补肾活血汤含药血清对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

【目的】探讨补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外成骨细胞分化的能力。【方法】用不同浓度的补肾活血汤含药血清干预BMSCs,7d后应用4-硝基苯基磷酸二钠盐（PNPP）偶氮法测定碱性磷酸酶（ALP）活性,21d后行茜素红染色（ARS）观察钙盐沉积情况判定成骨能力,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测Runx相关转录因子2（Runx2）、骨钙素（OCN）、骨桥蛋白（OPN）的基因表达以评估成骨能力。【结果】与空白血清组比较,补肾活血汤低、中、高剂量血清组BMSCs的ALP活性、茜素红染色面积及Runx2、OCN、OPN基因表达水平均升高（P<0.05或P<0.01）。【结论】补肾活血汤可促进BMSCs向成骨细胞分化,其机制可能与上调Runx-2、OCN、OPN表达有关。     

补肾活血中药对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的观察补肾活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞培养体系;收集补肾活血中药的含药血清,用10%含药血清代替10%的血清,绘制生长曲线,观察补肾活血中药含药血清促进骨髓间充质干细胞体外增殖的作用。结果所培养的大鼠骨髓细胞在表型表达和细胞形态上具备MSC特征,补肾活血中药含药血清组增长速度比空白对照组明显加快,并与剂量呈正比。结论补肾活血中药含药血清能促进干细胞在体外增殖。     

左归丸对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察不同浓度左归丸水提液对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响。方法:应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,并传代扩增,采用倒置显微镜进行细胞形态学观察,免疫组化检测细胞表面抗原鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度左归丸干预组,采用MTT比色法观察不同浓度左归丸水提液干预后BMSCs增殖的情况。结果:采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态以长梭形为主,呈集落样生长。体外培养的BMSCs免疫组织化学鉴定显示CD44,CD29呈阳性表达,CD34呈阴性表达。MTT检测结果显示,与空白对照组相比,相当于生药质量浓度2.5～4 g·L-1的左归丸水提液干预24 h后,干预组吸光度均明显增高(P<0.01),而与其他浓度相比1 g·L-1时左归丸水提液促进BMSCs增殖的作用最强。结论:所培养的大鼠骨髓基质细胞在细胞表型表达和细胞形态上具备BMSC特征。左归丸水提液在一定浓度范围内可以提高BMSCs的体外增殖能力。     

地龙提取物对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:探讨地龙提取物对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响。方法:全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,用流式细胞术鉴定P3代BMSCs。将地龙配制成终浓度为500、50、5、0.5 mg/m L的提取物溶液作为药物干预组,以0 mg/m L组为空白对照组,CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况。通过比较OD值判断地龙提取物对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响,比较增殖率。结果:全骨髓贴壁法培养的P3代BMSCs表现为集落生长,经流式细胞术检测,CD90呈阳性表达,CD45呈阴性表达;CCK-8法检测结果为,剂量为0.5-50 mg/m L的药物干预组OD值较对照组显著升高;地龙浓度为5 mg/m L组OD值出现最大值,继续提高浓度OD值逐渐减小,当提取物浓度达到500 mg/m L时表现为细胞生长受到抑制。结论:培养的骨髓基质细胞在形态和表型上具备BMSCs的特性。地龙提取物在一定浓度范围内能促进BMSCs增殖。浓度为5mg/m L时促进BMSCs增殖作用最为明显,浓度为500 mg/m L时会抑制BMSCs的增殖。     

补肾中药诱导骨髓间充质干细胞增殖分化防治骨质疏松的研究进展

骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是干细胞研究领域的热点。BMSCs增殖分化成成骨细胞与中医"肾藏精"理论有一定联系,应用补肾中药干预BMSCs增殖分化防治OP具有良好研究的前景。从中医"肾藏精"理论与BMSCs的关系以及补肾中药(单味中药与单体,中药复方)两个方面,对近年来补肾中药诱导BMSCs增殖分化防治OP的研究进展进行了综述。     

菟丝子含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖的效应及机制

目的:探讨菟丝子含药血清体外对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及机制研究。方法:分离、培养大鼠MSCs,菟丝子含药血清诱导培养MSCs 72h后,MTT法检测大鼠MSCs增殖情况;RT-PCR检测增殖过程中MSCs不同细胞因子mRNA的表达;Real-time PCR检测骨形态蛋白-2(BMP-2)mRNA表达;Western-blot检测BMP-2蛋白表达。结果:10%菟丝子含药血清具有显著促进MSCs增殖的作用(P<0.05),并显著促进BMP-2 mRNA的表达(P<0.05)。结论:10%菟丝子含药血清促进MSCs增殖的作用,可能与其促进BMP-2 mRNA表达有关。     

肾气丸对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的：观察不同浓度肾气丸水提液对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖的影响。方法：应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,传代扩增,倒置显微镜进行细胞形态学观察,免疫组化法检测细胞表面抗原鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度肾气丸水提液干预组,采用MTT比色法观察其增殖情况。结果：采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态呈长梭形,呈集落样生长,免疫细胞化学鉴定,CD44、CD29阳性,CD34阴性。MTT检测结果显示,与空白对照组相比,肾气丸水提液干预24h后,4、2、1、0.5mg/ml浓度肾气丸干预组吸光度值均增高（P〈0.05）,其中2mg/mL肾气丸干预组增高明显;0.25mg/mL浓度肾气丸水提液干预组吸光度与空白组相比无差异（P〉0.05）。结论：本实验采用全骨髓贴壁法培养的骨髓基质细胞符合BMSCs的生物特性,可以用于BMSCs相关研究。在一定浓度范围内,肾气丸水提液可以提高BMSCs的体外增殖能力。     

肉桂酸对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及分化的影响

目的研究肉桂酸(CINN)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和向成骨细胞分化的影响。方法实验分为CINN组和对照组。CINN组采用CINN处理BMSCs,对照组细胞培养基不加任何药物处理。显微镜观察细胞形态变化,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,茜素红染色观察BMSCs向成骨细胞的分化能力,RT-PCR及放免方法检测骨钙素(BGP)的表达。结果与对照组比较,CINN组BMSCs增殖能力显著下降,细胞周期出现向G0/G1期移行的特征性动力学改变。CINN作用14 d后钙化结节形成,且骨钙素的表达明显升高。结论肉桂酸可抑制大鼠BMSCs增殖,促进其向成骨细胞分化。     

中药促骨髓间充质干细胞增殖的研究概况

骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有广泛的临床应用前景,是当前生命科学研究的主要领域之一。结合中医理论,从补气药、补血药、滋阴药、补阳药、补肾药、活血药等方面对近3年来中药促BMSCs增殖的研究进行整理归类,为今后相关研究的开展提供参考。参考文献39篇。     

健脾补肾、清肠化湿方对骨髓间充质干细胞增殖迁移的影响

目的观察健脾补肾、清肠化湿方对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖迁移的影响。方法贴壁筛选法体外分离培养BMSCs,制备细胞悬液,空白对照组不予任何药物干预,健脾补肾、清肠化湿方低、中、高剂量组(简称复方低、中、高剂量组)分别加入含有0.39、0.78、1.56μg/mL复方共同孵育。采用CCK-8法检测BMSCs增殖能力;采用Transwell法检测BMSCs迁移趋化能力。另设复方各剂量组联合细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)激酶抑制剂U0126作为对照,采用Western blot法检测ERK和环磷腺苷效应元件结合蛋白(CAMP responsive element-binding protein,CREB)蛋白磷酸化水平。结果与空白对照组比较,复方低、中、高剂量组均能促进BMSCs增殖和BMSCs迁移数目增多(P0.05),且复方中、高剂量组促BMSCs增殖作用优于复方低剂量组(P0.05)。与空白对照组比较,复方各剂量组ERK和CREB蛋白磷酸化水平升高(P0.05),且能被U0126抑制(P0.01);与复方低剂量组比较,复方中、高剂量组ERK磷酸化水平升高(P0.05)。结论健脾补肾、清肠化湿方能促进BMSCs的增殖迁移,其机制可能与ERK/CREB信号通路有关。     

补肾活血汤提取物促进大鼠骨髓间充质干细胞体外迁移及CXCR4表达的研究

目的筛选补肾活血汤促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外迁移的活性部位并研究其对CXCR4蛋白表达的影响。方法补肾活血汤采用索氏提取法,得到石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇及水提物4个部位。全骨髓贴壁培养法培养BMSCs,取第三代(P3)BMSCs进行实验。补肾活血汤4个部位按照10,50,100μg·mL~(-1)浓度梯度对BMSCs进行Transwell实验,筛选出有效部位。使用Western blot和细胞免疫荧光检测补肾活血汤有效部位对CXCR4蛋白表达的影响。结果 Transwell结果显示,补肾活血汤石油醚部位具有明显促进大鼠BMSCs体外迁移的作用,以100μg·mL~(-1)浓度最佳(P0.05)。Western blot、细胞免疫荧光结果显示,补肾活血汤石油醚部位呈浓度依赖性上调大鼠BMSCs的CXCR4蛋白表达(P0.05)。结论补肾活血汤促进大鼠BMSCs体外迁移的有效部位为石油醚部位,其相关机制可能与上调CXCR4蛋白表达,激活SDF-1/CXCR4信号轴有关。     

补肾化痰法影响骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究

目的:研究补肾化痰法对BMSCs成骨分化的影响,探讨补肾化痰法治疗骨质疏松症的可能作用机制。方法:运用全骨髓贴壁法分离培养纯化Wsitar大鼠BMSCs,诱导BMSCs成骨分化,观察补肾中药、化痰中药和补肾化痰中药分别对BMSCs成骨分化后茜素红染色及定量、碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)mRNA表达影响。结果:补肾化痰中药能促进BMSCs成骨诱导后细胞体外钙化,提高细胞内ALP活性,上调OCN-mRNA表达。结论:补肾化痰法可以促进BMSCs向成骨细胞分化。     

不同浓度川芎嗪对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的观察不同浓度川芎嗪对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法取SD大鼠,无菌条件下收集股骨、胫骨骨髓内的细胞进行体外培养,选第3代细胞用于实验。川芎嗪培养液选用9个不同的浓度进行干预实验。骨髓间充质干细胞分别在不同浓度的川芎嗪培养液中培养24h后,倒置显微镜下观察细胞形态,采用MTT比色法检测骨髓间充质干细胞增殖的情况。结果在低浓度范围内,川芎嗪对细胞的增殖作用具有浓度依赖性,浓度越高越明显,但到达一定浓度后,随着川芎嗪浓度进一步增加,对细胞的增殖反而有抑制作用。0.08mmol/L的川芎嗪对骨髓间充质干细胞的增殖作用最强。结论川芎嗪对体外培养的骨髓间充质干细胞的增殖作用与剂量有关。     

中药对骨髓间充质干细胞增殖分化影响的研究进展

骨髓间充质干细胞（marrow stromal stem cells，MSCs）具有的多向分化潜能和自我更新能力使其成为未来再生医学的重要种子细胞，并成为研究人类早期胚层特化和器官形成、药物筛选以及基因治疗的最佳工具。随着现代研究在中医药领域的不断渗透和深入，中药在诱导MSCs增殖分化水方面有不少突破。目前，这些研究主要集中在单味中药、中药复方其相应提取物对MSCs的直接及间接干预上。本文针对中药对骨髓间充质干细胞的增殖分化的研究进展进行综述。     

补肾活血汤对大鼠骨髓间充质干细胞体外成骨分化影响的研究

目的 研究补肾活血汤对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外成骨分化的影响,并探讨Wnt/β-catenin信号通路在其中的调控作用。方法 将20只6周龄SD大鼠随机分为对照组和补肾活血汤组,分别给予生理盐水和补肾活血汤灌胃7 d后取血制备空白血清和含药血清。采用全骨髓培养法获取8周龄SD大鼠BMSCs,传至第3代用于实验研究。流式细胞仪检测BMSCs表型、纯度。实验分为3组：空白对照组细胞加入空白血清培养,补肾活血汤含药血清组细胞加入含药血清培养,经典成骨诱导剂组细胞加入含经典成骨诱导剂的空白血清培养。CCK-8法检测3组细胞干预1～4 d的增殖率,酶标仪检测3组细胞干预14 d后碱性磷酸酶活性,茜素红染色观察3组细胞干预21 d后成骨情况,RT-PCR法检测3组细胞干预21 d后Wnt/β-catenin信号通路相关因子(Wnt3a、β-catenin、CyclinD1、Runx2)mRNA表达情况。结果 第3代BMSCs纯度高。补肾活血方含药血清组干预3 d和4 d的细胞增殖率均明显高于同期空白对照组和经典成骨诱导剂组(P均<0.05);补肾活血方含药血清组和经典成骨诱导剂...     

疏密波促进体外骨髓间充质干细胞增殖的实验研究

目的:探讨疏密波促进骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的最佳波段组合,并从分子生物学水平阐明其可能的作用机制,为疏密波临床治疗提供实验依据.方法:体外分离、培养大鼠MSCs,流式细胞仪进行鉴定,MTT法检测疏密波对MSCs增殖的影响.结果:不同波形组合的疏密波均能不同程度地促进MSCs增殖,以C组为最佳,与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01),但各组组内差异无统计学意义(P＞0.05).结论:疏密波能明显促进MSCs增殖,增殖程度与波形组合有关,以C组的促增殖作用效应最大.     

骨碎补及其有效成分对骨髓间充质干细胞增殖分化影响的研究进展

通过分析近年来研究骨碎补的相关文献，对骨碎补、骨髓间充质干细胞及其有效成分对BMSCs增强分化影响的研究现状进行概括、总结。     

不同补肾法诱导的骨髓间充质干细胞对脑梗死大鼠神经功能恢复的促进作用

目的 探讨不同补肾法诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对脑梗死大鼠神经功能恢复的影响.方法 用线栓法制备大鼠大脑中动脉梗死(MCAO)模型,随机分为假手术组、模型组、单纯BMSCs移植组及左归丸、右归丸、地黄饮子、维甲酸诱导BMSCs移植组.移植后3、7、14d进行大鼠神经功能综合测评,于移植后7、14d处死大鼠,采用TTC染色法测定脑梗死面积,并采用免疫组化方法检测脑组织神经突触素(syn)的表达.结果 与模型组比较,各移植组7、14 d的神经功能评分均显著增高(P＜0.05),脑梗死面积均显著缩小(P＜0.05),syn阳性细胞数均明显增加(P＜0.05).结论 不同补肾法诱导BMSCs能够促进脑梗死大鼠神经功能的恢复,且补阴和阴阳双补方药诱导BMSCs组的作用优于补阳类方药.     

补肾法诱导骨髓间充质干细胞定向成骨分化的研究进展

中医学认为:肾主骨,生髓。骨的生成,发育,强弱,盛衰均与肾有密切关系。众多研究表明补肾法能诱导骨髓间质干细胞定向成骨分化,骨髓间质干细胞是多能细胞,通过诱导可分化成为骨、软骨、脂肪、肌腱,这是用现代科学技术更完善地阐释补肾法的理论依据,对防治骨质疏松症,骨坏死,骨缺损等也有重大价值。