桔梗皂苷-D诱导肺腺癌A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞

目的:探究桔梗皂苷-D(Platycodin-D,PD)诱导肺腺癌细胞(A549)和A549顺铂耐药细胞(A549/DDP)凋亡和周期抑制的作用机制,为PD治疗非小细胞肺癌和产生顺铂耐药的非小细胞肺癌提供实验基础。方法:采用MTT法检测细胞的增殖抑制率和耐药指数;流式细胞术检测细胞周期阻滞和凋亡作用;Hoechst-33258荧光染色观察细胞核形态的变化;Western-blot蛋白印迹法分析凋亡通路和细胞周期相关蛋白表达水平的变化。结果:MTT检测结果显示,PD对A549和A549/DDP细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性。Hoechst 33258荧光染色发现,随着PD浓度增加,两种细胞核形态都有明显的改变。进一步流式细胞术结果表明,PD诱导A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞。Westernblot检测结果表明,PD通过上调Bax、Caspase-9、cleaved-Caspase-3和PARP的表达,下调Bcl-2和Caspase-3的表达诱导A549和A549/DDP细胞凋亡。此外,PD通过下调Cyclin-D1、Cyclin-D3、CDK4、CDK6、E2F1和p-Rb及上调P18的蛋白水平诱导A549细胞周期G0/G1阻滞。同时,PD通过下调Cyclin-B1、p-Cdc2、E2F1和p-Rb及上调P27的蛋白表达诱导A549/DDP细胞周期G2/M阻滞。结论:PD通过线粒体途径诱导A549和A549/DDP细胞凋亡诱导,并且引发A549细胞G0/G1周期阻滞和A549/DDP细胞G2/M阻滞周期阻滞。     

重楼总皂苷对A549细胞凋亡及Caspase3、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨重楼总皂苷诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用及对Caspase3、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:CCK-8法检测重楼总皂苷对细胞增殖的抑制作用;Hoechst染色后激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态的变化;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测重楼总皂苷对细胞凋亡的影响;Western blotting检测重楼总皂苷对细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2表达的影响。结果:重楼总皂苷对A549细胞的生长有显著抑制作用,可引起细胞形态发生明显改变,诱导细胞发生凋亡,显著上调促凋亡蛋白Caspase3的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达,且与浓度成依赖关系。结论:重楼总皂苷可显著诱导A549细胞凋亡,其机制与上调促凋亡蛋白Caspase3的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达相关。     

人参皂苷Rg3诱导肺癌细胞株凋亡的机制研究

目的探讨20(R)-人参皂苷Rg3诱导人肺腺癌细胞株凋亡的机制。方法选用人肺腺癌细胞A549细胞,MTT法检测细胞的增殖;流式细胞术分析各细胞周期的细胞比率;Westren blotting检测与细胞相关蛋白表达。结果 (1)G-Rg3的不同浓度对人肺腺癌A549细胞各期的细胞比率与对照组的细胞比率无明显差异;人参皂苷-Rg3对A549细胞凋亡率的影响,对照组与不同浓度组间存在明显差异,呈时间浓度依赖性。(2)不同时间/不同浓度的G-Rg3作用于A549细胞,可活化Caspase-3/Caspase-8级联,并上调Bax及下调Bcl-2蛋白表达,上调Bid、Cyto-c蛋白的表达,呈时间浓度依赖性。结论 G-Rg3能够经上调Bax及下调Bcl-2蛋白表达,并上调Bid、Cyto-c蛋白的表达,从而诱导人肺腺癌细胞A549细胞凋亡。     

去氢骆驼蓬碱调控FOXD3-AS1 对肺癌A549 细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨去氢骆驼蓬碱对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法:不同浓度(0.175、0.35、0.7 ng/mL)的去氢骆驼蓬碱作用A549细胞24 h后,细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞核增殖抗原Ki67和半胱天冬酶-3(Caspases3)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测叉头框转录因子D3的反义RNA 1 (FOXD3-AS1)基因表达水平。转染FOXD3-AS1小干扰RNA至A549细胞,上述相同方法观察下调FOXD3-AS1表达对A549细胞增殖、凋亡及Ki67和Caspases3蛋白表达的影响。结果:去氢骆驼蓬碱作用A549细胞后,细胞存活率、克隆形成数及Ki67蛋白和FOXD3-AS1的表达均降低(P0.05),而细胞凋亡率和Caspase3蛋白表达均升高(P0.05)。下调FOXD3-AS1表达后,A549细胞存活率、克隆形成数及Ki67蛋白表达均降低(P0.05),细胞凋亡率和Caspase3蛋白表达均升高(P0.05)。下调FOXD3-AS1表达且同时使用去氢骆驼蓬碱作用A549细胞后,细胞存活率、克隆形成数及Ki67蛋白表达均降低(P0.05),凋亡率和Caspase3蛋白表达均升高(P0.05)。结论:去氢骆驼蓬碱可能通过下调FOXD3-AS1表达抑制肺癌A549细胞增殖并促进细胞凋亡。     

白藜芦醇对A549肺腺癌细胞促凋亡机制的研究

目的:观察白藜芦醇对A549肺腺癌细胞生长的影响并对促凋亡机制进行初步研究。方法:使用MTT方法观察不同浓度与作用时间的白藜芦醇对A549细胞增殖的影响,采取流式细胞技术观察白藜芦醇对A549细胞促凋亡情况与细胞周期的影响,选用Western-blot技术观察不同浓度白藜芦醇作用下A549细胞凋亡相关蛋白p53、Bcl-2家族及Caspase的变化。结果:白藜芦醇对A549细胞增殖的抑制呈浓度/时间双重依赖,作用24 h IC50值是29.3μM,这种抑制作用有凋亡机制的参与。A549细胞发生了S期阻滞,凋亡相关蛋白中p53浓度增加,Bcl-2家族蛋白中促凋亡蛋白/抗凋亡蛋白比值上调,Caspase-3、-9发生剪切。结论:白藜芦醇能通过促凋亡作用抑制A549肺腺癌细胞的增殖,诱导出现S期细胞阻滞,与细胞凋亡线粒体途径相关的p53、Bcl-2家族蛋白、Caspase-3、-9等多种凋亡相关因子也参与促凋亡作用中,白藜芦醇对A549的促凋亡效应可能是一个多靶点多层次的作用机制。     

苇茎汤调控人肺腺癌A549细胞中EGFR、STAT3抗凋亡的机制研究

目的:研究苇茎汤对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:将苇茎汤培养液浓度稀释为0.25、2.5、25g/L,与A549细胞共同培养,AO∕EB荧光染色观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率;Real-time PCR检测EGFR、STAT3基因的表达。结果:0.25~25g/L苇茎汤能诱导A549细胞发生凋亡形态学改变,且细胞凋亡率随苇茎汤浓度增加而升高;苇茎汤可将A549细胞周期阻滞于G0/G1期;Real-time PCR结果表明,苇茎汤可以下调A549细胞中EGFR、STAT3基因的表达。结论:苇茎汤可能通过调控EGFR、STAT3信号通路诱导人肺腺癌A549细胞发生早期凋亡。     

莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法体外培养肺腺癌细胞A549,MTT比色法测定莪术油对A549细胞作用24、48、72 h后抑制率;流式细胞术分析莪术油对A549细胞作用24 h后细胞周期的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测莪术油对A549细胞作用24 h后细胞凋亡与坏死情况。结果莪术油对A549细胞增殖的抑制率随时间延长明显升高,随药物浓度增加抑制作用增强;莪术油对A549细胞作用24 h后,细胞周期停滞在G0/G1期,阻止其进入S期;细胞的早期凋亡、晚期凋亡和坏死比例随着莪术油浓度的增加而增加,且坏死细胞的比例高于凋亡细胞。结论莪术油对A549细胞的增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖,其作用是通过阻滞细胞周期及诱导凋亡和坏死来实现的。     

塔斯品碱诱导肺癌细胞A549凋亡的实验研究

目的:探讨塔斯品碱对肺癌细胞A549增殖、凋亡以及细胞周期的影响。方法:进行人肺腺癌细胞株A549细胞培养,不同浓度塔斯品碱干预,采用MTT法、流式细胞术、透射电镜等技术,研究不同浓度塔斯品碱对其增生、凋亡以及细胞周期的影响。结果:塔斯品碱可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,且呈时间剂量依赖性;FCM检测发现塔斯品碱阻滞细胞周期于S期;电镜下可见塔斯品碱能够诱导细胞出现核固缩、细胞核内染色质凝聚和凋亡小体等凋亡现象。结论:塔斯品碱有抗肿瘤和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

广陈皮在白血病 KG1a 细胞株凋亡中的作用机制分析

〔摘 要〕 目的：探究广陈皮中的主要成分川陈皮素及橙皮苷在白血病 KG1a 细胞株凋亡中的作用机制。方法：CCK–8 法 检测细胞抑制率;流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot 检测细胞 Bcl–2、Bax、Caspase–3 蛋白表达。结果：川陈皮 素及橙皮苷浓度不同对于 KG1a 细胞增殖抑制率影响不同,时间增加,增殖抑制越明显,剂量浓度越高增值越依赖,川陈 皮素和橙皮苷对细胞阻滞周期有所不同且两者能够降低细胞的抗凋亡蛋白 Bcl–2 蛋白表达、增加 Bax 及 Caspase–3 蛋白表达。 结论：川陈皮素与橙皮苷可以有效抑制 KG1a 细胞增殖及诱导其凋亡。这可能与 Bcl–2 蛋白表达下调、Bax、Caspase–3 蛋 白表达上调相关。     

芦荟素抑制A549肺癌细胞增殖、凋亡和周期的作用机制研究北大核心CSCD

目的:探究芦荟素对非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC) A549细胞增殖、凋亡和周期的作用及机制。方法:用不同浓度芦荟素处理A549细胞,MTT法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期; Western blot检测细胞增殖、凋亡、细胞周期及相关通路标记蛋白的表达。结果:芦荟素浓度达到50μM及以上时,A549细胞活性低于80%,因此,选择5、10、20μM三个浓度进行后续实验。芦荟素(10、20μM)能显著促进A549细胞凋亡,还能诱导A549细胞G2/M期阻滞;芦荟素可显著抑制细胞增殖标记蛋白Ki67和细胞周期蛋白Cyclin B的表达,浓度为10μM和20μM时能明显升高细胞凋亡蛋白cleaved caspase-3的表达水平。此外,芦荟素还能明显抑制p38 MAPK通路蛋白p-Cdc25B和p-Hsp27的表达,降低p-p38/p38的比值。结论:芦荟素可抑制NSCLC A549细胞增殖,诱导细胞凋亡和周期阻滞,作用机制可能与抑制p38 MAPK通路激活有关。     

芪玉三龙汤药物血清对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的观察芪玉三龙汤药物血清对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法制备芪玉三龙汤药物血清,体外培养A549细胞。将A549细胞分为正常血清组、5%药物血清组、10%药物血清组和20%药物血清组。CCK-8法和集落形成实验检测A549细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase-3、Bcl-2表达。结果与正常血清组比较,不同浓度芪玉三龙汤药物血清组A549细胞活力明显降低(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.001),10%药物血清组和20%药物血清组A549细胞Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.001)。结论芪玉三龙汤可能通过上调A549细胞Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,进而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

消岩汤剂拆方配伍对肺腺癌A549细胞survivin和caspase-3表达的影响

目的 探讨消岩汤及其各拆方组分对人肺腺癌A549细胞株凋亡的影响及其机制.方法 将消岩汤按照功效进行拆方,分为清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组.以CCK-8法检测各拆方对A549细胞的最有效抑制浓度,采用Western blotting法测定Survivin、Caspase-3蛋白表达,RT-PCR法检测survivin与caspase-3基因表达.结果 消岩汤及其各拆方组分均有明显的抑制A549细胞生长作用,消岩汤及其各拆方组分具有诱导A549细胞凋亡的作用,其机制与下调survivin基因和蛋白表达有关,对caspase-3基因和蛋白表达影响不显著.结论 消岩汤及其各拆方组分体外均有明显的抑制A549细胞生长作用,消岩汤及其各拆方组分可通过下调survivin的表达诱导肿瘤细胞凋亡,清热解毒组方中药是其抗肿瘤作用主要组分.     

消岩汤对肺腺癌A549实体荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡干预机制的研究

目的分析消岩汤干预下Survivin siRNA对肺腺癌A549实体荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡的影响。方法以人肺腺癌A549实体移植瘤裸鼠模型为研究对象,将消岩汤含药血清及siRNA转染后的A549细胞分别进行瘤内注射,通过流式细胞术观察小鼠体内细胞凋亡情况;免疫细胞化学法检测Survivin蛋白表达。结果 siRNA转染组对Survivin蛋白表达的抑制率明显高于消岩汤组,但显著低于消岩汤+siRNA转染组。siRNA转染组和消岩汤组均可诱导细胞凋亡,且siRNA转染组的诱导作用强于消岩汤组,消岩汤+siRNA转染组可协同增强诱导细胞凋亡作用。结论消岩汤联合Survivin siRNA可协同增强诱导细胞凋亡作用。     

番荔枝内酯对肺腺癌A549细胞周期及凋亡的影响

目的：探讨番荔枝内酯 Bullatacin 诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用 MTT 法检测不同浓度（6.25、12.5、25、50、100μg/mL）Bullatacin对A549细胞的抑制增殖作用,依照MTT结果取浓度25μg/mL Bullatacin作用于A549细胞0、12、24、48 h,流式细胞仪分析其对A549细胞增殖周期的影响,观察其对细胞凋亡的干预作用。Western Blot 检测不同实验组 ERK、JNK、p38磷酸化与总蛋白的表达。结果不同浓度Bullatacin作用于A549细胞后,呈明显的剂量依赖性;25μg/mL Bullatacin能将A549细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡;与空白组比较,P-ERK、P-JNK、P-p38的蛋白表达均明显增强。结论 Bullatacin明显抑制A549细胞增殖,并诱导其凋亡,其机理与Bullatacin通过磷酸化各蛋白激酶而激活MAPK通路有关。     

Anti‐lung Cancer Effects of Polyphyllin VI and VII Potentially Correlate with Apoptosis In Vitro and In Vivo

Polyphyllin VI (PVI) and polyphyllin VII (PVII) derived from Paris polyphylla possess anti‐cancer activities. However, the mechanisms for the anti‐lung cancer effects of PVI and PVII remain poorly understood. In this study, PVI and PVII exhibited inhibitory effects on the proliferation of A549 and NCI‐H1299 cells. PVI and PVII induced G2/M cell cycle arrest and triggered apoptosis. PVI and PVII upregulated the tumor suppressor protein p53 and downregulated cyclin B1. The two treatments significantly increased the expression levels of death receptor 3, death receptor 5, Fas, cleaved PARP, and cleaved caspase‐3. Furthermore, PVI and PVII significantly inhibited the growth of A549 cells in vivo. The tumor inhibitory rates of PVI were 25.74%, 34.62%, and 40.43% at 2, 3, and 4 mg/kg, respectively, and those of PVII were 25.63%, 41.71%, and 40.41% at 1, 2, and 3 mg/kg, respectively. Finally, PVI and PVII regulated the expression of proteins related to the apoptotic pathway in A549 xenografts. In summary, PVI and PVII exhibited strong inhibitory effects on lung cancer cell growth in vitro and in vivo by inducing G2/M cell cycle arrest and triggering apoptosis. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

c‐Jun N‐terminal Kinase‐Dependent Endoplasmic Reticulum Stress Pathway is Critically Involved in Arjunic Acid Induced Apoptosis in Non‐Small Cell Lung Cancer Cells

Though arjunic acid, a triterpene isolated from Terminalia arjuna, was known to have antioxidant, antiinflammatory, and cytotoxic effects, its underlying antitumor mechanism still remains unclear so far. Thus, in the present study, the molecular antitumor mechanism of arjunic acid was examined in A549 and H460 non‐small cell lung cancer (NSCLC) cells. Arjunic acid exerted cytotoxicity by 3‐[4, 5‐dimethylthiazol‐2‐yl]‐2, 5‐diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay and significantly increased sub‐G1 population in A549 and H460 cells by cell cycle analysis. Consistently, arjunic acid cleaved poly (ADP‐ribose) polymerase (PARP), activated Bax, and phosphorylation of c‐Jun N‐terminal kinases (JNK), and also attenuated the expression of pro‐caspase‐3 and Bcl‐2 in A549 and H460 cells. Furthermore, arjunic acid upregulated the expression of endoplasmic reticulum (ER) stress proteins such as IRE1 α, ATF4, p‐eIF2α, and C/EBP homologous protein (CHOP) in A549 and H460 cells. Conversely, CHOP depletion attenuated the increase of sub‐G1 population by arjunic acid, and also JNK inhibitor SP600125 blocked the cytotoxicity and upregulation of IRE1 α and CHOP induced by arjunic acid in A549 and H460 cells. Overall, our findings suggest that arjunic acid induces apoptosis in NSCLC cells via JNK mediated ER stress pathway as a potent chemotherapeutic agent for NSCLC.     

南方红豆杉水提物诱导人肺癌A549细胞凋亡及其分子机制的实验研究

目的 探讨南方红豆杉水提物诱导人肺癌A549细胞的凋亡作用及其分子机制。     

消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

[目的]分析消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,探究其抑瘤机制。[方法]在Invitrogen公司的网上设计系统中设计靶向Survivin基因的siRNA序列,并将其转染A549细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测消岩汤以及转染组对A549细胞生长抑制的情况,免疫组化法观察A549细胞Survivin蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。[结果]MTT法显示消岩汤具有抑制A549细胞生长的作用,其作用具有一定的时间依赖性,转染中药组的抑制率显著高于转染对照组及非转染中药组。经免疫组化法检测,转染对照组对Survivin蛋白表达的抑制率明显高于非转染中药组,但显著低于转染中药组。流式细胞术检测结果显示消岩汤及重组质粒以诱导细胞晚期凋亡为主,转染中药组A549细胞凋亡率显著高于其他各组。[结论]消岩汤可诱导A549细胞的凋亡,联合应用转染靶向Survivin基因的重组质粒可增强其体外诱导A549细胞凋亡的作用。