同型半胱氨酸诱导THP-1单核细胞产生巨噬细胞炎性蛋白1α

为探讨同型半胱氨酸对人单核细胞表达和分泌巨噬细胞炎性蛋白 1α的影响并检测其活性 ,在体外培养的THP 1单核细胞培养基中加入终浓度为 0 .0 5mmol L、0 .1mmol L和 0 .2mmol L的同型半胱氨酸 ,孵育 8h ,或加入终浓度 0 .1mmol L的同型半胱氨酸 ,分别孵育 4、8及 16h ,用酶联免疫吸附法检测其培养基中的分泌性巨噬细胞炎性蛋白 1α。用改良Boyden小室微孔滤膜法检测THP 1单核细胞条件培养基中巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白对外周血单核细胞的趋化活性。结果发现 ,培养的THP 1单核细胞暴露于不同浓度或同一浓度不同孵育时间的同型半胱氨酸后 ,其分泌至条件培养基中巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白呈浓度和时间依赖性递增 (P <0 .0 1)。趋化实验表明 ,经同型半胱氨酸刺激的THP 1条件培养基引起单核细胞迁移距离 ( 83 .2± 4.8μm)明显大于未经同型半胱氨酸刺激的条件培养基组 ( 73 .2± 2 .3 μm)和随机移动组 ( 62 .4± 3 .5 μm)。方差分析显示 ,三组间均有显著性差异 (F =3 10 .70 ,P <0 .0 1)。在经同型半胱氨酸刺激的THP 1条件培养基中加入巨噬细胞炎性蛋白 1α抗体后 ,单核细胞的移动距离较不含抗体组明显缩短 (P <0 .0 1)。结果提示 ,同型半胱氨酸能诱导THP 1单核细胞表达有趋化活性的分泌性巨噬细胞炎性蛋     

巴西日圆线虫诱导小鼠T辅助细胞的变化对伯氏疟原虫感染的影响

[目的 ]观察预感染巴西日圆线虫后 ,小鼠抵御伯氏疟原虫攻击感染的能力 ,并着重探讨T辅助细胞亚型在感染过程中的变化以及这些变化对宿主免疫力和预后的影响。 [方法 ]皮下注射巴西日圆线虫感染C5 7BL/ 6小鼠 ,建立线虫预感染模型 ,于 3wk后腹腔注射伯氏疟原虫ANKA株攻击感染小鼠。观察每天原虫血症变化情况 ,并于疟原虫感染后 0、3和 9d取脾 ,提取RNA ,用RT PCR扩增法定性观察细胞因子IFN γ和IL 4的变化。[结果 ]与对照组相比 ,实验组感染疟原虫后 ,原虫血症的峰值出现时间明显延长 ,小鼠对疟原虫感染的耐受程度以及小鼠生存时间显著提高。实验组Th2型细胞合成IL 4的量在疟原虫感染 0d时明显高于对照组 ;而在 3与 9d时两组均异常升高。Th1型细胞合成IFN γ的量在疟原虫感染后 3d时实验组高于对照组 ,但在 9d时实验组IFN γ有所下降。 [结论 ]预感染巴西日圆线虫的小鼠具有较高的抗感染能力。但在攻击感染疟原虫后Th2型细胞被提前激活而抑制了Th1型细胞的正常功能 ,最终仍导致小鼠死亡。     

弓形虫感染对THP-1巨噬细胞极化影响的研究

目的 探讨弓形虫感染对体外诱导的人外周血单核细胞(Human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)极化特点的影响。方法 用佛波酯(PMA)诱导THP-148 h使之由悬浮的单核细胞诱导为贴壁的巨噬细胞,体外选择不同时间点感染弓形虫,用Diff染色分析弓形虫在细胞内的增殖情况。Western blot检测极化相关蛋白,Q-PCR检测mRNA的表达情况。结果 成功诱导得到贴壁的巨噬细胞模型,感染弓形虫后,M1型巨噬细胞标志性蛋白iNOS 及M2型巨噬细胞标志型蛋白Arg-1 36 h表达量与对照组差异明显(t=10.23,P<0.05)。Q-PCR的结果显示不同的处理组IL-1、IL-12、iNOS和TNF-α逐渐减少,而IL-10、Arg-1呈逐渐增加,到36 h达到顶峰(t=9.587,P<0.05)。结论 弓形虫RH株感染THP-1巨噬细胞后可以在胞内生长增殖,THP-1细胞感染后向M2型巨噬细胞方向极化。     

姜黄素对不同亚型THP-1来源巨噬细胞表达炎症因子的抑制作用

目的 探讨姜黄素对M0、M1和M23种亚型巨噬细胞表达炎症因子的影响。方法 构建M0型/M1型/M2型巨噬细胞模型以及不同浓度梯度的姜黄素干预组和对照组,通过实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附方法分别测定不同分组中TNFα、IL-6以及IL-123种炎症因子的表达。结果 实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,姜黄素对3种亚型巨噬细胞TNFα、IL-6以及IL-12 mRNA的表达均具有明显抑制作用(P<0.01),酶联免疫吸附实验也证实姜黄素能抑制以上3种细胞炎症因子的分泌水平(P<0.01)。结论 姜黄素对M0、M1和M23种亚型的巨噬细胞炎症因子表达水平均有不同程度的抑制作用,且呈剂量依赖关系。     

阴道毛滴虫巨噬细胞迁移抑制因子对THP⁃1巨噬细胞的作用

目的　探讨阴道毛滴虫分泌的巨噬细胞迁移抑制因子（TvMIF）对THP⁃1巨噬细胞的作用。方法　原核表达重组TvMIF蛋白并纯化,鉴定后去内毒素。采用不同浓度（0、1、5、10、50 ng/mL和100 ng/mL）重组TvMIF蛋白作用于THP⁃1巨噬细胞,用细胞计数试剂盒（cell counting kit,CCK）⁃8检测重组TvMIF蛋白对THP⁃1巨噬细胞的毒性,采用流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,采用实时荧光定量PCR技术（real⁃time fluorescence quantitative PCR,qPCR）检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白（nucleotide⁃binding oligomerization domain⁃like receptor protein 3,NLRP3）、caspase⁃1、白细胞介素1β（interleukin⁃1β, IL⁃1β）、IL⁃18 mRNA表达水平变化,采用Western blotting技术检测THP⁃1巨噬细胞中caspase1、NLRP3、消化道皮肤素D（gasdermin D,GSDMD）及GSDMD蛋白氨基端裂解片段（gasdermin D N⁃terminal,GSDMD⁃NT）、pro⁃IL⁃1β蛋白表达水平变化。结果　成功表达并纯化获得分子量为15.5 kDa的重组TvMIF蛋白。内毒素检测结果显示,已去除重组TvMIF蛋白的内毒素（浓度< 0.1 EU/mL）,可用于蛋白功能研究。流式细胞术检测结果显示,当重组TvMIF蛋白浓度≤ 10 ng/mL时可促进THP⁃1巨噬细胞凋亡,当TvMIF浓度为5 ng/mL时凋亡现象最为明显,当重组TvMIF蛋白浓度为50、100 ng/mL时可抑制THP⁃1巨噬细胞凋亡。当TvMIF蛋白浓度为1 ng/mL时,ROS含量明显升高。qPCR检测结果显示,1 ng/mL 重组TvMIF蛋白作用THP⁃1巨噬细胞8 h后,caspase⁃1、NLRP3、IL⁃18和IL⁃1β mRNA水平均显著上升。Western blotting检测结果显示,1 ng/mL 重组TvMIF蛋白刺激THP⁃1巨噬细胞后,caspase⁃1和NLRP3蛋白表达量显著上升,pro⁃IL⁃1β、GSDMD和GSDMD⁃NT蛋白表达量显著增加;用NLRP3炎症小体特异性抑制剂MCC950预处理后,GSDMD和GSDMD⁃NT蛋白表达水平显著下降。结论　高浓度重组TvMIF蛋白抑制THP⁃1巨噬细胞凋亡;低浓度重组TvMIF蛋白激活NLRP3炎症小体,促进THP⁃1巨噬细胞焦亡。     

伊维菌素抗巴西日圆线虫感染及对犬钩虫卵和杆状蚴的药效研究

目的　为提供国产伊维菌素临床应用的科学依据,本文就其抗巴西日圆线虫感染及对犬钩虫卵和杆状蚴的作用进行了体内及体外的实验研究。方法　取巴西日圆线虫卵用滤纸培养法进行体外培养,收集感染性幼虫经皮接种Ｗｉｓｔａｉ 大鼠;采用水洗沉淀法收集钩虫卵,通过试管滤纸法培养杆状蚴。结果　伊维菌素投与量在０－１ｍｇ／ｋｇ ～０－３ｍｇ／ｋｇ,对中度感染巴西日圆线虫的大鼠具有明显的驱虫效果,０－１ｍｇ／ｋｇ 时的驱虫率为９２－０７ ±５－６６ ％ ,０－３ｍｇ／ｋｇ 时的驱虫率为１００％ 。而左旋咪唑投与量在１５ｍｇ／ｋｇ 时,才能取得与伊维菌素相同的驱虫效果。伊维菌素在０－００５ｍｇ／ｍｌ～０－１ｍｇ／ｍｌ 的范围内均有杀灭钩虫卵的作用,而相同剂量的左旋咪唑未见有此作用。然而伊维菌素在０－００１ｍｇ／ｍｌ～０－３ｍｇ／ｍｌ 剂量范围内对犬钩虫杆状蚴虽有一定的杀灭作用,但其效果低于相同浓度的左旋咪唑。结论　进一步揭示伊维菌素对某些寄生虫具有高效的杀灭作用。     

巨噬细胞炎性蛋白-1与1型糖尿病

巨噬细胞炎性蛋白-1(MIP-1)是一种趋化因子,与受体结合后,可以发挥趋化和促进炎症的生物学作用,能引起多种炎症性疾病。研究表明,MIP-1α可以导致破坏性胰岛炎以及自发性1型糖尿病,而MIP-1β则对1型糖尿病起保护性作用。本文对MIP-1的结构、功能及其在1型糖尿病中的作用机制进行综述。     

活动性肺结核患者单核来源巨噬细胞极化能力的研究

目的：研究活动性肺结核患者单核来源巨噬细胞(monocyte-derived macrophages, MDM)向 M1型和 M2型巨噬细胞极化的能力。方法采集活动性肺结核患者和健康人外周血,分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),采用磁珠分选技术纯化 CD14+单核细胞,体外分化为 M0型巨噬细胞,然后分别用细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和 IL-4刺激巨噬细胞向 M1和 M2型巨噬细胞极化,最后流式细胞术检测 M1型 MDM 表面 CD80、CD86和 HLA-DR 的表达,M2型 MDM 表面 CD163和 CD206的表达。结果与健康人相比,活动性肺结核患者 M1型 MDM 表面 CD80和 CD86的表达显著降低(t =2.359,P <0.05;t =2.816,P <0.01),而 M2型 MDM 表面 CD163和 CD206的表达显著升高(t =2.368,P <0.05;t =2.994,P <0.01)。结论活动性肺结核患者 MDM 向 M1型巨噬细胞极化能力减弱,而向M2型巨噬细胞极化能力增强。     

基于体外巨噬细胞极化作用进行异种血管组织脱细胞评价的实验研究

目的 通过体外巨噬细胞极化诱导的实验方法,客观评价异种血管组织进行除垢剂脱细胞处理后的纯度和免疫原性。方法 对新鲜牛主动脉采用3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸内盐[3-(3-Cholamidopropyl)dimethylammonium)-1-propanesulfonate,CHAPS]和十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）的双除垢剂脱细胞方法进行脱细胞处理,其中SDS脱细胞时间设置为24 h和36 h两组,定量检测脱细胞处理后组织材料DNA浓度。进一步将脱细胞血管基质材料消化为溶液状态,在体外对SD大鼠来源的巨噬细胞进行刺激诱导。采用定量聚合酶链反应（quantitative polymerase chain reaction,qPCR）分析巨噬细胞表面标记物诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）、CD80、CD206和CD163,以及分泌的细胞因子白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-10和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,...     

重组旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂体外诱导骨髓来源巨噬细胞极化的研究

目的探讨重组旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制(rTs-Cys)对体外诱导骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)极化的调控作用。方法获取BMDMs并培养至条件培养基中,7d后获取成熟BMDMs。将此BMDMs分为阴性对照组(A组)、阳性对照组(B组)、单独重组蛋白组(C组)和蛋白共培养组(D组),A组细胞给予10 ng/mLγ-干扰素(IFN-γ)和100 ng/mL脂多糖(LPS)刺激,B组细胞给予10 ng/mL白细胞介素(IL)-4和10 ng/mL IL-10刺激,C组细胞给予1_μg/mL rTs-Cys干预,D组细胞给予1μg/mL rTs-Cys、10 ng/mL IFN-γ及100 ng/mL LPS刺激。干预24 h后,收集细胞及培养上清,采用流式细胞术检测各组细胞中F4/80^+、CD11b^+、CD206^+和CD11c^+细胞比例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10及转化生长因子-β(TGF-β)水平,采用免疫荧光染色鉴定CD86^+、CD206^+表型。结果流式细胞术检测结果显示,4组F4/80^+CD11b^+CD11c^+细胞比例差异具有统计学意义(F=46.184,P<0.001),C组及D组F4/80^+CD11b^+CD11c^+细胞比例均较A组显著降低(P均<0.001);4组F4/80^+CD11b^+CD206^+细胞比例差异具有统计学意义(F=11.032,P<0.01),C组及D组F4/80^+CD11b^+CD206^+细胞比例均较A组显著升高(P均<0.01)。免疫荧光染色显示,C组及D组CD206^+表达水平较A组显著上调,两组CD86^+表达水平较A组下降。ELISA检测结果显示,4组细胞培养上清液中IL-6(F=3.950,P<0.001)和TNF-α水平(F=205.827,P<0.001)差异均有统计学意义;C组及D组IL-6和TNF-_α水平均较A组显著下降(P均<0.05)。4组细胞培养上清液中IL-10(F=8.274,P<0.001)和7GF-β水平(F=13.559,P<0.01)差异均有统计学意义;C组IL-10、TGF-β水平较A组显著增加(P均<0.01);D组TGF-β水平较A组显著增加(P<0.05),但IL-10水平较A组无明显变化(P>0.05)。结论rTs-Cys体外能诱寻BMDMs向抗炎特性的M2方向极化,并抑制M1型巨噬细胞活化。     

Type 2-biased expression of cytokine genes in lung granulomatous lesions induced by Nippostrongylus brasiliensis infection

Infections with helminthic parasites occasionally induce pulmonary diseases with possible involvement of immunological mechanisms. In rats infected with the nematode Nippostrongylus brasiliensis, pulmonary granulomatous lesions develop and persist after the larvae have migrated through the lungs. To determine the pathogenesis of this lesion, we examined cytokine gene expression in the lungs using RT-PCR and in situ hybridization. Two weeks after infection, when fully developed lesions appeared, levels of IL-3 and of type2 cytokines IL-4, IL-5, IL-6 and IL-13 gene expression were markedly enhanced in whole lung homogenates. Those of IL-2 and IFN-gamma were also slightly increased 2 weeks postinfection. IL-12 mRNA level did not change after 2 weeks but was slightly increased after 4 weeks. Levels of IL-10 and proinflammatory cytokine TNF gene expression did not show significant changes, although a slight increase was observed in IL-1beta message after 2 weeks. In situ hybridization studies showed that lung granulomatous lesions were composed mainly of lymphoid cells expressing IL-3, IL-4 and IL-13 mRNA, but not IFN-gamma mRNA. IL-5 mRNA-expressing cells were fewer in number than these cells. RMCP II immunohistochemistry revealed that mast cells increased in number in the lung granulomas. From these results, it was concluded that the nematode infection-associated lung granuloma was a type 2 lesion.     

Polarization of macrophages induced by Toxoplasma gondii and its impact on abnormal pregnancy in rats

Toxoplasma gondii infection is the leading cause of fetal intrauterine growth retardation among the five kinds of pathogens termed as TORCH, including Toxoplasma, Rubella virus, Cytomegalo virus, herpes virus and others during pregnancy. Pathogens infect the fetus through the placenta. T. gondii infection may result in congenital toxoplasmosis, miscarriage, stillbirth, and preemie, and increase pregnancy complications. Adaptive immune response induced by T. gondii infection stimulates T cells and macrophages to produce high levels of cytokines. Physiologically, the microenvironment of pregnancy was Th2-dominant. Here we set up a pregnant Sprague-Dawley rat model, and reported the polarization of macrophages induced by genotype Chinese 1 strain (Wh6) of Toxoplasma, and its adverse impact on pregnancy. The results showed that Wh6 infection pre- or in-gestation both led to abnormal pregnancy outcomes. Peritoneal macrophages in pre-gestation infection were polarized toward classically activated macrophages (M1), while in-gestation infection drove macrophages to polarize toward M2 activation. The Th2-dominant immune response in pregnant rat somewhat inhibits the excessive bias of the macrophages toward M1, and partially, toward M2. Infection of pre- and in-gestation may alter the physiological immune microenvironment in pregnant rats, giving rise to abnormal pregnancy outcomes.     

慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者外周血巨噬细胞极化和TXNIP/NLRP3水平与预后的关系探讨

目的 探讨慢加急性乙型肝炎肝衰竭(HBV-ACLF)患者外周血巨噬细胞极化和外周血单个核细胞(PBMCs)硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平变化。方法 2019年6年～2020年6月我院收治的HBV-ACLF患者57例和慢性乙型肝炎(CHB)患者43例,使用流式细胞仪检测外周血M1/M2型巨噬细胞比率,分离PBMCs,采用实时荧光定量RT-PCR法检测TXNIP、NLRP3和半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)mRNA水平,采用ELISA法检测血清白介素-6(IL)-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果 HBV-ACLF组M1型巨噬细胞比率和M1/M2细胞比值分别为(3.5±0.4)%和(1.2±0.2),显著高于CHB组【分别为(2.1±0.2)%和(0.6±0.1),P<0.05】,而M2型巨噬细胞比率为(2.5±0.3)%,显著低于CHB组【(4.1±0.4)%,P<0.05】;HBV-ACLF组血清IL-6和TNF-α水平分别为(37.9±4.2)ng/L和(2.3±0.2)pg/mL,显著...     

血红素加氧酶1在高糖和糖基化终产物致人单核细胞氧化应激中的作用

目的探讨血红素加氧酶1（HO-1）高表达在对抗高糖和糖基化终产物（AGEs）诱导的人单核细胞（THP-1）氧化应激中的作用。方法THP-1细胞分为对照（NC）组、GLU＋AGEs组、钴原卟啉（CoPP）＋GLU4-AGEs组和CoPP组4组,孵育24h后收集细胞及培养液上清,检测各组细胞的活性氧（ROS）产量、培养液上清丙二醛（MDA）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平及HO-1表达。结果GLU4-AGEs组的ROS产量、MDA和TNF-α水平均显著高于NC组（P〈0．05）;CoPP4-GLU4-AGEs组的ROS产量和MDA水平均显著低于GLU4-AGEs组（P〈0．05）。GLU4-AGES组的HO-1基因和蛋白表达均显著高于NC组（P％0．01）,CoPP4-GLU＋AGEs组的HO-1蛋白表达显著高于GLU4-AGEs组（P〈0．01）。结论CoPP通过诱导HO-1蛋白高表达拮抗高糖和AGEs导致的THP-1细胞氧化应激,通过诱导HO-1高表达可能拮抗糖尿病所致单核细胞氧化应激。     

葛根素对巨噬细胞表达C-反应蛋白的影响

目的:观察葛根素对巨噬细胞分泌和表达C-反应蛋白(CRP)的影响。方法:将人单核细胞系THP-1来源的巨噬细胞与不同浓度的葛根素进行培养,采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附测定(ELISA)方法分别检测巨噬细胞CRP基因和蛋白质表达。结果:葛根素对人单核细胞系THP-1来源的巨噬细胞CRP及其蛋白质表达呈浓度依赖性,随着葛根素的浓度的增加,CRPmRNA及其蛋白质表达逐渐减少。结论:葛根素可以通过调节巨噬细胞表达CRP途径,发挥稳定动脉粥样硬化斑块的作用。     

露蜂房蛋白体外诱导K562细胞凋亡的作用及其机制

目的探讨露蜂房蛋白(NVP)体外诱导人红白血病细胞系K562细胞凋亡的作用及其机制。方法将露蜂房蛋白NVP1、NVP2、NVP3及NVP4分别作用于K562细胞,采用细胞培养、Hoechst 33258荧光染色技术观察K562细胞形态变化;采用免疫组织化学方法检测K562细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cas-pase-3)表达。结果NVP1~NVP4作用后K562细胞生长缓慢,数量减少,胞质内颗粒增多,并出现大量空泡,细胞碎片逐渐增多;Hoechst33258荧光染色显著增强,染色质呈致密浓染的块状或粗颗粒状荧光。K562细胞cas-pase-3蛋白表达明显增加,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05)。结论NVP能抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡;其作用机制可能是使caspase-3蛋白表达升高和活化。     

自噬相关基因LC3和Beclin1在大鼠急性坏死性胰腺炎中的表达和意义

目的:研究大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)胰腺组织LC3、Beclin1的表达,并探讨其在ANP中的作用及意义.方法:36只SD大鼠随机分为假手术(SO)组和ANP组,ANP组采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠诱导制作大鼠ANP模型,SO组开腹后翻动胰腺后关腹,各组再分3、6和12h3个不同时间点.观察各组大鼠血清炎症因子及胰腺的病理改变,运用免疫组织化学法检测各组大鼠在不同时间点胰腺组织LC3和Beclin1的变化.结果:ANP组血浆淀粉酶(U/L)、TNF-α(μg/L)较SO组明显增加(血浆淀粉酶:3h:4936±1207vs1447±355;6h:5464±768vs1513±333;12h:6139±710vs1539±231;TNF-α:3h:111.24±21.86vs56.14±7.69;6h:107.55±33.05vs57.13±11.30;12h:108.24±24.83vs58.60±9.54,均P<0.05),且ANP组大鼠胰腺病理改变随着时间延长加重.正常大鼠胰腺腺泡细胞LC3、Beclin1低表达,大鼠ANP3h后胰腺细胞LC3、Beclin1表达开始增多,在6和12h呈强表达.结论...