白藜芦醇对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤时炎性反应的影响

目的研究白藜芦醇预处理对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用,以及对炎性反应的影响。 方法取糖尿病模型制备成功的SD大鼠30只,采用随机数字表法分为3组（n=10）：假手术组（Sham组）、心肌缺血再灌注组（MI/R组）和心肌缺血再灌注+白藜芦醇组（MI/R+Res组）。B超测量左心室的射血分数（LVEF）以及左室短轴缩短率（FS）,于再灌注末时处死5只大鼠,用TTC染色法测定心肌梗死面积,另再处死5只大鼠,经腹主动脉取血测心肌损伤标志物乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）的浓度,采用ELISA法检测血清的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白介素-6（IL-6）,细胞间黏附分子-1（ICAM-1）,并取心肌组织,通过RT-PCR法测TNF-α,IL-6,基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的含量。 结果与Sham组比较,MI/R组与MI/R+Res组的LDH和CK-MB浓度,血清TNF-α,IL-6,ICAM-1含量以及心肌梗死面积均显著增高,LVEF和FS显著降低,心肌TNF-α,IL-6,MMP-9的mRNA表达增加（均P<0.05）;与MI/R组比较,MI/R+Res组的LDH和CK-MB浓度,血清TNF-α,IL-6,ICAM-1含量以及心肌梗死面积均显著降低,LVEF和FS显著升高,TNF-α,IL-6,MMP-9的mRNA表达减少（均P<0.05）。 结论白藜芦醇预处理可以减轻糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤时的炎性反应。     

炎症因子在尿毒症大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的观察尿毒症大鼠脑缺血再灌注(I/R)后炎症因子的动态变化。方法清洁级健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为单纯尿毒症组(CRF组)6只、尿毒症合并脑I/R组(CRF+I/R组)24只,制备尿毒症模型,成模后,再取同样大鼠30只,随机分为正常对照组6只、单纯脑I/R组24只。将I/R组和CRF+I/R组大鼠再制作大脑中动脉栓塞模型,脑缺血2h后再灌注,按再灌注后不同时间点(0、2、12、24h)I/R组、CRF+I/R组又分为4个亚组,每个亚组6只。I/R组和CRF+I/R组按再灌注后的时间点取材,正常对照组在饲养3～7d后取材,CRF组在成模后0～3d取材,RT-PCR法检测脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA表达情况。结果 TNF-αmRNA:正常对照组与CRF组大鼠脑组织TNF-αmRNA的表达差异不显著(P0.05),CRF组大鼠TNF-αmRNA的表达较I/R组各时间点均降低(P0.05);脑I/R两组大鼠TNF-αmRNA在2h时间点表达最强,此后逐渐下降;CRF+I/R组大鼠各时间点TNF-αmRNA的表达均较CRF组、I/R组升高(P0.05)。IL-1βmRNA、IL-6mRNA:CRF组大鼠IL-1βmR-NA、IL-6mRNA的表达均较正常对照组升高,但差异不显著(P0.05);与I/R组各时间点相比,CRF组大鼠IL-1βmRNA、IL-6mRNA的表达均明显偏低(P0.05);脑I/R两组大鼠脑组织中IL-1β、IL-6mRNA表达随再灌注时间延长逐渐升高,至24h达高峰;与I/R组和CRF组相比,CRF+I/R组各时间点IL-1βmRNA和IL-6mRNA表达均显著升高(P0.05)。结论炎症因子参与了尿毒症大鼠的脑I/R损伤,提示尿毒症的微炎症状态对神经系统具有一定的影响。     

巨噬细胞极化在白藜芦醇抗大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨巨噬细胞极化在白藜芦醇(Res)抗肝脏缺血-再灌注损伤(HIRI)中的作用。方法 24只雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血-再灌注组(I/R组)、Res后处理组(Res组),每组8只。建立急性HIRI模型,于再灌注6 h后收集动物血液和肝脏标本。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(AKP)及炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-10、转化生长因子(TGF)-β的浓度,采用Real-time PCR法检测肝脏组织TNF-α及IL-10 mRNA的表达情况,采用流式细胞术分析肝脏M1、M2型巨噬细胞分布情况。结果 Res后处理可以降低肝脏功能学指标ALT、AST、AKP的血清浓度;与I/R组比较,Res组IL-10和TGF-β含量升高,而IL-6和TNF-α含量降低,同时IL-10 mRNA表达量升高而TNF-α表达量下降;流式细胞分析结果显示Res后处理可以降低M1型巨噬细胞的比例,使巨噬细胞向M2型转化。结论 Res对HIRI的保护是通过调节巨噬细胞极化发挥作用的。     

不同剂量右美托咪定对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织TNF-α、IL-1β及ICAM-1表达的影响

目的探讨不同剂量右美托咪定(DEX)对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β及细胞间黏附分子(ICAM)-1表达的影响。方法按照随机数字表法将60只健康SD大鼠分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、DEX组(低剂量DEX组、中剂量DEX组和高剂量DEX组),每组各12只。采用栓线法制备大鼠大脑中动脉阻塞缺血再灌注模型,造模结束后Sham组和I/R组大鼠持续静脉泵入生理盐水2 h,速度为2 ml/h,低剂量DEX组、中剂量DEX组和高剂量DEX组大鼠分别静脉输注0.05、0.50、5.00μg·kg~(-1)·min~(-1)DEX,持续静脉泵注2 h。造模结束后,评估各组大鼠神经功能缺损程度和梗死区域面积,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-α、IL-1β及ICAM-1的表达水平,同时应用免疫组化法检测各组大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β及ICAM-1的表达水平。结果造模大鼠均出现了一定程度的神经功能缺损和梗死面积,其他各组大鼠神经功能评分及梗死面积均明显高于Sham组,同时高、中、低剂量DEX组大鼠神经功能评分及梗死面积均显著低于I/R组(P<0.05);与Sham组相比,其他各组大鼠血清和脑组织中TNF-α、IL-1β及ICAM-1表达水平均明显升高(P<0.05);与I/R组相比,高、中、低剂量DEX组大鼠血清和脑组织中TNF-α、IL-1β及ICAM-1表达水平显著降低(P<0.05),但是不同剂量DEX组大鼠神经功能评分、梗死面积及血清和脑组织中各检测指标水平之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DEX可以明显减少缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损程度和梗死面积,并且能够通过抑制血清及脑组织中炎症因子的表达,从而发挥脑保护作用,同时无显著的剂量相关性。     

SIRT1信号通路在白藜芦醇保护脑缺血再灌注损伤中的作用机制

目的探讨白藜芦醇(Res)对大脑缺血再灌注损伤后大鼠神经元凋亡的影响及其作用机制。方法采用线栓法制作短暂性大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。将60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注模型组(MCAO组)、白藜芦醇低剂量(10 mg/kg)组(Res 10组)、白藜芦醇高剂量(30 mg/kg)组(Res 30组)。栓塞缺血2 h、再灌注24 h后对各组大鼠进行神经功能损伤评分、脑组织含水量及脑梗死体积评估,TUNEL染色检测细胞凋亡,同时测定缺血再灌注损伤缺血测脑组织中SIRT1、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平。结果脑缺血再灌注后24 h,MCAO组脑梗死体积大于Sham组(P0.01),神经功能损伤评分、脑组织含水量、TUNEL(+)细胞数及Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表达量均明显高于Sham组(P0.01),而SIRT1 mRNA表达量较Sham组明显降低(P0.01)。与MCAO组比较,Res 10组、Res 30组脑梗死体积明显缩小(P0.01),神经功能损伤评分、脑组织含水量、TUNEL(+)细胞数以及脑组织中Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表达量明显降低(P0.01),SIRT1 mRNA表达明显增加(P0.01)。结论白藜芦醇可通过减轻缺血脑组织神经元凋亡对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥神经保护作用,其可能通过激活SIRT1信号通路从而抑制或逆转脑缺血再灌注神经损伤的发生。     

缺血后处理下调脑缺血再灌注大鼠白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α表达

目的 探讨缺血后处理(ischemic postconditioning,IP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠白细胞介素-1β(interleukin- 1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响.方法 110只成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(n=10)、缺血再灌注组和IP组,后2组根据再灌注时间再分为6、12、24、48和72 h亚组(每亚组n=10).采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型.IP方法为在大脑中动脉闭塞2h后实施再灌注15 s/缺血15 s,反复3次.对各组大鼠进行神经行为学评分,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色测定脑梗死体积,免疫组化法检测脑组织TNF-α和IL-1β蛋白表达,原位杂交法检测IL-1β和TNF-α mRNA表达.结果 与缺血再灌注组比,IP组神经行为学评分显著降低(P均＜0.05),脑梗死体积显著缩小(P均＜0.05).假手术组额顶叶皮质IL-1β、TNF-α蛋白和mRNA表达微弱;缺血再灌注组IL-1β、TNF-α蛋白和mRNA在额顶叶皮质大量表达,6h开始上调,24 h达高峰(与其他时间点比较,p均＜0.05),之后逐渐下降;IP组具有相同的动态变化趋势,且各时间点表达量均显著低于缺血再灌注组(P均＜0.05).结论 IP可显著下调脑组织IL-1β和TNF-α表达,缩小缺血再灌注大鼠脑梗死体积,提示IP可通过抑制脑组织缺血再灌注后炎症反应发挥神经保护作用.     

小檗碱通过激活SIRT1通路减轻脑缺血再灌注大鼠炎症及凋亡

目的研究小檗碱预处理对大鼠脑缺血再灌注(I/R)过程中炎症及凋亡的调节作用及分子机制。方法选择40只SPF级成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、I/R组、小檗碱预处理组(BP组)、BP+SIRT1抑制剂EX527处理组(BP+EX组),BP组在造模前给予小檗碱100 mg/(kg·d)灌胃、连续14天,BP+EX组在造模前给予小檗碱100 mg/(kg·d)灌胃及SIRT1抑制剂EX527 5 mg/(kg·d)腹腔注射、连续14天,而后采用线栓法建立脑I/R模型。采用神经功能缺损评分、TUNEL染色、Nissl染色评价神经功能损伤程度,检测SIRT1通路基因、线粒体途径凋亡基因、炎症因子的表达。结果 I/R组大鼠的神经功能缺损评分、TUNEL阳性率及脑组织中核因子κB (NF-κB)、P53、Bax、Caspase-9、Caspase-3、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达水平均明显高于假手术组,Nissl阳性数目及脑组织中SIRT1、Bcl-xL的表达水平均明显低于假手术组(P0.05);BP组大鼠的神经功能缺损评分、TUNEL阳性率及脑组织中NF-κB、P53、Bax、Caspase-9、Caspase-3、TNF-α、IL-1β、IL-6、ICAM-1的表达水平均明显低于I/R组,Nissl阳性数目及脑组织中SIRT1、Bcl-xL的表达水平均明显高于I/R组(P0.05);BP+EX组大鼠脑组织中Bax、Caspase-9、Caspase-3、TNF-α、IL-1β、IL-6、ICAM-1的水平均明显高于BP组,Bcl-xL的表达水平明显低于BP组(P0.05)。结论小檗碱预处理能够通过激活SIRT1通路来减轻大鼠脑缺血再灌注过程中的炎症及凋亡。     

白细胞介素-37介导炎症反应平衡保护小鼠心肌缺血再灌注损伤的机制

目的:探讨外源性重组人源性白细胞介素(IL)-37对小鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法:8~10周雄性c57BL/6小鼠为实验对象,随机分为假手术组、缺血再灌注(I/R)对照组和I/R+IL-37干预组,每组6只。观察各组小鼠I/R后心肌坏死面积及心功能(24h后),检测缺血心肌处中性粒细胞募集(MPO),以及缺血心肌和血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β、IL-6、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)表达(4h后)。结果:与假手术组比较,I/R对照组心功能明显下降,TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显增高。IL-37干预组可以明显抑制TNF-α、IL-1β和IL-6表达,增加IL-10与TGF-β水平,减轻MPO,减少心肌坏死面积并改善心功能。结论:IL-37减轻小鼠心肌I/R损伤,可能与抑制MPO、降低促炎因子表达以及上调抗炎因子表达相关。     

缺血后处理对再灌注损伤后炎症因子的调节作用

目的探讨缺血后处理(POC)调节肾缺血再灌注损伤(RIPI)后炎症因子的表达水平及其对大鼠肾脏保护作用的机制。方法成年SD大鼠随机分成:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、POC组。Sham组为对照组。I/R组:采用无创动脉夹夹闭左肾动脉45 min,切除右肾,然后去除血管夹,恢复血流灌流。POC组:在I/R组的基础上再进行3个循环的30 s缺血/30 s再灌注的手术干预(共计3 min),最后打开血管夹使血液再灌注。将各组动物于清洁条件下饲养,于第2天及1个月时收集各组动物血清,检测肾脏功能。第2天时,苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织结构。RT-PCR法检测各组中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-10的表达水平。结果再灌注第2天,Sham组血清肌酐(Cr)和血尿酸氮(BUN)的浓度维持在正常水平,而I/R组Cr和BUN的浓度明显增高(P0.01),POC组Cr和BUN的浓度显著低于I/R组(P0.05)。再灌注1个月,三组中Cr的浓度无明显差异(P0.05)。HE染色结果显示,再灌注第2天,Sham组中肾组织形态正常,I/R组肾小管上皮细胞变性,部分脱落,管腔内可见管型,POC组肾组织病变较轻。RT-PCR法检测结果显示,再灌注第2天,Sham组TNF-α、IL-6和IL-10的表达水平很低,I/R组中TNF-α、IL-6的表达水平明显升高,POC组低于I/R组,而IL-10的表达水平明显高于I/R组。结论 POC降低了缺血再灌注后的急性炎症反应,从而对大鼠的肾脏起到了保护作用。     

MMP-9在心肌缺血再灌注中的作用和机制研究

目的探讨血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在心肌缺血再灌注中的表达和作用机制。方法建立大鼠急性心肌缺血再灌注模型,构建MMP-9-siRNA慢病毒,并分为对照组、缺血再灌注(I/R)组、I/R+control-siRNA组、I/R+MMP-9-siRNA组。观察并记录术后28 d各组大鼠生存情况,Western Blot检测在大鼠I/R术后1 d,7 d,14 d,28 d心肌中MMP-9的表达;M型超声评价各组大鼠心功能改变;Real time PCR法检测干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化。结果I/R+MMP-9-siRNA组大鼠生存率达80%,生存率显著提高,与I/R组比较,具有统计学意义(P0.05)。I/R组和I/R+control-siRNA组左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)以及左心室质量指数(LVMI)增加(P0.05),对I/R组大鼠进行MMP-9-siRNA干预后,可见3个指标减少,与I/R组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。I/R术后,MMP-9蛋白表达明显增加,与术后1 d比较,差异具有统计学意义(P0.05)。当缺血再灌注时IFN-γ、IL-6、TNF-α急剧增加(P0.05),MMP-9-siRNA干预后,可见IFN-γ、IL-6、TNF-α不同程度的减低,与I/R组大鼠比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论以MMP-9-siRNA作为靶标可减轻缺血再灌注损伤和心室重构,改善心室功能。     

羟基红花黄色素A改善SD大鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的研究羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)对大鼠心肌缺血/再灌注(myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)损伤的改善作用。方法采用结扎Sprague Dawley(SD)大鼠冠状动脉左前降支的方法,建立MI/R损伤模型;结扎大鼠冠状A前降支30 min,再灌注3 h,灌注即刻给药。实验分为假手术组(Sham组)、模型组(MI/R组)、HSYA治疗组(MI/R+HSYA组,5 mg/kg),每组10只动物。观察心肌缺血损伤面积大小、HE染色变化、心电图监测变化、心肌损伤标志物以及血清中IL-1、IL-6和TNF-α的含量变化。结果 MI/R+HSYA组心肌梗死面积显著低于MI/R组(P0.05)。HE染色显示MI/R+HSYA组心肌细胞形态更接近于假手术组。血流动力学及心电监测显示MI/R+HSYA组心肌舒缩功能指标左心室收缩末压(LVSP)、左心室上升最大速率(+dp/dtmax)、左心室下降最大速率(-dp/dtmax)以及心率(HR)较MI/R组均升高(P0.05)。MI/R+HSYA组血清肌酸激酶同工酶(CKMB)、肌钙蛋白I(c Tn I)水平较MI/R组有所降低(P0.05);IL-1、IL-6及TNF-α水平也较MI/R组有所降低(P0.05)。结论 HSYA可以降低心肌梗死的程度和范围,改善心功能,减少心肌细胞损伤,抑制炎症因子的释放,从而发挥保护和改善心肌缺血的作用。     

吸入高浓度氢气对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响

目的 探究高浓度氢气对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响。方法 雄性SD大鼠30只,体重220～260 g,随机分为3组(n=10):假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和氢气组(H2组)。采用阻断左侧肺门30min,再灌注1h的方法制备大鼠肺缺血再灌注模型。Sham组,只开胸,不建立缺血再灌注模型,I/R组和H2组建立缺血再灌注模型,H2组在再灌注期间吸入67%H2。再灌注1h后,采用ELISA法检测肺组织中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法检测肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的水平,并且用Western blot方法测定凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9的含量。结果 与Sham组比较,I/R组IL-6、TNF-α和MDA水平显著升高,SOD的活性降低,caspase-3和caspase-9的含量明显升高(P<0.05)。与I/R组比较,H2组IL-6、TNF-α和MDA水平显著降低,SOD的活性升高,caspase-3和caspase-9的含量明显降低(P<0.0...     

人白介素-10基因转染对大鼠脑缺血再灌注损伤半影区炎性因子基因和蛋白表达的影响

目的 观察人白介素(IL)-10基因转染对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤半影区肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)基因和蛋白表达的影响. 方法 建立大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,采用立体定向脑室内注射的方式进行转染,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测其转染效果,氯化三苯四氮唑(TTC)染色测定脑梗死体积,荧光实时定量PCR检测半影区TNF-α和IL-1β基因表达情况,ELISA法检测半影区TNF-α和IL-1β蛋白的含量.结果 正常对照组、缺血对照组、空质粒组和IL-10基因转染组半影区TNF-α蛋白含量分别为(0.66±0.04)、(1.16±0.26)、(1.15±0.26)ng/g和(0.84±0.05)ng/g,IL-1β蛋白含量分别为(0.37±0.05)、(1.25±0.39)、(1.21±0.58)ng/g和(0.62±0.05)ng/g.与正常对照组比较,其余各组TNF-α和IL-1β蛋白含量明显升高(P＜0.01),而IL-10基因转染组TNF-α和IL一1β含量则较缺血对照组和空质粒组显著降低(P＜0.01);正常对照组,缺血对照组、空质粒组和IL-10基因转染组半影区TNF-αmRNA的表达量分别为1.00±0.53、9.42±1.83、9.69±1.96和3.53±1.09;IL-1βmRNA的表达量分别为1.00±0.51、27.81±4.84、23.96±4.90和13.55±4.45.与正常对照组比较,其余各组TNF-α和IL-1βmRNA表达量明显升高(P＜0.01),而IL-10基因转染组TNF-α和IL-1βmRNA表达量则较缺血对照组和空质粒组显著降低(P＜0.01). 结论 人IL-10基因转染后能抑制大鼠局灶脑缺血再灌注损伤半影区TNF-α和IL-1β基因和蛋白的表达,可能是其发挥缺血脑保护作用的机制之一.     

DMOG稳定缺血/再灌注心肌组织低氧诱导因子-1α表达时间规律的研究*

目的 观察二甲氧乙二酰甘氨酸（DMOG）预处理对大鼠缺血再灌注（I/R）心肌组织中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响,探讨DMOG稳定HIF-1α表达的时间规律。方法 雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（Sham组）、心肌缺血再灌注组（MI/R组）、DMOG+MI/R组、YC-1+MI/R组（YC-1为HIF-1α抑制剂）。建立心肌缺血/再灌注模型,心肌缺血45 min,再灌注0 h、3 h、6 h、9 h四个时间点。留取心脏左室前壁标本,分别采用Western blot和Real-time PCR法检测心肌组织中HIF-1α 的蛋白与mRNA表达水平。结果 ①再灌注相同时间点,D+MI/R组的HIF-1α蛋白表达量均明显高于MI/R组;在观察时间内,D+MI/R组的HIF-1α蛋白表达量呈现出先增高、后降低的趋势,并且在再灌注3h时达峰值（P<0.05）。②HIF-1α的mRNA表达量在不同组间及再灌注各个时间点均无明显差异（P?0.05）。结论 DMOG预处理能够稳定心肌I/R时HIF-1α的蛋白表达量,峰值出现于再灌注3h,而对HIF-1α的mRNA表达量无明显影响,表明这种作用主要发生于蛋白合成过程,而非基因转录水平。     

四氢吡咯二硫代氨基甲酯对人脐静脉内皮细胞模拟缺血再灌注诱导炎症因子的影响

目的通过四氢吡咯二硫代氨基甲酯(PDTC)研究核因子(NF)-κB对人脐静脉内皮细胞(HUVECS)模拟缺血再灌注后炎症因子表达的影响。方法分为五组对HUVECs进行培养,即对照组(正常培养基培养)、缺血再灌注组(模拟缺血培养液培养30 min后换正常培养液再培养4 h)、缺血再灌注+0.1 mmol/L PDTC组、缺血再灌注+0.25 mmol/L PDTC组和缺血再灌注+0.5 mmol/L PDTC组。后三组均于模拟缺血再灌注培养前1 h在培养液中添加相应浓度PDTC。实时定量PCR和酶联免疫吸附法分别检测不同浓度PDTC对肿瘤坏死因子(TNF)-α、细胞间黏附分子(ICAM)-1 mRNA和蛋白表达水平的影响。结果模拟缺血再灌注刺激TNF-α、ICAM-1的mRNA表达水平显著升高(P0.05,P0.01)。同时,模拟缺血再灌注刺激HUVECS上清液TNF-α和ICAM-1蛋白表达水平显著升高(P0.05)。0.1、0.25、0.5 mmol/L PDTC均显著降低模拟缺血再灌注所诱导的TNF-α和ICAM-1的mRNA表达水平(P0.05)。0.5 mmol/L PDTC显著降低模拟缺血再灌注所诱导的TNF-α和ICAM-1的蛋白表达水平(P0.05)。结论 PDTC通过沉默p65,抑制模拟缺血再灌注诱导的TNF-α和ICAM-1表达水平。     

Urocortin-I通过激活Akt/GSK-3β改善I/R心肌单相动作电位及氧化炎症反应

目的研究Urocortin-I通过激活蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)通路,对缺血再灌注(I/R)心肌单相动作电位及氧化炎症反应的作用。方法制备离体心肌Langendorff灌注模型,并分为对照组、I/R组、Urocortin-I组、Urocortin-I+LY组。对照组进行常规灌流;I/R组给予常规预处理、Urocortin-I组给予Urocortin-I预处理、Urocortin-I+LY组给予Urocortin-I+LY294002预处理后,均进行缺血再灌注处理。比较4组间心肌酶、心肌梗死面积、单相动作电位、炎症因子、氧化应激产物、Akt/GSK-3β通路分子的差异。结果与对照组比较,I/R组乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)的含量及心肌梗死面积明显增加,APA、APD50、APD90的水平及p-Akt、p-GSK-3β的含量明显减少(P0.05)。与I/R组比较,Urocortin-I组LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6、ICAM-1、ROS、MDA的含量及心肌梗死面积明显减少,APA、APD50、APD90的水平及p-Akt、p-GSK-3β的含量明显增加(P0.05)。与Urocortin-I组比较,Urocortin-I+LY组LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6、ICAM-1、ROS、MDA的含量及心肌梗死面积明显增加,APA、APD50、APD90的水平及p-Akt、p-GSK-3β的含量明显减少(P0.05)。结论 Urocortin-I通过激活Akt/GSK-3β通路改善I/R心肌的单相动作电位及氧化炎症反应。     

大鼠急性心肌梗死后心脏炎症细胞因子基因和蛋白表达及辛伐他汀干预研究

目的探讨辛伐他汀对急性心肌梗死(AMI)后大鼠心脏炎症细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)mRNA表达和蛋白质产生的影响。方法Wistar大鼠36只分3组:(1)假手术(Sham)组;(2)心肌梗死对照(MI-C)组;(3)辛伐他汀(MI-S)组。动物笼养4周取出心脏,沿乳头肌等分为二,一半用逆转录聚合酶链反应法测定心脏细胞因子mRNA表达,另一半用Western blot测定细胞因子蛋白质生成量。结果Sham组上述细胞因子均无明显表达,MI-C组TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-10 mRNA和蛋白产生均显著高于Sham组;同MI-C组比较,MI-S组的TNF-α,IL-1β,IL-6 mRNA和蛋白生成均显著下降,而IL-10的mRNA和蛋白明显升高。结论辛伐他汀明显降低AMI后大鼠心脏的致炎症细胞因子,而升高炎症保护因子IL-10。     

免疫因素在大鼠肺缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨免疫因素在大鼠肺缺血再灌注(I/R)损伤中的作用。方法选取90只健康雄性Wistar大鼠,随机分为3组,即为I/R组(左肺I/R组),Sham组(假手术组),C组(对照组),均于缺血30 min、再灌注60、120 min时采集标本,检测肺组织的湿/干重比(W/D),支气管肺泡灌洗液的蛋白总量(TP),白细胞数目(WBC),中性粒细胞(PMN)的百分比及肺组织匀浆肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1、IL-6及IL-8含量。结果在各组的对应时间点,I/R组中再灌注60、120 min时,W/D比值、WBC、PMN比例及TP含量明显高于C组及Sham组(P<0.05);I/R组中再灌注120 min,W/D比值、WBC、PMN比例及TP含量明显高于I/R组中再灌注60 min(P<0.05);I/R组中缺血30 min,肺组织匀浆TNF-α含量明显高于C组及Sham组(P<0.05);I/R组中再灌注60 min及再灌注120 min时,肺组织匀浆TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8含量明显高于C组及Sham组(P<0.05);I/R组中再灌注120 min时,肺组织匀浆TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8含量明显高于I/R组再灌注60 min时(P<0.05)。结论免疫因素在大鼠肺I/R损伤发挥重要作用。     

基于PPAR-γ探讨人参皂苷Rg1对大鼠心肌缺血再灌注后心律失常的调节作用

目的基于过氧化体增殖物激活型受体γ(PPAR-γ)探讨人参皂苷Rg1对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)后心律失常的调节作用。方法 72只SD大鼠随机分为假手术组(SO组)、缺血再灌注组(I/R组)、人参皂苷Rg1组(Rg1组)、人参皂苷Rg1+罗格列酮组(Rg1+ROS组),后三组采用冠状动脉左前降支结扎的方法建立I/R模型;SO组和I/R组给予生理盐水干预、Rg1组给予40 mg/kg人参皂苷Rg1干预、Rg1+ROS组给予40 mg/kg人参皂苷及6 mg/kg罗格列酮干预。再灌注6 h的过程中进行心电图监测,再灌注6 h后检测心肌I/R面积、心肌酶、炎症细胞因子的含量及核因子κB (NF-κB)、NF-κB抑制因子(I-κB)、PPAR-γ的表达水平。结果与SO组比较,I/R组的心律失常明显加剧,心肌I/R面积、磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、P选择素、E选择素含量及NF-κB、PPAR-γ表达水平均明显增加,I-κB表达水平明显减少。与I/R组比较,Rg1组的心律失常明显改善,心肌I/R面积、CK、CK-MB、LDH、TNF-α、IL-1β、P选择素、E选择素含量及NF-κB、PPAR-γ表达水平均明显减少,I-κB表达水平明显增加。与Rg1组比较,Rg1+ROS组的心律失常明显加剧,心肌I/R面积、CK、CK-MB、LDH、TNF-α、IL-1β、P选择素、E选择素含量及NF-κB、PPAR-γ表达水平均明显增加,I-κB表达水平明显减少(P均0.05)。结论人参皂苷Rg1通过抑制PPAR-γ介导的炎症反应来改善大鼠心肌I/R后心律失常。     

川芎嗪抑制大鼠脑缺血再灌注损伤的机制

目的探讨川芎嗪(TMP)抑制脑缺血再灌注损伤(CIRI)的分子机制。方法选择清洁级健康成年雄性SD大鼠,采用改良的Zea Longa栓线法构建大脑中动脉梗塞(MCAO)模型,并将大鼠随机分为三组(n=20):假手术组、模型组、TMP治疗组。假手术组大鼠不插入线栓,其余操作均同模型组;TMP治疗组大鼠在被拔出线栓再灌注时,腹腔注射TMP 20 mg/kg。再灌注24 h后,各组大鼠进行神经功能评分,然后麻醉处死,取材检测。干湿称重法检测大鼠脑组织含水量;2,3,5-三苯基氮化四氮唑(TTC)染色法检测大鼠脑梗死面积,HE染色观察脑组织形态;荧光定量PCR检测大鼠梗死侧脑皮层中miR-199a-5p、Bax、Bcl-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6 mRNA的表达水平;酶联免疫法检测大鼠血清中炎症介质TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;免疫组化法观察大鼠梗死侧脑皮质核转录因子(NF)-κB p65及磷酸化NF-κB p65(NF-κB p-p65)的表达。结果 TMP治疗可显著改善神经缺陷评分(P<0.05),降低脑组织含水量(P<0.05),减少梗死体积(P<0.01),减轻脑组织破坏。模型组miR-199a-5p、Bax、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的表达明显升高(P<0.05),而Bcl-2 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。而TMP治疗可显著降低miR-199a-5p、Bax、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的表达水平(P<0.05),增加Bcl-2 mRNA的表达(P<0.05)。与模型组比较,TMP治疗组大鼠脑皮质和血清中TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子含量均显著降低(P<0.05)。IHC结果显示,TMP治疗组中NF-κB p-p65阳性细胞数明显减少(P<0.05)。结论 TMP可减轻CIRI,其机制可能为抑制miR-199a-5p的表达,减少凋亡,降低炎症反应,且可降低NF-κB的活化。