     

热补针法对寒证类风湿关节炎模型家兔滑膜组织代谢物的影响

目的通过测定寒证类风湿关节炎(RA)模型家兔滑膜组织内源性代谢物,探讨热补针法治疗RA的特异性机制。方法采用卵蛋白诱导联合低温冷冻法复制寒证RA模型。将40只清洁级青紫蓝家兔随机分为正常组、模型组、平补平泻组、捻转补法组、热补针法组,每组8只。除正常组和模型组外,其余各组分别施以平补平泻、捻转补法、热补针法针刺"足三里",1次/d,留针30 min,连续7 d。干预结束后分离家兔膝关节滑膜组织,应用气相色谱-四级杆飞行时间质谱采集各组滑膜代谢物谱图,利用主成分分析和偏最小二乘判别分析对数据进行统计。结果与正常组比较,模型组家兔滑膜组织代谢物变化主要体现于三羧酸循环、糖类及脂肪酸代谢相关物质增高(P0.05);与模型组比较,各针刺组家兔滑膜组织代谢物变化主要体现于上述各种代谢相关物质降低(P0.05),且热补针法组三羧酸循环与糖代谢相关物质明显低于平补平泻组和捻转补法组(P0.05)。结论热补针法治疗RA的特异性体现在对三羧酸循环及糖代谢通路的调控。     

热补针法对类风湿关节炎家兔关节滑膜LDH、SDH和CCO活性的影响

目的观察热补针法对类风湿关节炎(RA)机体能量代谢酶的调节作用,初步解析热补针法"取热"的作用机制。方法将40只青紫蓝家兔随机分为正常组、模型组、平补平泻组、捻转补法组和热补针法组。除正常组外,采用卵蛋白诱导法和低温冷冻法对其他4组家兔进行RA寒证模型复制。造模成功后第2天,正常组和模型组与其他针刺组相同方法抓取与固定(捆绑)1次/d,30 min/次。平补平泻组施以平补平泻法,捻转补法组施以捻转补法,热补针法组施以热补法,每次操作1 min,留针30 min/次,1次/d,共7 d。观察治疗前后RA家兔膝关节周径和关节滑膜组织病理切片炎症积分的变化;干预结束后处死家兔,快速分离关节滑膜,冰冻切片,借助组织化学染色技术观察膝关节滑膜组织乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)和细胞色素氧化酶(CCO)活性改变。结果针刺干预后,平补平泻组、捻转补法组、热补针法组都能减少RA家兔膝关节周径,但热补针法组对减少RA家兔的膝关节周径作用优于平补平泻组和捻转补法组(P0.05);热补针法组对减少RA家兔的关节滑膜组织病理切片炎症积分方面,也优于平补平泻组和捻转补法组。模型组滑膜LDH积分光度、阳性总面积、面积百分比显著高于正常组(P0.05);平补平泻组、捻转补法组和热补针法组滑膜LDH积分光度、阳性总面积、面积百分比均显著低于模型组(P0.05);热补针法组LDH积分光度、阳性总面积、面积百分比均显著低于平补平泻组和捻转补法组(P0.05)。与正常组比较,模型组家兔关节滑膜SDH、CCO活性显著增高(P0.05)。平补平泻组、捻转补法组和热补针法组家兔滑膜SDH和CCO积分光度、阳性总面积、面积百分比均显著高于模型组(P0.05);热补针法组SDH和CCO积分光度、阳性总面积、面积百分比显著高于平补平泻组和捻转补法组(P0.05)。结论热补针法治疗RA疗效确切,可增强RA模型家兔SDH、CCO活性,从而增强有氧代谢,使机体局部产生更多的能量,这可能是热补针法"取热"的可能机制之一。     

单味中药有效成分对类风湿关节炎JAK-STAT信号通路影响的研究进展

JAK-STAT信号通路是介导细胞因子信号传导的重要通路之一,类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑液中的诸多细胞因子如白细胞介素-6、白细胞介素-15、干扰素及粒-巨细胞集落刺激因子等均可通过该通路在RA疾病的发生发展中起重要作用,且该通路在RA发病中呈持续激活状态。近年来研究发现,中药对JAK-STAT信号通路的调节机制,一是直接抑制JAK-STAT信号通路,二是调节与JAK-STAT信号通路相关的细胞因子的释放,三是调节与JAK-STAT信号通路相关基因的表达,多种机制间相互协同发挥作用。本文通过综述近年来单味中药有效成分对RA-JAK-STAT信号通路影响的研究成果,以期为RA的基础研究、新药开发及其临床治疗提供借鉴。     

艾灸对类风湿关节炎大鼠足趾关节滑膜组织AMPK/ULK1信号通路的影响

目的:观察艾灸对类风湿关节炎(RA)大鼠足趾关节滑膜组织中环磷酸腺苷(AMP)依赖的腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/UNC-51样激酶1(ULK1)信号通路的影响,探索艾灸治疗RA的作用机制。方法:SD大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、艾灸组、甲氨蝶呤组、雷帕霉素组,每组9只。采用弗氏完全佐剂注射法制备RA大鼠模型。艾灸组艾灸“足三里”“关元”,20 min/次,每日1次。甲氨蝶呤组予甲氨蝶呤灌胃(0.35 mg/kg),每周2次。雷帕霉素组予腹腔内注射雷帕霉素(1 mg/kg),隔日1次。各组均干预3周。足趾容积测量仪检测大鼠左后肢足趾容积;ELISA法检测大鼠足趾关节滑膜组织中AMP含量;Western blot法检测大鼠足趾关节滑膜组织中AMPK、液泡分选蛋白34(VPS34)蛋白表达量;real-time PCR法检测足趾关节滑膜组织中Atg13、ULK1 mRNA的表达水平。结果:与空白组比较,模型组足趾容积增大(P<0.01),足趾关节滑膜组织AMP含量、AMPK和VPS34蛋白表达量、ULK1和Atg13 mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。与模型...     

热补针法对类风湿关节炎寒证家兔膝关节滑膜组织炎性反应及滑膜细胞坏死性凋亡的影响

目的:观察热补针法对类风湿关节炎(RA)寒证家兔膝关节滑膜组织炎性因子及滑膜细胞坏死性凋亡的影响，探讨热补针法治疗RA的抗炎机制。方法:新西兰家兔按随机数字表法分为正常组、模型组、抑制剂组、捻转补法组、热补针法组，每组8只。采用卵蛋白诱导联合弗氏完全佐剂混合液注射，配合低温冷冻法复制RA寒证模型。抑制剂组予TAK-632(25 mg/kg)灌胃，每2 d治疗1次，共治疗7次；捻转补法组和热补针法组取双侧“足三里”分别施以捻转补法及热补针法操作，均留针30 min, 1次/d,共治疗14次。干预结束后，测量各组家兔膝关节皮温、周径；彩色多普勒超声观察各组家兔膝关节腔积液、滑膜厚度及内部血流信号；HE染色法观察各组家兔膝关节滑膜组织病理形态学变化；ELISA法检测各组家兔血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β及IL-6含量；透射电镜法观察各组家兔膝关节滑膜细胞超微结构及坏死情况；Western blot法检测各组家兔膝关节滑膜组织受体相互作用蛋白(RIPK)1、RIPK3、混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)、磷酸化(p)-MLKL的表达。结果:与正常组比较，模型组家兔膝...     

黄芪桂枝五物汤对类风湿关节炎CIA模型大鼠JAK-STAT信号通路的影响

目的探讨黄芪桂枝五物汤(HGW)对类风湿关节炎CIA模型大鼠JAK-STAT信号通路的影响。方法选用SD大鼠72只,随机分为6组:正常组(N),模型组(CIA),HGW低中高剂量组(HGW-L、M、H),Tofacitinib组(TFN)。HGW-L、HGW-M、HGW-H组药物剂量分别为16,32,64 g·m l~(-1),相当于临床常人用量的3,6,12倍,TFN药物剂量为15 mg·kg~(-1),N、CIA组每日给予10 ml·kg~(-1)的蒸馏水。以牛Ⅱ型胶原加弗氏完全佐剂建立胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠模型,每周监测各组大鼠足趾容积和体质量变化,经HGW治疗4周后光镜下观察各组大鼠踝关节病理形态;酶联法检测大鼠血清中IL-2的含量;免疫组化法检测大鼠软骨和滑膜中JAK3、STAT3、SOCS1、SOCS3的蛋白表达水平。结果 CIA组大鼠踝关节红肿明显,伴关节畸形、大鼠活动量明显减少,喜扎堆、哀鸣渐至跛行。与N组比较,CIA组、HGW-H组大鼠STAT3、SOCS1蛋白表达水平显著升高(P0.05,P0.01);与CIA组比较,HGW-H组大鼠STAT3、SOCS1蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论黄芪桂枝五物汤能明显减轻CIA大鼠关节炎症、滑膜增生、血管翳形成及软骨破坏,其机制可能与调控JAK-STAT信号通路中IL-2、JAK3、STAT3、SOCS1、SOCS3的表达相关。     

当归拈痛汤对类风湿关节炎大鼠滑膜细胞凋亡通路的影响

目的:观察当归拈痛汤对类风湿关节炎大鼠足趾关节的改变情况及探讨其对滑膜细胞凋亡通路的影响。方法:选取50只Wistar雄性大鼠,并随机分为模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组;除对照组外其余均建立胶原诱导的关节炎(Collagen Induced Arthritis,CIA)模型,在类风湿关节炎模型制备成功后开始给药:对照组和模型组予以6.5 g/kg生理盐水,低剂量组、中剂量组和高剂量组均为当归拈痛汤灌胃给药,分别给予生药6.5 g/kg,13.0 g/kg,19.5 g/kg。干预时间28d。采用容积法测量双后肢的足趾关节肿胀度;采用足趾关节苏木精-伊红(HE)染色计算细胞凋亡数;采用免疫印迹法(Western Blotting,WB)检测Bcl-2、PI3K、Bax的蛋白表达情况。结果:对照组未见足趾肿胀情况,给药1 d模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组间比较,差异无统计学意义(P0.05),给药7~28 d各剂量给药组肿胀度均低于模型组(P0.05),至14~28 d中、高剂量组的肿胀度显著低于低剂量组(P0.05),而28 d高剂量组的肿胀度又明显低于中剂量组(P0.05)。足趾关节HE染色中,对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组中的细胞凋亡数呈逐渐上升的趋势(P0.05)。PI3K和Bcl-2蛋白在模型组中表达上调,经过给药治疗,随着剂量的逐渐升高而下调(P0.05);而Bax蛋白的表达情况则与PI3K相反,随着剂量的增加而上调(P0.05)。结论:当归拈痛汤能有效改善类风湿关节炎大鼠足趾关节肿胀度,促进滑膜细胞的细胞凋亡数进而抑制滑膜细胞增殖的进程,而PI3K通路对细胞凋亡的调控起到关键的作用。     

风湿定胶囊对类风湿关节炎大鼠滑膜组织JAK/STAT信号通路的影响

目的观察风湿定胶囊对类风湿性关节炎(RA)大鼠滑膜组织中JAK-STAT信号通路的影响。方法取85只大鼠,随机选出10只为空白组(予等量生理盐水),其余75只注射Ⅱ型胶原制备RA大鼠模型;将造模成功大鼠随机分为模型组(等量生理盐水)、阳性对照组[甲氨蝶呤0.5 mg/(kg·d)]、风湿定胶囊低剂量组[200 mg/(kg·d)]、中剂量组[400 mg/(kg·d)]、高剂量组[800 mg/(kg·d)];观察并记录给药后不同时间段大鼠体质量变化等一般情况及右后足肿胀体积;给药4周后,以免疫组化法观察各组大鼠滑膜组织病理变化,Western blotting测定各组大鼠关节滑膜组织中p-JAK3、p-STAT3的蛋白表达水平。结果模型组关节肿胀明显,摄食及活动减少,精神萎靡;给药治疗后,各治疗组大鼠摄食及精神状态较模型组明显改善,且随治疗时间延长,效果越明显;模型组大鼠体质量增加低于治疗组。治疗4周后,模型组及各治疗组大鼠足肿胀体积均显著高于空白组;随风湿定胶囊剂量的增加,肿胀体积逐渐减小(P0.05),且中、高剂量组效果显著优于阳性对照组(P0.05)。各组间JAK3蛋白及STAT3蛋白表达水平差异无统计学意义(P0.05);模型组及各治疗组大鼠关节滑膜组织中p-JAK3、p-STAT3的蛋白表达水平均显著高于空白组(P0.05);随风湿定胶囊剂量的增加,p-JAK3、p-STAT3的蛋白表达水平均逐渐下调(P0.05),且中、高剂量组下调效果显著优于阳性对照组(P0.05)。结论风湿定胶囊可能通过下调RA大鼠关节滑膜组织中p-JAK3、p-STAT3的表达调控JAK/STAT信号通路进行RA的治疗。     

热补针法对类风湿关节炎寒证模型家兔血液代谢物谱的影响

目的:利用液质联用(LC-MS)技术研究热补针法对类风湿关节炎(RA)模型家兔血液代谢物谱的影响,探讨热补针法治疗RA的特异性机制。方法:40只清洁级青紫蓝家兔随机分为正常组、模型组、平补平泻组、捻转补法组和热补针法组,每组8只。除正常组外,余组以卵蛋白诱导法联合低温冷冻法复制RA寒证模型。正常组、模型组不予针刺干预,平补平泻组、捻转补法组和热补针法组于"足三里"分别施以平补平泻、捻转补法、热补针法针刺,留针30 min,每日1次,共7 d。干预结束后测定各组痛阈值以及膝关节表面温度;心脏采血制备血清,对血清进行代谢组学检测;并对数据进行主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),通过变量重要性投影值(VIP1)和P值(P0.05)筛选出血清中的差异代谢物。结果:与正常组相比,模型组家兔痛阈、膝关节表面温度降低(均P0.05);与模型组比较,各针刺组干预后痛阈、膝关节表面温度升高(均P0.05);热补针法组优于平补平泻组、捻转补法组(均P0.05)。与正常组相比,模型组血液代谢物中肉碱、Lyso PC(14∶0)、Lyso PC(18∶3)、Lyso PE(0∶0/20∶5)、Lyso PE(0∶0/22∶1)、癸酸、硬脂酸以及乳酸的含量均升高,亮氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺、焦谷氨酸、α-酮戊二酸、琥珀酸、延胡索酸、苹果酸、半乳糖、甘露糖含量均降低,上述代谢物具体涉及到脂肪酸、氨基酸、三羧酸循环以及糖类代谢。各针刺组干预后上述代谢物均出现不同程度的回调。热补针法组较平补平泻组和捻转补法组乳酸的含量降低,琥珀酸、延胡索酸、苹果酸、半乳糖、甘露糖的含量升高。结论:热补针法治疗RA的特异性体现在对三羧酸循环与糖代谢的调控。     

“热补针法”对类风湿关节炎模型家兔尿液代谢物的影响

目的:比较不同针法对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)模型家兔尿液代谢物的影响,探讨"热补针法"治疗RA的特异性机制。方法:40只清洁级青紫蓝家兔随机分为正常组、模型组、平补平泻组、捻转补法组、热补针法组,每组8只。除正常组外,余组以卵蛋白诱导法和低温冷冻法复制RA寒证模型。平补平泻组、捻转补法组、热补针法组于"足三里"分别施以平补平泻、捻转补法、"热补针法"针刺,留针30min,每日1次,共7d。干预结束后收集24h尿液,处死家兔,剥取各组家兔膝关节滑膜组织进行组织形态学观察,采用液相色谱-质谱联用仪技术(LC-Q/TOF-MS)检测尿液代谢物,利用主成分分析(PCA)和偏最小二乘方判别分析(PLS-DA)对数据进行统计分析。结果:与正常组比较,模型组尿液代谢物变化主要体现在亮氨酸代谢相关物质降低(P0.05),嘌呤代谢、色氨酸代谢相关物质增高(P0.05)。与模型组比较,各针刺组尿液代谢物变化主要体现在亮氨酸代谢相关物质增高(P0.05),色氨酸代谢、嘌呤代谢相关物质降低(P0.05),且热补针法组亮氨酸代谢相关物质明显高于平补平泻组和捻转补法组(P0.05)。结论:平补平泻、捻转补法及"热补针法"针刺可调控RA家兔体内亮氨酸代谢(能量代谢)、嘌呤代谢(氧化损伤)、色氨酸代谢(免疫调控)通路,而热补针法治疗RA的特异性可能体现在对亮氨酸代谢(能量代谢)的调控方面。     

热补针法治疗类风湿关节炎临床疗效及对机体氧化应激的影响

目的观察热补针法治疗类风湿关节炎(RA)风寒湿阻证患者临床疗效及对血浆氧化应激指标的影响。方法采用随机数字表法将68例患者分为热补针法组和西药组各34例。西药组予依托考昔片、来氟米特片、甲氨蝶呤片,餐后服。热补针法组在西药组基础上行热补针法,每日1次,连续5 d,疗程间休息2 d。2组均治疗4周,治疗后3个月随访。采用视觉模拟评分法(VAS)评价疼痛程度,检测血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平,评价临床疗效。结果热补针法组治疗后及治疗后3个月总有效率分别为91.2%(31/34)、88.3%(30/34),西药组分别为76.5%(22/34)、70.6%(24/34),热补针法组均优于西药组(P0.05)。与本组治疗前比较,2组治疗后及治疗后3个月VAS评分明显降低,血浆GSH-Px、SOD水平升高,MDA水平降低(P0.05);2组治疗后及治疗后3个月比较,热补针法组VAS评分低于西药组,GSH-Px、SOD、MDA水平改善优于西药组(P0.05)。结论热补针法治疗RA风寒湿阻证患者疗效显著,可明显减轻疼痛症状,提高机体抗氧化损伤能力。     

热补针法对胃溃疡大鼠胃窦粘液细胞超微结构的影响

目的：探讨慢性胃溃疡胃窦粘液细胞超群同结构的改变及针刺手法的影响。方法：采用醋酸浸渍法造成大鼠慢性胃溃疡模型，观察溃疡周边粘液细胞超微结构的变化。结果：与对照组比较，模型组粘液细胞内无或仅少数见稀少粘原颗粒，线粒体肿胀或固缩，内网高度扩张，低倍镜下在核周围形成大量空泡，高倍镜下与核周间隙相勇，细胞间隙增宽，治疗后上述病理改变得到明显改善并基本恢复正常，结论：慢性胃溃疡时胃窦胃粘液细胞的超微结构发生明显病理改变，针对对其有较好的治疗作用，热补针法疗效优于捻转补法。     

热补针法对类风湿关节炎寒证家兔膝关节滑膜组织嘌呤能离子通道型受体7、Nod样受体蛋白3及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1表达的影响

目的:观察热补针法对类风湿关节炎(RA)寒证家兔膝关节滑膜组织嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)表达的影响,探讨热补针法治疗RA的机制。方法:新西兰大白兔随机分为正常组、模型组、平补平泻组、热补针法组、拮抗剂组,每组6只。采用卵蛋白联合弗氏完全佐剂诱导及低温冷冻法复制RA寒证模型。热补针法组及平补平泻组分别于“足三里”施以相应的针刺手法,留针30 min, 1次/d,治疗7 d;拮抗剂组腹腔注射A438079 (2.5 mg/kg),1次/d,治疗7 d。运用彩色多普勒超声诊断仪观察各组家兔关节腔积液、滑膜厚度及内部血流信号;HE染色法观察各组家兔膝关节滑膜组织形态学改变;荧光定量PCR法检测各组家兔膝关节滑膜组织P2X7R、NLRP3、Caspase-1 mRNA的相对表达量;Western blot法检测各组家兔膝关节滑膜组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组膝关节滑膜增厚,线状及点状血流信号增多,关节积液明显,滑膜被覆细胞肿...     

风湿祛痛胶囊对类风湿关节炎滑膜Akt和MAPK信号通路的影响

目的:观察风湿祛痛胶囊(FSQTC)对蛋白激酶B(Akt)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,以探讨其抑制类风湿关节炎(RA)滑膜血管新生的机制。方法:采用SD大鼠诱导建立胶原诱导性关节炎(CIA)模型,灌胃给予FSQTC低、中、高剂量(0. 25,0. 5,1 g·kg~(-1)) 19 d后,取膝关节滑膜组织备用;血管内皮细胞生长因子(VEGF,20μg·L~(-1))诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC),肿瘤坏死因子-α(TNF-α,20μg·L~(-1))体外诱导人RA成纤维样滑膜细胞系MH7A,分别加入不同质量浓度FSQTC(0. 02,0. 1,0. 5μg·L~(-1))作用后,取细胞备用。分别提取滑膜组织以及MH7A和HUVEC两种细胞中的蛋白,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化Akt(p-Akt),p-p38 MAPK,p-细胞外信号调节激酶(ERK),p-氨基末端激酶(JNK)的蛋白表达水平。结果:CIA模型组大鼠关节滑膜中p-Akt,p-p38 MAPK,p-ERK和p-JNK的表达水平均较正常组显著升高(P 0. 01),经0. 25,0. 5,1 g·kg~(-1)·d~(-1)的FSQTC治疗后降低(P 0. 05,P 0. 01);与空白组比较,VEGF或TNF-α能分别诱导p-Akt,p-p38 MAPK,p-ERK和p-JNK在MH7A或HUVEC细胞中的异常升高(P 0. 01),0. 02,0. 1,0. 5μg·L~(-1)的FSQTC能明显降低p-Akt,p-p38 MAPK,p-ERK,p-JNK的表达水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:FSQTC能负调节Akt和MAPK信号通路在CIA大鼠滑膜组织、体外培养的血管内皮细胞和成纤维滑膜细胞中的异常活化,这可能与其对RA滑膜血管新生的抑制作用有关。     

基于TNF-α-HIF-1α-iNOS-NO信号通路探讨大黄素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的影响

目的研究大黄素对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)肿瘤坏死因子ɑ(TNF-α)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)以及一氧化氮(NO)表达的影响,探讨大黄素通过调控TNF-α-HIF-1α-iNOS–NO信号通路干预RA的机制。方法培养来源于人的RA-FLS与正常-FLS,设立正常组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性组。正常组用正常-FLS,其余5组用RA-FLS。高/中/低剂量组分别予80μmol·L~(-1)、40μmol·L~(-1)及20μmol·L~(-1)的大黄素溶液。阳性组予0.1mg·L~(-1)地塞米松溶液。药物干预24h、48h、72h、96h,用HE染色法观测滑膜细胞的生长和形态学改变;用ELISA法与硝酸还原酶法检测滑膜细胞培养液中TNF-α、HIF-1α、iNOS及NO表达变化;用Western blot法检测滑膜细胞中TNF-α、HIF-1α以及iNOS表达水平。结果 HE染色结果显示:以梭形为主的滑膜细胞均贴壁生长,卵圆形胞核居于细胞中央,RA-FLS明显比正常-FLS增长迅速。ELISA与硝酸还原酶法检测结果显示:RA-FLS细胞培养液中TNF-α、HIF-1α、iNOS以及NO表达在24h、48h、72h、96h均明显高于正常组(P0.05),不同浓度大黄素不同时间段给药后TNF-α、HIF-1α、iNOS以及NO表达均有降低,尤其是给药80μmol·L~(-1),干预96h下降最多(P0.05)。Western blot检测结果显示:药物干预96h后,大黄素组和阳性组RA-FLS细胞中TNF-α、HIF-1α及iNOS蛋白表达较之模型组均有减少,其中高剂量组下降幅度最大,低剂量组下降幅度最小,差异有统计学意义(P0.05)。结论大黄素对RA具有治疗作用,其机制可能与抑制RA-FLS TNF-α-HIF-1α-iNOS–NO信号通路开放有关。     

通痹灵对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞MCP-1 mRNA表达的影响

目的:探讨中药复方制剂通痹灵(以桂枝芍药知母汤为基础)对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞单核细胞趋化蛋白 1(MCP-1)mRNA表达的影响。方法:采用半定量RT-PCR法测定佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞MCP-1 mRNA表达水平。结果:通痹灵明显抑制了佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞MCP-1 mRNA的表达,提示通痹灵治疗类风湿性关节炎的分子机制与抑制MCP-1基因表达有关。     

苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞JAK-STAT信号通路的影响

目的 观察苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞JAK-STAT通路的影响.方法 苦参碱和/或JAK-STAT途径特异性抑制剂AG490培养肝癌细胞SMMC-7721,MTT法检测苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞株增殖的影响,RT-PCR法检测苦参碱对SMMC-7721细胞stat3、 stat5 mRNA表达的影响,Western blotting法检测苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达的影响.结果 苦参碱对肝癌细胞增殖的抑制率呈剂量和时间依赖性.苦参碱能下调stat3、 stat5 mRNA表达水平(P<0.05、0.01),降低STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量(P<0.05、0.01).AG490作用于SMMC-7721细胞后,star3、 stat5 mRNA和STAT3、STAT5蛋白的表达量与对照组比较无显著差异(P>0.05),P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量与对照组比较显著降低(P>0.05、0.01).与AG490组比较,AG490 苦参碱组stat3、 stat5 mRNA的表达量显著降低(P<0.05),STAT3、STAT5蛋白表达量显著降低(P>0.05),P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量无显著差异(P>0.05).与苦参碱组比较,AG490 苦参碱组stat3、 stat5 mRNA的表达量无显著差异(P>0.05),STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量无显著差异(P>0.05).结论 苦参碱能下调stat3、 stat5 mRNA表达水平,因而能降低STAT3、STAT5蛋白表达水平,抑制细胞JAK-STAT信号转导通路,从而抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖.     

中药对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞的影响

类风湿关节炎(RA)是以关节滑膜为主要靶组织的炎症性自身免疫疾病。其病因病机不明,但研究表明成纤维滑膜细胞(FLS)是关节滑膜组织的主要细胞,在RA发生发展中扮演重要角色。尽管随着生物制剂的产生,RA有了较好的治疗方法,但仍不能终止病情。通过对相关文献的复习和基础实验的总结,发现中药直接以FLS为治疗靶点可能是治疗类风湿关节炎的新策略。通过总结FLS在RA中的发病机制,探讨中药对RA-FLS的治疗作用,为今后RA的实验研究及临床应用提供了新思路和依据。