免疫介导的再生障碍性贫血小鼠模型造模过程中病理性T细胞的特征分析北大核心CSCD

目的通过DsRed小鼠淋巴细胞输注加全身辐照(TBI)建立免疫介导的再生障碍性贫血(AA)C.B10-H2b/LilMcd (C.B10)小鼠模型, 分析C.B10 AA小鼠模型中病理性T细胞在不同器官的动态归巢过程及特征。方法通过异体淋巴细胞输注加TBI建立AA小鼠模型, 以TBI组为对照, 分析外周血细胞和骨髓单个核细胞数, 验证造模效果。在造模的第3、6、9、12天, 处死小鼠并收集骨髓、脾脏、淋巴结和胸腺单个核细胞, 流式细胞术分析DsRed+ T细胞的动态变化及效应记忆T细胞(TEM)、中央记忆T细胞(TCM)、初始T细胞(na?ve T)和效应T细胞(TEFF)的比例。PCR Array分析AA小鼠不同组织内DsRed+病理性T细胞活化相关基因的表达谱。结果与TBI组相比, AA组小鼠在造模第9、12天出现严重骨髓衰竭, 第12天时骨髓有核细胞数、外周血细胞数均显著减少(P值均<0.05)。AA组小鼠骨髓、脾脏、淋巴结内DsRed+ T细胞比例随时间增加而增加。骨髓中的DsRed+ T细胞比例在第3、6天低于脾脏与淋巴结, 但在第12天时高于脾脏与淋巴结(P值均<0.05)。整个骨髓衰竭形成过程中, 胸腺中DsRed+T细胞比例均最低。在第12天时, AA小鼠骨髓、淋巴结和脾脏单个核细胞中, DsRed+CD3+CD4+ T细胞比例分别为(91.38±2.10)%、(39.78±6.98)%、(67.87±12.77)%, 三者之间两两比较均有统计学意义(P值均<0.05);DsRed+CD3+CD8+ T细胞比例分别为(98.21±1.49)%、(94.06±4.20)%、(96.29±1.23)%, 差异均无统计学意义(P值均>0.05)。第9、12天, AA组小鼠骨髓中几乎所有的DsRed+CD4+ T或DsRed+CD8+ T细胞均为TEM, 而淋巴结中包括TEM、TCM以及na?ve T。PCR Array结果显示:骨髓中DsRed+CD4+或DsRed+CD8+ T细胞中CD38、IFN-γ、LAG3、CSF1、SPP1及TNFSF13B表达增高, 但DsRed+CD4+ T细胞中FOXP3、CTLA4表达降低。结论 DsRed小鼠淋巴细胞输注可导致C.B10小鼠发生骨髓衰竭, 并可以在该AA模型小鼠中追踪DsRed+病理性T细胞。在C.B10 AA模型小鼠体内, DsRed+CD8+和DsRed+CD4+ T细胞先归巢到脾脏与淋巴结, 在其中扩增分化, 最终转运至骨髓并转化为TEM。胸腺对异体T细胞的归巢过程更具抵抗性, 提示胸腺在免疫介导AA模型的骨髓衰竭过程中可能是一个免疫豁免部位。在C.B10 AA模型小鼠的骨髓衰竭形成过程中, 归巢到骨髓的DsRed+病理性T细胞较迁移到脾脏与淋巴结的细胞具有更强的免疫活性, 而免疫抑制活性则减弱。     

铁过载对小鼠脾脏CD8~+ T淋巴细胞凋亡及分泌功能的影响

目的:探讨铁过载对小鼠脾脏CD8~+T细胞凋亡及分泌功能的影响。方法:将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、铁剂组、去铁组、抗氧化组,每组10只。腹腔注射右旋糖酐铁建立小鼠铁过载模型,观察小鼠铁负荷情况及脾脏CD8~+T淋巴细胞内可变铁池(LIP)水平,活性氧(ROS)水平;用流式细胞术检测脾脏CD8~+T细胞比例以及IFN-γ、TNF-α、Granzyme-B和perforin细胞因子的分泌情况,Annexin/PI标记流式细胞术检测CD8~+T细胞凋亡。免疫磁珠分选小鼠脾细胞获得CD8~+T细胞,RT-PCR检测CD8~+T细胞的IFN-γ、TNF-α、G ranzyme-B、perforin、BCL-2和BAX表达。结果:脾组织铁染色及流式细胞术检测均显示脾发生铁过载。与对照组相比外周血中CD8~+T细胞中ROS明显上升(108.45±9.22 vs 187.48±5.36,P0.01)。与对照组相比,铁过载组小鼠脾脏CD8~+T细胞比例明显降低(7.41±1.23)%vs(14.05±0.79)%,(P0.01)。流式细胞术检测显示,与对照组相比,铁过载组小鼠脾CD8~+T细胞IFN-γ显著降低(11.62±1.99)%vs(3.77±0.84)%,(P0.05),GranzymeB表达显著降低(11.36±1.48)%vs(5.29±1.74)%,(P0.05);小鼠脾CD8~+T细胞中IFN-γ(×10-4)表达(10.94±0.13 vs 2.19±0.78,P0.05)明显下降,Granzyme-B(×10-3)表达(7.70±0.75 vs 4.88±0.08,P0.05)明显下降。与对照组相比,小鼠脾CD8~+T细胞凋亡率明显增高(11.33±0.48)%vs(2.27±0.33)%,(P0.05);小鼠脾CD8~+T细胞中BCL-2表达(×10-3)明显下降(48.29±5.81 vs 1.17±0.21,P0.05),BAX表达(×10-2)明显上升(13.90±2.67 vs 446.93±76.64,P0.05)。上述铁过载对小鼠脾CD8~+T细胞的作用经去铁以及抗氧化治疗后可部分逆转。结论:铁过载可通过上调脾CD8~+T细胞内ROS进而上调BAX并下调BCL-2,增加CD8~+T细胞凋亡率,抑制CD8~+T细胞IFN-γ、Granzyme-B和蛋白的表达。经去铁以及抗氧化治疗后可部分逆转此作用。     

肝癌患者血清Th1/Th2相关因子与免疫功能的相关性研究

目的探讨肝癌患者血清Th1/Th2相关因子与免疫功能的相关性。方法选取2015年4月至2016年12月该院1 100例肝细胞癌患者和1 100例健康体检者分别作为研究组和对照组,比较两组血清干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-12、IL-4、IL-6、IL-10、C3补体、C4补体及CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、CD19~+B细胞、CD16/65~+NK细胞水平,分析它们之间的相关性,并对Th1与Th2平衡关系进行研究。结果研究组IFN-γ、TNF-α、IL-12水平明显低于对照组,IL-4、IL-6、IL-10水平明显高于对照组(P0.05);研究组外周血CD4~+T细胞、CD16/65~+NK细胞水平明显低于对照组,CD8~+T细胞、C3补体、C4补体水平明显高于对照组(P0.05);两组外周血CD19~+B细胞水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。肝癌患者血清IFN-γ、TNF-α、IL-12水平与CD4~+T细胞、CD16/65~+NK细胞、C3补体、C4补体水平呈正相关,与CD8~+T细胞水平呈负相关(P0.05);IL-4、IL-6、IL-10水平与CD4~+T细胞、CD16/65~+NK细胞、C3补体、C4补体水平呈负相关,与CD8~+T细胞水平呈正相关(P0.05)。受试者工作特征曲线分析结果显示,Th1/Th2比值若小于1,其恶性肿瘤发生发展的风险上升。结论 Th1/Th2相关细胞因子水平与机体细胞免疫和天然免疫功能关系密切,而肝癌患者存在Th1/Th2比值异常,并影响相关细胞因子的生成。     

结直肠癌患者血清中免疫相关因子的表达水平及临床意义

目的探讨外周血自然杀伤细胞(NK细胞)、CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD8~+CD28~-及血清免疫相关因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-2、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-22、IL-8在结直肠癌(CRC)患者中的表达水平及其临床意义。方法选择80例结直肠癌(CRC)患者、54例慢性肠炎患者及36例健康志愿者分别作为肠癌组、良性组、健康组。测定各组受试者外周血NK细胞、CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD8~+CD28-含量及血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-22、IL-8水平。采用单因素ANOVA法分析3组受试者免疫相关指标,同时选择非参数Kruskal Wallis秩和检验分析CRC患者免疫相关因子表达与病理分期间相关性。结果 3组受试者外周血NK细胞、CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD8~+CD28~-含量及血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-22、IL-8水平比较,差异有统计学意义(P 0. 05);与健康组相比,良性组和肠癌组患者外周血CD8~+、CD8~+CD28~-含量及血清TNF-α、IL-22、IL-8水平均显著上升,而外周血NK细胞、CD3~+、CD4~+含量及血清IL-2、IFN-γ水平显著下降(P 0. 05);与良性组相比,肠癌组TNF-α、IL-22、IL-8水平及外周血CD8~+、CD8~+CD28~-含量显著上升,血清IL-2、IFN-γ水平及外周血NK细胞、CD3~+、CD4~+含量显著下降(P 0. 05)。不同临床分期CRC患者血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-22、IL-8水平及外周血NK细胞、CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD8~+CD28~-含量差异显著(P 0. 05),从TNMⅠ期到TNMⅣ期,患者血清TNF-α、IL-22、IL-8水平及外周血CD8~+、CD8~+CD28~-含量呈显著升高趋势,IL-2、IFN-γ水平及外周血NK细胞、CD3~+、CD4~+含量呈显著下降趋势。结论免疫相关因子TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-22、IL-8及外周血免疫细胞在CRC发生发展过程中扮演重要角色,可作为反映CRC进展及评估患者临床治疗效果的重要标志物。     

T淋巴细胞亚群及外周血IL-17、IL-35和IFN-γ在多发性骨髓瘤患者中的水平及其临床意义

河北中医学院目的:探讨外周血T淋巴细胞亚群、调节性T细胞(Treg)、白介素IL-17、IL-35和γ-干扰素(IFN-γ)在多发性骨髓瘤(MM)患者中的水平及其临床意义。方法:选取2014年1月-2017年1月医院收治的8~~+例多发性骨髓瘤患者作为MM组,并选取同时期体检健康者30例为对照组。应用流式细胞术检测外周血CD4~+/CD8~+T细胞比例和CD4~+CD25~(high/+)CD127~(low/-)调节性T水平,ELISA法检测血清IL-17、IL-35和IFN-γ表达水平;比较各组不同指标间的差异。结果:与对照组比较,多发性骨髓瘤患者CD4~+T细胞、CD4~+/CD8~+T细胞比例降低,CD8~+T细胞、Treg细胞比例升高;MMⅢ期患者的T淋巴细胞亚群与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);随着临床分期的提高,Treg细胞呈现增高趋势;MMⅢ期Treg细胞水平明显高于Ⅰ期(P0.05);血清IL-17水平依次为MMⅢ期Ⅱ期Ⅰ期对照组,血清IL-35和IFN-γ水平依次为对照组Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期(P0.05);Treg细胞比例依次为进展期稳定期对照组(P0.05);血清IL-17水平进展期稳定期对照组,血清IL-35和IFN-γ水平则对照组稳定期进展期(P0.05)。结论:T淋巴细胞亚群、调节性T细胞、IL-17、IL-35和IFN-γ水平异常与多发性骨髓瘤患者疾病进展及预后相关。目的:探讨外周血T淋巴细胞亚群、调节性T细胞(Treg)、白介素IL-17、IL-35和γ-干扰素(IFN-γ)在多发性骨髓瘤(MM)患者中的水平及其临床意义。方法:选取2014年1月-2017年1月医院收治的86例多发性骨髓瘤患者作为MM组,并选取同时期体检健康者30例为对照组。应用流式细胞术检测外周血CD4~+/CD8~+T细胞比例和CD4~+CD25high/~+CD127low/-调节性T水平,ELISA法检测血清IL-17、IL-35和IFN-γ表达水平;比较各组不同指标间的差异。结果:与对照组比较,多发性骨髓瘤患者CD4~+T细胞、CD4~+/CD8~+T细胞比例降低,CD8~+T细胞、Treg细胞比例升高;MMⅢ期患者的T淋巴细胞亚群与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);随着临床分期的提高,Treg细胞呈现增高趋势;MMⅢ期Treg细胞水平明显高于Ⅰ期(P0.05);血清IL-17水平依次为MMⅢ期Ⅱ期Ⅰ期对照组,血清IL-35和IFN-γ水平依次为对照组Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期(P0.05);Treg细胞比例依次为进展期稳定期对照组(P0.05);血清IL-17水平进展期稳定期对照组,血清IL-35和IFN-γ水平则对照组稳定期进展期(P0.05)。结论:T淋巴细胞亚群、调节性T细胞、IL-17、IL-35和IFN-γ水平异常与多发性骨髓瘤患者疾病进展及预后相关。     

骨髓T淋巴细胞

骨髓中含有一定量的成熟T淋巴细胞。这些细胞可能由骨髓源性的淋巴祖细胞发育而来,也可能属于骨髓再循环池的一部分。T淋巴细胞约占骨髓全部淋巴细胞的46％(骨髓穿刺)或22％(骨髓活检)。骨髓中CD4与CD8比值较外周血低,提示骨髓中含有较多的细胞毒/抑制性T淋巴细胞。同外周血相似,骨髓T淋巴细胞表面抗原受体(TCR)也以aβ+TCR为主,γδ+TCR极少。此外,在小鼠骨髓中还发现有CD4-CD8-αβ-TCR及NK1.1+αβ+TCR细胞,这些细胞具有独特的生物学功能。     

痕量小鼠骨髓造血干细胞移植体系的建立

目的:建立痕量小鼠骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)移植体系。方法:利用ESLAM(CD45~+EPCR~+CD150~+CD48-)组合流式分选成体GFP/CD45.2小鼠骨髓细胞与保护细胞(CD45.2小鼠),共同移植给致死剂量照射的受体小鼠(CD45.2小鼠),分析移植后不同时间点,受体小鼠外周血嵌合以及其重建效率和谱系分化情况,随后处死受体小鼠,获取骨髓、胸腺、脾脏和外周血等组织的细胞,检测各组织嵌合情况。结果:移植后受体小鼠外周血结果显示第4周之后重建效率为100%,GFP~+细胞在各系细胞(髓系、红系、B细胞、T细胞、巨核)中不同时间点的比例不同,且各系重建水平的变化趋势不同;6个月之后各组织(外周血、骨髓、脾脏、胸腺)嵌合情况显示外周血红系和巨核细胞中有较高比例GFP~+细胞,且在髓系和淋系细胞中无GFP~+细胞,而骨髓的髓系细胞含也有较高比例GFP~+细胞,脾脏中的B细胞也有较高比例的GFP~+细胞,胸腺中的T细胞也含有较高比例GFP~+细胞。结论:ESLAM组合能够较高效率的富集具有长期重建能力的HSCs;这群细胞移植后6个月外周血结果提示可能具有红系和巨核分化倾向。     

初诊多发性骨髓瘤患者外周血淋巴细胞亚群的检测及意义

目的:通过检测多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者外周血淋巴细胞亚群评价MM患者机体的免疫功能状态并分析其与患者预后的相关性。方法:采用流式细胞术检测32例初诊MM患者和24例健康献血者的外周血T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞及CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg);分别采用溴甲酚绿法、透射免疫比浊法检测患者血清白蛋白(albumin,Alb)、β2-微球蛋白(β2 microglobulin,β2-MG)。结果:与健康献血者比较,MM患者外周血淋巴细胞中CD3~+、CD4~+T淋巴细胞比例无显著改变(P0.05),CD8~+T淋巴细胞、NK细胞比例升高(P0.05),CD4~+/CD8~+T淋巴细胞比值、CD19~+B淋巴细胞比例降低(P0.05),CD4~+CD25~+Treg细胞占CD4~+T淋巴细胞的比例明显升高(P0.01)。CD4~+CD25~+Treg细胞占CD4~+T淋巴细胞的比例与MM的疾病分期呈正相关,与MM患者血清中的β2-MG浓度亦呈正相关(P0.05)。结论:MM患者体内在淋巴细胞亚群的异常表达可能与其肿瘤负荷、病情进展及预后有关。CD4~+CD25~+Treg细胞的表达异常可能是MM免疫逃逸的一个重要机制。     

严重细菌感染患者外周血DNT淋巴细胞检测及其临床价值

目的探讨严重细菌感染患者外周血CD4~-CD8~-双阴性T淋巴细胞(DNT淋巴细胞)的表达水平及其在细菌感染中的作用。方法选取2014年1月至2017年3月该院血培养阳性且临床明确诊断为严重细菌感染的87例患者纳入研究组,其中40例血培养转阴时间≥7d者为A组,47例转阴时间7d者为B组;选取30例该院健康体检者作为健康对照组。采用流式细胞术对3组人群外周血免疫细胞:CD3~+T淋巴细胞比例、CD4~+T淋巴细胞比例、CD8~+T淋巴细胞比例、自然杀伤(NK)细胞比例、B淋巴细胞比例、DNT淋巴细胞比例,以及CD4~+/CD8~+进行检测与对比分析。结果 (1)A组和B组患者CD3~+T淋巴细胞比例、CD8~+T淋巴细胞比例显著低于健康对照组,CD4~+/CD8~+显著高于健康对照组,差异均有统计学意义(P0.05);(2)A组患者的DNT淋巴细胞比例高于B组和健康对照组,差异有统计学意义(P0.05);(3)A组B淋巴细胞比例显著高于B组和健康对照组,差异有统计学意义(P0.05);(4)B组NK细胞比例高于A组和健康对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞和NK细胞水平变化均影响严重细菌感染患者病原体清除效率,其中DNT淋巴细胞可能参与了对CD4~+T淋巴细胞免疫应答的抑制过程,不利于机体对病原体的清除。检测外周血DNT淋巴细胞对患者治疗方案的调整有一定的参考价值。     

胰腺癌患者手术前后外周血淋巴细胞亚群和血小板变化

目的测定胰腺癌患者手术前后外周血淋巴细胞亚群和血小板(PLT)水平,并探讨其与胰腺癌患者临床病理参数的相关性。方法选取66例胰腺癌患者(胰腺癌组),以64名体检健康者作为对照组。检测所有对象淋巴细胞亚群[CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞、B细胞和自然杀伤(NK)细胞]及PLT水平,分析其与胰腺癌临床病理参数的相关性。结果与对照组相比,胰腺癌组术前外周血CD3~+T细胞和CD3~+CD4~+T细胞水平明显降低(P0.05),CD3~+CD8~+T细胞和PLT水平明显升高(P0.05);胰腺癌组术后CD3~+T细胞和CD3~+CD4~+T细胞水平较术前明显升高(P0.05),PLT较术前明显降低(P0.05);胰腺癌组术后与对照组之间CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞、B细胞、NK细胞和PLT水平差异均无统计学意义(P0.05);胰腺癌组术前外周血CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞、B细胞、NK细胞、PLT水平与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、有无神经浸润、分化程度无关(P0.05);外周血CD3~+CD4~+T细胞、PLT水平与胰腺癌不同组织分级、有无淋巴结转移有关(P0.05)。胰腺癌组术前外周血CD3~+CD4~+T细胞水平与PLT水平呈负相关(r=-0.44,P0.01)。结论胰腺癌患者细胞免疫功能术前处于被抑制状态,术后可基本恢复正常。胰腺癌患者术前淋巴细胞免疫异常与PLT水平、胰腺癌组织分级和淋巴结转移相关。     

口腔癌患者外周血细胞免疫水平与临床结局的相关性分析

目的探讨口腔癌患者外周血细胞免疫水平与临床结局的相关性。方法选取2014年1月—2015年1月我院收治的口腔癌50例(口腔癌组),选择同期体检健康的50例(对照组)。比较两组外周血淋巴细胞(CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD19~+)和自然杀伤(natural killer,NK)细胞的水平,分析口腔癌患者外周血淋巴细胞(CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD19~+)、NK细胞与其临床特征的相关性。结果与对照组比较,口腔癌组CD3~+及CD4~+T淋巴细胞、CD4~+/CD8~+和NK细胞显著降低(P0.05),CD19~+T淋巴细胞显著升高(P=0.000),CD8~+T淋巴细胞降低不明显(P0.05)。与Ⅲ~Ⅳ期口腔癌患者比较,Ⅰ~Ⅱ期患者的CD3~+、CD4~+及CD8~+T淋巴细胞、CD4~+/CD8~+和NK细胞显著升高(P0.05),CD19~+T淋巴细胞显著降低(P=0.000)。与无淋巴结转移的患者比较,出现淋巴结转移的患者CD3~+、CD4~+及CD8~+T淋巴细胞和NK细胞显著降低(P0.05),CD19~+T淋巴细胞显著升高(P=0.000),CD4~+/CD8~+降低不明显(P0.05)。与无复发患者比较,术后复发者CD3~+、CD4~+及CD8~+T淋巴细胞、CD4~+/CD8~+和NK细胞显著降低(P0.05),CD19~+T淋巴细胞显著升高(P=0.000)。结论口腔癌患者存在一定程度的免疫抑制,且外周血细胞免疫水平与其预后密切相关。     

细胞因子诱导的杀伤细胞

正常人或患者外周血、骨髓单个核细胞/淋巴细胞中定期加入γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-2(IL-2)、抗CD3抗体(CD3mAb)经2～4周的诱导可获得大量的新型肿瘤杀伤细胞——细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK),增殖旺盛及肿瘤杀伤活性高,包含大量CD3~+CD56~+细胞。有关基础及临床研究证明,CIK细胞较细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、淋巴细胞因子活化的杀伤细胞(lymphokine-activated killer,LAK)、肿瘤细胞浸润的淋巴细胞(tumer infiltrating-lym-phocyte,TIL)更适用于肿瘤的生物治疗。本文就CIK细胞的来源与生物学特征、对肿瘤细胞的杀伤及临床应用进行综述。     

胶原蛋白肽改善模拟失重小鼠外周血淋巴细胞分布及脾脏T淋巴细胞增殖能力

目的:探讨胶原蛋白肽能否改善模拟失重小鼠的免疫功能。方法:采用尾吊法模拟失重小鼠模型,模拟失重小鼠每天1次腹腔注射600 mg/kg体重的胶原蛋白肽,10 d后处死小鼠,应用MTT法检测外周血白细胞分类和淋巴细胞亚群以及脾脏T淋巴细胞增殖能力。结果:与正常对照组相比,模拟失重组小鼠白细胞总数、淋巴细胞绝对值、T细胞、CD4+和CD8+T细胞、B细胞、NK细胞数量均明显降低(P0.05),脾脏T淋巴细胞增殖能力也明显降低(P0.05);模拟失重小鼠给予胶原蛋白肽后,除NK细胞外上述其他指标均有明显提高(P0.05),且部分指标恢复至正常对照组水平。结论:胶原蛋白肽能够有效改善模拟失重小鼠的外周血淋巴细胞分布及脾脏T淋巴细胞增殖能力。     

系统性红斑狼疮患者的外周血淋巴细胞亚群结果分析

目的研究40例系统性红斑狼疮(SLE)患者不同状态的外周血总T淋巴细胞(CD3+)、T辅助淋巴细胞(CD3+/CD4+),T抑制淋巴细胞(CD3+/CD8+),B淋巴细胞(CD3-/CD19+),NK淋巴细胞(CD3-/CD16+CD56+)的差异并初步探讨其在SLE发病中的意义。方法根据SLE疾病活动积分(SLEDAI)将SLE患者分为活动组(24例)和非活动组(16例),流式细胞仪检测外周血CD3+/CD4+,CD3+/CD8+,CD3-/CD19+,CD3-/CD16+CD56-表达百分率,对其与SLE临床活动度、尿蛋白、补体和抗dsDNA抗体水平的相关性进行研究。结果活动组和非活动组SLE患者外周血总T细胞(CD3+)与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);活动组和非活动组SLE患者外周血T细胞(CD3+/CD4+、CD3+/CD8+)、B淋巴细胞(CD3-/CD19+)、NK淋巴细胞(CD3-/CD16+CD56-)表达百分率与健康对照组相比,T、B淋巴细胞表达的分率差异均有统计学意义(P=0.043,P=0.027);NK淋巴细胞(P=0.612)差异无统计学意义;活动组与非活动组的总T细胞,差异无统计学意义,而T辅助淋巴细胞(CD3+/CD4+)、B淋巴细胞(CD3-/CD19+)差异具有统计学意义,提示T辅助淋巴细胞(CD3+/CD4+)、T抑制淋巴细胞(CD3+/CD8+),与SLE活动度相关。T、B、NK细胞与SLE临床表现相关性分析显示,T辅助淋巴细胞(CD3+/CD4+)与SLEDAI,抗dsDNA抗体呈正相关(P=0.096);B细胞与C3呈负相关(P=0.048);NK细胞与SLEDAI和抗dsDNA抗体呈负相关(P=0.096)。结果显示T、B、NK细胞异常与SLE临床表现明显相关。结论 SLE患者的外周血总T细胞(CD3+)、T辅助淋巴细胞(CD3+/CD4+)、T抑制淋巴细胞(CD3+/CD8+)、B淋巴细胞(CD3-/CD19+)、NK淋巴细胞(CD3-/CD16+CD56+)可作为SLE诊断及评价活动性的指标。     

再生障碍性贫血患者免疫抑制治疗前后外周血VEGF、TNF-α和IFN-γ表达变化及临床意义

目的探讨再生障碍性贫血(AA)患者免疫抑制治疗前后外周血血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)表达变化及临床意义。方法 2012年1月至2014年4月收治的30例AA初发患者设为对照组,2014年5月至2016年4月收治的30例经免疫抑制治疗后的AA患者设为观察组,测定患者治疗前后外周静脉血T淋巴细胞亚群(CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+、CD_4~+/CD_8~+)、NKT细胞及NK细胞的百分比及CD_3~+淋巴细胞胞浆内TNF-α和IFN-γ水平,比较两组治疗前后相同部位骨髓涂片标本中VEGF表达水平,分析表达情况及临床意义。结果治疗后,观察组T淋巴细胞亚群及NK细胞改善明显优于对照组(P0.05),CD_3~+/TNF-α+(%)和CD_3~+/IFN-γ+(%)、VEGF表达较对照组明显下调(P0.05)。结论 AA患者经免疫抑制治疗后可有效的减少胞浆内的TNF-α和IFN-γ的表达,且AA患者中VEGF呈现低表达现象。     

外周血T淋巴细胞亚群变化特点及血清因子表达水平的研究

目的探讨发热伴血小板减少综合征(SFTS)患者外周血T淋巴细胞亚群变化特点及血清因子表达水平。方法选取2013年5月1日至2016年12月1日该院确诊并治疗的SFTS患者138例,作为SFTS组。利用流式细胞术检测患者外周血T淋巴细胞CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞2个亚群变化的特点,运用酶联免疫吸附方法检测外周血清白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-β(TNF-β)、干扰素-γ(IFN-γ)表达水平。同时选取该院门诊体检健康者120例作为健康对照组,采用同样的方法检测相同的各项指标表达水平。结果 SFTS组患者外周血CD4~+T淋巴细胞数量明显减少,为(22.69±5.02)%,健康对照组CD4~+T淋巴细胞数量比SFTS组多,为(56.11±4.14)%,差异有统计学意义(P0.05);SFTS组CD8~+T淋巴细胞数量明显增多,为(39.03±4.09)%,健康对照组CD8~+T淋巴细胞数量比SFTS组患者少,为(24.51±4.82)%,差异有统计学意义(P0.05),CD4~+T/CD8~+T在感染布尼亚病毒(SFTSV)后明显降低。SFTS组IL-2表达水平为(55.81±7.52)μg/L,健康对照组为(117.02±5.31)μg/L;SFTS组TNF-β表达水平为(72.91±6.03)μg/L,健康对照组为(112.84±4.91)μg/L;SFTS组IFN-γ表达水平为(21.01±8.20)μg/L,健康对照组为(103.15±3.74)μg/L,SFTS组患者感染SFTSV后IL-2、TNF-β、IFN-γ均明显下降,2组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论 SFTS患者感染SFTSV后,导致外周血CD4~+T淋巴细胞减少,CD8~+T淋巴细胞增加,CD4~+T与CD8~+T比例失衡;造成外周血清中IL-2、TNF-β、IFN-γ因子表达水平降低。     

肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞比例检测的临床意义

目的 探讨肿瘤患者外周血淋巴细胞亚群和NK细胞表达水平检测的临床意义。方法 选取621例肿瘤患者(包括肺癌、肝癌、乳腺癌、胃癌和鼻咽癌)为肿瘤组,同期115名健康人为健康组,采用流式细胞术检测外周血中T淋巴细胞亚群、CD19~+B细胞和NK细胞的细胞免疫表达水平并进行对比分析。结果 肿瘤组外周血的CD3~+、CD4~+、CD19~+细胞比例及CD4~+/CD8~+比值均低于健康组,NK细胞比例高于健康组,差异均有统计学意义(P0.05)。亚组分析结果显示,不同肿瘤间的CD8~+细胞比例差异无统计学意义(P0.05),CD3~+、CD4~+、CD19~+、NK细胞比例及CD4~+/CD8~+比值差异均有统计学意义(P0.05)。结论 肿瘤患者外周血中不同淋巴细胞亚群及NK细胞的变化对早期发现和早期诊断具有指导意义,同时也可作为临床监测肿瘤患者细胞免疫功能状态的指标之一。     

肾移植术后T淋巴细胞亚群和NK细胞百分比参考范围的研究

目的初步建立肾移植患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的百分比参考范围。方法 67例健康对照组、169例肾移植患者于肾移植手术后1周清晨采集外周血,用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群和NK细胞百分比。同时按年龄段划分为3组进行统计:≤30岁(青年组)、31~49岁(中年组)、≥50岁(老年组)。结果 (1)建立了肾移植术后T淋巴细胞亚群和NK细胞百分比的参考范围:CD3+56.80%~64.54%;CD4+30.82%~36.43%;CD8+23.45%~27.32%;CD3+CD4+/CD3+CD8+1.35~1.68;NK 6.04%~8.35%。(2)肾移植术后不同性别间的T淋巴细胞亚群和NK细胞差异无统计学意义(P0.05)。(3)肾移植术后不同年龄间的T淋巴细胞亚群和NK细胞差异有统计学意义(P0.05):与老年组比较,青年组和中年组肾移植术后CD8+细胞百分比明显升高,差异有统计学意义(P0.01),CD3+CD4+/CD3+CD8+明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论初步建立了肾移植术后的T淋巴细胞亚群和NK细胞的参考范围,同时发现肾移植术后随年龄增长CD8+细胞百分比降低,而CD3+CD4+/CD3+CD8+升高。     

多发性骨髓瘤患者外周血Tim-3的表达变化及与T、B细胞功能异常的关系

目的:研究多发性骨髓瘤(MM)患者外周血中Tim-3的表达变化及其与T细胞、B细胞功能异常之间的的关系。方法:选取2016年10月-2018年10月诊断为MM的30例患者纳入MM组,并选取年龄、性别与之相匹配的30名健康人员纳入对照组(HC)。收集MM患者和HC的外周血,通过密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞(PBMNC),同时保留分离过程中留下的血清。应用流式细胞术(FCM)检测PBMNC中CD3~+CD4~+Tim-3~+T、CD3~+CD8~+Tim-3~+T细胞的百分比,同时检测浆母B细胞即CD19~+CD20~-CD38~+B细胞的百分比。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中T细胞相关细胞因子IFN-γ、TNF-α,以及B细胞相关抗体IgA,IgM和IgG的滴度。分析MM患者和HC外周血中CD3~+CD4~+Tim-3~+T、CD3~+CD8~+Tim-3~+T细胞、浆母B细胞比率和血清中T细胞相关细胞因子、B细胞相关抗体滴度的差异,并分析MM患者外周血中CD3~~+CD4~+Tim-3~+T、CD3~+CD8~+Tim-3~+T细胞比率与浆母B细胞比率、细胞因子、抗体浓度的相关性。结果:MM患者CD3~+CD4~+Tim-3~+T、CD3~+CD8~+Tim-3~+T细胞的百分比要高于HC,而CD19~+CD20-CD38~+B细胞百分比及细胞因子、抗体浓度低于HC。MM患者CD3~+CD4~+Tim-3~+T细胞百分比与CD19~+CD20-CD38~+B细胞百分比、细胞因子IFN-γ和抗体浓度呈负相关,而CD3~+CD8~+Tim-3~+T细胞的百分比仅与细胞因子TNF-α的浓度呈负相关。结论:MM患者外周血中Tim-3在CD4和CD8细胞上的表达增加,并与T细胞和B细胞功能抑制存在相关性。     

消化系统肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞分析与临床意义

目的通过观察外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性在消化系统肿瘤患者中的表达,探讨消化系统肿瘤患者的细胞免疫功能状况及临床意义。方法采用流式细胞分析法对123例消化系统肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞进行检测,并与35例健康对照组比较。结果与健康对照组比较,消化系统各肿瘤组患者外周血总T细胞(CD3+)、T4细胞(CD3+CD4+)、NK细胞(CD3-CD16/56+)百分率下降(P<0.01);T4/T8(CD3+CD4+/CD3+CD8+)比值降低(P<0.05);T8细胞(CD3+CD8+)百分率明显升高(P<0.05);消化系统各肿瘤组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论消化系统肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性表达较健康对照组显著降低,表明消化系统肿瘤患者细胞免疫功能低下。检测消化系统肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞水平对评估患者的细胞免疫功能、监测抗瘤疗效和判断预后均具有一定的临床意义。