原代心肌细胞的培养

<正> 体外心肌细胞培养是近年来国外开展的一种实验方法。1960年Harary报道用Waster大白鼠的乳鼠心肌细胞体外培养获得成功。国内个别单位于七十年代后期始建立原代心肌细胞培养方法并有记录装置。心肌细胞培养广泛用于细胞药理学和分子生物学的研究中,它具有准确、可靠、简便、经济、快速及重复性好、可比性强等优点。且     

细胞凋亡与心肌缺血再灌注损伤

本文就近年来 ,缺血再灌注时的心肌细胞凋亡现象、心肌细胞凋亡的机制及心肌细胞保护的研究等 ,综述如下。1　心肌细胞凋亡现象对急性缺血和缺血再灌注时的心肌细胞凋亡曾有过争论 ,Ｇｏｔｔｌｉｅｂ等[1 ] 于 1 994年采用电镜结合ＤＮＡ凝胶电泳方法 ,率先报道了缺血再灌注时的心肌细胞凋亡现象 ,发现细胞凋亡可以作为心肌细胞缺血再灌注损伤的特征 ,并区别于缺血性损伤 ,单纯缺血心肌无细胞凋亡。同年Ｔａｎａｋａ等[2 ] 报道 ,在乳鼠心肌细胞培养时 ,以 95 %Ｎ2 、5 %ＣＯ2 造成缺血条件 ,在 1 2ｈ内就观察到心肌细胞凋亡 ,证实细胞凋亡…     

体外培养乳鼠心肌细胞的电生理学特性及与乳鼠成年鼠在位心脏的比较

作者使用常规的细胞内微电极技术,初步观察了由我院组胚教研室提供的培养乳鼠心室肌细胞的电生理特性,并与乳鼠、成年大鼠在位心脏相比较。本文结果与Schanne 0.F~3的报道相近似。用贴壁分离处理的心肌细胞静息电位较高,Vmax快。这一结果与Jourdon结果相似。可能是培养细胞中成纤维细胞的存在,某种原因降低了培养心肌细胞的电活动所致。作者在对比了培养心肌细胞、乳鼠、成年大鼠三者的电生理特性之后,对培养心肌细胞在电生理学研究中的应用,表明了粗浅的看法。     

成年小鼠心肌细胞的分离培养及鉴定

目的探讨成年小鼠心肌细胞分离培养的方法,评价心肌细胞的存活状况。方法应用改良Langendorff方法进行成年小鼠心脏灌流,分离并培养心肌细胞,评价杆状心肌细胞的比例变化。台盼蓝染色判定心肌细胞活力,应用毒胡萝卜素(thapsigargin)治疗心肌细胞24 h后,WST方法测定细胞生存率。结果在每个成年小鼠心脏分离了40~60万的心肌细胞,台盼蓝染色结果68%为存活心肌细胞。心肌细胞培养1 h2、4 h及48 h后,杆状心肌细胞的比例分别为70%、50%及30%。心肌细胞生存率随着毒胡萝卜素浓度的增加逐渐减低,其中1、5及10μmol/L毒胡萝卜素的生存率明显低于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论应用改良Langendorff方法及严格控制心脏灌流培养的条件,可以成功地分离培养成年小鼠心肌细胞,有助于进行细胞分子水平的研究。     

心肌细胞二维培养的纯化和鉴定

目的探讨新生大鼠心肌细胞二维培养过程中心肌细胞的纯化及心肌细胞与成纤维细胞的鉴别,为改进心肌细胞二维培养及心肌细胞三维培养提供依据。方法用不同差速贴壁次数、含Brdu培养心肌细胞,免疫荧光标记后用激光共聚焦显微镜分别对24h的细胞进行分析鉴定。结果不同培养方法对心肌细胞的纯化有影响。结论差速贴壁次数的不同得到的心肌细胞纯度不一样,加入适当浓度的Brdu可抑制成纤维细胞的生长,获得纯度更高的心肌细胞。     

乳小鼠心肌细胞体外培养方法的优化

目的探讨乳小鼠心肌细胞分离和体外培养的方法,并结合实际情况建立一种优化的体外培养乳小鼠心肌细胞的方法。方法胰酶-Ⅱ型胶原酶混合液分次消化乳小鼠心肌组织后行差速贴壁法达到心肌细胞纯化目的,并利用心肌细胞特意表达a-肌动蛋白的特性运用细胞免疫组织化学方法鉴定心肌细胞。结果差速贴壁48h后心肌细胞贴壁完全,并见大部分贴壁细胞出现搏动,但未观察到同簇搏动,经a-肌动蛋白细胞免疫组织化学鉴定,心肌细胞纯度达96.7%。结论本研究优化了原代乳小鼠心肌细胞分离和体外培养方法,为后续细胞实验打下了基础。     

乳鼠原代心肌细胞培养的镜下观察

本文从乳鼠原代心肌细胞培养方法、细胞形态、功能活动等方面做了细致的观察与描述,在 pH、温度、胰蛋白酶等对培养心肌细胞的影响方面进行了探讨。证明了培养心肌细胞的肾上腺素能受体未因培养而被破坏。还证明了葛根提取物 PuRWO_3有阻滞异丙肾上腺素所致培养心肌细胞搏动频率上升的药效。     

新生大鼠心肌细胞培养及方法的改进

新生大鼠心肌细胞培养及方法的改进吴国群基础医学研究所微生物研究室（０５００１７）关键词心肌细胞；培养方法；改进我们在大鼠心肌细胞培养的试验中，改进了以往心肌细胞制备的方法，获得了更为满意的效果．现报告如下．１材料与方法选择新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠，常规消...     

《改进悬浮微电极在位法及用于心肌电生理研究》通过技术鉴定

我院心肌电生理研究室通过改进悬浮式微电极及其实验方法,对十七种动物心肌细胞动作电位进行了测定,全面报道了其正常值,其中十五种动物应用微机进行实时处理。在此基础上,进行了室颤时单个在位心肌细胞电变化研究。从比较生理学角度对培养心肌细胞,幼年和成年动物心肌细胞的电生理特性进行了研究,提供了有价值的资料。四川省高教局于1986年6月6日—7日在我院主持召开了成果鉴定会。北京大学、南开大学、华西医科大学、第三军医大学等院校专家教授参加了会议。同济医科大学、山西医学院、哈尔滨医科大学、西安医科大学的专     

Balb/c乳鼠心肌细胞的分离和体外培养方法的优化

目的 探讨Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养方法,优化出Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养的方法.方法 取乳鼠心脏,采用胰酶和胶原酶Ⅱ消化方法分离乳鼠心肌细胞,比较消化次数和消化时间对原代乳鼠心肌细胞培养的影响.结果 原代培养的Balb/c乳鼠心肌细胞生长迅速、自行搏动,细胞形态完整,细胞内肌丝、线粒体清晰.分离细胞时消化次数最好控制在不多于6次,每次消化时间不超过20min.2h差速贴壁可以提高心肌细胞纯度,经肌动蛋白鉴定,心肌细胞达94.6%.结论 本研究优化了分离和原代培养Blab/c乳鼠心肌细胞的方法.     

原代乳小鼠心肌细胞的分离培养及鉴定

目的建立原代乳小鼠心肌细胞的培养方法,评价心肌细胞的存活状况并鉴定心肌细胞纯度。方法应用胰酶联合胶原酶共同消化3d内C57乳小鼠心脏,台盼蓝染色判断心肌细胞存活率,α-actin免疫荧光染色鉴定心肌细胞纯度。结果利用3d内乳鼠心脏可成功培养原代小鼠心肌细胞,台盼蓝染色显示细胞存活率大于95%,α-actin免疫荧光染色显示心肌细胞纯度达95%以上。结论严格控制实验条件,可成功培养高存活率和高纯度的小鼠心肌细胞。     

成年大鼠心室肌细胞的分离、培养与鉴定

目的探讨成年大鼠心肌细胞的分离、培养方法.方法麻醉后取成年Wistar大鼠心脏连接于Langendorff装置上进行0.1%胶原酶 0.1%透明质酸酶灌注肖化分离心肌细胞,纯化后培养于DMEM培养基.用免疫荧光染色方法鉴定心肌细胞,并在倒置显微镜、电镜下观察细胞的形态结构.结果本方法分离、培养的心肌细胞纯度为98%,细胞活性为92%,杆状细胞率为82%.结论该方法简单有效,为深入研究成年心肌细胞打下了基础.     

大鼠成体心肌细胞的分离和培养

目的: 探索稳定的大鼠成体心肌细胞的分离和培养方法. 方法: 应用主动脉逆行生物酶(5 g/L胰蛋白酶及1 g/L胶原酶)灌流法分离大鼠成体心肌细胞,免疫荧光染色法鉴定分离的心肌细胞,比较有无血清培养对心肌细胞的影响. 结果: 心肌细胞的存活率为95%以上;存活细胞呈杆状,形态完整,长宽比约为4～6∶ 1;无血清培养心肌细胞只能存活1 wk,形态不发生改变;而加血清培养心肌细胞可存活2 wk以上,但超微结构发生了改变,且不同血清浓度对成纤维细胞生长具有不同的作用. 结论: 主动脉逆行生物酶(胶原酶和蛋白酶)灌流法是比较理想的心肌细胞分离方法;血清对成体心肌细胞的培养起着重要作用.     

乳鼠原代心肌细胞提取方法的改良

目的 改进传统的SD大鼠乳鼠心肌细胞培养方法,探索更简便、高效的心肌细胞培养方法.方法 用两种不同方法提取心肌细胞,比较两种不同提取方法对细胞存活率、搏动能力的影响.结果 与传统法相比用改良法提取的心肌细胞存活率较高,起搏较早,差异有统计学意义(P﹤0.01).结论 用改良法提取心肌细胞,可获得存活率高、纯度高心肌细胞.且操作简便,重复性好,是一种较为理想的提取原代心肌细胞的方法,可建立满意的体外培养心肌细胞模型.     

牛磺酸对培养的心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用

目的：观察牛磺酸对培养的心肌细胞损伤的影响。方法：以培养的心肌细胞为模型。在缺氧再给氧损伤细胞后,观察心肌细胞活力及搏动频率的变化,结果：牛磺酸可以提高心肌细胞的活力,提高心肌细胞的搏动频率,使心肌细胞的搏动频率明显恢复。结论：牛磺酸对缺氧再给氧损伤培养的心肌细胞有保护作用。     

风心病心肌细胞培养模型的建立及其胶原合成

目的　建立风心病心肌细胞体外培养方法 ,观察其胶原合成变化 .方法　采用快速贴壁法对正常成人 7例和风心患者 15例左室乳头肌心肌细胞进行原代培养 ,观察培养期间其形态、超微结构、活性及胶原合成的变化 .结果　培养的成人心肌细胞短而粗呈杆状 ,无明显自主收缩 ;48h后杆状细胞率为 ( 87.2± 4.1) % ,细胞存活率为 ( 92 .8± 4.1) % ,两者随培养时间延长而降低 ;透射电镜显示杆状细胞超微结构正常 ;免疫组化染色显示风心病心肌细胞 , 型胶原呈阳性表达 ,正常组呈阴性或弱阳性表达 ;胶原合成测定结果显示风心组[2 ,3- 3H]-脯胺酸摄取量显著高于正常组 .结论　我们建立的成熟心肌细胞分离和培养方法可靠 ,培养心肌细胞保持了在体的杆状形态 ,风心病心肌细胞培养 48h后胶原合成表型仍存在 ,该方法的建立为研究心肌细胞参与风心病心肌纤维化的调控机制提供了一个有效的实验手段     

新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改良

目的 探讨更为简单、有效的新生大鼠心肌细胞分离、培养方法.方法 取出生24 h内大鼠左心室,剪碎,0.125%胰蛋白酶、0.08%胶原酶Ⅰ分离,离心收集心肌细胞,差速贴壁法和化学试剂抑制非心肌细胞生长,纯化后培养于DMEM培养基.免疫荧光鉴定纯度,0.4%台盼蓝染色检查心肌细胞成活率.结果 心肌细胞纯度为95%,平均成活率96%,并出现同簇细胞的同步跳动.结论 本研究应用改良的新生大鼠心肌细胞培养方法,心肌细胞存活率高,纯度高,且操作简便,重复性好,是一种较为理想的心肌细胞原代培养方法,可满足实验要求.     

新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改良

目的:探讨更为简便的新生大鼠心肌细胞原代培养的方法,使分离的心肌细胞达到理想的数量、存活率和纯度.方法:用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化,分离新生大鼠心肌细胞,进行体外培养,观察心肌细胞形态学变化,并以细胞免疫荧光进行心肌细胞纯度鉴定.结果:心肌细胞分离良好,收获细胞数量及存活率高,可贴壁搏动生长,免疫荧光显示培养的心肌细胞纯度达95%以上.结论:改良的细胞培养技术可获得生长状态良好的心肌细胞.     

新生大鼠心肌细胞的分离与培养

目的:建立一种简单实用的新生大鼠心肌细胞分离与培养的方法。方法:用胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶和分散酶消化心室肌组织,用差速贴壁法纯化心肌细胞进行培养。用台盼蓝染色法检测细胞存活率,倒置显微镜下观察细胞形态变化和细胞搏动频率。结果:从第3天开始,大部分心肌细胞出现搏动,存活率均在96%以上。培养3d的心肌细胞搏动频率较小,到第6天搏动频率达到高峰,随后几天趋于稳定。结论:应用此方法培养的心肌细胞纯度高,存活时间长,是一种稳定、可靠的新生大鼠心肌细胞的培养方法。     

BALB/c小鼠乳鼠心肌细胞的原代培养

目的：建立分离、纯化和培养BALB/c小鼠乳鼠心肌细胞的方法。方法：取出生1～3天以内的BALB/c小鼠乳鼠心肌组织,用0.125%胰蛋白酶和0.1%Ⅰ型胶原酶消化,将心肌细胞收集到含15%胎牛血清的DMEM培养基中,用差速贴壁分离法和5-溴脱氧尿苷相结合分离、纯化心肌细胞。采用α-actin抗体进行免疫组化染色鉴定心肌细胞,用台盼蓝染色检查心肌细胞成活率。结果：24小时后可见部分单个心肌细胞搏动,48小时后可见心肌细胞相互连接同步搏动;免疫组化染色后可见培养的细胞是心肌细胞,心肌细胞成活率达95%。结论：本研究应用的方法可获得状态好、高成活率的BALB/c小鼠心肌细胞,是一种可靠的心肌细胞培养方法。