中药靛玉红衍生物E804对肺癌A549细胞增殖、凋亡和分化的影响及其作用机制

目的：探讨不同浓度靛玉红衍生物E804对非小细胞肺癌（NSCLC） A549细胞增殖、凋亡和分化的影响,阐明其可能的作用机制。方法：体外培养A549细胞,分为对照组（0μmol·L-1E804）和不同浓度（2.5、5.0和10.0μmol·L-1） E804组。采用MTT法检测各组细胞增殖率,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力,软琼脂克隆实验观察各组细胞分化及克隆形成能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白和Janus激酶1 (JAK1)/信号转导与转录激因活子3 (STAT3)信号通路相关蛋白表达水平。结果：MTT法,与对照组比较,2.5、 5.0和10.0μmol·L-1E804组细胞增殖率明显降低（P<0.05或P<0.01）,并呈时间和浓度依赖性。细胞划痕和软琼脂克隆法,与对照组比较,2.5、5.0和10.0μmol·L-1E804组细胞迁移距离和克隆形成数减少（P<0.05或P<0.01）。流式细胞术检测,与对照组比较,2.5、5.0和10.0μmol·L-1E804组细胞凋亡率明显升高（P<...     

和厚朴酚对人舌癌CAL-27细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 探讨和厚朴酚（HNK）对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 采用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养CAL-27细胞。并将其分为对照组和3个实验组,实验组分别加入20、40、60 μmol/L的HNK进行处理。用MTT法检测 不同浓度和厚朴酚对CAL-27细胞增殖的影响;划痕实验观察CAL-27细胞迁移能力;Hoechst33342荧光染色法和Annexin VFITC/PI法检测CAL-27细胞凋亡数及凋亡率;Western blot检测CAL-27细胞内p-Pi3k、p-Fak、Fak、MMP2、MMP9、p-Akt、Akt、Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase-3的蛋白表达量。结果 HNK（0、20、40、60 μmol/L）处理24 h后CAL-27细胞增殖、迁移能力减弱;且随HNK浓度增大细胞凋亡数升高,凋亡率分别为（6.53±1.80）%、（15.24±2.06）%、（35.03±2.42）%、（48.13±4.61）%,细胞内p-Pi3k、p-Fak、p-Akt、MMP2、MMP9和Bcl-2蛋白表达量减少而Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量增加（P<0.01）。结论 HNK能抑制CAL-27细胞体外增殖及迁移,同时还能诱导其凋亡,作用机制可能与调控细胞内p-Pi3k、p-Fak、p-Akt、MMP2、MMP9、Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase-3的蛋白表达量有关。     

人脐带间充质干细胞培养上清对米非司酮处理的人子宫内膜基质细胞存活、凋亡和子宫内膜容受性的影响

目的：探讨人脐带间充质干细胞培养上清（hUCMSCs-Sup）对米非司酮（Ms）处理的人子宫内膜基质细胞（hEndoSCs）增殖、凋亡和子宫内膜容受性的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：体外培养hEndoSCs,分为对照组和40、60、80及100μmol·L-1 Ms组,MTT法检测各组细胞存活率。hEndoSCs分为对照组、40μmol·L-1 Ms组和60μmol·L-1 Ms组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平并计算Bcl-2/Bax比值。hUCMSCs-Sup作用后,hEndoSCs分为对照组、Ms组、Ms+hUCMSCs-Sup组和Ms+hUCMSCs-Sup+3-甲基腺嘌呤（3-MA）组,MTT法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ（LC3B-Ⅱ）和微管相关蛋白1轻链3B-Ⅰ（LC3B-Ⅰ）蛋白表达水平并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值,实时荧光定量P...     

丹参酮ⅡA联合三氧化二砷对NB4细胞凋亡的影响

目的 观察丹参酮ⅡA（Tanshinone,TanⅡA）联合三氧化二砷（ATO）对人急性早幼粒细胞白血病细胞株（NB4细胞）凋亡的作用;并通过观察两药联合诱导NB4细胞凋亡时p53、Bcl-2表达的变化,探讨其可能的机制.方法 通过Annexin V FITC/PI荧光染色观察1.0μg·mL-TanⅡA分别联合0.25、0.5、1.0 μmol·L^-1的ATO作用于NB4细胞的形态学变化;流式细胞术Annexin V-FITC/PI法测定各组细胞凋亡率;流式细胞仪检测各组细胞p53、Bcl-2的表达.结果 （1） 1.0μg·mL^-1 TanⅡA分别与0.5、1.0μmol·L^-1的ATO联合作用NB4细胞24、48和72h的凋亡率均较相应单独用药组凋亡率明显增高（P＜0.05）;染色荧光显微镜观察1.0μg·mL^-1TanⅡA联合1.0μmol·L^-1ATO实验组较1.0μmol·L^-1ATO对照组72h时更易见到中晚期凋亡细胞和死亡细胞;（2） 1.0μg·mL^-1 TanⅡA与0.5、1.0 μmol·L^-1的ATO联合作用NB4细胞48h、72h表达p53蛋白的细胞较1.0μmol· L^-1ATO单药组明显增多（P＜0.05）,作用高峰时间为72h; 1.0μg·mL^-1TanⅡA分别与0.25、0.5、1.0 μmol·L-的ATO联合作用NB4细胞24h时,表达Bcl-2蛋白的细胞数较1.0μmol· L^-1 ATO单药组显著下降（P＜0.05）,且与ATO的浓度呈负相关（r=-0.858,P=0.000）.结论 联合1.0μg·mL^-1 TanⅡA可增强0.5、1.0μmol·L^-1ATO诱导NB4细胞凋亡;TanⅡA联合ATO诱导NB4细胞p53表达增强和Bcl-2表达减少可能是其促凋亡机制之一.     

EZH2抑制剂GSK126对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨zeste基因增强子同源物2（EZH2）特异性抑制剂GSK2816126（GSK126）对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,阐明其可能机制。方法：常规体外培养A549细胞,将细胞分为对照组和不同浓度（1.0、2.5、5.0、10.0和15.0μmol·L^-1） GSK126组。MTT比色法检测各组细胞存活率,克隆形成实验检测各组细胞集落形成数并计算克隆形成率,EdU细胞增殖成像法检测各组细胞增殖率,Hoechst-33342荧光染色法观察各组细胞凋亡形态表现,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）、B细胞淋巴瘤-2原癌基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）和活化型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（Cleaved-Caspase-3）蛋白表达水平。结果：MTT比色法,与对照组比较,随着GSK126浓度升高,不同浓度GSK126组细胞存活率明显降低（P<0.05）;克隆形成实验,与对照组比较,随着GSK126浓度升高,不同浓度GSK126组克隆形成率逐渐降低（P<0.05）;EdU成像,与对照组比较,随着GSK126浓度升高,不同浓度GSK126组增殖率明显降低（P<0.01）;Hoechst-33342染色,与对照组比较,随着GSK126浓度的升高,5、10和15μmol·L^-1GSK126组凋亡细胞数明显增加;流式细胞术检测,与对照组比较,随着GSK126浓度升高,不同浓度GSK126组细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。Western blotting法,与对照组比较,随着GSK126浓度升高,不同浓度GSK126组细胞中p-AKT和Bcl-2蛋白表达水平逐渐降低（P<0.05）,Bax和Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平逐渐升高（P<0.05）。结论：GSK126可能通过降低AKT磷酸化水平抑制细胞增殖,并且通过诱导Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路活化,激活凋亡途径,促进肺癌细胞凋亡。     

DHA对宫颈癌细胞株凋亡、侵袭和转移的影响

目的探讨多不饱和脂肪酸DHA对宫颈癌细胞（HeLa、Siha）凋亡、迁移侵袭的影响。方法HeLa、Siha细胞,分为空白对照 组、不同浓度DHA组,观察不同药物浓度作用于宫颈癌细胞后的形态学改变,Hoechst 33258染色检测48 h后细胞核凋亡情况; MTT法检测DHA作用于宫颈癌细胞24、48、72 h后的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测不同浓度DHA作用于宫颈癌细胞48 h后 的凋亡率;细胞划痕实验和Transwell 迁移实验检测不同浓度DHA对宫颈癌细胞体外迁移能力的影响;Western Blotting检测 DHA刺激细胞48 h 后凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3）及肿瘤转移侵袭相关蛋白MMP-9、VEGF表达情况。结果 倒置显微镜下及经Hoechst33258染色后,随着DHA浓度增加,宫颈癌细胞形态改变越明显,凋亡小体增多;MTT结果显示DHA 呈时间-浓度依赖性抑制宫颈癌细胞增殖,促进其凋亡;细胞划痕实验和transwell迁移实验提示DHA作用于细胞后,浓度越高, 对细胞的体外迁移能力的抑制作用越强;Western Blotting 显示DHA作用于细胞48 h 后,cleaved-caspase3、Bax蛋白表达增加 （P<0.05）,而Bcl-2、MMP-9、VEGF 蛋白表达下降（P<0.05）,Bcl-2/Bax 比值下降（P<0.05）。结论DHA 可通过调控 cleaved-caspase3、Bax及Bcl-2表达,促进宫颈癌细胞凋亡的作用并能通过降低MMP-9、VEGF的表达抑制宫颈癌细胞的迁移和 侵袭。     

阿托伐他汀对白蛋白诱导的HK-2细胞凋亡的影响及机制初探

目的探讨阿托伐他汀（atorvastatin, ATO）对白蛋白诱导的人肾小管上皮细胞（human renal tubular epithelial cells, HK-2）凋亡的影响,并对其可能作用机制进行初步探讨。方法体外培养HK-2细胞,将培养到85%～90%的HK-2细胞随机分为7组:空白对照组（A组）、白蛋白诱导组(B组:5 mg·mL-1白蛋白)、ATO组(C组:10-8 mol·L-1 ATO)、低浓度ATO+白蛋白诱导组(D组:10-10 mol·L-1 ATO+5 mg·mL-1白蛋白)、中浓度ATO+白蛋白诱导组(E组:10-9 mol·L-1 ATO+5 mg·mL-1白蛋白)、高浓度ATO+白蛋白诱导组(F组:10-8 mol·L-1 ATO+5 mg·mL-1白蛋白)、RhoA/ROCK信号通路阻断剂组(G组:10μmol·L-1 Y27632+5 mg·mL-1白蛋白);予以各实验组细胞干预培养48 h后,流式细胞仪检测各组HK-2细胞的早期凋亡,采用RT-PCR检测各组HK-2细胞RhoAmRNA、ROCK1mRNA的表达。结果空白对照组与ATO组HK-2细胞的早期凋亡、RhoAmRNA、ROCK1mRNA的表达比较差异均无统计学意义（均P>0.05）;不同浓度的ATO+白蛋白诱导组及RhoA/ROCK信号通路阻断剂组HK-2细胞较白蛋白诱导组早期凋亡降低（均P<0.05）,且随着ATO浓度的升高,其抑制HK-2细胞早期凋亡的作用越明显;不同浓度的ATO+白蛋白诱导组HK-2细胞RhoAmRNA、ROCK1 mRNA的表达较白蛋白诱导组减少（均P<0.05）。结论 ATO可抑制白蛋白诱导的HK-2细胞的早期凋亡,其作用机制可能与部分阻断RhoA/ROCK信号通路有关。     

淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

【摘要】 目的 探讨淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法体外培养人肝癌Hep-G2细胞;采用MTT比色法检测淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖的影响;将Hep-G2细胞分为：空白对照（Control)组、低剂量（2.5 μM/L)组、中剂量（5 μM/L)组和高剂量（10 μM/L)组;蛋白质印记检测增殖、凋亡相关蛋白Ki-67、Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达情况;克隆形成实验检测各组肝癌细胞增殖情况;流式细胞仪检测Hep-G2细胞凋亡情况。结果MTT结果显示淫羊藿素对肝癌Hep-G2细胞的IC50为5.38 μM/L;与空白对照组相比,低剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高（均P<0.05）;与低剂量组相比,中剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高（均P<0.05）;与中剂量组相比,高剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高（均P<0.05）。结论淫羊藿素可以抑制肝癌Hep-G2细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达以及增强caspase-3的活性相关。     

橄榄苦苷对HK-2细胞缺糖缺氧损伤的保护作用

目的分析橄榄苦苷对HK-2细胞缺糖缺氧损伤的保护作用并探讨其可能的作用机制。方法实验于2017年1-4月在武汉大学人民医院中心实验室进行,体外培养HK-2细胞,应用无糖无血清培养基和三气培养箱建立缺糖缺氧模型,将细胞分为对照组、单纯缺氧24 h复氧3 h组(IR组)和缺氧24 h复氧3 h加不同浓度(10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)的橄榄苦苷干预组。用CCK-8检测各组细胞的A450值,与对照组比较计算细胞的存活率,Hoechst染色检测各组细胞的凋亡情况,Western Blot法测定B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bcl-2 associate X protein,Bax)的蛋白表达量,结果橄榄苦苷随浓度升高能够提高HK-2细胞在缺糖缺氧环境下的细胞存活率,100μmol/L组存活率最高,但至200μmol/L组存活率呈降低趋势;Hoechst染色显示橄榄苦苷可减少缺糖缺氧损伤引起的细胞凋亡,100μmol/L组凋亡率最低;Western blot结果显示橄榄苦苷能够增加细胞Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达。结论橄榄苦苷对HK-2细胞的缺糖缺氧损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与其抑制细胞凋亡有关。     

纳米氧化铈在阿霉素诱导心脏毒性中的作用及其对P53基因表达的影响

目的 研究纳米氧化铈在阿霉素心脏毒性损伤中的作用及其对P53基因表达的影响,探讨纳米氧化铈对阿霉素心脏毒性损伤的作用机制。方法 培养H9C2心肌细胞,随机分为5组：对照组、模型组（1μmol/L阿霉素）、纳米氧化铈组（10μg/ml纳米氧化铈）、实验组（1μmol/L阿霉素+10μg/ml纳米氧化铈）、阳性对照组（1μmol/L阿霉素+10μmol/L右丙亚胺）。建立阿霉素心脏毒性损伤模型,CCK-8法检测心肌细胞的存活率;生化法检测心肌细胞内乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）的含量;流式细胞仪检测心肌细胞内活性氧（reactive oxygen,ROS）水平及细胞凋亡率;Western blot检测心肌细胞中Bax、Bcl-2及P53蛋白的表达。结果 与对照组相比,模型组的细胞存活率下降,细胞LDH、MDA含量上升,细胞内ROS水平和凋亡率增加,Bax和P53蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量下降,且Bcl-2/Bax比值下降（均P<0.001）;与模型组相比,实验组细胞存活率上升,细胞LDH、MD...     

苦豆碱对膀胱癌EJ细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察苦豆碱对膀胱癌EJ细胞增殖与凋亡的影响并探讨其作用机制。方法 实验分组如下,A组：膀胱癌EJ细胞不作处理;B组：加入苦豆碱浓度25μmol/L;C组：加入苦豆碱浓度50μmol/L;D组：加入苦豆碱浓度100μmol/L。通过CCK8检测各组细胞的存活率,通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率,通过Western blot法检测各组细胞Bcl-2、Bax、p-Erk1/2蛋白的表达水平。结果 CCK8结果显示,B、C、D组较A组细胞存活率降低（P<0.05）;流式细胞术结果显示：B、C、D组较A组细胞凋亡率增加（P<0.05）;Western blot结果显示：B、C、D组较A组Bcl-2、p-Erk1/2表达水平降低（P<0.05）,Bax表达水平增高（P<0.05）。结论 苦豆碱可降低膀胱癌EJ的存活率,诱导其凋亡,其作用机制可能是通过抑制Erk1/2的磷酸化而实现的。     

灵芝酸A对人非小细胞肺癌PC-9细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨灵芝酸A (GAA)对PC-9细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响,并阐明其作用机制。方法：体外培养非小细胞肺癌（NSCLC） PC-9细胞,分为对照组（未加GAA）、低剂量GAA组（0.1 mmol·L-1 GAA）和高剂量GAA组（0.5 mmol·L-1 GAA）。采用噻唑蓝（MTT）法检测各组PC-9细胞增殖率,流式细胞术检测各组PC-9细胞凋亡率,细胞划痕实验检测各组PC-9细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测各组PC-9细胞迁移能力,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组PC-9细胞中血管内皮生长因子（VEGF）和缺氧诱导因子1α (HIF-1α) mRNA及蛋白表达水平。结果：MTT法检测,与对照组比较,处理48和72 h时低剂量GAA组细胞增殖率均降低（P<0.05）,处理24、 48和72 h时高剂量GAA组细胞增殖率均降低（P<0.05）;与低剂量GAA组比较,处理24、48和72 h时高剂量GAA组细胞增殖率均降低（P<0.05）。流式细胞术检测,与对照组和低剂量GAA组比较,高剂量GA...     

基于线粒体凋亡通路探讨防己诺林碱对前列腺癌PC3细胞的生物学行为的影响

目的 基于线粒体凋亡通路探究防己诺林碱（fangchinoline, FAN）对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响。方法 将前列腺癌PC3细胞按照FAN处理浓度分为4组,分别为FAN 0μmol/L组、FAN 5μmol/L组、FAN 10μmol/L组和FAN 20μmol/L组,各组依次采用FAN 0μmol/L (DMSO替代)、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L进行处理,孵育48 h后进行实验。CCK-8法检测PC3细胞增殖,平板克隆法检测PC3细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测PC3细胞凋亡,Transwell实验检测PC3细胞侵袭,划痕实验检测PC3细胞迁移,Western blot检测PC3细胞自噬相关蛋白和线粒体凋亡通路蛋白。结果 与FAN 0μmol/L组相比,FAN 5μmol/L组、FAN 10μmol/L组和FAN 20μmol/L组的PC3细胞增殖能力、克隆形成能力、侵袭和迁移能力明显降低（P<0.001）,凋亡率明显升高（P<0.001）;与FAN 5μmol/L组和FAN 10μmol/L组相比,FAN 20μmol/L组的PC3...     

姜黄素通过下调PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达对胃癌MGC-803细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的：观察姜黄素对胃癌MGC-803细胞体内外增殖和侵袭的作用,探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B (Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的作用机制。方法：胃癌MGC-803细胞分为对照组、低剂量（10μmol·L-1）姜黄素组、中剂量（20μmol·L-1）姜黄素组和高剂量（40μmol·L-1）姜黄素组。采用CCK-8法检测各组MGC-803细胞增殖能力,Transwell法检测各组MGC-803细胞侵袭能力,流式细胞术检测各组MGC-803细胞凋亡率。采用MGC-803细胞建立胃癌移植瘤模型,分别使用低剂量（0.5 mg·kg-1）、中剂量（1.0 mg·kg-1）和高剂量（2.0 mg·kg-1）姜黄素处理小鼠,观察姜黄素对各组小鼠肿瘤生长的抑制作用,TUNEL法检测各组小鼠移植瘤组织中肿瘤细胞的凋亡情况,Western blotting法检测各组小鼠移植瘤组织中PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达水平。结果：与对照组比较,不同剂量姜黄素组细胞增殖能力和侵袭细胞数明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;低剂量姜...     

环状RNA Hsa_circ_0006948对口腔鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨环状RNA Hsa_circ_0006948（circ_0006948）对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞恶性生物学行为的影响。方法 qRT-PCR检测SCC-15、CAL27和HIOEC细胞circ_0006948的表达;将SCC-15细胞分别转染pc-NC、pc-circ_0006948、si-NC、si-circ_0006948,记为pc-NC组、pc-circ_0006948组、si-NC组以及si-circ_0006948组,取正常培养的细胞作为NC组。CCK-8法检测细胞存活率;平板克隆法检测细胞克隆情况;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞E-Cadherin、N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果 与HIOEC细胞相比,CAL27细胞和SCC-15细胞中circ_0006948表达明显升高（P＜0.05）,由于SCC-15细胞中circ_0006948的表达最高,后续使用SCC-15细胞进行后续转染实验。与NC组和pc-NC组相比,pc-circ_0006948组细胞存活率、克隆个数、迁移和侵袭个数以及细胞N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显升高（P＜0.05）,细胞凋亡率以及E-Cadherin蛋白表达明显降低（P＜0.05）;与NC组和si-NC组相比,si-circ_0006948组细胞存活率、克隆个数、迁移和侵袭个数以及细胞N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显降低（P＜0.05）,细胞凋亡率以及E-Cadherin蛋白表达明显升高（P＜0.05）。结论 circ_0006948在OSCC细胞中呈高表达,过表达circ_0006948会促进SCC-15细胞增殖,克隆,迁移,侵袭,并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与调控上皮间充质转化（EMT）有关     

氯通道阻断剂DIDS对过氧化氢诱导PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨氯通道阻断剂DIDS抗PC12细胞凋亡的作用机制。方法:取处于对数生长期的PC12细胞,随机分为对照组、模型组(用400 nmol/L H2O2诱导细胞凋亡)和DIDS组(H2O2+DIDS),培养12 h后,用MTT法测定各组细胞的存活率,Western blot法观察凋亡相关蛋白Caspase-3和Bcl-2蛋白的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:400 nmol/L H2O2可以明显诱导PC12细胞损伤,细胞存活率为(35.07±1.23)%;DIDS组细胞存活率明显高于模型组,且具有一定浓度依赖性(F=640.420,P<0.001)。与对照组比较,模型组细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,DIDS组Caspase-3表达降低,Bcl-2蛋白表达增加,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:DIDS可能通过抑制Caspase-3依赖性凋亡信号通路发挥抗凋亡作用。     

Src 激酶抑制剂PP2对星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨Src激酶抑制剂PP2对大鼠星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法实验分为正常对照组,缺氧/复氧组
（H/R;缺氧8 h/复氧24 h）,PP2 +缺氧/复氧组（PP2+H/R;缺氧前给予10 μmol/L PP2作用24 h）。MTT法检测各组星形胶质细胞
存活率,流式细胞术测定各组星形胶质细胞凋亡率,Western blotting法检测各组星形胶质细胞中Src激酶、Bax及Bcl-2的蛋白
表达。结果MTT检测结果显示H/R 损伤后细胞存活率降低,而在使用PP2预处理后细胞存活率增加（P<0.01）;流式细胞术实
验结果显示H/R 损伤后细胞凋亡增加,而在使用PP2预处理后细胞凋亡显著减少（P<0.01）;Western blotting法检测结果显示H/
R 损伤后Src激酶表达增加,用PP2预处理后Src激酶表达降低。H/R 损伤后凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的比值增加,在用PP2预
处理后Bax/Bcl-2的比值显著降低（P<0.01）。结论PP2可对星形胶质细胞H/R损伤起保护作用,其机制可能与抑制Src激酶的
蛋白表达和激活抗凋亡机制有关。
     

芍药醇对叔丁基过氧化氢损伤的血管内皮细胞的保护作用

目的：探讨芍药醇（PAE）对叔丁基过氧化氢（TBHP）损伤的血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分为对照组（Control组）、造模组（TBHP组）和PAE处理组（各浓度PAE+THBP组）;用CCK8法及乳酸脱氢酶（LDH）检测各组HUVECs细胞增殖抑制情况,Transwell实验检测细胞的迁移能力,流式细胞仪和Cleaved-caspase 3免疫荧光染色检测HUVECs细胞凋亡情况。结果：与Control组比较,TBHP组细胞存活率和细胞迁移数明显降低,细胞凋亡率、LDH释放量和Cleaved-caspase 3蛋白的表达明显升高（均P＜0.05）。与TBHP组比较,PAE处理组细胞的存活率和细胞迁移数均随着给药浓度的增加而逐渐升高,细胞凋亡率、LDH释放量和Cleaved-caspase 3蛋白的表达均随着给药浓度的增加而逐渐下降（均P＜0.05）。结论：PAE通过抑制TBHP诱导的HUVECs细胞存活率降低、LDH释放量升高、细胞凋亡增多、Cleaved-caspase 3蛋白表达的上调,发挥其对TBHP损伤的血管内皮细胞的保护作用,且呈剂量依赖性。     

miR-149-5p靶向FGF5调节人口腔鳞状细胞癌细胞凋亡和上皮-间质转换及微管形成

目的：　探究miR-149-5p对人口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）细胞凋亡、上皮-间质转换（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及微管形成的影响及作用机制。方法：　miR-149-5p mimic（mimic）和pcDNA-FGF5（FGF5）单转或共转CAL-27细胞系,RT-PCR、Western blot检测FGF5表达;双荧光素酶报告实验验证miR-149-5p和FGF5靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Bax/Bcl-2蛋白表达;观察EMT细胞形态转化,Western blot检测CAL-27细胞上皮标记物E-钙黏蛋白（E-cadherin,E-cad）及间质标记物N-钙黏蛋白（N-cadherin,N-cad）表达;成管实验检测CAL-27细胞微管样形成能力,Western blot检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达。结果：　miR-149-5p mimic能明显抑制CAL-27细胞中FGF5的表达（P=0.000）;miR-149-5p mimic能明显减弱FGF5野生质粒的荧光素酶活性（P=0.000）;miR-149-5p mimic可明显上调CAL-27细胞凋亡率及Bax/Bcl-2比值（P=0.000）,并逆转FGF5过表达导致的细胞凋亡率（P=0.014）及Bax/Bcl-2比值上调（P=0.000）。miR-149-5p mimic抑制EMT细胞形态由圆形到纺锤形转变,并逆向转换FGF5过表达导致的间质样细胞形态。miR-149-5p mimic可上调CAL-27细胞中E-cad的表达（P=0.000）、下调N-cad的表达（P=0.000）,逆转FGF5过表达引起的E-cad表达下调（P=0.020）和N-cad表达上调（P=0.000）。miR-149-5p过表达能明显抑制CAL-27细胞微管结节形成（P=0.002）,降低VEGF蛋白表达水平（P=0.000）,逆转过表达FGF5引起的VEGF表达上调（P=0.000）。结论：　miR-149-5p能抑制OSCC细胞的EMT和微管形成能力并促进细胞凋亡,作用机制与靶向抑制FGF5表达有关。     

AG490对食管鳞癌Eca-109细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响

目的研究Janus激酶抑制剂AG490对食管鳞癌Eca-109细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法用不同浓度(0、25、50、100μmol/L)的AG490处理Eca-109细胞,采用MTT法检测细胞增殖,AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞放疗敏感性,Western blot检测各组细胞Stat3、p-Stat3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与对照组比较,AG490各浓度组(25、50、100μmol/L)在AG490作用后第1～5天Eca-109细胞增殖减慢,呈量效-时效关系(P<0.05,P<0.01)。与对照组比较,AG490各浓度组(25、50、100μmol/L)在AG490作用48 h后Eca-109细胞凋亡率增加,呈量效关系(P<0.01)。与对照组比较,各剂量X射线照射后50μmol/L组细胞存活率降低,放射生物学参数SF2、D0、Dq、N值均降低(P<0.05),SERD0和SERDq值增加(P<0.05)。与对照组比较,AG49050μmol/L+4Gy组和AG490 50μmol/L组p-Stat3蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01)。与对照组比较,AG490各浓度(50和100μmol/L)组Bcl-2的表达降低(P<0.05)、Bax的表达增加(P<0.05)。结论 AG490抑制Eca-109细胞增殖,增加细胞凋亡,增加放疗敏感性,其机制可能是通过阻断Stat3蛋白的活化,调控凋亡蛋白(Bcl-2和Bax)的表达。