NLRP3炎症小体信号通路在抗磷脂综合征中的作用

目的观察核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎性小体信号通路相关分子在抗磷脂综合症(APS)中的表达水平,并初步探讨其临床意义。方法选取50例APS患者作为研究对象,选取同期健康体检者50例为对照组,收集两组的血液样本,分离外周血单个核细胞,用实时荧光定量PCR方法检测NLRP3炎症小体的mRNA表达情况,用ELISA方法检测抗心磷脂抗体(aCL)、抗β2糖蛋白I抗体、白细胞介素-18(IL-18)和IL-1β的血清水平,同时检测两组血清中的补体、D二聚体及狼疮抗凝物(LA),并分析抗体滴度与NLRP3、下游炎症因子表达水平的相关性。结果 APS组患者C3、C4水平低于对照组,D二聚体水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。APS患者PBMC中的NLRP3 mRNA表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),ELISA法中NLRP3、半胱天冬酶1(caspase-1)、IL-18、IL-1β表达水平也高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。APS患者NLRP3 mRNA的表达水平与caspase-1呈正相关关系(r=0.921,P0.05);抗心磷脂抗体滴度与NLRP3炎症小体、IL-18、IL-1β呈正相关关系(r=0.598、0.521、0.428,P0.05)。结论 NLRP3炎症小体信号通路相关分子参与APS的发病过程且表达水平与APS严重程度密切相关。     

NLRP3炎性小体在慢性阻塞性肺疾病患者机体炎症反应中作用的研究

目的研究NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体及其下游炎症因子在慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)患者和健康人之间表达的差异,揭示NLRP3炎性小体在慢阻肺发病机制中的可能作用。方法选取2016年11月至2017年5月住院的40例慢阻肺患者纳入急性加重期组,其经过治疗进入稳定期后纳入稳定期组,选取40例健康体检者纳入对照组。采集各组一般资料和外周血,荧光定量PCR法测定外周血单个核细胞中NLRP3 m RNA水平,酶联免疫法检测血浆白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果急性加重期组慢阻肺患者的NLRP3 m RNA、IL-18和IL-1β水平显著高于稳定期组[2.11±0.77,12.79(7.10,43.13)pg/ml,17.02(8.36,52.21)pg/ml比1.60±0.44,10.66(6.32,18.59)pg/ml,13.34(7.07,16.89)pg/ml,P0.05]。急性加重期组慢阻肺患者的NLRP3 m RNA、IL-18和IL-1β水平显著高于对照组[2.11±0.77,12.79(7.10,43.13)pg/ml,17.02(8.36,52.21)pg/ml比1.00±0.49,6.29(4.73,7.93)pg/ml,5.93(4.81,9.67)pg/ml,P0.05]。稳定期组慢阻肺患者的NLRP3 m RNA、IL-18和IL-1β水平显著高于对照组[1.60±0.44,10.66(6.32,18.59)pg/ml,13.34(7.07,16.89)pg/ml比1.00±0.49,6.29(4.73,7.93)pg/ml,5.93(4.81,9.67)pg/ml,P0.05]。急性加重期组血浆IL-18水平和白细胞计数、中性粒细胞百分比呈正相关(r=0.372,P0.05;r=0.386,P0.05);急性加重期组NLRP3 m RNA表达量和稳定期组NLRP3 m RNA表达量均与CAT评分正相关(r=0.387,P0.05;r=0.399,P0.05)。结论 NLRP3炎性小体参与慢阻肺患者的机体炎症反应。     

NLRP3炎症小体介导的巨噬细胞极化在ITP中的作用

目的 探讨在免疫性血小板减少症(ITP)中NLRP3炎症小体的活化水平及抑制NLRP3介导的炎症小体活化对M1型巨噬细胞极化与免疫功能的影响。方法 RT-qPCR法检测ITP患者(ITP组)和健康对照组(Control组)外周血单个核细胞(PBMC)与CD14⁺单核细胞中NLRP3 mRNA的表达；ELISA法检测两组血清中IL-1β与IL-18的含量；Pearson相关系数分析NLRP3、IL-1β与IL-18表达水平与血小板计数的相关性；将ITP患者来源的M0型巨噬细胞(MDMs)分为4组：IgG对照组(IgG组),MCC950处理组(MCC950组),LPS、IFN-γ与IgG处理组(LPS+IFN-γ+IgG组)和LPS、IFN-γ与MCC950处理组(LPS+IFN-γ+MCC950组);RT-qPCR与Western blot检测4组MDMs中M1型巨噬细胞标志物CD86、iNOS、MCP-1 mRNA与蛋白水平；Western blot检测各组MDMs中NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、cleaved caspase-1与IL-β的表达；...     

哮喘患儿外周血单个核细胞中NLRP3炎症小体及血清中IL-1β和IL-18表达变化及其意义

目的：观察哮喘患儿外周血单个核细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）炎症小体表达水平及血清中下游因子白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素18（IL-18）水平变化,探讨其对患儿病情评估的意义。方法：176例哮喘患儿根据临床表现分为急性发作期组（n=91）、慢性持续期组（n=49）和缓解期组（n=36）,同期从门诊体检中心选取健康儿童60名作为对照组,采用肺功能仪检查各组研究对象肺功能。采用实时荧光定量PCR法检测各组研究对象外周血单个核细胞中NLRP3、含有CARD结构域的凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase-1） mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附（ELISA）实验检测各组研究对象血清中IL-1β和IL-18水平。结果：与对照组比较,急性发作期组、慢性持续期组和缓解期组哮喘患儿第1秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV1%）和第1秒用力呼气容积所占肺活量比值（FEV1/FVC）均降低,且急性发作期组<慢性持续期组<缓解期组,组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;哮喘患儿外周血单个核细胞中NLRP3、ASC和Caspase-1 mRNA表达水平及血清中IL-1β和IL-18水平均高于对照组（P<0.01）;急性发作期组患儿外周血单个核细胞中NLRP3、ASC和Caspase-1 mRNA表达水平及血清中IL-1β和IL-18水平高于慢性持续期组和缓解期组（P<0.05）,且慢性持续期组患儿高于缓解期组（P<0.05）。Pearson相关分析,哮喘患儿外周血单个核细胞中NLRP3 mRNA表达水平与ASC、Caspase-1 mRNA表达水平和血清中IL-1β、IL-18水平均呈正相关关系（P<0.05）,而与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）;ASC mRNA表达水平与Caspase-1 mRNA表达水平和血清中IL-1β、IL-18水平呈正相关（P<0.05）,而与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）;Caspase-1 mRNA表达水平与血清中IL-1β和IL-18水平呈正相关关系（P<0.05）,而与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）;血清中IL-1β水平与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）;IL-18水平与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）。结论：哮喘患儿外周血NLRP3炎症小体及下游因子IL-1β和IL-18水平升高,且与哮喘患儿的临床分期有关,NLRP3炎症小体通路可能促进了儿童哮喘的发病过程。     

多索茶碱联合定掌汤治疗AECOPD的效果及对NLRP3mRNA、TLR4-MyD88通路的影响

目的:探究多索茶碱联合定掌汤治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)的效果及对NL-RP3 mRNA、TLR4MyD88通路的影响。方法:选择AECOPD患者120例,随机分为两组(n=60)。对照组使用多索茶碱治疗,观察组在对照组基础上联合定掌汤定掌汤治疗。比较两组血气指标、肺功能指标,检测并比较两组血清白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-18(IL-18)以及外周血淋巴细胞NLRP3 mR-NA和TLR4MyD88通路相关蛋白表达水平。结果:观察组的有效率显著高于对照组(P<0.05)。治疗后两组血气指标均显著改善(P<0.05),观察组PaO_2高于对照组而和PaCO_2显著低于对照组(P<0.05)。治疗后两组肺功能指标均显著升高(P<0.05),观察组FEV1和PEF均显著高于对照组(P<0.05)。治疗后两组IL-1和IL-18均显著降低(P<0.05),观察组IL-1和IL-18均显著低于对照组(P<0.05)。治疗前两组NLRP3mRNA水平无显著差异(P>0.05),治疗后均显著降低(P<0.05),治疗后观察组外周血淋巴细胞NLRP3 mRNA水平显著低于对照组(P<0.05)。治疗前两组TLR4、MyD88蛋白水平比较无显著差异(P>0.05),治疗后均显著降低(P<0.05),治疗后观察组外周血淋巴细胞TLR4、MyD88蛋白水平显著低于对照组(P<0.05)。结论:定掌汤联合多索茶碱对AECOPD患者具有更好的临床疗效,可更好的改善血气指标和肺功能。定掌汤可显著的抑制淋巴细胞中TLR4-MyD88通路并下调NLRP3 mRNA的水平。     

牙周炎患者自身组织核酸对小鼠巨噬细胞中NLRP3 mRNA表达的影响及其意义

目的：检测牙周炎患者自身组织核酸刺激小鼠巨噬细胞后炎性相关因子NOD样受体蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶1（caspase-1）、白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素18（IL-18） mRNA表达水平,探讨牙周炎患者自身组织核酸对小鼠巨噬细胞中炎性相关因子的作用。方法：于慢性牙周炎患者翻瓣术中采集炎性牙周组织、于牙周组织健康患者冠延长术中采集健康牙周组织,分别提取组织总RNA逆转录成cDNA （cDNA质量浓度为1 mg·L^-1）。培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,分为对照组和实验组,分别加入上述提取的健康牙周组织cDNA （健康牙周组织）和炎症牙周组织cDNA （炎症牙周组织）共孵育。共孵育4、6和8h后,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组RAW264.7细胞中NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平。结果：显微镜下观察,小鼠巨噬细胞RAW264.7生长状态良好,细胞形态似圆形和多边形,胞浆透明,胞体丰满。与对照组比较,实验组在4、6和8h时RAW264.7细胞中NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,6 h时实验组RAW264.7细胞中NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平最高。结论：牙周炎患者自身组织核酸可促进小鼠巨噬细胞中炎性相关因子mRNA表达,牙周炎患者自身组织核酸对小鼠巨噬细胞的活化具有免疫调节作用。     

NLRP3、AIM2和CASP1基因在慢性阻塞性肺疾病急性加重发病中的作用

目的: 探讨固有免疫中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、黑素瘤缺乏因子2(AIM2)、半胱天冬酶1(CASP1)基因和白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)炎症因子在慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性发作期(AECOPD)患者体内的表达情况,阐明其作用机制。 方法: 收集健康对照组(12例)和AECOPD患者(20例)的痰液,分别进行痰处理,采用实时荧光定量PCR法检测NLRP3、AIM2和CASP1基因表达水平,通过ELISA法检测痰上清中的IL-1β和IL-18蛋白表达水平。 结果: 与健康对照组比较,AECOPD组患者NLRP3、AIM2和CASP1基因表达分别上调3.83、1.70和2.42 倍,NLRP3、AIM2和CASP1基因表达水平明显增高(P<0.01),AECOPD组患者痰上清中IL-1β和IL-18蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。 结论: NLRP3及AIM2炎性体参与AECOPD的病理过程,其作用机制可能与固有免疫活化有关。     

NLRP3-ASC-Caspase-1-IL-18/IL-1β-TGF信号通路与Ⅱ型糖尿病临床相关性研究

目的 探讨NLRP3-ASC-Caspase-1-IL-18/IL-1β-TGF 信号通路与初诊Ⅱ型糖尿病（T2DM）的临床相关性。方法 入选符合纳入标准的健康对照组30例及T2DM组40例,收集所有研究对象的一般临床资料,采用RT qPCR检测各组患者外周单个核细胞（PBMCs）中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 (NLRP3)炎性小体各组分mRNA 的表达水平,Western blot法检测其蛋白表达水平,并采用ELISA法测定各组患者空腹血浆白介素-1β（IL-1β）、白介素-18（IL-18）、转化生长因子(TGF)水平。结果 PBMCs中NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1（caspase-1）mRNA表达水平在T2DM组和对照组之间无显著性差异（P＞0.05）,但ASCmRNA在T2DM组与总胆固醇（TC）呈正相关(P＜0.05);Caspase 1mRNA在T2DM组与体重指数（BMI）呈正相关(P＜0.05)。PBMCs中NLRP3、ASC、Caspase-1表达水平及血浆IL-1β、IL-18、TGF水平在T2DM组和对照组之间有显著性差异(P＜0.05),且ASC在T2DM组与平均动脉压（MAP）、空腹血糖(FPG)、TC、IL-1β、IL 18呈正相关(P＜0.05);Caspase-1在T2DM组与吸烟、FPG、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、IL-1β呈正相关(P＜0.05);IL-1β在T2DM组与TGF 呈正相关(P＜0.05)。结论 以NLRP3炎性小体为中心的NLRP3-ASC-Caspase-1=IL-18/IL-1β-TGF信号通路可能在初诊T2DM的发生发展过程中发挥重要作用。     

NLRP3炎症小体通路在慢性阻塞性肺病发展中的作用研究

目的探讨平常固有免疫中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体通路在慢性阻塞性肺病（COPD）发展中的作用。方法选取94例COPD患者为研究对象,中度、重度、极重度分别31、33和30例。采集急性加重期和稳定期的外周血标本,采用荧光定量PCR检测外周血NLRP3、接头蛋白凋亡相关点样蛋白（ASC）、半胱天冬酶1（Caspase-1）、IL-1β、IL-18mRNA表达水平,采用ELISA法测定血清细胞因子IL-1β、IL-18浓度;并在稳定期测定肺功能,分析稳定期外周血炎症小体成分及下游分子mRNA表达水平与肺功能指标的相关性。结果不论是稳定期或急性加重期,重度、极重度组外周血NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18mRNA表达水平均明显高于中度组（均P＜0.05）,极重度组又明显高于重度组（均P＜0.05）;与稳定期比较,3组患者急性加重期均明显升高（均P＜0.05）。不论是稳定期或急性加重期,重度、极重度组血清IL-1β、IL-18浓度均明显高于中度组（均P＜0.05）,极重度组又明显高于重度组（均P＜0.05）;与稳定期比较,3组患者急性加重期均明显升高（均P＜0.05）。稳定期COPD患者外周血炎症小体成分及下游分子mRNA表达水平与FEV1占预计值、FEV1/FVC均呈负相关（均P＜0.01）。结论NLRP3炎症小体通路可能参与COPD反复急性加重、肺功能进行性下降的过程,与COPD进展密切相关。     

氧化应激介导NLRP3炎性反应小体对慢性阻塞性肺疾病的影响研究

目的 通过对慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）患者血清中氧化应激指标超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）浓度以及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide binding oligomerization domain like receptor protein 3,NLRP3） mRNA的表达量的检测,分析NLRP3、MDA、SOD、第1秒用力呼气容积占预计值百分比（forced expiratory volume in the first second% pred,FEV1% pred）之间的相关性,从而探讨氧化应激介导NLRP3炎性小体活化对COPD的影响。方法 选取2017年6月至2018年6月长沙市第一医院收治的COPD患者90例,其中慢性阻塞性肺疾病急性加重期（acute chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD）患者60名,AECOPD组患者根据肺功能分为重-极重组和轻-中组,每组30例,经治疗症状体征达到缓解期水平的COPD稳定期患者30名,另选取同期体检健康者30例作为对照组。比较AECOPD组、COPD稳定期组、对照组血清中MDA、SOD浓度、NLRP3 mRNA表达量与COPD患者血清中MDA和SOD浓度、外周血淋巴细胞NLRP3 mRNA表达量、FEV1% pred之间的相关性采用Pearson相关性分析。结果 血清中MDA浓度AECOPD组高于COPD稳定期组、COPD稳定期组高于健康对照组（P<0.05）;血清中SOD浓度AECOPD组低于COPD稳定期组、COPD稳定期组低于健康对照组（P<0.05）;外周血淋巴细胞中NLRP3 mRNA表达量AECOPD组高于COPD稳定期组、COPD稳定期组高于健康对照组（P<0.05）。AECOPD组血清中MDA浓度重-极重组高于轻-中组、轻-中组高于对照组（P<0.05）;AECOPD组血清中SOD浓度重-极重组低于轻-中组、轻-中组低于对照组（P<0.05）;AECOPD组外周血淋巴细胞NLRP3 mRNA表达量重-极重组高于轻-中组、轻-中组高于对照组（P<0.05）。Pearson相关性分析结果显示,COPD患者中血清MDA浓度与NLRP3 mRNA表达量呈正相关（r=0.64,P<0.05）;COPD患者中血清SOD浓度与NLRP3 mRNA表达量呈负相关（r=-0.90,P<0.05）;COPD患者FEV1% pred与NLRP3 mRNA表达量呈负相关（r=-0.78,P<0.05）。结论 氧化应激和NLRP3炎性反应小体参与COPD发病过程,氧化应激和NLRP3 mRNA表达量升高与COPD病情加重相关,氧化应激介导NLRP3炎性小体活化对COPD疾病进展有影响。