生长抑素受体2基因转染抑制胰腺肿瘤细胞生长机制的探讨

目的探讨生长抑素受体2(SSTR2)基因转染抑制体内胰腺肿瘤生长的效果及其机制.方法利用lipofectAMINE将人类SSTR2全长 cDNA转染导入胰腺癌细胞株PC-3中,G418筛选出阳性克隆;免疫组织化学SABC法和RT-PCR检测生长抑素受体2的稳定表达.分别将表达生长抑素受体2的PC-3细胞 (实验组) 和空载体对照组及阴性对照组的PC-3细胞异种移植到无胸腺小鼠体内.TUNEL法测定这些细胞形成的胰腺肿瘤细胞凋亡指数(AI);免疫组织化学SP法测定凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,以及肿瘤微血管密度(MVD).另外,比较3组裸鼠之间胰腺肿瘤的大小和重量.结果实验组胰腺肿瘤细胞AI(3.39%±0.84%)显著高于空载体对照组(0.69%±0.08%)和阴性对照组(0.68%±0.09%)(P<0.05).与空载体对照组和阴性对照组相比,实验组Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白的表达则显著升高(P<0.05);实验组MVD(6.3±1.7)显著低于空载体对照组(12.6±1.7)和阴性对照组(13.5±1.9)(P<0.05).另外,实验组胰腺肿瘤的大小和重量也显著低于空载体对照组和阴性对照组(P<0.05).空载体对照组与阴性对照组之间未观测到任何有差异的指标(P>0.05).结论大多数人胰腺癌细胞中缺失SSTR2基因,生长抑素受体2在胰腺癌细胞中的再表达能诱导肿瘤凋亡,抑制肿瘤新生血管形成,最终明显抑制胰腺肿瘤的生长,而凋亡可能通过Bcl-2蛋白的下调及Bax蛋白的上调来调节.     

生长抑素抑制小鼠肝细胞癌的体外实验研究

目的 探讨生长抑素对小鼠肝细胞癌的抑制作用和机制。方法 用液闪仪测定肿瘤细胞摄入3H-TdR的方法 来检测生长抑素对肿瘤细胞增殖的抑制作用。用流式细胞仪测定肿瘤细胞的周期和增殖指数,以了解生长抑素对肿瘤细胞周期的影响。结果 生长抑素能使肿瘤细胞对3H-TdR的摄入显著减少,使G0/G1期细胞明显增多,细胞增殖指数下降,其作用随生长抑素浓度和作用时间的增加而增强,均有显著差异（P〈0.01）。结论 生长抑素能抑制体外培养的小鼠肝细胞癌H22的生长。生长抑素抑制肿瘤生长的机制可能与抑制肿瘤细胞核酸合成,阻止G0/G1期细胞进入细胞增殖周期有关。生长抑素的运用有可能成为治疗肝细胞癌的一条新途径。     

生长抑素抑制胰腺癌细胞株生长的作用

目的：观察生长抑素对人胰腺癌细胞株HS766T生长的作用；测定神经鞘磷脂（sphingomyolin,SM）、cAMP、细胞内Ca^2 水平，探讨生长抑素的受体后信息传递作用。方法：细胞培养，分别加入不同浓度的生长抑素，PACAP1－38。应用MTT法来观察细胞增殖程度；薄层层析法测定细胞内SM，放免法测定细胞内cAMP含量；Fura-2/AM测定[Ca^2 ]i。结果：不同浓度的生长抑素（10^-6-10^-12mol/L）均能有效地抑制S766T的生长。能抑制HS766T细胞内SM、cAMP生成和细胞内Ca^2 水平，cAMP生成量和细胞内Ca^2 水平与生长抑素浓度呈负相关。结论：生长抑素能抑制HS766T细胞的生长，它的抑制作用是通过受体介导的。     

原位杂交法检测胰腺细胞生长抑素受体亚型2的探讨

胰腺既分泌丰富的生长抑素,也有生长抑素受体存在。生长抑素与胰腺组织细胞膜上受体相结合,经细胞内信号传导系统发挥其抑制分化、抑制生长、抑制分泌、抑制活动等作用［１,２］。研究胰腺组织细胞生长抑素受体及其亚型类别,对阐明生长抑素及其衍生物在胰腺生理和病理情况下的作用机制有重要意义。核素配基受体结合试验已确定胰腺存在生长抑素受体,但不能确定受体亚型及其分布。本文作者探讨采用原位杂交法检测胰腺细胞生长抑素受体亚型２（ＳＳＴＲ２）及其分布。材料和方法一、动物体重２２０～２８０克ＳＤ大鼠１０只,雄性（上海医…     

生长抑素类似物治疗原发性肝细胞肝癌研究进展

原发性肝细胞肝癌是临床常见的恶性肿瘤。生长抑素及其类似物除能通过抑制肿瘤细胞增殖及血管生成、诱导肝癌细胞凋亡等途径直接发挥抗肿瘤效应外,还可通过抑制一些能够刺激肿瘤细胞增长的激素分泌而起到间接抗肿瘤作用。生长抑素及其类似物所发挥的宏观抗肿瘤效应依赖于其与肝癌细胞表面相应受体之间的相互作用及随后发生于细胞内的一系列信号级联反应。因而肝癌细胞表面生长抑素受体的表达在其数量、与配体的亲和力、持续时间等方面都与该类药物的临床疗效密切相关。     

生长抑素类似物抑制人肝癌细胞生长和诱导其凋亡

目的 探讨生长抑素类似物奥曲肽抑制人肝癌细胞生长及诱导其凋亡的作用.方法 将10μg/ml的奥曲肽置人经体外培养的肝癌细胞SMMC-7721中,经RNA酶消化和DNA-Stain染色后,用流式细胞仪式测定细胞DNA含量,并做细胞周期分析,计算凋亡率.结果 奥曲肽组S期和G2/M期细胞数减少、G0/G1期细胞数增加,奥曲肽组和对照组细胞的凋亡率分别为15.1%和6.5%;奥曲肽组肝癌细胞增殖停留在G0//G1期,同时S期和G2/M期的细胞数量减少,细胞增殖能力降低并发生凋亡,G1峰前出现亚G1峰(凋亡峰),其凋亡率明显高于对照组(P<0.05).结论 奥曲肽可以通过诱导人肝癌细胞凋亡而抑制人肝癌细胞的生长.     

生长抑素受体特异性激动剂对人肝癌细胞生长影响的实验研究

目的探讨生长抑素受体特异性激动剂对体外培养的人肝癌细胞HepG2生长的影响。方法分别采用MTS、TUNEL、Transwell法检测生长抑素受体亚型特异性激动剂对体外培养的人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡、迁移的影响。结果与对照组相比,SSTR2~4亚型特异性激动剂对人肝癌细胞的增殖、凋亡、迁移没有明显影响,SSTR5亚型特异性激动剂L-817、818在剂量为1μg·mL-1时可以出现较明显的迁移抑制作用,剂量达到5μg·mL-1时,差异有统计学意义（P〈0.05）。其他不同浓度激动剂对HepG2的迁移抑制作用不明显。结论 SSTR亚型特异性激动剂对肝癌细胞的增殖、凋亡、侵袭没有明显的影响,L-817、818在高剂量时可以抑制HepG2的迁移。     

生长抑素受体特异性激动剂对人肝癌细胞生长影响的实验研究

目的探讨生长抑素受体特异性激动剂对体外培养的人肝癌细胞HepG2生长的影响。方法分别采用MTS、TUNEL、Transwell法检测生长抑素受体亚型特异性激动剂对体外培养的人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡、迁移的影响。结果与对照组相比,SSTR2~4亚型特异性激动剂对人肝癌细胞的增殖、凋亡、迁移没有明显影响,SSTR5亚型特异性激动剂L-817、818在剂量为1μg·mL-1时可以出现较明显的迁移抑制作用,剂量达到5μg·mL-1时,差异有统计学意义(P<0.05)。其他不同浓度激动剂对HepG2的迁移抑制作用不明显。结论 SSTR亚型特异性激动剂对肝癌细胞的增殖、凋亡、侵袭没有明显的影响,L-817、818在高剂量时可以抑制HepG2的迁移。     

生长抑素受体与胃肿瘤研究现状

生长抑素受体(somatostatin receptor，SSTR)作为基因型肿瘤标志物之一，正在受到研究者的重视。目前已有不少文献报道生长抑素(SS)对肿瘤有抑制作用，肿瘤组织或细胞株上存在SSTR。随着SSTR 5种亚型先后被克隆，人们对SSTR各亚型的研究进一步深人。SSTR不仅广泛存在于神经内分泌肿瘤的细胞膜上，在消化系实体肿瘤上亦有广泛分布，本文就其在胃肿瘤中的作用机制及研究现状作一综述。     

生长抑素、环氧合酶-2在肝癌发生发展中的变化及意义

目的 探讨在肝癌发生发展过程中,生长抑素及其受体（SST/SSTR）和环氧合酶-2（COX-2）的表达演变规律,并分析门脉高压与SST/SSTR 表达之间的关联性。 方法 收集一系列肝脏手术标本:正常肝脏5例、慢性肝炎14例、肝硬化40例、癌前病变40例及肝癌组织40例,收集肝硬化经颈静脉肝内门体分流手术（TIPS）患者术前及术后外周血标本各20例。免疫组化法及RT-PCR 法分别检测肝组织中SSTR 1~5亚型的蛋白及mRNA 表达情况。放射免疫法检测外周血及肝组织中SST表达量。Western blot检测肝组织中COX-2 蛋白表达量。 结果 约90% 的癌前病变高表达SSTR 2、5, 且SSTR表达分布呈包绕门静脉特征。至少约60%的肝癌组织表达SSTR 2、5 亚型。SSTR 1~5表达量与SST表达量呈正相关。肝硬化患者TIPS术后,外周血SST水平较术前升高（ P<0.05)。COX-2 在肝硬化组织中表达量最高（约90%）,在癌前病变（约80%）及肝癌中表达量降低。 结论 就分子靶点分布情况而言,癌前病变期可能为生长抑素类似物与COX-2抑制剂联合用药的最佳时期。而对肝癌组织,缓解门脉高压可能有利于诱导增强SSTR在肿瘤组织中的表达。     

Zoledronic acid inhibits hepatocellular carcinoma cells growth in vitro and in vivo

背景 越来越多的临床前研究表明,唑来磷酸能抑制多种肿瘤细胞生长,但其对肝癌细胞的作用尚未见报道。本研究我们通过体内体外实验验证唑来磷酸对肝癌细胞的作用。 方法 SRB及流式细胞术验证唑来磷酸对肝癌细胞生长及周期的影响。westernblot验证周期蛋白表达变化。H22腋下核瘤小鼠及H22腹水瘤小鼠模型验证唑来磷酸在体内对肝癌细胞效应。 结果 唑来磷酸可能通过下调CDC2和上调cyclin A表达诱导S期阻滞从而抑制肝癌细胞株SK-HEP-1、H22细胞生长。在体内试验中,唑来磷酸显著抑制核瘤小鼠肿瘤生长且可显著延长腋下核瘤小鼠及腹水瘤小鼠生存。 结论 唑来磷酸体内外均可抑制肝癌细胞生长且可延长核瘤小鼠生存。本研究结果将为唑来磷酸直接应用于肝癌的治疗提供一定的理论和试验基础。     

CPLX2在30例肝癌组织的表达及其对体外细胞增殖与侵袭的影响

目的 检测人复合素2(CPLX2)在肝癌组织中的表达,探讨其对肝癌细胞增殖与侵袭的影响。 方法 采用RT-qPCR和Western blotting方法检测30例配对肝癌组织和癌旁组织中CPLX2 mRNA和蛋白水平的表达。利用Lipofectamine 2000转染两条CPLX2小分子干扰RNA(siRNA)至肝癌Huh7细胞,RT-qPCR和Western blotting方法验证转染后的干扰效率。细胞实验分4组:空白组、对照siRNA组,CPLX2 siRNA1组和CPLX2 siRNA2组。噻唑蓝(MTT)法和Transwell实验检测细胞增殖和侵袭能力。采用成组t检验分析siRNA干扰效果和细胞侵袭能力的差异,双因素方差分析法两两多重比较各组细胞增殖能力的差异。 结果 CPLX2在肝癌组织(22.69±14.78)中的表达高于癌旁组织(4.03±2.65),差异有统计学意义(t=5.941, P<0.001)。CPLX2 mRNA在两siRNA干扰组的表达量分别为0.34±0.02和0.48±0.01,均低于对照siRNA组(0.88±0.02)和空白组(1.00±0.05),差异有统计学意义(P<0.001),mRNA和蛋白水平均显示siRNA干扰效果较好。MTT实验证实CPLX2两siRNA干扰组的细胞增殖能力低于对照siRNA组(P<0.001)和空白组(P<0.001)。Transwell migration实验显示每个检测视野CPLX2 siRNA1组细胞的穿膜细胞数(37.0±2.0)和CPLX2 siRNA2组细胞的穿膜细胞数(46.3±2.5)低于空白组(88.0±2.0)和对照siRNA组(77.0±4.4)。Transwell invasion实验结果显示,每个检测视野CPLX2 siRNA1组细胞的穿膜细胞数(29.7±2.5)和CPLX2 siRNA2组细胞的穿膜细胞数(41.0±2.6)低于与空白组(74.7±3.1)和对照siRNA组(68.7±1.5),差异有统计学意义(P<0.001)。 结论 CPLX2在肝癌组织中表达升高,下调其表达可抑制肝癌细胞Huh7的增殖和侵袭,CPLX2可能在促进肝癌的发生发展过程发挥重要作用。     

奥曲肽抑制肝癌生长的实验研究

目的研究生长抑素类似物奥曲肽在体外、体内对肝癌生长及凋亡的影响.方法采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法、DNA末端原位标记染色(TUNEL)及流式细胞技术检测奥曲肽对体外培养的肝癌细胞生长影响及凋亡的诱导作用.利用SMMC-7721肝癌细胞株建立裸鼠肝癌原位种植瘤模型,实验组皮下注射奥曲肽100μg@kg-1@d-1;对照组予生理盐水20μg@d-1;共给药8周.结果培养细胞经不同浓度的奥曲肽作用48h后,对肝癌细胞的生长具有明显的抑制作用,且肝癌细胞3H-TdR掺入值与奥曲肽的浓度呈负相关(r=-0.97,P<0.01).TUNUL显示,1×10-6mol/L的奥曲肽作用24h后,肝癌细胞凋亡率为15.2%±2.4%;流式细胞检测可见明显的凋亡峰.奥曲肽治疗组裸鼠肝癌原位种植瘤重量明显低于对照组(0.27±0.05vs0.85±0.37,P<0.01).结论体内及体外实验表明,奥曲肽能有效抑制肝癌生长,其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关.     

In vivo and in vitro effects of QHF combined with chemotherapy on hepatocellular carcinoma

Objective： To investigate the synergistic anti-tumor effect of QHF （a Chinese medicine formula with anti- tumor active ingredients, including 800 mg/kg Cinobufotalin, 14 mg/kg Ginsenoside Rg3, 5.5 mg/kg Notoginseng and 100 mg/kg Lentinan） when combined with the chemotherapy drug cisplatin （DDP）. Methods： Hepatocellular carcinoma H22 cells were implanted into mice and after the transplants were successfully established the animals were divided into four groups, namely a normal saline（NS） control group, QHF group, DDP group and QHF＋DDP group. The tumor growth was monitored and the survival time determined. In vitro studies employing H22 cells used the first three groups, and determined the effects of QHF and DDP on tumor cell cycle distribution, apoptosis and morphologic changes in vitro. Results： QHF significantly inhibited the growth of tumors and prolonged the survival time of mice with hepatocellular carcinomas. QHF combined with DDP could attenuate DDP-induced leucopenia, spleen and thymus atrophy and other indicators of toxicity. The inhibition rate of tumor growth reached 82.54% with QHF＋DDP, and QHF prolonged the life span of DDP-treated mice by 66.83%. In the in vitro experiments tumor cells showed morphological changes characteristic of apoptosis by both light and transmission electron microscopy in the QHF group, and the apoptosis rate was 33.85%. Moreover, the proportion of cells in the G0/G1 phase was increased and those in the S-phase decreased. Conclusion： QHF combined with DDP could significantly inhibit tumor growth, induce the apoptosis of tumor cells and effectively attenuate DDP toxicity.     

肝细胞癌组织凋亡基因Bcl—XL,Bcl—2的表达及意义

目的 探讨凋亡抑制基因Ｂｃｌ－ＸＬ、Ｂｃｌ－２在肝细胞癌组织中的表达及相互关系。方法 用免疫组化ＳＰ法检测５７例肝细胞癌组织中Ｂｃｌ－ＸＬ、Ｂｃｌ－２的表达。结果 ５７例肝细胞癌组织中的Ｂｃｌ－ＸＬ、Ｂｃｌ－２阳性表达分别为３６例（６３．２％）、２３例（４０．４％）。两者表达阳性率差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。Ｂｃｌ－２－ＸＬ、Ｂｃｌ－２各组表达水平及组织学分级表达差异无显著性。低分化组１７例中,Ｂｃｌ－ＸＬ、Ｂｃｌ－２阳性表达分别为１０例（５５．８％）、４例（２３．５％）。两组表达阳性率差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。５７例肝细胞癌中,Ｂｃｌ－ＸＬ、Ｂｃｌ－２同时阳性１７例,同时阴性１５例,单独阳性各为１９例、６例。结论 凋亡抑制基因Ｂｃｌ－ＸＬ、Ｂｃｌ－２在肝细胞癌组织中既可同时发挥抑制细胞凋亡作用,也可单独     

外生型肝癌3例外科处理

目的提高对外生型肝癌的认识，减少误诊率。方法分析3例肝外生长型肝癌患者的临床表现、诊断和治疗。结果病变部位肝切除术疗效良好。结论外生型肝癌罕见．以上腹部包块或腹痛为主要表现。病一睛进展相对缓慢，肿瘤切除率高和预后较好。     

肝癌中COX-2蛋白与MMP-2蛋白的表达及其相关性研究

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在肝细胞癌(HCC)中表达的相关性和临床意义。方法:应用免疫组化SP法检测47例HCC组织、33例癌旁组织COX-2蛋白和MMP-2蛋白的表达。结果:COX-2蛋白在HCC组织、癌旁组织中的阳性表达率分别为78.7%,30.3%(P<0.05),COX-2蛋白的表达与肿瘤分化程度、肝硬化、静脉浸润以及TNM分期相关(P<0.05);MMP-2蛋白在HCC组织、癌旁组织中的阳性表达率分别为68.1%,39.4%(P<0.05),MMP-2蛋白的表达与肿瘤大小、分化程度、静脉浸润、TNM分期相关(P<0.05)。COX-2与MMP-2同时阳性表达者为25例。结论:COX-2蛋白和MMP-2蛋白在HCC组织中表达上调,并呈正相关(P<0.01),证实COX-2和MMP-2在HCC发生发展过程中起重要作用。     

小檗碱体内外对人鼻咽癌细胞CNE-2生长的抑制作用

目的观察小檗碱体内外对人鼻咽癌CNE-2细胞生长的影响,探讨小檗碱的抗肿瘤作用机制。方法MTT法测定小檗碱对CNE-2细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测小檗碱对CNE-2细胞凋亡和周期的影响;透射电镜观察CNE-2细胞经小檗碱处理后凋亡形态变化;Westernblotting法检测小檗碱对CNE-2细胞的细胞周期相关蛋白(cyclin)B1、CDK1、cdc25c表达的影响;3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)和3H-亮氨酸(3H-Leu)标记前体掺入法检测小檗碱对CNE-2细胞DNA和蛋白质合成的影响;利用荷人鼻咽癌的裸鼠模型验证小檗碱的体内抗肿瘤作用。结果小檗碱能抑制CNE-2细胞生长,48h的半数抑制浓度(IC50)为(49.5±5.8)μmol/L,72h的IC50为(13.3±2.0)μmol/L;小檗碱能抑制CNE-2细胞DNA和蛋白质合成;小檗碱能诱导CNE-2细胞凋亡,细胞经过25.0μmol/L小檗碱处理48h后的凋亡指数为(48.9±10.4)%;50.0μmol/L小檗碱能诱导CNE-2细胞G2/M期阻滞,并且下调细胞周期相关蛋白B1、CDK1、cdc25c表达;小檗碱能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞在裸鼠体内的生长,30mg/kg剂量组的肿瘤体积中位数为317.9mm3,明显低于对照组(P<0.05)。结论小檗碱体内外均能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的生长,其抗肿瘤作用可能与其诱导细胞周期阻滞和凋亡,下调相关细胞周期蛋白有关。     

Inhibition of connective tissue growth factor overexpression decreases growth of hepatocellular carcinoma cells in vitro and in vivo

Background  We have previously found that connective tissue growth factor (CTGF) is highly expressed in a rat model of liver cancer. Here, we examined expression of CTGF in human hepatocellular carcinoma (HCC) cells and its effect on cell growth.

Methods  Real-time PCR was used to observe expression of CTGF in human HCC cell lines HepG2, SMMC-7721, MHCC-97H and LO2. siRNA for the CTGF gene was designed, synthesized and cloned into a Plk0.1-GFP-SP6 vector to construct a lentivirus-mediated shRNA/CTGF. CTGF mRNA and protein expression in HepG2 cells treated by CTGF-specific shRNA was evaluated by real-time PCR and Western blotting. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay was utilized to evaluate the growth effect, and a colony formation assay was used for observing clonogenic growth. In vivo, tumor cell proliferation was evaluated in a nude mouse model of xenotransplantation. Statistical significance was determined by t test for comparison between two groups, or analysis of variance (ANOVA) for multiple groups.

Results  Immunohistochemical staining of CTGF was seen in 35 of 40 HCC samples (87.5%). CTGF was overexpressed 5-fold in 20 HCC tissues, compared with surrounding non-tumor liver tissue. CTGF mRNA level was 5–8-fold higher in HepG2, SMMC-7721 and MHCC-97H than in LO2 cells. This indicated that the inhibition rate of cell growth was 43% after knockdown of CTGF expression (P <0.05). Soft agar colony formation assay showed that siRNA mediated knockdown of CTGF inhibited colony formation in soft agar of HepG2 cells (P <0.05). The volume of tumors from CTGF-shRNA-expressing cells only accounted for 35% of the tumors from the scrambled control-infected HepG2 cells (P <0.05).

Conclusions  CTGF was overexpressed in human HCC cells and downregulation of CTGF inhibited HCC growth in vitro and in vivo. Knockdown of CTGF may be a potential therapeutic strategy for treatment of HCC.