尼美舒利对体外培养人胆管癌细胞QBC939增殖的抑制作用

近年来研究表明,环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂具有抑制结肠癌、胃癌、肝癌等癌细胞增殖的作用.我们采用选择性COX-2抑制剂尼美舒利作用于胆管癌QBC939细胞,观察尼美舒利对胆管癌细胞的影响.……     

反义RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株基质金属蛋白酶-9的抑制作用

目的 探讨反义RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株的金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响.方法 通过质粒转染的方法向QBC939细胞中转染反义RhoC cDNA真核表达载体pcDNA 3.1Hyp(+)质粒,RT-PCR和Western-Blot检测MMP-9在QBC939细胞、转染空载体的QBC939细胞(QBC939-V)、转染反义RhoC的QBC939细胞(QBC939-AS)的mRNA和蛋白相对表达量.结果 对照组细胞QBC939中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值分别为(0.265±0.059)和(0.242±0.063),QBC939-V细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值分别为(0.257±0.039)和(0.303±0.031),而反义RhoC cDNA质粒转染组细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值分别为(0.125±0.062)和(0.095±0.043);对照组中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值均高于反义RhoC转染组,统计学分析表明在QBC939-AS组和对照组之间,MMP-9的平均光密度值差异有统计学意义(P<0.05).结论 反义RhoC基因在QBC939细胞株中可以抑制MMP-9表达.     

苦参碱对人胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响

苦参碱作用广泛，具有抗病毒、抗感染、平喘、增强机体免疫力、升高白细胞、保肝等作用。近年来，其抑制肿瘤细胞生长的作用已经用于抗白血病的治疗,但在实体瘤的研究很少。本研究旨在探讨苦参碱对胆管癌细胞的作用及其机制。     

三种分化诱导剂对人胆管癌细胞株QBC939的作用

目的观察二甲基亚砜(DMSO)、全反式维甲酸(ATRA)和9顺式维甲酸(9cisRA)对人胆管癌细胞株QBC939的作用,筛选对它有效的分化诱导剂。方法以DMSO、ATRA和9cisRA作用于培养的胆管癌细胞株,描绘生长曲线,观察细胞形态,双层软琼脂培养法观察细胞恶性度,流式细胞术(FCM)检测细胞周期动力学变化。结果10-6mol/L9cisRA作用2d后开始抑制QBC939细胞生长,抑制率为39.4%～80.7%(P<0.05)。细胞软琼脂集落形成能力较对照组下降80.9%(P<0.01)。细胞形态向正常细胞转化。9cisRA作用1、3、5、7dG0/G1期细胞比例分别为55.56%、63.92%、73.38%、76.92%。ATRA对QBC939细胞无明显作用,DMSO主要引起细胞死亡。结论9cisRA可诱导QBC939细胞向良性表型分化,对该细胞株具有有诱导分化作用。     

华蟾素对人胆管癌细胞系QBC939的作用

目的：探讨华蟾素对人胆管癌细胞株QBC939的抑制作用及可能的作用机制。方法：流式细胞仪检测华蟾素对QBC939细胞凋亡的作用，RT—PCR法研究华蟾素对人胆管癌细胞株QBC939Fas及caspase-3mRNA表达变化的影响。结果：不同浓度华蟾素作用于QBC939细胞48h后，流式细胞仪分析显示，凋亡细胞明显增多，与对照组相比有显著性（P〈0．001）。RT—PCR结果显示：leas、caspase-3mRNA表达实验组与对照组相比增强（P〈0．001）。结论：华蟾素作用于人胆管癌细胞株QBC939，促进其细胞凋亡，而这一作用的实现可能与Fas及caspase-3mRNA表达的上调有关。     

Bcl-2反义寡核苷酸对人胆管癌细胞株QBC939中Bcl-2表达的影响

胆管癌对放疗、化疗不敏感,手术效果差,如何提高其治疗效果,一直是困扰临床医师的难题。作者既往的实验显示胆管癌组织中Bcl-2高表达,胆管癌细胞株QBC939中Bcl-2阳性表达,Bcl-2反义寡核苷酸(ASODN)可抑制QBC939细胞增殖。本研究将Bcl-2 ASODN作用于人胆管癌细胞株QBC939,旨在探索Bcl-2 ASODN作用的分子机制,为胆管癌反义基因治疗提供实验依据。     

体外分层渗透共培养研究胆管癌细胞株QBC939对正常内皮细胞的作用

目的 在体外分层渗透共培养体系中研究胆管癌细胞对正常内皮细胞的作用.方法 建立胆管癌细胞株QBC939与正常内皮细胞的体外分层渗透共培养体系,以同期单独培养的正常内皮细胞为对照,用免疫荧光法检测内皮细胞与胆管癌细胞共培养后,内皮细胞F-actin,pp125FAK,蛋白水解酶MMP-2、MMP-9、uPA蛋白表达变化,用Realtime PCR,Western印迹检测内皮细胞共培养前后,ppl25FAK,MMP-2、MMP-9、uPA的mRNA及蛋白表达变化.结果 与同期单独培养的正常内皮细胞对照相比,内皮细胞F-actin表达增强,pp125FAK、MMP-2、MMP-9、uPA的mRNA及蛋白表达增加(P<0.01).结论 胆管癌细胞能通过旁分泌作用导致内皮细胞骨架系统改变,并能诱导内皮细胞蛋白水解酶的基因表达及蛋白合成,表明肿瘤细胞对邻近内皮细胞还可以通过肿瘤细胞的内分泌、旁分泌等作用分泌各种细胞因子,作用于内皮细胞上的特异性受体,发挥其对内皮细胞mRNA表达的调控作用,而导致内皮细胞发生形态、行为的改变.     

阿托伐他汀对人胆管癌QBC939细胞系增殖及侵袭的影响

目的 探讨阿托伐他汀(ATV)对人胆管癌QBC939细胞系增殖、侵袭的影响及其可能作用机制方法 应用细胞培养技术培养QBC939细胞,经不同浓度的阿托伐他汀处理后,以MTF法检测阿托伐他汀对QBC939细胞的杀伤抑制率,以Matrigel侵袭实验、迁移实验和半定量RT-PCR检测阿托伐他汀对QBC939细胞的侵袭、运动能力和对细胞内RhoC,MMP-9,p27 mRNA表达的影响情况.结果 阿托伐他汀可明显抑制QBC939细胞的生长及增殖,且其抑制作用呈剂量-时间效应关系:IC50为25 μmoL/L,最强抑制作用时间为48h.Matrigel侵袭实验及迁移实验显示,经10 μmol/L,25 μmol/L,50 μmoL/L药物干预48h后的QBC939细胞,随着浓度的增加,其体外侵袭、运动能力明显减弱(P＜0.05);半定量RT-PCR测定显示,阿托伐他汀作用48h后,QBC939细胞中p27表达含量明显增高、MMP-9的表达降低,而RhoC的表达改变并不明显.结论 阿托伐他汀可抑制人胆管癌QBC939细胞的生长增殖,并减弱其体外侵袭、运动能力.     

RNA干扰降低环氧化酶2基因表达对人胆管癌QBC939细胞的体外作用

目的研究小干扰RNA（siRNA）降低环氧化酶2（COX-2）基因对胆管癌QBC939细胞凋亡及凋亡蛋白caspase-3蛋白表达的影响。方法采用RNA干扰的方法,将胆管癌细胞株QBC939细胞分为4组：COX-2 siRNA干预组、阴性对照siRNA组、空脂质体、空白对照组。将COX-2 siRNA转染入QBC939细胞;流式细胞仪检测siRNA降低COX-2基因表达对凋亡的作用,WesternBlot法检测siRNA降低COX-2基因表达对caspase-3表达变化的影响。结果 RNA干扰后QBC939细胞COX-2表达下降至空白对照组的42%,流式细胞仪检测结果显示COX-2 siRNA干预组细胞的凋亡率以及凋亡蛋白caspase-3的表达明显高于其他3个对照组。结论 RNA干扰可抑制细胞COX-2蛋白的表达,促使胆管癌QBC939细胞的凋亡,caspase-3途径可能是其调控通路之     

γ-氨基丁酸对人胆管癌细胞株QBC939增殖和侵袭的影响

目的 观察抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)对人胆管癌细胞株QBC939生物学行为的影响.方法 采用MTF比色法观察GABA对人系胆管癌细胞QBC939增殖的作用,PCR-ELISA法观察其对QBC939细胞端粒酶活性的影响,Transwell小室分析GABA对胆管癌细胞侵袭能力的影响,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、明胶酶谱法分析GABA对QBC939细胞分泌的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)mRNA和酶活性的影响,数据采用单因素方差分析和Dunnett法处理.结果 GABA对人胆管癌细胞QBC939的增殖有抑制作用(抑制率由2.6%增至26.8%,P＜0.05);抑制癌细胞中端粒酶的活性(0.82±0.05)vs.(0.56±0.05)(P＜0.05);抑制胆管癌细胞穿透Matrigel胶的能力(在100 μmol/L浓度的GABA作用下,穿透细胞数由(60±10)个降至(43±4)个(P＜0.05),同时胆管癌细胞分泌的基质蛋白酶MMP-2和MMP-9的mRNA和活性下降,这三种效应均成浓度依赖性.结论 GABA抑制胆管癌细胞QBC939的生长并减弱侵袭转移能力,其机制可能与其抑制端粒酶活性和基质蛋白酶MMP-2和MMP-9的分泌和活性有关.     

腺病毒载体介导的双自杀基因对人胆管癌细胞QBC939的体外杀伤实验

目的观察腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶/单纯疱疹病毒-1-胸苷激酶(CD/TK)双自杀基因对人胆管癌细胞 QBC939的体外杀伤作用。方法 CD/TK 克隆入穿梭载体成为 pAdtrack-CMV-CD/TK,与骨架载体 pAdeasy-1在细菌内同源重组为 pAd-CD/TK,经 PacⅠ酶切,293细胞包装、扩增、纯化后,体外转染人胆管癌细胞 QBC939,并给予前药5-FC 或 GCV,观察其体外杀伤效果。结果含 CD/TK 基因的重组腺病毒鉴定正确,扩增纯化后,病毒滴度为1×10~(11)颗粒/ml。重组腺病毒对 QBC939细胞在感染倍数(m.o.i)为100时的转染效率为90%,在 m.o.i50感染时,0.1mmool/L的5-FC 及10 μmol/L 的 GCV 对 QBC939细胞的杀伤率为80%,明显高于单用5-FC 与 GCV 的效应。结论双自杀基因以腺病毒为载体对人胆管癌细胞转染效率高,体外杀伤效应明显。腺病毒介导的双自杀基因治疗有望成为治疗胆管癌的有效方法。     

9-顺维甲酸对前列腺癌细胞系LNCaP中同源盒基因NKX3.1表达的影响(英文)

目的:研究9-顺维甲酸对前列腺癌细胞系 LNCaP 中同源盒基因 NKX3.1表达的调节作用。方法:采用流式细胞术、反转录 PCR 和 Western Blot 技术检测9-顺维甲酸对 LNCaP 细胞周期及 NKX3.1表达的影响;构建和转染 NKX3.1启动子-报告基因质粒及其缺失突变体,通过报告基因活性测定,鉴定 NKX3.1启动子中受9顺-维甲酸调控的区域。结果:通过转染及报告基因检测,发现9-顺维甲酸在 LNCaP 细胞中可明显提高 NKX3.1启动子的活性:RT-PCR 和 Western Blot 结果显示,9-顺维甲酸可提高 NKX3.1mRNA 和蛋白的表达,并呈剂量依赖性;通过启动子缺失突变分析,发现 NKX3.1基因上游-936至-921区明显受9-顺维甲酸诱导调节;流式细胞术分析细胞周期的结果显示,9-顺维甲酸可阻止 LNCaP 细胞于 G_1期,减少 G_2/M 期细胞。结论:9-顺维甲酸作为诱导分化剂可阻止 LNCaP 细胞于 G_1期,减少细胞有丝分裂,并明显上调前列腺特异的抑癌基因 NKX3.1的表达。     

尼美舒利对胆管癌QBC939细胞增殖与凋亡的调节

目的研究选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939增殖和凋亡的影响.方法应用MTT比色法观察尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939增殖的影响,细胞凋亡采用透射电镜及流式细胞仪检测,应用免疫组化、RT-PCR检测尼美舒利对凋亡相关基因表达的影响.结果尼美舒利呈时间、剂量依赖性抑制胆管癌细胞增殖,高浓度（200 μmol/L）尼美舒利不仅抑制胆管癌细胞增殖,而且诱导其凋亡,流式细胞仪研究显示,随药物浓度增加,细胞凋亡率显著增加,透射电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变：细胞核染色质致密浓缩,凋亡小体形成等,免疫组化和RT-PCR测定显示尼美舒利显著下调bcl-2、survivin表达,而bax表达上调.结论尼美舒利显著抑制QBC939细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性,bcl-2、bax、survivin等凋亡相关基因可能参与了尼美舒利诱导的QBC939细胞凋亡过程.     

G9a特异性siRNA表达载体的构建及在QBC939细胞中对G9a基因表达的影响

目的构建特异性组蛋白甲基转移酶G9a基因的siRNA表达载体并检测QBC939细胞对G9a表达的抑制作用。方法设计、合成G9a特异性的短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段.克隆到pSilencer neo^TM2.1-U6载体中,构建G9a特异性siRNA的表达载体。EcoRⅠ＋BamHⅠ和EcoRⅠ＋HindⅢ双酶切及测序鉴定重组体,并转染QBC_（939）细胞,G418筛选出稳定表达细胞株,半定量RT-PCR方法和Western印迹法检测G9a mRNA和蛋白的表达水平。结果双酶切与测序鉴定证实成功构建了G9a-siRNA表达载体,转染人胆管癌细胞株QBC939后,在mRNA和蛋白表达水平对G9a的抑制率分别为55.2%和54.8%。结论运用pSileneer neo^TM2.1-U6载体构建的G9a-siRNA表达载体可有效抑制G9a在胆管癌细胞株QBC939中的表达。     

γ-氨基丁酸抑制胆管癌细胞株QBC939增殖及其机制的研究

目的 观察γ-氨基丁酸(GABA)对胆管癌细胞QBC939增殖、凋亡和端粒酶活性的影响.方法 采用MTT比色法观察GABA对人系胆管癌细胞QBC939增殖的作用,流式细胞术检测GABA对胆管癌细胞QBC939凋亡的影响,PCR-ELISA法观察其对QBC939细胞端粒酶活性的影响,放射免疫分析法检测cAMP含量.结果 GABA抑制胆管癌细胞的增殖(抑制率由2.6%增至26.8%,P<0.05),促进细胞凋亡(凋亡率由4.8%增至28.03%,P<0.05),并且抑制癌细胞中端粒酶的活性(0.82±0.048 vs 0.56±0.054,P<0.05),同时促进胆管癌细胞内cAMP含量的增加[(0.59±0.049)nmol/L vs (0.82±0.033)nmol/L,P<0.05].结论 GABA可能通过受体后信息介导途径,诱导细胞凋亡,并抑制癌细胞端粒酶活性,从而抑制胆管癌细胞的增殖.     

阻断Hedgehog信号通路可抑制胆管癌细胞QBC939的生长

目的 研究Hedgehog信号通路特异性阻断剂环靶明(cyclopamine)对人胆管癌细胞系QBC939增殖与凋亡的影响.方法 用MTT比色法检测环靶明对QBC939细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率.RT-PCR法分别检测环靶明处理前后PTCH1、GLI1、EGFR在QBC939中的mRNA表达及变化.Western blot检测环靶明处理前后PTCH1、GLI1、EGFR在QBC939中的蛋白表达及变化.结果 环靶明抑制QBC939细胞的增殖,其作用呈剂量和时间依赖性.经5、10、20 μmol/L的环靶明作用48 h后,QBC939细胞的凋亡率逐渐升高,明显高于对照组的凋亡率(P＜0.01).PTCH1、GLI1、EGFR的mRNA和蛋白均在QBC939中表达,环靶明下调QBC939的PTCH1、GLI1、EGFR表达.结论 阻断Hedgehog信号通路能抑制胆管癌细胞QBC939的增殖,促进其凋亡.     

Apr-1基因对胆管癌细胞QBC939细胞周期的调节机制研究

目的 研究Apr-1基因对胆管癌细胞的细胞周期调节作用及机制.方法 采用脂质体介导法将Apr-1基因转染胆管癌细胞系QBC939,建立稳定表达Apr-1基因的细胞模型(QBC939-Apr-1).运用RT-PCR检测转染前后QBC939细胞系中Apr-1 mRNA的表达;流式细胞分析以及生长曲线等方法观察目的 基因对该细胞系的细胞周期的影响.采用细胞周期基因芯片,观察Apr-1基因对细胞周期相关基因表达的调节作用.结果 Apr-1基因在QBC939细胞系中呈阴性表达,转染Apr-1基因的QBC939-Apr-1细胞出现了Apr-1 mRNA的表达,成功建立了稳定表达Apr-1基因的细胞模型,该细胞模型表现出细胞生长受抑,细胞周期显示G2期细胞由9%增加至13%(P＜0.01).细胞周期抑制;并且细胞周期基因芯片检测结果发现:Skp2、UBE基因的表达水平出现明显上调,而CDC6、Cyclin H等25种基因的表达下降,其中MRE11A、CKS2、CDK8、CDC45下调在3倍以上.结论 Apr-1基因在体外能够使QBC939细胞的细胞周期在G2期延长,出现细胞周期多种调节基因的表达差异.

Abstract：

Objective To investigate the role and the mechanism of Apr-1 gene on cholangiocarcinoma QBC939 cell lines proliferation and cell cycle regulation. Methods Apr-1 gene was transfected into QBC939 cells by using liposomes to establish a QBC939 cell model ( QBC939-Apr-1 ) stably expressing Apr-1 gene. Apr-1 mRNA expression and the changes in cell cycle and cell growth of QBC939 cells were analyzed by RT-PCR, flow cytometry ( FCM ) and growth curve before and after transfection. The regulatory effect of Apr-1 gene on the expression of cell cycle-related genes was investigated in QBC939 cells before and after Apr-1 transfection using cell cycle gene microarrays. Results Significant suppression of cell growth was observed with the cell model stably expressing Apr-1 gene. Apr-1 over-expression caused cell arrest from 9% to 13% (P ＜0. 01 ) increase in G2 population. Cell cycle gene microarrays demonstrated that the expression of Skp2 、UBE1 was up-regulated, while the expression of MRE11A 、CKS2 、CDK8 、CDC45 was down-regulated by more than 3 folds. Conclusions Apr-1 gene suppresses QBC939 cell proliferation in vitro, QBC939 cells presented with differences in the expression of cell cycle-related genes after Apr-1 gene transfection.     

胆汁酸对胆管癌细胞株QBC939中IL-6表达与细胞活力的影响

目的 探讨不同胆汁酸对胆管癌细胞株QBC939中IL-6的表达和细胞活力的影响.方法 分别使用不同浓度的游离胆汁酸以及其对应的甘氨酸结合型胆汁酸作用于胆管癌细胞株QBC939,药物浓度分别为:胆酸(CA)800 μmol/L、脱氧胆酸(DCA)100 μmol/L、鹅脱氧胆酸(CDCA)100 μmol/L、甘氨胆酸(GCA)1200 μmol/L、甘氨脱氧月胆酸(GDCA)200 μmol/L以及甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)300 μmol/L.以MTT法检测不同胆汁酸刺激24、48、72 h后胆管癌细胞活力的变化,并以ELISA法检测肿瘤细胞中IL-6表达的改变.结果 DCA、CDCA、GCDCA作用48 h后,肿瘤细胞活力比值(A处理组/A对照组)分别为0.61、0.58和1.26;作用72 h后,CA、DCA、CDCA、GCA、GDCA和GCDCA各组肿瘤细胞活力比值分别为0.48、0.50、0.42、1.29、1.30和1.41;与对照组相比,以上各组细胞活力变化均具有统计学意义(P＜0.05).对照组肿瘤细胞培养48和72 h后,IL-6表达量分别为(198±32)ng/L和(323±34)ng/L,CA、DCA、CDCA、GCA、GDCA和GCDCA作用48 h后IL-6的表达量分别为(106±33)ng/L、(88±29)ng/L、(116±54)ng/L、(413±21)ng/L、(587±32)ng/L和(366±30)ng/L,作用72 h后IL-6表达量分别为(123±66)ng/L、(45±21)ng/L、(74±45)ng/L、(792±13)ng/L、(1310±22)ng/L和(845±18)ng/L;与对照组相比,以上各组IL-6表达量变化均具有统计学意义(P＜0.05).结论 游离胆汁酸CA、DCA和CDCA能减少胆管癌细胞IL-6的表达,并抑制细胞活力;而结合胆汁酸GCA、GDCA和GCDCA能增加胆管癌细胞IL-6的表达,并促进细胞活力.胆汁酸能通过IL-6途径改变胆管癌细胞活力.