下调MiR-221对胃癌顺铂耐药细胞增殖及顺铂敏感性的影响及其相关机制

背景晚期胃癌(gastric cancer, GC)患者通常接受化疗作为主要治疗方法.然而,化疗的有效性受到GC细胞耐药性的限制.本研究旨在探讨microRNA-221(miR-221)在顺铂(cisplatin, DDP)耐药GC细胞中的生物学作用和潜在机制,以期为临床治疗提供参考.目的研究下调Mi R-221对GC DDP耐药细胞增殖及DDP敏感性的影响及相关机制.方法采用AGS和MGC-803细胞构建出DDP耐药AGS/DDP和MGC-803/DDP细胞. RT-qPCR检测GC及癌旁组织、DDP化疗敏感组织、DDP化疗耐药组织、GC细胞和GC DDP耐药细胞的miR-221表达水平;用LVmiR-221-shRNA慢病毒转染AGS/DDP和MGC-803/DDP细胞后,MTT检测细胞增殖以及对DDP的化学敏感性; Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;进行生物信息学分析以寻找miR-221的潜在靶基因,应用RT-qPCR和Western blotting检测细胞中CCND1的m RNA和蛋白表达.结果在GC组织和GC细胞细中miR-221明显上调,且DDP耐药组织和DDP耐药细胞中miR-221表达更高.下调miR-221抑制了AGS/DDP和MGC-803/DDP细胞增殖,促进了细胞凋亡和细胞对DDP的化学敏感性;CCND1是miR-221的直接靶基因,转染LV-miR-221-sh RNA抑制CCND1 mRNA和蛋白表达水平.结论下调miR-221可以抑制GC DDP耐药细胞增殖,促进其对DDP的化学敏感性,这一作用可能通过抑制靶基因CCND1表达来实现的.     

下调miRNA-214表达抑制胃癌SGC-7901/DDP细胞顺铂耐药、迁移和上皮间质转化

背景胃癌(gastric cancer, GC)是常见的消化系统肿瘤之一,而肿瘤化疗耐药是制约GC癌治疗效果的瓶颈,探索逆转GC化疗耐药机制对于GC的治疗具有重大意义.目的探讨敲低miR-214表达对GC细胞SGC-7901/DDP顺铂耐药性、迁移以及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)的影响,并讨论初步作用机制.方法采用Lipofectamine~(TM) 2000法转染miR-214inhibitor至SGC-7901/DDP细胞后,CCK-8法评估细胞对顺铂耐药性的改变;划痕试验检测细胞迁移能力;免疫印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cad)、波形蛋白(Vimentin)和N-钙黏蛋白(N-cad),以及NF-κB与Bcl-2蛋白表达水平.结果转染mi R-214 inhibitor后, SGC-7901/DDP细胞对顺铂耐药性明显降低(P0.05);且细胞迁移能力明显降低(P 0.05),E-cad蛋白表达显著升高(P 0.05), Vimentin与N-cad蛋白表达均显著降低(均P 0.05).另外,SGC-7901/DDP细胞中NF-κB与Bcl-2的表达明显降低(均P 0.05).结论下调mi R-214表达具有降低GCSGC-7901/DDP细胞对顺铂耐药性,抑制细胞迁移与EMT的作用.而这种作用可能与下调NF-κB与Bcl-2的表达有关.     

miR-10a-5p敲低通过靶向THBS2抑制胃癌细胞的生长和转移

背景在胃癌(gastric cancer, GC)的发病和进展中,已经发现许多miRNAs可发挥抑癌或促癌的作用.但miRNAs数量众多,在GC中仍有众多miRNAs的作用并不明确,因此,继续筛选具有影响GC细胞生长和转移的miRNAs仍十分必要.目的探究miR-10a-5p对GC细胞生长和转移的影响及其机制.方法采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-q PCR)检测GC组织和GC细胞(MGC-803和AGS)中miR-10a-5p表达;miR-10a-5p-inhibitor转染入MGC-803和AGS细胞,CCK-8实验,集落形成实验和Transwell实验分别检测细胞的增殖,集落形成,迁移和侵袭.采用Western-blot和RT-q PCR检测GC组织和GC细胞(MGC-803和AGS)中THBS2表达;采用Target Scan在线软件筛选miR-10a-5p的潜在靶基因THBS2,并进一步验证. NC+pc DNA-Con, miR-10a-5pinhibitor+pc DNA-Con和miR-10a-5p-inhibitor+pc DNATHBS2共转染入MGC-803细胞,CCK-8实验,集落形成实验和Transwell实验分别检测各组细胞的增殖,集落形成,迁移和侵袭.结果miR-10a-5p在GC组织,MGC-803和AGS细胞中表达异常上调; miR-10a-5p敲低显著降低了MGC-803和AGS细胞的增殖,集落形成和侵袭.THBS2m RNA和蛋白水平在GC组织、MGC-803和AGS细胞中表达均异常下调; THBS2是miR-10a-5p的靶基因;过表达THBS2能逆转miR-10a-5p敲低对MGC-803细胞增殖,集落形成,迁移和侵袭的抑制作用.结论miR-10a-5p敲低通过靶基因THBS2来抑制GC细胞的生长和转移.     

miR-181a、miR-181b在人胃癌细胞和组织中的表达

目的:研究miR-181a、miR-181b在不同分化程度人胃癌细胞株和胃癌组织中的表达情况,探索其在胃癌发生发展过程中的作用.方法:体外培养3种不同分化程度的胃癌细胞株(AGS,SGC-7901、MGC-803)及正常胃黏膜细胞GES-1,收集28例胃癌患者手术切除的癌组织及正常组织样本,通过实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerasechain reaction,qRT-PCR)方法检测上述细胞和组织中miR-181a、miR-181b的表达量,比较胃癌细胞与正常胃黏膜细胞、胃癌组织与正常胃组织中miR-181a,miR-181b表达的差异性.结果:经qRT-PCR方法检测发现,AGS、S GC-7901、MGC-803 3种胃癌细胞中miR-181a及miR-181b的表达量均高于GES-1细胞中的表达量(P0.05),而AGS,SGC-7901、MGC-803 3种胃癌细胞之间miR-181a及miR-181b的表达量差异均无统计学意义(P0.05).与正常胃组织相比,miR-181a,miR-181b在胃癌组织中的表达量显著升高(P0.05).Ⅲ/Ⅳ期组胃癌组织中miR-181a,miR-181b的相对表达量高于Ⅰ/Ⅱ期组(P0.05).有淋巴结转移组胃癌组织中miR-181a,miR-181b的相对表达量高于无淋巴结转移组(P0.05).miR-181a,miR-181b的相对表达量与年龄、性别、胃癌的分化程度无明显关系(P0.05).结论:miR-181a、miR-181b在胃癌细胞和组织中高表达,两者的表达水平与胃癌的分期、淋巴结转移相关,可能在胃癌的发生发展中发挥癌基因的作用.     

miR-135b-5p靶向KLF4基因调控胃癌SGC-7901细胞生物学行为的研究

目的 研究miR-135b-5p通过靶向KLF4基因对人胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响。方法 通过RT-PCR检测人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平,将miR-135b-5p inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞中,RT-PCR和Western blotting分别检测转染后细胞中miR-135b-5p和KLF4蛋白表达水平,MTT法、流式细胞术、Transwell实验分别检测转染对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。生物信息学软件预测及双荧光素酶报告基因实验验证KLF4是否为miR-135b-5p的靶基因。结果 胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,且胃癌SGC-7901细胞中miR-135b-5p表达水平最高。在SGC-7901细胞中转染miR-135b-5p inhibitor 48 h后,miR-135b-5p的表达水平显著降低,KLF4 mRNA和蛋白表达水平明显升高。下调miR-135b-5p后SGC-7901细胞增殖能力下降,凋亡率升高,侵袭和迁移能力减弱。双荧光素酶报告基因实验结果显示,KLF4是miR-135b-5p靶基因。结论 miR-135b-5p能够通过靶向KLF4抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡。     

RNA干扰沉默CLIC4基因对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨氯离子胞内通道(CLIC)4对胃癌细胞增殖和侵袭的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测人胃癌细胞SGC-7901和MGC-803中CLIC4的表达.应用Lipofectamine2000将CLIC4 siRNA转染到SGC-7901细胞和MGC-803细胞中,分为siRNA1组、siR...     

苦参碱对胃癌SGC7901/DDP细胞耐药相关miRNA表达的影响和靶点分析

目的探讨苦参碱对化疗药物的增敏作用和机制。方法以非毒性剂量的苦参碱联合长春新碱、阿霉素、5-氟尿嘧啶干预胃癌SGC7901/DDP细胞,观察苦参碱对胃癌SGC7901/DDP细胞耐药性的增敏作用;采用实时荧光定量PCR观察苦参碱干预后耐药相关miRNA的表达,并应用生物信息学方法预测和分析相关miRNA的靶基因和信号通路,应用GO分析方法进行了靶基因的功能注释。结果苦参碱可以增强胃癌SGC-7901/DDP细胞对化疗药物的敏感性,逆转耐药;苦参碱可以剂量依赖性上调耐药相关mir-7、mir-125b、mir-200a、mir-200b、mir-200c、mir-146a的表达,生物信息学方法预测和分析了其靶基因和相关信号通路,并筛选出耐药相关miRNA靶向调控的耐药基因和DNA修复基因,为苦参碱克服胃癌化疗多药耐药提供了靶点。结论苦参碱可以增强胃癌SGC-7901/DDP细胞对化疗药物的敏感性;其作用可能与苦参碱可以上调耐药相关mir-7、mir-125b、mir-200a、mir-200b、mir-200c、mir-146a的表达,并通过miRNA靶向调控的耐药基因和DNA修复基因有关。     

SCH66336对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制

目的探讨法尼基转移酶抑制剂（FTIs）SCH66336对胃癌SGC-7901与MGC-803细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法取对数生长期胃癌SGC-7901与MGC-803细胞,分为实验组和对照组,实验组加入SCH66336使终浓度分别为0.1、0.3、1.0、3.0μM,对照组加入含等体积DMSO的培养基,每组设3个复孔。MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术测定细胞周期与细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中核糖体蛋白S6的磷酸化（S235/236）、细胞周期素D1（cyclin D1）与活化的Caspase-3表达情况。结果与对照组比较,SCH66336作用后SGC-7901与MGC-803细胞抑制率及凋亡率明显升高,呈G0/G1细胞周期阻滞,cyclin D1与S6磷酸化表达明显降低、活化的Caspase-3表达升高（P〈0.05）,且呈时间及剂量依赖性。结论 SCH66336对SGC-7901与MGC-803胃癌细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其机制可能为抑制S6的活化、下调cyclin D1表达、激活Caspase-3依赖的凋亡通路。     

miR-576-5p通过结合CADM2调节胃腺癌DNA损伤和放化疗敏感性

目的 探究miR-576-5p通过调控细胞黏附分子(CADM)2基因对胃腺癌DNA损伤和放化疗敏感性的影响。方法 GEO2R分析胃腺癌数据集(GSE26595、GSE6174)中表达上调的基因,GSEA分析miR-576-5p与细胞增殖和DNA损伤的关系。按照转染物的不同,分为空白对照组(miR-NC)和miR-576-5p模拟物组(miR-576-5p),向miR-576-5p组的BGC-823、SGC-7901细胞中转染miR-576-5p模拟物组,miR-NC组细胞仅转染对应的对照片段。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BGC-823、SGC-7901细胞中miR-576-5p的表达水平,细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞活力。将miR-576-5p过表达的BGC-823细胞皮下注射至裸鼠体内,成瘤后检测小鼠瘤重和体积,qRT-PCR检测肿瘤组织中miR-576-5p表达水平。以不同剂量的γ射线照射BGC-823、SGC-7901细胞,Western印迹检测γH2AX的蛋白表达。CCK8检测细胞对多柔比星化疗的敏感性。双荧光素酶活性实验验证miR-576-5p和CADM2的...     

胃癌多药耐药蛋白的相互作用蛋白鉴定及分子机制

目的:研究多药耐药蛋白(multidrug resistance protein,MRP)的相互作用蛋白及其对肿瘤耐药性的影响.方法:采用免疫沉淀结合质谱方法分离鉴定MRP的相互作用蛋白,并对其中的耐药相关蛋白之一Annexin A5进行功能研究,Western blot及siRNA干扰技术分析MRP、Annexin A5蛋白表达的变化、相关性及胃癌SGC-7901细胞的耐药性变化.结果:经免疫沉淀结合质谱方法分离鉴定发现了14个MRP的相互作用蛋白,其中AnnexinA5为其中得分最高的蛋白;Westernblot检测显示耐药细胞株SGC-7901/DDP中MRP、AnnexinA5蛋白表达均高于SGC-7901和siRNA-SGC-7901/DDP,siRNA干扰AnnexinA5表达后,siRNA-SGC-7901/DDP中MRP蛋白表达下调,MRP、AnnexinA5蛋白在SGC-7901和siRNA-SGC-7901/DDP之间表达无明显差异;MTT法结果显示经siRNA干扰SGC-7901/DDP后,顺铂、5-Fu和紫杉醇作用后的IC50值明显减少,对其的敏感性分别增加了36倍、17倍和4倍.结论...     

胃癌细胞PTEN甲基化与其表达的相关性

目的:探讨胃癌细胞PTEN基因启动子区域甲基化与其mRNA表达的关系.方法:采用甲基化特异性PCR法(MSP)检测四种胃癌细胞系SGC-7901(中度分化)、BGC-823(低度分化细胞)、MGC-803(低度分化细胞)、HGC-27中PTEN基因甲基化状态,RT-PCR检测四种胃癌细胞系PTEN表达水平(未分化).结果:HGC-27、MGC-803、BGC-823细胞系可检测到PTEN基因启动子的甲基化,SGC-7901细胞未检测到甲基化,甲基化水平的顺序依次为:HGC-27最高(138.217±7.898,P<0.01),MGC-803、BGC-823次之(P>0.05).PTENmRNA表达水平的依次顺序为:SGC-7901最高(0.336±0.079,P<0.01),BGC-823、MGC-803次之(P>0.05),HGC-27表达水平最低(0.113±0.047,P<0.05),其表达水平随着其启动子区甲基化水平增高而降低.PTENmRNA表达及其启动子甲基化水平还与胃癌细胞分化程度相关.结论:胃癌细胞PTEN基因启动子区域出现异常甲基化,可能是导致其mRNA表达异常的主要原因,也可能是导致胃癌发生、发展的重要机制之一.     

葡萄糖神经酰胺合成酶基因在人胃癌细胞SGC-7901及SGC-7901/VCR的表达和意义

目的:研究葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosyl- ceramide synthase,GCS)基因在人胃癌细胞SGC-7901和SGC-7901/VCR的表达并探讨其对人胃癌发生、发展的意义.方法:体外培养人亲本敏感胃癌细胞SGC-7901和人耐长春新碱胃癌细胞SGC-7901/VCR.采用MTT法检测半数细胞抑制浓度(IC_(50))和SGC-7901/VCR耐药倍数;RT- PCR法检测SGC-7901和SGC-7901/VCR两种细胞GCS mRNA的表达,免疫组化法测定GCS蛋白表达水平.结果:SGC-7901和SGC-7901/VCR的IC_(50)分别为1.40±0.06和86.20±0.50 mg/L.SGC-7091/ VCR细胞耐药指数是亲本细胞SGC-7901的61倍,SGC-7901和SGC-7901/VCR两种细胞均有GCS mRNA表达,且SGC-7901/VCR细胞GCS mRNA表达水平(GCS指数为3.9)较SGC-7901细胞(GCS指数为0.5)有显著升高(P<0.05),耐药细胞GCS蛋白表达阳性率(65%)显著高于亲本细胞(18%)(P<0.05).结论:GCS基因在人胃癌耐药细胞和亲本敏感细胞均有表达,耐药细胞GCS mRNA及蛋白均高表达.GCS可能参与了胃癌的发生过程,且与肿瘤多药耐药有密切关系.     

miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌SGC-7901细胞生物学特性的研究

背景 miR-183在胃癌、乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中低表达,发挥抑癌基因的作用,但其在胃癌中作用机制目前尚不十分清楚.研究表明, miR-183可以通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞的生长、迁移和侵袭,而Wnt/β-catenin信号通路在胃癌中高度激活与胃癌的发生和转移密切相关.但miR-183是否调节Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞生物学特性尚不清楚.目的探讨miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞生物学特性的影响.方法采用q RT-PCR检测miR-183在不同胃癌细胞株中的表达情况,在胃癌细胞SGC-7901中转染miR-183mimics或mimics对照,分别设为miR-183组和miR-NC组, qRT-PCR检测转染效率,噻唑蓝增殖实验检测SGC-7901细胞增殖变化,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡情况, Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力, Western blot法检测凋亡相关及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平.使用Wnt/β-catenin信号通路激动剂氯化锂处理过表达miR-183的SGC-7901细胞,观察SGC-7901细胞生物学特性的变化.结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比, 4株胃癌细胞中miR-183的表达水平明显降低(P 0.05).转染miR-183mimics后SGC-7901细胞中miR-183的表达水平显著升高(P0.05).过表达miR-183后SGC-7901细胞OD值降低(P0.05),凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P 0.05),侵袭和迁移细胞数减少(P0.05),β-catenin、p-GSK-3β和Cyclin D1蛋白表达水平下调(P0.05), GSK-3β蛋白表达水平上调(P 0.05).激活Wnt/β-catenin信号通路部分逆转了过表达miR-183对SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及凋亡促进作用(P0.05).结论miR-183可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路阻碍人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡.     

miR-1301对胃癌细胞侵袭的影响及分子机制

目的探讨微小核糖核苷酸(miR)-1301在人胃癌(GC)组织内的表达及对MGC-803细胞侵袭的影响。方法选择四川省人民医院收治并行手术切除的60例GC组织与对应癌旁组织。检测miR-1301的相对表达量,分析miR-1301表达的临床病理意义;采用人工合成的miR-1301模拟物转染MGC-803细胞,检测MGC-803细胞过表达miR-1301后迁移、侵袭能力的变化。Western印迹检测miR-1301下游潜在靶点信号传导及转录激活蛋白(STAT)3的表达及侵袭相关分子基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达。结果GC组织中的miR-1301表达水平较癌旁组织降低(t=2.419,P=0.026),低表达miR-1301与肿瘤淋巴结转移(χ^2=6.140,P=0.021)、较短的总体生存期(HR=2.140,P=0.021)及无病生存期(HR=3.437,P=0.015)均密切相关;过表达miR-1301能够削弱MGC-803细胞迁移(t=6.423,P=0.021)、侵袭能力(t=3.128,P=0.030)及细胞内STAT3(t=3.781,P=0.028)和MMP-2(t=2.168,P=0.036)的表达水平。结论GC中miR-1301表达降低,miR-1301可能通过下调STAT3/MMP-2轴的表达来削弱GC细胞的侵袭能力。     

miR-34a逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制

目的探讨过表达miR-34a对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及可能机制。方法成功构建过表达miR-34a的真核载体p CDNA3.1+miR-34a后,将A549/DDP细胞分为对照组(无转染)、空转染组(转染空质粒)和过表达组(转染p CDNA3.1+miR-34a),采用实时荧光定量PCR(q PCR)法检测转染24、48、72及96 h后各组miR-34a水平;给予不同浓度DDP(2、4、8、16、32和64μg/ml)处理48 h后采用CCK-8法比较各组对DDP的敏感性,流式细胞仪PI/Annexin V双染法检测各组转染48、96 h后的凋亡率,分别采用Western印迹检测各组转染48、96 h后常见耐药基因的表达情况。结果 A549/DDP细胞的miR-34a水平均低于其亲本细胞A549和正常支气管上皮细胞系HBE(P0.05);与其余两组相比,过表达组转染后的miR-34a水平升高,且对A549/DDP细胞的增殖抑制率升高(P0.05);过表达组的半数抑制浓度均低于其余两组,过表达组转染48、96 h后的凋亡率高于其余两组,而转染48 h后的P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白1及肺耐药相关蛋白的水平低于其余两组(P0.05);对照组和空转染组以上指标的差异均无统计学意义(P0.05)。结论 A549/DDP细胞中miR-34a水平较低,通过真核载体将其过表达后可抑制增殖率并提高其对DDP的敏感性,可能与其诱导凋亡及降低耐药基因的表达有关。     

miR-660-3p下调REG4对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的研究miR-660-3p对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测134例胃癌组织和癌旁组织中miR-660-3p的表达,MTT法和Transwell实验测定过表达miR-660-3p和REG4后MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测REG4、Cyclin D1、p21、E-cadherin和MPP-2蛋白的表达,双荧光素酶报告系统验证miR-660-3p与REG4的调控关系。结果与正常癌旁组织相比,胃癌组织中的miR-660-3p表达量显著降低(P 0. 05);抑制miR-660-3p可抑制MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭,抑制MGC-803中REG4、Cyclin D1和MPP-2表达(P 0. 05),促进p21和E-cadherin表达(P 0. 05); miR-660-3p靶向负调控REG4的表达;过表达REG4可逆转过表达miR-660-3p对MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-660-3p通过靶向REG4抑制MGC-803细胞的增殖、迁移和侵袭。miR-660-3p是胃癌的潜在分子靶点。     

miR-637靶向ERBB3对胃癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响及分子机制研究

背景研究发现miR-637可抑制结肠癌、甲状腺乳头状癌、胶质瘤等多种肿瘤细胞的侵袭、迁移;其在胃癌(gastric cancer, GC)中下调表达,但对GC细胞迁移、侵袭及凋亡的影响及分子机制尚不清楚.目的探讨miR-637对GC细胞迁移、侵袭及凋亡的影响及其作用机制.方法实验设置miR-NC组、miR-637组、anti-miR-NC组、anti-miR-637组、si-NC组、si-ERBB3组、miR-637+pc DNA3.1组、miR-637+pc DNA3.1-ERBB3组、miR-NC+WT-ERBB3组、miR-NC+MUT-ERBB3组、miR-637+WT-ERBB3组、miR-637+MUT-ERBB3组;q RT-PCR检测miR-637的表达水平;Westernblot检测蛋白表达; Transwell检测细胞迁移、侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果相较于癌旁组织, GC组织中miR-637的表达水平显著降低(P0.05);过表达miR-637和抑制人类表皮生长因子受体3(human epidermal growth factor receptor3,HER3/ERBB3)表达可抑制基质金属蛋白酶2和B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2, Bcl-2)的表达,促进上皮钙黏蛋白和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)的表达;抑制GC细胞SGC-7901迁移、侵袭,促进细胞凋亡.miR-637靶向调控ERBB3的表达,过表达ERBB3能逆转miR-637对GC细胞SGC-7901迁移、侵袭抑制和凋亡促进的作用.结论miR-637可抑制GC细胞SGC-7901迁移、侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与靶向下调ERBB3的表达有关,将可为GC的预防和治疗提供新靶点.     

GRP78在胃癌中表达水平及沉默表达后对人胃癌SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡的影响

目的研究内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)在人不同胃组织(正常胃组织和胃癌组织)和细胞(正常胃上皮GES1细胞、胃癌SGC-7901细胞、多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞)中的表达水平;揭示GRP78沉默表达对SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡的影响。方法利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫印迹(Western blotting)方法分别检测人正常胃组织、胃癌组织、人正常胃上皮GES1细胞、胃癌SGC-7901细胞、多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平。利用LipfectamineTM2000将GRP78 siRNA转染至SGC-7901/DDP细胞中,同时设置未转染Control组和无义转染Control siRNA组。Real-time PCR和Western blotting方法检测各组SGC-7901/DDP细胞转染效率;MTT方法检测各组SGC-7901细胞的生长活力变化和不同浓度顺铂DDP作用下细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组SGC-7901细胞凋亡情况。结果胃癌组织中GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常胃组织(P0.05);多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著高于胃癌SGC-7901细胞和正常胃上皮GES1细胞(P0.05);GRP78 siRNA转染SGC-7901/DDP细胞后GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05);与Control组和Control siRNA组相比,GRP78 siRNA转染组SGC-7901/DDP细胞生长活力显著下降,DDP作用下细胞增殖抑制率和细胞凋亡率显著增加(P0.05)。结论 GRP78 mRNA和蛋白在胃癌组织中高表达,在多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中也高表达,证实GRP78在胃癌中发挥促癌基因的作用。而GRP78 siRNA转染能够沉默SGC-7901/DDP细胞中GRP78基因表达,抑制SGC-7901/DDP细胞增殖并促进细胞凋亡。     

顺铂联合热疗对人胃癌耐药细胞增殖及耐药相关基因Survivin表达的影响

目的通过体外实验观察顺铂联合热疗对人胃癌耐药细胞增殖及多药耐药基因Survivin表达的影响。方法选取人胃癌SGC7901/DDP细胞系进行体外培养。应用流式细胞术(FCM)检测对照组、化疗组、热疗组及热化疗组SGC7901/DDP细胞增殖的情况,并用FCM法半定量检测各组细胞中Survivin蛋白表达的变化;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测4组SGC7901/DDP细胞中Survivin mRNA表达的变化。结果热疗及顺铂联合热疗都可以降低人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的增殖水平,并且顺铂联合热疗作用效果最明显。单纯热疗及顺铂联合热疗作用后,SGC7901/DDP细胞中Survivin蛋白及mRNA的表达明显下降,并且并顺铂联合热疗作用后下降最明显。结论热疗、顺铂联合热疗能够抑制人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的增殖,并可诱导该细胞凋亡,抑制细胞周期诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用机制之一;下调Survivin蛋白及mR-NA的表达可能是热疗逆转人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP多药耐药性的机制之一。     

胃癌细胞和胃癌多药耐药细胞中P-gp及GST的表达

目的比较胃腺癌SGC-7901细胞和多药耐药细胞SGC-7901/ADR中P-gp和GST表达的差异,进一步探讨胃癌多药耐药机制。方法常规培养人胃癌SGC-7901细胞和多药耐药细胞SGC-7901/ADR。制备细胞爬片,免疫细胞化学方法和灰度测定检测SGC-7901细胞和SGC-7901/ADR中P-gp及GST的表达。结果免疫细胞化学SP法染色后,P-gp蛋白阳性者在胃癌细胞的胞浆和胞膜中可见棕黄色颗粒沉着,GST在胃癌细胞的胞浆中可见棕黄色颗粒。P-gp、GST在胃癌SGC-7901细胞中呈中度表达,在胃癌SGC-7901/ADR细胞中呈高表达,两者比较有显著性差异（P〈0.05）。免疫细胞化学灰度定量测定显示同样的结果。结论 P-gp、GST在胃癌SGC-7901/ADR细胞中的表达较SGC-7901细胞明显增加,可能是胃癌多药耐药的原因之一。