一氧化氮及其合成酶与脑创伤性损害

一氧化氮(NO)是一种具有生物活性作用的小分子,它分布于人体多种组织中。NO内源合成的关键酶是一氧化氮合成酶(NOS)。脑损伤能诱导局部神经元和传入到损伤区域的神经元表达NOS,伤口内反应性的星形细胞和相关的胶质细胞聚集并有较高的NOS活性。NO发挥神经毒性作用的中心环节是损伤DNA,使细胞内能量储备耗竭而引起细胞死亡。     

Aβ对原代培养海马神经元NO、NOS和LDH影响及bFGF保护作用

目的　探讨β-淀粉样蛋白 (amyloid-beta protein,Aβ)对原代培养海马神经元一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)和乳酸脱氢酶 (LDH)的影响及碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)的保护作用。方法　通过测定原代培养新生大鼠海马神经元培养液中 NO、NOS及 LDH的含量变化 ,观察 Aβ1 -40对神经元的损伤及 b FGF的保护作用。结果　Aβ1 -40作用于海马神经元 2 4h后 ,培养上清液中 NO、NOS含量增加 ,LDH活性升高 ,与对照组比较差异有显著性 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1 )。经 b FGF预处理的海马神经元暴露于 Aβ1 -40 2 4h后 ,NO、NOS含量及 LDH活性均降低 ,且与损伤组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　 b FGF对 Aβ诱导海马神经元损伤具有一定的保护作用。     

神经节苷脂GM1对大鼠脑液压伤后行为和记忆的影响

目的:探讨大鼠脑液压伤后GM1与学习记忆、脑内一氧化氮、突触素和细胞凋亡的关系.方法:液压损伤法建立大鼠脑损伤模型,随机分为治疗组、损伤组和对照组.观察伤后学习记忆改变,检测一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、突触素和海马、皮质及基底节区细胞凋亡指数.结果:治疗组学习记忆成绩高于损伤组,NOS、NO明显降低,治疗组海马CA1区突触素显著增多,皮质、海马和基底节的凋亡细胞数明显减少.结论:GM1能减少海马和皮质细胞凋亡,可能有利于促进脑损伤后神经行为和记忆的恢复.     

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻一氧化氮介导的谷氨酸神经毒作用

研究垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)是否通过作用于一氧化氮(NO)代谢途径,减轻谷氨酸的神经毒作用.取新生SD大鼠海马,用B27无血清培养基培养神经元;重氮化反应法测定NO浓度,MTT法测定神经元存活率,PACAP能减少谷氨酸引起的海马神经元死亡;谷氨酸呈剂量依赖性地增加海马神经元培养液中NO的含量,PACAP能不同程度地减少NO的含量;分别给予2 mmol/L L-Arg,100 靘ol/L SNP和 200 靘ol/L SNAP处理后,海马神经元存活率明显下降,给予不同浓度的PACAP (10-9,10－11,10-13 mol/L)能增加神经元的存活率.上述结果提示,PACAP通过抑制NO释放及其神经毒作用,减轻谷氨酸引起的海马神经元损害.     

神经节苷脂GMl对大鼠脑液压伤后行为和记忆的影响

目的探讨大鼠脑液压伤后GM1与学习记忆、脑内一氧化氮、突触素和细胞凋亡的关系.方法液压损伤法建立大鼠脑损伤模型,随机分为治疗组、损伤组和对照组.观察伤后学习记忆改变,检测一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、突触素和海马、皮质及基底节区细胞凋亡指数.结果治疗组学习记忆成绩高于损伤组,NOS、NO明显降低,治疗组海马CA1区突触素显著增多,皮质、海马和基底节的凋亡细胞数明显减少.结论GM1能减少海马和皮质细胞凋亡,可能有利于促进脑损伤后神经行为和记忆的恢复.     

脑缺血后脑组织NO含量和NOS活性变化及三七总皂甙的影响

为了探讨一氧化氮 (NO)在缺血神经元坏死中的作用机制及三七总皂甙 (PNS)是否通过影响NO的变化而起脑保护作用。　　方法　用栓线法建立大鼠局灶性脑缺血模型 ,测定脑缺血后不同时间脑组织NO含量和一氧化氮合成酶 (NOS)活性变化及PNS对其的影响。　　结果　缺血后 3 0分钟脑组织NO含量和NOS活性均显著升高 (P <0 0 1 ) ,而PNS能防止脑缺血后两者的升高。NO含量与NOS活性呈显著正相关。　　结论　NO在缺血神经元损伤中起重要作用 ,PNS是通过降低NO的含量而起保护脑组织作用     

FK506在颅脑损伤中作用的实验研究

目的 研究创伤性脑损伤(TBI)后，FK506对血浆一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、脑组织炎症介质、自由基生成、兴奋性氨基酸(EAAs)水平的影响。方法 雄性SD大鼠采用液压损伤法制备脑损伤模型，随机分为损伤组、治疗组和对照组。治疗组于伤后5min开始，一次性腹腔注射FK506(3mg/kg)。伤后30min、6h、24h测量血浆NO、NOS和伤灶及周围脑组织的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)、兴奋性氨基酸(EAAs)水平。结果 与损伤组相比，治疗组中NOS活性和NO水平显著降低，IL-6、TNFα完全被清除，SOD损耗减少，MPO活性减低，伤后30min组EAAs释放明显减少。结论 FK506能抑制伤后NO升高，减少EAAs释放，清除炎症介质，减少自由基生成，对减轻TBI后继发性脑损伤有较大应用价值。     

氯通道在一氧化氮诱导离体大鼠海马神经元凋亡中的作用

目的 观察氯通道阻断剂SITS和DIDS对NO诱导的大鼠离体海马神经元凋亡的效应,探讨氯通道在缺血性脑损伤中的作用。方法 离体培养12天的SD大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、NO处理组、NO处理后使用氯通道阻断剂组,对各组神经元分别在相应的时间点进行Hoechst荧光染色观察凋亡细胞数和MTT实验定量检测神经元的存活率,western blot 分析凋亡信号分子caspase-3的变化。结果 SITS和DIDS呈剂量依赖性地抑制NO诱导的神经元损伤,并能抑制损伤所引起的caspase-3的激活,提高神经元的存活率。结论 氯通道阻断剂对NO诱导的大鼠海马神经元凋亡有一定的保护作用。     

一氧化氮合酶及其抑制剂与脑缺血

一氧化氮合酶(NOS)在脑缺血中具有双重作用,nNOS介导缺血早期神经元损伤,iNOS介导缺血晚期神经元损伤,eNOS则介导神经保护作用。对NOS抑制剂,尤其是选择性nNOS和iNOS抑制剂的研究,无疑将为缺血性脑损伤的治疗提供新途径。     

内皮型一氧化氮合酶与蛛网膜下腔出血的研究进展

内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的产物一氧化氮,具有舒张血管和抑制炎症细胞的浸润等生理作用。蛛网膜下腔出血后,内皮型一氧化氮合酶表达下调、功能紊乱、一氧化氮(NO)消耗加剧,修复e NOS并促进其磷酸化有助于抑制细胞凋亡,促进血管新生,减轻血管痉挛,从而达到防治蛛网膜下腔出血后早期脑损伤和减轻脑血管痉挛的作用。     

丁基苯酞对慢性脑缺血大鼠海马区NO表达的影响

目的研究丁基苯肽对慢性脑缺血大鼠海马区一氧化氮（NO）表达的影响。方法 80只大鼠随机分为假手术组、模型组、预处理组、处理组。根据硝酸还原酶法和β-NADPH组织化学染色法,又将每个小组分为两个亚组。模型组、预处理组和处理组利用双侧颈总动脉永久结扎术制备动物模型,假手术组不结扎双侧颈总动脉。预处理组在造模前及造模后均给予丁基苯酞,处理组在造模后给予丁基苯酞,假手术组和模型组在造模后给予同等剂量的生理盐水,4组分别在造模后1个月处死大鼠取材。用硝酸还原酶特异性还原NO产物的方法测定大鼠前脑缺血模型中海马NO释放量的异常变化。β-NAD-PH组织化学染色显示一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元,光镜下观察。结果模型组、预处理组及处理组海马区NO、NOS阳性神经元数目与假手术组相比均有明显增加。与模型组相比,预处理组和处理组海马区NO、NOS阳性神经元数目减少。与处理组相比,预处理组海马区NO、NOS阳性神经元数目减少更明显。结论慢性脑缺血缺氧能使大鼠海马区NO含量明显增加,丁基苯肽（NBP）能减轻这种变化。     

二硫化碳对大鼠海马一氧化氮合酶活力和基因表达的影响

目的:探讨二硫化碳(CS2)对大鼠海马一氧化氮合酶(NOS)活力和基因表达的影响。方法:以吸入染毒法制作不同浓度CS2中毒大鼠模型:染毒2个月后,用Morris水迷宫法检测实验大鼠的学习记忆功能;以NOS测定试剂盒测定大鼠海马NOS活力;以半定量逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定神经元型一氧化氮合酶(nNOS)mRNA 含量的变化。结果:Morris水迷宫测试显示染毒后大鼠平均逃逸潜伏期较对照组延长,差异有显著性;各CS2染毒组大鼠海马NOS活性降低,与对照组比较差异有显著性,随CS2浓度的增加NOS活性降低,各染毒组间比较差异有显著性差异;染毒后海马nNOS mRNA含量比对照组显著减少,与CS2浓度呈剂量依赖关系,差异有显著性意义。结论:CS2致大鼠海马NOS活力降低及nNOS mRNA含量减少可能是CS2干扰学习记忆功能的机制之一。     

大鼠实验性脑损伤血浆中NO及NOS的动态变化研究

目的 测定实验性脑损伤后血浆中一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性,研究其与脑水肿之间的关系.方法 大鼠随机分组,用硝酸还原酶法测定血清中NO含量、NOS活性,及测定脑组织含水量.并行还原型辅酶Ⅱ依赖性黄递酶(NADPⅡ-d)组化染色检测皮层及脑底NOS阳性细胞.结果 (1)TBI后血浆内NO含量、NOS活力即有升高,与对照组比较有明显差异(P＜0.05).(2)脑组织含水量在外伤后升高,与对照组比较有明显差异(P＜0.05).与血浆中NO含量、NOS活力变化趋势一致.(3) NADPⅡ-d组化染色显示TBI皮层NOS阳性细胞明显多于正常对照组,伤灶脑底也出现了染色块及浓染的细胞群与阳性纤维束.结论 大鼠TBI后NO含量、NOS活性的升高,与脑水肿的发生有关.     

脑室内注射乙酰胆碱受体抗体IgG对大鼠神经元凋亡及一氧化氮合酶表达的影响

目的研究乙酰胆碱受体抗体(AchRab)对大鼠脑内神经元的损害及一氧化氮合酶(NOS)在损害中所起的作用，探讨重症肌无力(MG)中枢神经系统损害的机制。方法将AchRab IgG或健康人的IgG注入大鼠侧脑室。HE染色、TUNEL法检测细胞凋亡；免疫组化方法观察大鼠皮质、海马及杏仁核神经元型一氧化氮合酶(nNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达变化。结果2周后实验组皮质、海马及杏仁核凋亡细胞明显增多，对照组仅见少量凋亡。实验组皮质、海马及杏仁核nNOS神经元数目明显减少。实验组及对照组脑内细胞均来见iNOS表达。结论AchRab脑内注射可诱导神经元凋亡；损伤皮质。海马及杏仁核nNOS神经元；但未能诱导脑内细胞iNOS表达。神经元凋亡损害参与了AchRab对中枢神经损害的机制；nNOS神经元的减少，可能与MG认知功能障碍有密切关系；而神经元的损伤可能与NO的毒性作用无关。     

天舒胶囊对偏头痛动物模型血浆一氧化氮、一氧化氮合酶、降钙素基因相关肽含量及血流动力学的影响

目的 研究天舒胶囊对偏头痛动物模型血浆及脑组织血管活性物质及血流动力学的影响.方法 皮下注射硝酸甘油分别制作大鼠和兔偏头痛模型.给予天舒胶囊后用放免法和分光光度法测大鼠血浆一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)、降钙素基因相关肽(CGRP)含量;通过免疫组织化学染色观察三叉神经脊束核神经元型NOS(NOS1)和CGRP表达;用经颅多普勒检测兔颈内动脉血流速度改变.结果 模型组大鼠血浆NO、NOS和CGRP较对照组明显升高;经不同剂量天舒胶囊灌胃后大鼠血浆NO、NOS和CGRP的增加受到抑制,尤以中、高剂量组明显(P<0.05～0.01).模型组兔颈内动脉收缩期峰值流速明显下降,经中剂量天舒胶囊干预后流速下降也受到抑制 (P<0.05).免疫组织化学染色发现灌胃天舒胶囊后,偏头痛大鼠三叉神经脊束核NOS1和CGRP表达增加的程度减小(均P<0.05).结论 天舒胶囊可改善偏头痛发作时血管活性物质和神经递质水平失常,从而缓解偏头痛症状.     

戊四唑致癫痫大鼠脑组织NO和MDA含量及其相关性研究

目的探讨一氧化氮(NO)在戊四唑诱导癫痫中的作用机制.方法用戊四唑建立大鼠癫痫模型,测定癫痫发作后和对照组大鼠大脑皮质、海马中NO、丙二醛(MDA)含量及NO合酶(NOS)活性.结果癫痫发作后大脑皮质、海马中NO、MDA含量及NOS活性较对照组显著升高(P<0.05或P<0.01);NO与MDA、NO与NOS之间呈显著正相关(两者均P<0.01).结论 NO通过增强脂质过氧化反应在癫痫发作中发挥重要作用.     

卡托普利上调缺血性脑卒中患者血小板一氧化氮合酶的实验和临床研究

目的　研究卡托普利对缺血性脑卒中患者血小板一氧化氮合酶 (NOS)的上调及临床应用。方法　测定急性缺血性脑卒中患者及健康体检者的血小板NOS及在体外加氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)、卡托普利后血小板NOS的活性 ;检测患者服卡托普利前、服后 1个月及 3个月的血浆oxLDL、NOS、一氧化氮 (NO) ,血小板NOS、NO ,同时检查神经功能。结果　 (1)卒中组和对照组血小板加oxLDL后 ,NOS值均明显下降 (P <0 .0 1) ,卒中组下降更明显 ;(2 )两组血小板同时加卡托普利、oxLDL后 ,NOS值均明显升高 (P <0 .0 1) ,卒中组升高更明显 ;(3)两组血小板单纯加卡托普利后 ,其NOS值均明显升高 (P <0 .0 1) ,同样亦是卒中组升高更明显 ;(4 ) 4 0例缺血性脑卒中患者服用卡托普利后血浆oxLDL明显下降 ,血小板NOS、NO ,血浆NOS、NO明显增高 ,神经功能明显改善。结论　卡托普利有直接上调血小板NOS的作用 ,卡托普利通过提高血小板NOS活性的作用 ,可以改善内皮功能 ,防治脑卒中     

Preso调控nNOS在神经元机械性损伤中的作用

目的通过建立神经元机械性损伤模型,研究突触后致密物质(PSD)支架蛋白中的树突棘突触后致密物质-95(PSD-95)相互作用调节蛋白(Preso)在创伤性脑损伤中的作用及调控机制。方法建立神经元机械性损伤模型,通过细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)检测神经元损伤程度,并通过Western blot检测明确Preso在损伤后的表达变化;利用Preso慢病毒过表达载体上调Preso在神经元中的表达,通过细胞活力和LDH检测明确上调Preso在神经元损伤中的作用;利用神经元特异性一氧化氮合酶(nNOS)特异性抑制剂ARL 17477,通过细胞活力和LDH检测明确抑制nNOS对上调Preso调控神经元损伤的影响。结果神经元机械性损伤后,Preso表达无明显改变,而上调Preso表达可加重神经元损伤;利用nNOS特异性抑制剂ARL 17477可显著改善神经元损伤,并抑制上调Preso表达对神经元损伤的影响。结论神经元机械性损伤后,Preso可促进神经元损伤的形成,而nNOS是其重要的下游效应分子。     

疏血通对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其对NO、NOS含量的影响

目的　探讨疏血通对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法　 4 8只成年雄性沙土鼠随机分成假手术组、缺血再灌注组和治疗组 ,阻断双侧颈总动脉 7分钟后血液复流 ,制成沙土鼠脑缺血再灌注模型。每组随机取 8只沙土鼠于再灌注后 2 4小时处死 ,分离出海马区及额顶部脑组织 ,作脑组织匀浆。测定脑组织匀浆中的NO、NOS含量 ,同时对再灌注后 12小时、3天、7天海马区的病理学改变进行观察。然后比较假手术组、缺血再灌注组和治疗组上述指标的变化。结果　缺血再灌注后 12小时治疗组较缺血再灌注组海马CA1区神经元变性、坏死程度明显减轻 ,随再灌注时间的推移两组变性、坏死及形态不规则的神经元均逐渐增多 ;超微结构显示治疗组细胞器、细胞核及细胞内膜系统的损伤性改变较缺血再灌注组明显减轻。治疗组NO、NOS含量则明显低于缺血再灌注组 (P <0 .0 5 ) ,而缺血再灌注组NO、NOS含量明显高于假手术组 (P <0 .0 5 ) ;治疗组与假手术组NO、NOS含量差别无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　疏血通可能通过抑制NO合成来对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。     

一氧化氮合酶抑制剂对脊髓损伤后运动功能的影响

目的观察诱导型和神经型一氧化氮合酶(iNOS,nNOS)抑制剂对大鼠脊髓损伤(SCI)后运动功能的影响和机理。方法大鼠脊髓压迫伤后分别给予iNOS和nNOS抑制剂—氨基胍(AG)和7-硝基吲唑(7-NI)进行治疗,24h后用分光光度法测定组织中一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性,72h后用流式细胞仪检测神经细胞凋亡情况,4周后用电生理和动物行为学等指标评价运动功能的恢复情况。结果AG和7-NI均可以抑制组织中的NO含量,并使NOS活性下降,同时降低神经细胞的凋亡比率,对运动功能的恢复前者优于后者。结论脊髓损伤后应用NOS抑制剂可以使伤后运动功能得到改善,AG的作用似乎更明显,提示iNOS活性变化可能对脊髓损伤的恢复更具决定作用。