血小板HPA基因库的建立和初步应用

血小板特异性抗原(human platelet alloantigens,HPA)基因频率在不同种族、不同地域中的分布各具特点,研究HPA的基因多态性不仅对群体遗传学的研究提供重要数据,而且对于临床输血实践、解决血小板输注无效(PTR)具有重要意义,并且能够预测血小板特异性同种免疫在不同种族中发生的可能性,为HPA同种免疫的患者提供已知.HPA基因型相配合的血液成分,提高疗效.     

长春地区人群HPA 1-6,15系统基因多态性分析

<正>人类血小板抗原系统HPA(Human Platelet Antigen)是由单核苷酸多态性(SNPs)导致单一氨基酸取代而导致的免疫原性结构，是血小板膜糖蛋白(GPIIb/IIIa、GPIa、GPIbα、GPIbβ 和 CD109)的构成部分，并且具有遗传多态性，可以介导产生同种免疫性抗体，并进一步导致血小板同种异体免疫反应的发生。当妊娠、输血和移植时，有可能引起血小板减少症，如血小板输注无效(PTR)、     

长春地区无偿献血者HPA1-6,15基因分型及频率调查

目的调查北方汉族人群人类血小板抗原（HPA）的基因频率及分布规律。建立一支HPA-1a,-2a,-4a,-5a,-6a阴性及已知HPA抗原的献血者队伍。方法随机抽取172名长春地区固定无偿血小板捐献者静脉血3ml,枸橼酸钠抗凝;采用TIANGEN试剂盒提取DNA。基因定量仪测定DNA的浓度和纯度。采用PCR-SSP方法进行试验。最后进行统计学分析。结果各表现型的频率分别是：HPA-1aa 0.988,HPA-1ab 0.012,HPA-2aa 0.833,HPA-2ab 0.159,HPA-2bb 0.008,HPA-3aa 0.355,HPA-3ab 0.482,HPA-3bb 0.163,HPA-4aa 0.988,HPA-4ab 0.012,HPA-5aa 0.971,HPA-5ab0.029,HPA-6aa 0.977,HPA-6ab 0.023,HPA-15aa 0.286,HPA-15ab 0.498,HPA-15bb 0.216。未发现HPA 1bb、4bb、5bb、6bb。各基因型的频率分别是：HPA-1a 0.994,HPA-2a 0.913,HPA-3a 0.596,HPA-4a 0.994,HPA-5a 0.985,HPA-6a 0.988,HPA-15a 0.535。其中基因频率占99%以上的有HPA-1a-、4a。各基因型的不配合率分别是HPA-1a 0.011,HPA-2a0.147,HPA-3a 0.366,HPA-4a 0.011,HPA-5a 0.028,HPA-6a 0.023,HPA-15a 0.374。结论本研究有助于在长春地区建立已知HPA抗原的机采血小板捐献者队伍,可以提高血小板抗体的检出率,为同种免疫性血小板减少症患者提供HPA相合的血小板。     

岳阳地区无偿献血者HPA1-6,15基因分型及频率调查

目的 了解岳阳地区汉族人群血小板抗原1-6,15多态性分布及基因频率.方法 采用PCR-SSP方法对岳阳地区204名无血缘关系固定血小板无偿捐献者进行HPA1-6及HPA-15系统的基因分型.结果 岳阳地区无偿献血者HPA1-6,15基因分型未发现HPA-1bb、-2bb、-4bb、-5bb.其中基因频率占98％以上的有HPA-1aa、-4aa、-5aa,本研究首次发现HPA-6bb,说明HPA-6具有多态性,杂合程度较低.结论 岳阳地区汉族人群HPA分布具有本地人群特点,调查数据分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,HPA-3和15系统具有多态性,在同种免疫性血小板随机输注时易产生同种免疫反应.     

北京地区汉族献血人群血小板HPA1-17基因多态性的研究

目的分析北京地区588名汉族无偿献血人群HPA基因多态性分布特点,计算HPA抗原不配合率的大小,分析有临床意义的HPA抗原系统并建立已知HPA基因型的血小板供者数据库。方法基因分型采用PCR-SSP(Polymerase Chain Reaction with Sequence-Specific),计算基因频率、基因型频率和χ2值,确定是否符合哈迪——温伯格平衡定律,并与国内外不同人群进行比较分析是否存在差异。结果 588名献血者均表达出HPA-a基因中的1a-17a基因;仅表达HPA-b基因中的1b-8b和15b;在基因型中主要以aa纯合子表达为多,其次是ab基因型表达较多,bb纯合子表达最少。具有最高杂合度的是HPA-3和HPA-15,HPA-3的aa、bb、ab基因型频率分别是0.352 0、0.4286、0.219 4;HPA-15的aa、bb、ab基因型频率分别是0.205 8、0.471 1、0.323 1。HPA9-14、16、17只表达a基因,抗原不配合率最低。χ2检验计算结果,HPA-3基因分布不符合哈迪——温伯格平衡定律,其余基因符合哈迪——温伯格平衡定律。结论该研究表明北京地区588名献血者的HPA基因分布具有自身特点,建立北京地区HPA基因供者库,在临床治疗方面具有重要意义。     

黑龙江省蒙古族人群HPA 1-17多态性的研究

目的:探讨中国黑龙江地区蒙古族与汉族人群的血小板抗原(HPA)的多态性分布特征,判断HPA抗原不配合比率,确定有临床意义的抗原系统,为建立包含不同民族已知HPA分型的血小板献血者库提供数据基础。方法:选择100例蒙古族的健康无血缘关系的人群为研究对象,以123例健康汉族人群为对照,采用PCR-SSP技术,对HPA 1-17共17个抗原系统34个等位基因进行分型。分别计算其基因频率、基因型频率,并进行分析比较。结果:汉族人群中HPA 4、HPA 7-14、HPA 16,17抗原系统的基因型均为aa,未检测出相应的等位基因HPA-b;HPA 1-3,HPA 5-6抗原系统的基因型以aa居多;蒙古族人群中HPA 1、HPA 5-14,HPA 16,17抗原系统的基因型均为aa,未检测出相应的等位基因HPA-b;HPA 2,4抗原系统的基因型以aa居多;两个民族中,HPA 3,15均具有较高的杂合度,易发生血小板不配合而造成的同种免疫。与对照组(汉族)比较,蒙古族HPA 1和HPA 3系统有显著差异(P0.05)。结论:黑龙江省蒙古族健康人群HPA1-17基因频率的分布与汉族人群相比有相似之处,也有本民族的自身特点。在建立血小板供者分型数据库时,要适当增加蒙古族的供者。     

献血者血小板1-16抗原基因遗传多态性分析及已知HPA型供者数据库的建立

本研究的目的是分析人类血小板抗原（human platelet antigen,HPA）基因多态性,根据分布频率来判断HPA抗原不配合比率以及抗体产生的机会,确定有临床意义的血小板抗原系统,并建立邯郸地区血小板基因频率数据库和供者库.采用SSP-PCR方法对邯郸地区148名随机献血者进行HPA1-16抗原32个等位基因的检测分析,并与不同人群的分布频率进行比较.结果表明：每个样本均检测到HPA-1a、2a、4a-14a、16a基因;HPA-4a、7a-14a、16a呈现单态性,未检测出相应的等位基因HPA-b;对于HPA-1、-2、-5、-6主要以a/a纯合子为多,a/a基因型频率分别是0.9595、0.8108、0.9865、0.9797,没有b/b纯合子出现.在HPA1-16中,具有最高杂合度的是HPA-15,基因型HPA15a/15a、HPA15a/15b、HPA15b/15b频率分别是0.2230、0.5270、0.2500;HPA-3在其次,基因型HPA3a/3a、HPA3a/3b、HPA3b/3b频率分别是0.3851、0.5135、0.1014.经x2检验,结果符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律.邯郸地区随机献血者HPA1-5系统基因频率与石家庄地区相似（P＞0.05）;与我国台湾人群进行HPA1-13、HPA-15的比较,HPA-1、-2、-6具有明显的不同（P＜0.05）,其它相似（P＞0.05）;与韩国人群进行HPA1-8的比较,除HPA-3具有明显不同外（P＜0.05）,其余均相似（P＞0.05）;与美国黑人进行HPA1-5的比较,HPA-1、-2、-5具有明显的差异（P＜0.05）;与英国人进行HPA1-11的比较,HPA-1、-5具有明显的不同（P＜0.05）.结论：北方地区中国人群HPA-2、-3、5、-15系统具有多态性,且HPA抗原分布不配合比率较高,这必然造成免疫暴露的机会增加,提示在临床上可能具有重要的免疫学意义.同时,在此次研究数据的基础上建立了邯郸地区血小板基因频率数据库和血小板已知型供者库.     

石家庄汉族血小板捐献者HPA1-17基因多态性分析

目的建立石家庄地区已知HPA基因型别单采血小板捐献者基因资料数据库,分析石家庄地区3591名汉族血小板捐献者HPA基因多态性分布特点。方法 HPA基因分型采用聚合酶链反应—序列特异引物(PCR-SSP)方法,计算等位基因频率、基因型频率及HPA-1～17组合型频率。结果 3 591名无血缘关系的血小板捐献者HPA基因HPA-7～14、HPA-16、HPA-17系统均为aa纯合子,未检出b等位基因。HPA-1～6、15中杂合度最高的为HPA-3系统,不配合率为37.44%;其次为HPA-15系统,不配合率为37.40%;HPA-4系统的杂合度最低,不配合率仅为0.38%;与国内部分地区人群数据比较分析,发现石家庄地区汉族血小板捐献者HPA-5系统分布与国内其他地区人群存在显著差异。结论建立了石家庄地区血小板捐献者HPA-1～17基因分型数据库,可为患者提供HPA相合的血小板,对减少临床血小板输注无效的发生具有重要意义。     

HPA和HLA已知型的血小板供者库建立及应用

目的 开展血小板同型或配合性输注是预防和治疗免疫性血小板输注无效(PTR)的良策.为此建立一定规模的HPA和HLA已知型血小板资料库,为临床提供匹配的单采血小板,是血小板输注安全有效的保障.方法 对所有供者库单采血小板进行ABO、HLA-A、B及HPA1-6,15基因分型.根据ABO、HPA同型和HLA同型或HLA交叉反应组相同(CREG)配型策略,编制数据库软件,建立上海市单采血小板供者资料库.结果 上海市血小板供者库至今已接受80人/次患者查询,共有78名患者找到合适的供者.HPA和HLA的CREG相同配合率为97.5％.其中50名患者接受了单采血小板的同型(或配合型)输注,47名输注有效(24 h血小板回收率＞20％).其中更有15名患者同型输注疗效明显,24 h回收率＞80％.结论 建立血小板供者HPA和HLA Ⅰ类抗原基因分型资料库,为患者提供HLA和HPA、ABO匹配的单采血小板,可以降低PTR的发生率,是解决免疫性PTR的根本手段.     

新乡地区献血者HPA1-18系统基因分型研究

目的研究新乡地区固定单采血小板献血者HPA1-18系统基因多态性分布,为输血患者寻找相容性血小板提供可靠依据。方法采用PCR-SSP法对150名固定单采血小板献血者标本进行HPA1-18系统的基因分型。结果HPA1-18系统基因在本地区固定献血者中分布频率分别为HPA-1a 0.990和-1b 0.010,HPA-2a 0.947和-2b 0.053,HPA-3a 0.376和-3b 0.624,HPA-15a 0.476和-15b 0.524;其余HPA系统只检测到a等位基因,故其基因频率均为1.000。结论HPA-2、3、15系统杂合度较高,抗原分布不配合率相对高,在临床配合性血小板输注中必须加以重视。     

河南汉族人群血小板抗原HPA1-16bw基因多态性研究

摘要：目的：研究河南地区汉族人群血小板抗原基因分布频率,建立地区性血小板抗原基因库,为血小板配合输注提供实验依据。 方法：用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）对160例无血缘关系的河南汉族体检健康者进行HPA1-16bw系统基因分型。 结果：HPA1-6和HPA-15基因频率分别为1a 0.987 5,1b 0.012 5; 2a 0.946 9,2b 0.053 1; 3a 0.590 6,3b 0.409 4; 4a 0.996 9,4b 0.003 1; 5a 0.990 6,5b 0.009 4; 6a 0.981 2,6b 0.018 8;15a 0.540 6,15b 0.459 4。 HPA7-14bw,16bw仅检测到a/a等位基因,基因频率均为1.000 0。经χ²检验各系统HPA符合Hardy-Weinberg平衡法则。HPA基因分布存在种族和地区差异。 结论:河南汉族人HPA-15 和HPA-3基因型杂合率最高。HPA基因分型有助于输注血小板时降低免疫性血小板减少症的发生概率。     

长沙地区汉族人血小板抗原（HPA1-17）基因多态性调查

目的研究长沙地区汉族人群人类血小板特异性抗原HPA1-17基因多态性。方法采用PCR-SSP方法对长沙市血液中心618名汉族无偿献血者进行HPA1-17系统基因分型。结果长沙地区618名汉族无偿献血者HPA1a基因频率为99.3%,HPA2a基因频率为96.8%,HPA3a基因频率为58.7%,HPA4a基因频率为99.4%,HPA5a基因频率为98.9%,HPA6a基因频率为98.9%,HPA15a基因频率为53.6%。结论长沙地区汉族人群HPA1-17的基因检测填补了地方空白,为建立血小板库奠定了基础,也为临床提供同型血小板输注提供可能。     

邢台地区血小板志愿捐献者HPA基因资料库的建立

目的对邢台地区血小板志愿捐献者进行人类血小板抗原(human platelet antigen,HPA)基因分型,建立已知HPA基因型的血小板捐献者资料库。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primers,PCR-SSP)方法对随机抽取的150例血小板捐献者进行HPA-1~6和HPA-1 5抗原系统共14个抗原基因分型。结果邢台地区血小板志愿捐献者HPA的基因频率分别为:HPA-1a 0.953,1b 0.01 0;2a 0.9 53,2b 0.086;3a0.596,3b 0.394;4a 1.000,4b 0:5a 0.967,5b 0.01 5:6a 0.986,6b 0.010;15a 0.475,1 5b 0.506。结论邢台地区血小板志愿捐献者HPA-1~6和HPA-15抗原系统的基因频率符合Hardy-weinberg遗传定律,与其他地区和国家的同类资料相比显示出种族和地域性差异,应建立邢台地区已知HPA基因型的血小板捐献者资料库。     

辽宁地区血小板志愿捐献者HPA基因资料库的建立

目的对辽宁地区血小板志愿捐献者进行HPA基因分型,建立已知HPA基因型的血小板捐献者资料库。方法采用PCR-SSP方法对随机抽取的130名血小板捐献者进行HPA-1-6和HPA-15抗原系统共14个抗原的基因分型。结果辽宁地区血小板志愿捐献者HPA的基因频率分别是:HPA-1a0.9925、1b0.0075、2a0.9305、2b0.0695、3a0.5810、3b0.4190、4a1.0000、4b0.000、5a0.9810、5b0.0190、6a0.9885、6b0.0115、15a0.4615、15b0.5385。结论辽宁地区血小板志愿捐献者HPA-1—6和HPA-15抗原系统的基因频率符合Hardy-Wein-berg遗传定律,与其它地区和国家的同类资料相比显示出种族和地域性差异,由此建立起了辽宁地区已知HPA基因型的血小板捐献者资料库。     

应用间接法建立北京地区健康成人HPLC法测定血清维生素B1与B2水平的参考区间

目的 建立北京地区健康人群采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测血清中维生素B1与B2的参考值范围,为临床诊断提供参考依据。方法 采用回顾性研究,收集2019年1月～2021年12月北京和合医学检验所5 563例维生素B1与5 476例维生素B2常规体检结果,受试者按性别、年龄分组,妊娠期女性分开统计,使用Z检验来确定各组数据有无显著差异,后根据改进的霍夫曼方法估算血清中维生素B1与B2的参考区间,并选取2022年1～3月北京和合医学检验所18～60周岁体检人群作为验证人群,将检测值与建立的参考区间进行比较,对其适用性进行验证。结果 不同年龄、性别成年人血清中维生素B1与B2水平没有显著差异[Z 2/(s₂-s₁)> 3],妊娠期也没有明显变化,可以合并建立参考区间。血清中维生素B1的参考区间为5～23 nmol/L,维生素B2的参考区间为3.0～24.0 ng/ml。参考区间验证符合率≥91.2%,适用性良好。结论 建立了...     

心肌营养素-1 ELISA测定法的建立及初步应用

目的 应用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附法(BSA-ELISA)建立血浆心肌营养素-1(CT-1)测定法,并初步应用于冠心病患者血浆CT-1水平的检测。方法 用鼠抗重组人CT-1单抗包被酶标板,加入待测抗原,并依次加入生物素化羊抗重组人CT-1多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记链霉亲合素,用H2O2-邻苯二胺显色。检测35名冠心病患者及对照组血浆CT-1含量的变化。结果 方法的线性范围为10～2000pg／ml,检测下限为10pg／ml,批内变异系数为1．76％～7．64％,批间变异系数为5．96％～9．04％。结论 该方法简便、快速,特异性、敏感性、重复性均在临床检测可接受范围内,标准曲线线性良好,适用于基础研究与临床检验。     

HLA与HPA配型不合导致血小板输注无效1例

正血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness,PTR)是指患者在至少连续两次输注ABO血型相合且其中至少一次保存时间在48 h以内的血小板后,血小板计数未见有效提升,临床出血症状未得到明显改善~([1])。大约30%～70%患者多次输注血小板制品后会产生血小板抗体,导致同种免疫反应而发生PTR~([2])。引起同种免疫反应的血小板抗原分为两类:一类是血小板相关性抗原,包括HLA-Ⅰ类抗原、ABH、Lewis     

基于荧光探针溶解曲线分析技术的HPA 1～5,15等位基因检测方法的建立

目的结合多重聚合酶链式反应(PCR)和荧光探针溶解曲线单核苷酸多态性(SNP)分型技术,建立一种方便准确的HPA等位基因分型方法。方法针对HPA 1~5,15这6种常见的HPA亚型等位基因设计多重PCR引物及SNP探针,通过多重PCR同时扩增6个等位基因目标片段并利用荧光探针的溶解温度变化区分不同SNP位点。结果多重PCR可同时扩增6个等位基因的目标片段,并通过溶解峰的Tm值变化区分SNP位点,结果与PCR-SSP位点相比较有相同的准确度,且操作更为简便,无需PCR后续电泳步骤,减少污染风险。结论成功建立了一种结合多重PCR和荧光探针溶解曲线分析技术的HPA 1~5,15等位基因检测方法。     

青岛地区已知HLA和HPA分型血小板供者库的建立及临床应用

目的建立青岛市已知HLA和HPA分型的无偿机采血小板供者库并用于解决血小板输注无效(PRT)患者的血小板输注。方法采用PCR-SSO流式磁珠法和PCR-SSP法分别对青岛地区无偿机采血小板捐献者1 800人进行HLA-Ⅰ类(A,B位点)、HPA-1—-5,-15基因分型,针对不同免疫状态的PTR患者比较3种不同配型法(血小板随机交叉配型法、抗原特异性配合法、抗原阴性选择法)解决血小板输注无效的效果。结果在高致敏(群体反应性抗体PRA>60%)患者中,HLA和或HPA特异性配型效果较好;轻度致敏(PRA<60%)患者随机交叉,抗原阴性选择,抗原特异性配型方案效果相似。不考虑ABO血型的因素1 800名的血小板供者库可以使99%的患者在库中找到至少1例HLA完全相合的供者,理论估算的供者库规模被不同表型的患者库中检索结果证实。结论理论上青岛本地化已知分型血小板供者库规模需达到6 000人左右可以有效解决血小板输注无效患者的血小板输注问题。只有重度致敏的患者需要HLA完全相同的供者,而轻度致敏的患者可以选择随机交叉配合或抗原阴性选择方案。