急性淋巴细胞白血病CDX2和β-catenin基因表达的相关性

目的:研究急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者CDX2与β-catenin基因表达的相关性。方法:实时定量PCR方法检测43例初诊ALL患者CDX2及β-catenin m RNA的表达,以30例非恶性血液病患者作为对照。结果:ALL组CDX2 m RNA表达阳性率为93%,对照组无表达(P<0.01);β-catenin m RNA在两组均有表达,但ALL组显著高于对照组(P<0.01)。CDX2、β-catenin m RNA表达均与初诊时白细胞数、LDH水平呈正相关(P<0.01)。ALL患者获得CR时,CDX2 m RNA、β-catenin m RNA表达显著下降,复发时两者均增高。相关性分析显示,ALL患者CDX2与β-catenin m RNA表达呈显著正相关(r=0.835,P=0.000)。结论:ALL患者存在CDX2基因过表达及Wnt/β-catenin信号通路激活,且CDX2与β-catenin表达呈显著正相关。     

代谢相关基因在儿童急性淋巴细胞白血病细胞中的表达及预后价值

目的:分析代谢相关基因在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及预后价值,探索新的预后判断标志物及治疗靶点。方法:以84例B细胞型ALL患儿作为研究对象,对所有样本转录组(RNA-Seq)测序数据中的代谢相关基因进行差异表达分析,利用COX单因素回归及Lasso回归方法构建代谢相关基因预后积分系统,COX多因素回归分析评价积分系统的预后价值,采用GSEA软件进行基因富集分析。结果:从转录组测序结果中共提取933个代谢相关基因的表达量数据进行差异表达分析,31个基因被鉴定为差异表达基因,其中14个基因在复发组表达上调,17个基因在复发组表达下调。进一步筛选出12个基因纳入预后积分系统,其中8个为复发组上调的基因(ASS1、CKM、PTGES、ADCY5、HNMT、PHGDH、CYP4F3、AADAT),4个为复发组下调的基因(GDA、DHRS9、IDO2、UGT2B4)。积分高风险组和低风险组的无复发生存率比较,差异具有统计学意义(P0.05)。在纳入性别、年龄、初诊时白细胞计数、细胞及分子遗传学等临床特征后,该预后积分系统风险评分仍为疾病复发独立的危险因素(HR=8.906,95%CI:3.114-25.470)。GSEA结果显示,氨基糖和核苷酸糖代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、果糖和甘露糖代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、嘧啶代谢、硒氨基酸代谢等通路在高风险组被显著富集。结论:代谢相关基因表达异常与儿童ALL预后相关,这些基因有望成为儿童ALL新的预后判断标志及治疗靶点。     

miRNA表达与儿童急性淋巴细胞白血病预后及复发的相关性研究

目的 筛选儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)相关的microRNA(miRNA),研究miRNA的表达与ALL复发以及预后是否相关,寻找判断复发以及预后的新指标.方法 采用基因芯片技术分析49例初诊ALL患儿和作为对照组的12例原发免疫性血小板减少症(ITP)患儿的miRNA表达谱,实时定量RT-PCR方法验证异常的miRNA表达.分析miRNA表达与预后相关指标、泼尼松早期反应以及1年内是否复发的相关性.结果 miRNA表达谱在儿童ALL中有特异的表达模式,且与泼尼松治疗反应和早期复发存在相关关系;8个特异表达水平的miRNA(miR-18a、miR-532、miR-218、miR-625、miR-193a、miR-638、miR-550和miR-633)能幕本区分泼尼松治疗试验敏感与不敏感的患者.而早期复发的患儿无论初诊时临床分型属高危或非高危,均有一些相同特征的miRNA异常表达,其中miR-7、miR-216和let-7i表达上调,miR-486、miR-191、miR-150、miR-487和miR-342表达下调.结论 在儿童ALL中异常的miRNA表达谱提示miRNA在白血病发生中起重要作用,其表达信息可能为更准确地评估儿童ALL的预后、更合理的分型治疗以及复发前进行临床早期干预提供依据.

Abstract：

Objective To screen childhood ALL related microRNAs ( miRNAs), analyze association of miRNAs expression profiles with prognosis and relapse in childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL) and explore new indicator for predicting relapse and prognosis. Methods miRNAs expression profile was analyzed by gene chip in 49 newly diagnosed childhood ALL and 12 primary immune thrombocytopenia (ITP) cases( as control group). Abnormal expression of miRNAs was verified by qRT-PCR. The correlation of miRNAs expression pattern with indicators predicting early prednisone response and relapse within a year was analyzed. Results Specific expression of miRNAs profiles associated with prednisone response and early relapse in childhood ALL was identified. Eight miRNAs ( miR-18a, miR-532, miR-218, miR-625, miR-193a, miR-638, miR-550 and miR-633 ) could distinguish prednisone sensitive from insensitive. The early relapse of newly diagnosed patients with either high-risk or non-high-risk clinical types had some characteristics of abnormal expression of miRNAs, including miR-7, miR-216 and let-7i upregulated, while miR-486, miR-191, miR-150,miR-487 and miR-342 downregulated. Conclusions The initial screening reveals miRNAs differentially expressed from normal in ALL suggesting the potential roles of them in leukemogenesis. MiRNAs expression signatures may be useful for predicting prognosis and relapse in childhood ALL and directing personalized treatment.     

miRNA-326及N-ras基因在儿童急性淋巴细胞白血病中的研究

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓中miRNA-326的表达及其临床意义。研究N-ras基因在儿童ALL微小残留病(MRD)中的表达,以期为儿童ALL的复发提供生物学检测标志。方法本研究选取35例儿童ALL和35例非白血病儿童作为对照组,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miRNA-326在儿童ALL中相对表达量,使用单链构象多态性PCR(PCR-SSCP)检测N-ras基因在治疗1年后的微小残留病(MRD)中的变化。结果miRNA-326在儿童ALL中的相对表达量(2.22±0.72)较对照组(6.35±1.23)明显下降;SSCP的电泳结果显示MRD组患者N-ras基因的电泳速度较对照组快,基因突变率为44.44%。结论miRNA-326和N-ras基因的检测可作为儿童ALL的诊断及复发生物学标志,也可为白血病的耐药性监测和治疗提供新的靶点。     

p73基因异常表达与急性淋巴细胞白血病相关性的研究

目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)发生发展的机制。方法应用RT-PCR技术检测42例ALL患者的p73基因mRNA表达情况,并结合患者的临床资料进行分析,同时采用限制性内切酶酶切结合多聚酶链反应方法(REP法)检测p73基因第一外显子甲基化情况。结果42例ALL患者甲基化检测结果28.6%(12/42)存在甲基化,甲基化患者p73mRNA均阴性表达,正常对照组和不存在p73基因甲基化的病人表达p73mRNA。p73mRNA阴性表达与ALL患者首次化疗既获完全缓解及平均缓解时间的降低有明显关系。结论ALL患者p73基因存在较高的阴性表达,p73基因失活在ALL的发生发展中起重要作用。p73基因失活主要原因之一是过度甲基化。p73mRNA检测对判断ALL患者预后有一定的意义。     

儿童急性淋巴细胞白血病microRNA表达的研究

微小RNA(micro RNA,miRNA)被认为是一类对基因表达起负调节作用的基因产物[1].参与生命过程中一系列重要进程,包括早期发育、细胞增殖、细胞死亡等.miRNA在正常细胞和肿瘤细胞中的表达不同,我们通过基因芯片对儿童早前B细胞急性淋巴细胞白血病(pre-B-ALL)患者和非血液病患者的miRNA进行对照分析,并通过实时定量PCR进行验证,目的是发现某些特异性miRNA在调控白血病发生中的作用,为白血病的基因治疗提供依据.     

Livin在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达和P53的相关性及临床意义

目的探讨Livin在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其与抑癌基因P53的相关性及临床意义。方法应用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物SABC方法 ,检测江西省儿童医院血液科2007年8～2008年12月收治的42例儿童ALL骨髓细胞Livin和P53的表达,对照组为23例非恶性血液病且骨髓正常患儿。结果在42例ALL患儿中,Livin蛋白表达阳性率为54.8%,P53表达阳性率为38.1%,显著高于正常骨髓组织(P均0.05),Livin和P53表达呈强相关性(P0.05),Livin在未完全缓解组中表达率明显高于完全缓解组(P0.05),在初治组中,Livin表达阳性患者的完全缓解率低于表达阴性的患者。结论 (1)Livin过度表达和儿童ALL的发病呈正相关;Livin高表达的患者完全缓解率低,预后不良。(2)抑癌基因P53的失活与Livin的表达可能在儿童ALL发生中起协同作用。     

自噬基因Beclin-1在儿童急性淋巴细胞白血病细胞的表达

目的探讨Beclin-1在儿童急性淋巴细胞白血病细胞的表达及与临床分型等特征之间的关系。方法应用免疫组织化学SP法(streptavidin-perosidase,链霉素抗生物素-过氧化物酶连结法),检测Beclin-1在急性淋巴细胞白血病和正常人外周血白细胞的表达情况。结果 (1)Beclin-1在急性淋巴细胞白血病外周血和正常人外周血有核细胞的表达率分别为28.5%(6/21)和72.5%(29/40)。急性淋巴细胞白血病的表达明显低于正常人,两者有明显的差异(P<0.01)。(2)Beclin-1在男性患儿中的表达率为36.3%(4/11),在女性患儿的表达率为20%(2/10),两组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。(3)临床分型L1中Beclin-1的表达率为33.3%(4/12),在L2型中为11.1%(2/9),两者之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Beclin-1在急性淋巴细胞白血病外周血有核细胞中的表达低于正常人外周血有核细胞。     

LKB1基因在急性淋巴细胞白血病患者中的表达水平与病情的相关性

目的:探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者体内LKB1基因的表达水平,分析患者病情与LKB1基因表达水平的相关性。方法:选择本院住院治疗的白血病患者98例,根据诊断结果的不同分为:ALL组56例,ANLL组42例。选取同时期50例健康体检者作为对照组。3组患者的静脉血分离单个核细胞,应用RT-PCR检测并比较各组的LKB1基因表达水平。根据ALL患者LKB1基因表达水平分为2个亚组:低表达组(39例),高表达组(17例)。随访3年,应用Kaplan-Meier法绘制2组ALL患者的OS及DFS曲线。比较2组CR及复发比例的差异。应用多因素Logistic回归分析影响ALL患者生存相关的危险因素。结果:LKB1基因表达水平对照组为1. 56(1. 38-1. 74) ALL组1. 32(1. 22-1. 40) ANLL组0. 89(0. 78-1. 02),3组比较具有统计学差异(P 0. 05)。与低表达组比较,高表达组CR率显著较高,而复发比例较低(均P 0. 05)。随访3年,LKB1高表达的ALL患者OS和DFS率均优于LKB1低表达的ALL患者(P 0.05)。LKB1基因表达水平与ALL患者危险分层存在负相关(r=-0. 712,P=0. 039),其中标危ALL,LKB1基因低表达组患者显著少于高表达组(P=0.014),而高危ALL,LKB1基因低表达组患者显著高于高表达组(P=0.002)。多元Logistic回归分析显示,年龄(OR=2. 872,P=0. 020)、外周血幼稚细胞数(OR=2. 268,P=0.028)为ALL患者生存相关的危险因素,而LKB1表达水平(OR=0. 426,P=0. 016)为保护因素。结论:ALL患者体内LKB1基因呈低表达水平,且表达水平越低ALL病情越严重,预后越差。     

急性淋巴细胞白血病儿童营养状况与医院感染相关性研究

目的:研究儿童急性淋巴细胞白血病患者治疗期间医院感染相关危险因素及感染特点,分析不同营养状况与医院感染及早期治疗反应之间的关系。方法:选取2016年6月至2019年6月纳入CCCG-ALL-2015方案治疗的133例儿童ALL患者的临床资料(化疗阶段、危险度、MRD等)、住院期间感染情况(感染病程、实验室指标、感染部位、转归等)及患儿的营养状况(性别、年龄、身高/身长、体重),采用χ2检验、 Logistic回归分析进行统计学分析。结果:133例ALL患儿医院感染率为19.9%,其中感染相关死亡3例。性别、免疫表型、危险度对医院感染的发生均无明显影响(P0.05),而中性粒细胞数、血红蛋白、血小板计数、化疗阶段、住院时长及营养状况对医院感染的发生均有影响(P0.05)。Logistic多因素回归分析显示,化疗阶段、住院时长、中性粒细胞数、营养状况为独立危险因素,其中感染部位以呼吸道感染最多见,检测出的病原学中革兰阳性菌、革兰阴性菌及真菌各占44.1%、52.9%和2.9%。不同营养状况分组之间,d 19、46 MRD的阴性率差异均有统计学意义(P0.05)。结论:中性粒细胞数、化疗阶段、住院时长、营养状况是医院感染的独立危险因素,其中营养状况与医院感染呈负相关,营养状况越差,发生医院感染的风险越高。营养不良及超重、肥胖均会影响ALL患儿的早期治疗反应,初诊时的营养水平可作为评估ALL患儿早期治疗反应的不良因素。     

儿童急性淋巴细胞白血病患者p73基因异常表达的研究

目的 探讨儿童急性淋巴细胞因病（ALL）发生及发展的机制。方法 应用RT－PCR技术检测61例ALL细胞系和53例儿童ALL患者的p73基因mRNA表达情况，并结合患者的临床资料进行分析。应用DNA甲基化酶谱测定、亚硫酸氢钠修饰的PCR和PCR产物测序等技术对61例ALL细胞系p73基因第1外显子的甲基化进行检测。结果 61个ALL细胞系中p73mRNA阴性表达率为31．1％（61个中19个）；53例原发性儿童ALL患者中，p73 mRNA阴性表达率为26．4％（53例中14例），p73 mRNA阴性表达与ALL无病生存期、总生存期的降低有明显关系。61个ALL细胞系中，39．3％存在p73基因的高甲基化。正常淋巴细胞和不存在p73基因高甲基化的细胞系表达p73 mRNA，大多数高甲基化的细胞系不表达p73 mRNA。结论 儿童ALL患者中p73 mRNA存在较高的阴性表达，其主要机制为p73基因高甲基化，p73基因失活在ALL的发生及发展中起重要作用，p73 mRNA检测对判断儿童ALL患者的预后有一定临床意义。     

儿童急性淋巴细胞白血病p16基因甲基化及表达水平临床意义

目的 探讨p16基因甲基化及表达水平改变在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)发病机制中的作用.方法 ALL患儿76例,其中初发(uALL)患儿69例、复发(rALL)患儿7例,健康儿童28例纳入对照组.采用荧光定量聚合酶链反应(RTPCR)检测外周血淋巴细胞p16基因mRNA表达;采用基于SYBR Green的甲基化特异性定量PCR(MethySYBR PCR)检测p16基因启动子甲基化水平.结果 ALL患儿淋巴细胞p16基因启动子甲基化水平高于健康儿童,uALL患儿p16基因甲基化水平低于rALL患儿(P＜0.05);ALL患儿p16基因mRNA水平低于健康儿童,uALL患儿p16基因转录水平高于rALL患儿(P＜0.05);p16基因转录水平与其启动子甲基化水平呈负相关关系(r=-0.63,P＜0.05);首次化疗即获完缓解ALL患儿p16基因甲基化水平低于未完全缓解患儿,而p16 mRNA表达水平高于后者(P＜0.05);p16基因低甲基化或高表达水平ALL患儿巩固强化治疗平均缓解时间明显低于p16基因高甲基化或低表达患儿(P＜0.05).结论 p16基因甲基化及表达低下可能与ALL发病有关,p16基因甲基化状态及表达水平检测或可用于儿童ALL预后评估.     

SLC25A38在儿童急性淋巴细胞白血病细胞中的表达

本研究探讨儿童急性淋巴细胞性白血病中SLC25A38表达水平及其临床意义.以23例初治儿童急性淋巴细胞白血病患儿作为实验组,10例非恶性血液病患儿作为对照组.通过Western blot及实时荧光定量RT-PCR方法检测SLC25A38在蛋白和mRNA水平的表达变化.结果表明：23例实验组中SLC25A38蛋白阳性的有8例,阳性率34.78％,10例对照均未检测出SLC25A38蛋白;ALL患儿中SLC25A38蛋白阳性组mRNA的相对表达量为0.4673±0.05344,阴性组为1.296±0.2517;蛋白阳性组较阴性组SLC25A38 mRNA的表达量明显降低（P=0.001）;蛋白阴性组与对照组比较表达量无统计学差异（P =0.1097）;临床资料分析发现,蛋白阳性组与阴性组在性别比例、免疫分型、初诊时外周血白细胞数、乳酸脱氢酶之间差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论：SLC25A38蛋白作为一种新发现的蛋白,在初诊儿童急性白血病细胞中过表达,有可能作为急性白血病的一种新的分子标志和潜在的治疗靶点.     

BCR基因重排的儿童急性淋巴细胞白血病

ＢＣＲ基因重排的儿童急性淋巴细胞白血病金晓明，林坤治，李奇志，吕联煌，郭瑞官，邓国仁ｂｃｒ（ｂｒｅａｋｐｏｉｎｔｃｌｕｓｔｅｒｒｅｇｉｏｎ，断裂点密集区）基因长５．８ｋｂ，位于ＢＣＲ基因的中部，定位于人染色体的２２ｑ１１．２１。已知该区域断裂与慢性粒...     

SFRP1基因甲基化在儿童急性淋巴细胞白血病中的临床意义

目的:探讨SFRP1基因及其甲基化在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的临床意义。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)检测43例新确诊ALL患儿化疗前(初发组)和诱导缓解化疗后d 46骨髓达完全缓解(缓解组)时的骨髓单个核细胞中SFRP1基因甲基化状态,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SFRP1 mRNA表达,蛋白印迹(Western blot)法检测SFRP1蛋白表达,并收集患儿的临床资料,分析SFRP1基因甲基化在儿童ALL中的临床意义。结果:初发组SFRP1基因启动子甲基化阳性率(44.19%)明显高于缓解组(11.63%)(χ²=11.328,P <0.05)。初发组患儿骨髓单个核细胞中SFRP1 mRNA及蛋白相对表达量均显著低于缓解组(P <0.05)。初发组SFRP1基因启动子甲基化与危险度(χ²=15.613,P=0.000)及患儿生存(χ²=6.561,P=0.010)有关,SFRP1基因高甲基化患儿危险度明显升高、无事件生存时间缩短,而其他临床资料间无明显差异。结论:SFR...     

门冬酰胺合成酶表达水平与儿童急性淋巴细胞白血病预后的相关性研究

目的 探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)肿瘤细胞中门冬酰胺合成酶(AS)基因表达水平是否与ALL的治疗反应和预后相关.方法 用实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,RQ-PCR)测定53例初发ALL患儿骨髓单个核细胞(BMMNC)AS mRNA水平,结合其临床资料,统计分析不同预后组患儿初诊时BMMNC中AS表达水平差异及其与预后的关系.结果 未缓解组患儿AS表达水平最高,表达水平中位值为17.25(2.48～46.82),复发组其次,为14.28(3.20～54.47),持续完全缓解组患儿AS表达水平最低,为5.08(0.84～54.92),三组比较差异有统计学意义(P＜0.05).合并未缓解和复发两组患儿,其中位AS mRNA水平为14.93(2.48～54.47),显著高于持续完全缓解组患JL(P＜0.01).AS低表达组患儿白血病持续完全缓解率为84.6%,而AS高表达组患儿持续完全缓解率仅为53.8%(P＜0.05).AS高表达组患儿的2年预计无病生存率为51.6%,显著低于AS低表达组患儿(84.6%)(P＜0.05).结论 AS高表达与患儿预后不良相关.     

抗凋亡基因livin在急性非淋巴细胞白血病细胞中的表达及临床意义

为了探讨急性非淋巴细胞白血病（ANLL）原代细胞livin基因表达及临床意义,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测46例急性非淋巴细胞白血病患者livin基因mRNA表达水平,以10名健康人为正常对照,以HL-60细胞株为阳性对照。结果表明,livin mRNA在初治ANLL患者中的表达较正常对照组明显升高（p〈0.05）;治疗缓解后表达明显下降（p〈0.05）;复发后其表达又升高。在初治ANLL患者中,livin mRNA表达阳性的患者完全缓解率（CR）低于表达阴性的患者（p〈0.05）。结论：livin基因过度表达和ANLL的发病呈正相关;livin基因高表达的患者完全缓解率低,预后不良;livin可作为急性非淋巴细胞白血病的发病、复发及预后判断的指标之一。     

儿童急性淋巴细胞白血病MTHFR基因多态性分析

甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因主要存在两种多态类型,分别为MTHFRC6 77T和MTHFRA12 98C ,这两种突变类型均可导致MTHFR活性不同程度减低,并最终影响体内叶酸代谢过程。国外有学者分别研究了这两种多态类型与成人和儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)易感性之间的相关性[1,2 ] ,但结果却不完全相同。由于MTHFR基因这两种多态类型的分布频率在不同种族中差异很大[3 ] ,因此我们对上海地区的汉族儿童MTHFR基因多态性与儿童ALL的相关性进行了研究。对象和方法1　对象　初治ALL患儿30例,其中男18例,女12例,中位年龄5 .5岁,均为我院2…