鸦胆子油乳注射液对SKMG-4胶质瘤细胞的作用研究

目的 本实验拟研究鸦胆子油乳注射液对人脑胶质瘤细胞SKMG-4细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用.方法 体外培养人脑胶质瘤细胞SKMG-4,利用MTT比色法检测鸦胆子油乳注射液对于SKMG-4的增殖抑制影响;用流式细胞术(flowcytometry,FCM)分析药物处理前后SKMG-4的细胞周期变化;实时荧光定量pcr检测不同处理组中凋亡基因bcl-2的表达.结果 MTT显示鸦胆子油乳注射液对SKMG-4细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,当浓度为5 g/L时,对SKMG-4细胞增殖的抑制率达到(72.1±2.2)%(P＜0.05);流式细胞仪分析显示,用5 g/L鸦胆子油乳注射液培养48 h,细胞周期中G1期所占比例增高,S期占细胞周期的比例降低;实时荧光定量pcr结果显示随着鸦胆子油乳注射液的浓度增加凋亡基因bcl-2mRNA的表达逐渐减少.与对照组比较P＜0.01.结论 中药鸦胆子油乳注射液可显著抑制SKMG-4胶质瘤细胞细胞增殖及促进其凋亡.     

鸦胆子油乳注射液对喉癌Hep-2细胞抑制作用研究

目的 探讨鸦胆子油乳注射液对喉癌Hep-2细胞增殖活性、凋亡水平、细胞周期及侵袭迁移的影响.方法 不同浓度鸦胆子油乳注射液作用Hep-2细胞后,利用MTT法检测鸦胆子油乳注射液作用后细胞增殖抑制情况;利用Hoechst33258观察细胞的凋亡现象;流式细胞仪检测分析细胞周期分布、凋亡情况;Transwell实验分析细胞侵袭迁移能力的变化情况.结果 经鸦胆子油乳注射液处理后,Hep-2细胞的增殖能力明显受到抑制(P＜0.05),且在一定浓度范围内,呈时间和剂量依赖性;细胞核出现致密的固缩形态及颗粒状荧光,鸦胆子油乳注射液诱导了细胞凋亡;细胞周期都被阻滞在G2/M期;鸦胆子油乳注射液呈剂量依赖性的抑制Hep-2细胞侵袭迁移能力(P＜0.05).结论 鸦胆子油乳注射液可抑制喉癌Hep-2细胞的增殖及侵袭迁移能力,可能与其引起肿瘤细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡有关.     

鸦胆子油乳抑制人白血病多药耐药K562/VCR细胞株增殖的实验研究

目的探讨鸦胆子油乳对人白血病多药耐药K562/VCR细胞株增殖抑制的作用及增加化疗药物阿霉素在K562/VCR的蓄积浓度,达到逆转作用。方法用MTT方法检测鸦胆子油乳对体外细胞K562/VCR的增殖抑制率;通过光学显微镜观察细胞形态学改变,DNA凝胶电泳检测,流式细胞仪(FCM)分析鸦胆子油乳对K562/VCR细胞株细胞周期分布的影响及细胞内ADM浓度。结果 (1)鸦胆子油乳对K562及K562/VCR细胞有明显抑制效应,且效应具有时间、剂量依赖关系;(2)1500mg/L的鸦胆子油乳即可诱导耐药细胞出现典型的细胞凋亡形态学特征;(3)DNA电泳呈现典型的梯形条带;(4)FCM细胞周期分析显示细胞周期中G0/G1期的比例逐渐增加,S期细胞减少,鸦胆子油乳使肿瘤细胞停滞在G1期;(5)鸦胆子油乳可提高K562/VCR细胞内阿霉素的蓄积浓度,与未加鸦胆子油乳对照组比较有显著性差异。结论鸦胆子油乳抑制K562/VCR细胞的增殖及诱导耐药细胞周期阻滞;鸦胆子油乳可增加细胞内化疗药物蓄积。     

鸦胆子油乳抗人胃腺癌增殖作用的初步研究

目的 研究鸦胆子油乳对人胃腺癌细胞的增殖抑制作用。方法 采用体外药物敏感试验和流式细胞仪技术检测鸦胆子油乳对SGC－7901细胞增殖周期影响及诱导凋亡作用。结果 鸦胆子油乳体外具有明显的抑制SGC－7901增殖的作用。与对照组相比,鸦胆子油乳2μg/ml分别孵育SGC-7901细胞24h和36h后,细胞周期被阻滞于DNA合成期（S期）。流式细胞仪检测未见明显的亚二倍体峰,鸦胆子油 同浓度、不同孵育时间诱导细胞凋亡的作用无显著差异（P＞0.05）。结论 鸦胆子油乳在体外能有效抑制SGC－7901细胞的增殖,初步研究表明其主要通过阻滞细胞周期于S期而不是通过诱导凋亡来抑制SGC－7901细胞的增殖。     

姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响

目的探讨姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响.方法采用细胞计数法绘制亲代A549和A549/DDP细胞生长曲线,MTY法测定A549/DDP对顺铂的耐药指数以及姜黄素对A549/DDP细胞抑制率.将不同浓度姜黄素作用于A549/DDP细胞24h 后,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率.以20μmol/L的姜黄素作用细胞24h 后,流式细胞仪分析细胞周期.结果亲代A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.24±0.24)h和(32.88±0.11)h(P＞0.05);顺铂处理A549和A549/DDP细胞72h 后,半数抑制浓度(IC50)分别为13.57 μmol/L 和146.79 μmol/L,A549/DDP细胞对顺铂的耐药指数为10.82.姜黄素对A549/DDP细胞增殖有抑制作用,并且呈时间浓度依赖性(P＜0.05).姜黄素作用后,Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染荧光成团块分布.流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P＜0.05).20 μmol/L的姜黄素作用细胞24h,引发G2期阻滞.结论姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖.其作用可能是通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的.     

鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞增殖影响的实验研究

目的 探讨鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞增殖的影响.方法 体外培养大鼠C6胶质瘤细胞,MTT法检测鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞增殖的抑制作用;免疫细胞化学染色法和western blot法检测鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞caspase-3蛋白表达的影响.结果 MTT法显示,鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞增殖的抑制具有剂量依赖性.免疫细胞化学染色和western blot检测显示,随着鸦胆子油乳注射液浓度增加,caspase-3蛋白表达明显上调.结论 鸦胆子油乳注射液能通过促进凋亡基因caspase-3蛋白表达的上调,从而抑制C6胶质瘤细胞增殖.     

抑制miR-21对非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响及可能机制探讨

目的:探讨抑制miR-21表达对非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响及可能的机制?方法:应用Real-time PCR技术分别检测人非小细胞肺癌细胞株A549及其耐药株A549/DDP中miR-21的表达;将miR-21抑制剂(miR-21 inhibitor) ASO-21转染至A549/DDP中,下调其miR-21的表达,在不同时间点使用MTT检测细胞的增殖,流式细胞仪Annexin-FITC检测细胞凋亡;使用生物信息学和miR的预测软件预测miR-21在非小细胞肺癌中的可能靶点?结果:①miR-21在A549/DDP细胞株的表达均为A549的3倍;②A549/DDP细胞株中转染ASO-21孵育,加入顺铂后,与对照组相比,其凋亡增加,增殖能力明显降低;③生物信息学软件分析后发现miR-21在非小细胞肺癌A549有多个调节靶点,一些蛋白分子可以调节miR-21的表达,组成肿瘤细胞的调节网络而影响肺癌细胞对顺铂的敏感性?结论:抑制miR-21可以促进顺铂耐药细胞A549/DDP的凋亡增加及抑制其增殖,miR-21可能成为逆转肺癌对顺铂耐药的新靶点?     

银杏酚C171与顺铂联用逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性

探讨银杏酚C171对顺铂耐药人肺腺癌A549/DDP细胞株耐药及凋亡的影响。方法: 体外培养A549及A549/DDP细胞,MTT法检测A549/DDP细胞的耐药倍数,确定顺铂作用浓度;此浓度顺铂与不同浓度银杏酚C171(0, 10,20,40 mg/L)联合应用,分别通过Transwell法、免疫印记及流式细胞术检测A549/DDP细胞迁移、侵袭,Nrf2/Keap1信号通路相关蛋白的表达及细胞凋亡情况。结果： MTT结果显示,与A549细胞相比,A549/DDP细胞具有5.8倍耐药性,确定顺铂作用浓度为4 mg/L;与对照组相比,Transwell实验显示,各浓度银杏酚C171与顺铂联用均能明显抑制A549/DDP细胞的迁移和侵袭(P<0.05);免疫印迹结果显示,各浓度银杏酚C171与顺铂联用均能抑制A549/DDP细胞Nrf2、Mrp1及抗凋亡蛋白Bcl2的表达(P<0.05),且促进凋亡蛋白Bax及Keap1蛋白的表达(P<0.01);流式细胞术结果显示,各浓度银杏酚C171与顺铂联用均能致A549/DDP细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。 结论： 银杏酚C171与顺铂联用可逆转体外A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,并促进细胞凋亡。     

罗格列酮对体外培养人肺癌细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的探讨罗格列酮（Rosiglitazone, ROS）对体外培养人肺癌细胞系A549细胞增殖抑制和凋亡的影响.方法体外培养人脐静脉内皮细胞系（HUVEC）、人肺癌细胞系（A549）,每种细胞实验组中分别加入不同浓度罗格列酮,对照组加入等量PBS.采用改良MTT比色法分别检测罗格列酮作用HUVEC、A549细胞不同时间后的细胞增殖抑制率;流式细胞仪分析法分别检测HUVEC、A549细胞的细胞周期分布及凋亡率;间接免疫荧光流式细胞仪分析法分别检测HUVEC、A549细胞的细胞内蛋白PPARγ表达.结果罗格列酮对A549细胞的增殖具有抑制作用,呈剂量依赖性和时间依赖性,对HUVEC细胞的增殖抑制作用弱,与A549细胞相比差异有显著性（P〈0.05）;罗格列酮作用于A549细胞后细胞周期分布及凋亡率与HUVEC细胞比较,G0/G1期细胞明显增多,且G1期细胞前出现明显的亚G1凋亡峰;罗格列酮作用于A549细胞后,细胞内 PPARγ的表达进行性上调.结论罗格列酮对肺癌细胞系A549的增殖具有明显抑制作用,其抗肿瘤作用机制可能是通过活化PPARγ途径诱导细胞凋亡.     

苦参碱及氧化苦参碱抑制A549细胞增殖及诱导细胞凋亡的比较研究

目的观察比较苦参碱及氧化苦参碱对A549细胞系增殖能力的影响及其对A549细胞凋亡的诱导效应.方法以不同剂量的苦参碱及氧化苦参碱分别作用A549细胞,观察细胞形态,MTT法检测细胞的增殖能力,TNUEL法原位检测DNA断裂,流式细胞仪检测凋亡.结果苦参碱在浓度为0.5g/L时即表现出明显的抑制A549增殖的作用,浓度在1.0g/L时TUNEL原位检测DNA断裂为强阳性,流式细胞仪检测出凋亡峰;相同浓度的氧化苦参碱没有明显的抑制A549增殖的作用,当其浓度增加到10倍出现对A549抑制增殖的作用,但是TUNEL原位检测DNA断裂为弱阳性,流式细胞仪不能检测出凋亡峰.结论苦参碱可抑制A549细胞系增殖并诱导其凋亡;相同浓度下氧化苦参碱不能抑制A549细胞系增殖,10倍剂量也未出现细胞凋亡.