ABT-737对M2型TAM来源外泌体处理的卵巢癌细胞SKOV3自噬性凋亡与干性特征的影响

目的 探讨Bcl-2小分子抑制剂ABT-737对经肿瘤相关巨噬细胞(TAM)来源外泌体(Exo)处理的卵巢癌细胞自噬性凋亡及干性特征的作用。方法 利用佛波酯(PMA)与重组人白细胞介素-4(IL-4)诱导人外周血单核细胞THP-1为M2型TAM,流式细胞术检测细胞表面巨噬细胞相关标志物表达;差速离心法提取外泌体,透射电镜与纳米粒子追踪技术观察外泌体形态及径粒分布,Western blot检测外泌体标志蛋白表达,Dil结合PKH67染色检测TAM来源外泌体被卵巢癌细胞系SKOV3摄取情况;实验分组为对照组、Exo组、Exo+ABT-737组,采用TAM来源外泌体与ABT-737按照分组处理SKOV3细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率,双荧光mRFP-GFP-LC3实验检测细胞自噬水平,Western blot检测细胞自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、p62)与凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase3)表达,肿瘤细胞成球实验检测细胞干性,Western blot检测肿瘤干细胞相关蛋白(CD133、OCT4、SOX2)表达。结果 经PMA与IL-4...     

肿瘤相关巨噬细胞外泌体调控肝癌细胞生长、转移及衰老的功能

目的 探讨肿瘤相关巨噬细胞外泌体对肝癌细胞生长、转移及衰老的影响及机制。 方法 提取并鉴定M0和M2型巨噬细胞外泌体（M0 exo和M2 exo）,肝癌细胞HepG2和SMMC-7721细胞分为PBS组、M0 exo组和M2 exo组,CCK8法检测各组肝癌细胞的增殖能力,Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力,SA-β-Gal染色检测细胞衰老,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测各组细胞P16、P21、HMGA1的表达水平。〖HTH〗结果 M0 exo和M2 exo均符合外泌体的结构和生物学特征,相较于PBS组,M2 exo组HepG2和SMMC-7721细胞增殖能力显著增加,迁移和侵袭能力显著增加,细胞周期G1期降低,SA-β-Cal染色阳性率显著降低,衰老相关蛋白P16、P21、HMGA1表达显著下调（均P＜0.05）,而M0 exo组上述指标与PBS组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论 M2型巨噬细胞外泌体可诱导肝癌细胞HepG2和SMMC-7721增殖、迁移和侵袭能力的增加,其机制可能为抑制细胞衰老     

内皮祖细胞外泌体抑制紫杉醇诱导的血管内皮细胞焦亡

目的：探索内皮祖细胞外泌体（EPCs-Exo）对紫杉醇诱导的内皮细胞焦亡的影响及其可能机制。方法：培养原代骨髓间充质干细胞（BMSCs）和内皮祖细胞（EPCs）并鉴定。提取BMSCs和EPCs培养液中的外泌体,使用透射电镜观察外泌体形态并检测CD63和CD9的表达鉴定外泌体。分别用BMSCs-Exo和EPCs-Exo干预经紫杉醇诱导的内皮细胞焦亡模型,光镜下观察细胞形态;Western blot检测外泌体标志蛋白CD63、CD9和细胞焦亡相关蛋白NLRP-3、IL-18、GSDMD-N的表达情况;电镜下观察细胞超微结构的变化。基因芯片检测两组外泌体中差异的非编码RNA,RT-qPCR检测lncRNA FGD5-AS1表达情况。结果：大鼠骨髓细胞中分离培养分化出BMSCs和EPCs,免疫荧光法证实BMSCs中CD90 和CD44阳性,EPCs中CD34 和VEGFR2阳性。相比于对照组,紫杉醇组细胞膜被破坏,细胞内线粒体间距离增加,细胞内纤维排列紊乱,细胞中NLRP-3、IL-18、GSDMD-N等细胞焦亡蛋白表达增加（P ＜0.05）;相比于紫杉醇组,紫杉醇+EPCs-Exo组内皮细胞中细胞膜较完整,细胞系损伤较轻,NLRP-3、IL-18、GSDMD-N表达减少（P ＜0.05）;紫杉醇组与紫杉醇+BMSCs-Exo组内皮细胞形态和焦亡蛋白的表达差异无统计学意义。芯片及RT-PCR结果显示相比于BMSCs-Exo,lncRNA FGD5-AS1在EPCs-Exo中表达增加（P ＜0.05）。结论：EPCs外泌体抑制紫杉醇诱导的血管内皮细胞焦亡。     

人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体调控恶性胶质瘤相关巨噬细胞的极化

  目的  探究人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响，并初步探讨其对胶质瘤发生发展的影响。  方法  利用试剂盒提取人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体，通过扫描电镜及Western blot 鉴定外泌体。将胶质瘤细胞分为SHG449:SHG449细胞不做特殊处理；SHG449+M0组:SHG449细胞与M0型巨噬细胞共培养；SHG449+M0+exosome组:SHG449细胞与M0型巨噬细胞共培养后，加入标记有PKH-67的外泌体使其进入M0型巨噬细胞。  结果  （1）人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体成功提取，且进入M0型巨噬细胞；（2）外泌体进入胶质瘤细胞SHG449诱导极化的巨噬细胞后细胞形态转化，且M2型巨噬细胞活化标志物Arginase、CD206以及CCL22，TGF-β表达下降（Arginase:P < 0.01，CD206:P < 0.05， CCL22:P < 0.05，TGF-β:P < 0.01），M1型活化标志物iNOS，CD68以及IL-1β，TNF-α表达上升（iNOS:P < 0.01，CD68:P < 0.01，L-1β:P < 0.000 1，TNF-α:P < 0.001）；（3）被外泌体诱导极化的巨噬细胞导致胶质瘤细胞增殖能力下降（P < 0.05），凋亡能力上升（P < 0.000 1）。  结论  人骨髓间质细胞分泌的外泌体可抑制肿瘤相关巨噬细胞向M2表型转化，并诱导其向M1表型转化，调节肿瘤免疫微环境，从而达到抑癌的作用。     

脂多糖刺激巨噬细胞分泌含miR-155-5p的外泌体促进肝星状细胞的活化及迁移

目的 探索脂多糖（LPS）刺激下的巨噬细胞来源的外泌体对肝星状细胞的激活及迁移能力的影响及分子机制。方法 以100 ng/mL丙二醇甲醚醋酸（PMA）处理人THP-1巨噬细胞24 h,诱导其分化为巨噬细胞,给予脂多糖刺激后收集巨噬细胞的培养上清,运用超速离心法提取外泌体并加以鉴定。荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外泌体中miR-155-5p的表达。采用Transwell共培养体系观察巨噬细胞分泌的外泌体对肝星状细胞LX2增殖、氧化应激、迁移和I型胶原等纤维化标志物表达的影响。同时,LX2转染miR-155-5p-mimics及miR-155-5p-inhibitors分别过表达和干扰miR-155-5p,从正反两方面去验证miR-155-5p对LX2功能的影响。Western blot检测SOCS1以及其下游信号通路蛋白的表达。结果 与对照相比,经脂多糖刺激后巨噬细胞的外泌体处理的LX2细胞增殖迁移能力增强,氧化应激水平和I型胶原等纤维化标志物的表达明显增高（P<0.05）。巨噬细胞经脂多糖处理后分泌的外泌体中miR-155-5p的表达显著增高（P<0.01）。miR-...     

循环外泌体介导的lncRNA HOXA11-AS通过上调SOX4促进血管内皮细胞增殖

目的：探索循环外泌体对内皮细胞增殖能力的影响及其可能机制。方法：收集支架内再狭窄患者（n =199）及对照组患者（n =32）血浆并提取外泌体,用患者血浆外泌体干预经雷帕霉素诱导的内皮细胞增殖抑制模型,MTT法测各组细胞的增殖能力,Western blot检测细胞中PCNA、Ki67的表达情况。基因芯片检测两组外泌体中差异的非编码RNA,qRT-PCR检测lncRNA HOXA11-AS表达情况。结果：与对照组比,雷帕霉素组细胞增殖能力减弱;PCNA、Ki67 表达减少（P ＜0.05）;相比于雷帕霉素组,对照组外泌体干预后内皮细胞增殖能力增强;PCNA、Ki67表达增加（P ＜0.05）。芯片结果显示lncRNA HOXA11-AS在ISR外泌体中表达减少（P ＜0.05）。pHOXA11-AS可以促进内皮细胞的增殖能力,增加细胞中PCNA、Ki67、SOX4的表达（P ＜0.05）。结论：血浆外泌体中的lncRNA HOXA11-AS可能是通过上调内皮细胞中SOX4的表达,增加内皮细胞的增殖能力。     

宫颈癌HeLa细胞外泌体对细胞迁移和侵袭的影响及其Wnt/β-catenin信号通路机制

目的：探讨宫颈癌HeLa细胞外泌体对细胞迁移、侵袭及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响,阐明其外泌体在宫颈癌发生发展过程中的可能作用机制。方法：取对数生长期宫颈癌HeLa细胞,采用超速离心法分离宫颈癌HeLa细胞外泌体,透射电镜下观察外泌体形态表现,Western blotting法检测外泌体标志蛋白CD63和CD81的表达,鉴定分离出来的外泌体。将HeLa细胞分为外泌体组（Exo组）和对照组,2组细胞分别用含和不含HeLa细胞外泌体的培养基培养。共聚焦显微镜下观察HeLa细胞摄取外泌体情况,其中外泌体采用PKH26荧光标记,HeLa细胞用DAPI荧光进行核染色,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验测定细胞迁移能力,Western blotting法检测细胞中Wnt1、β-catenin和T细胞因子4（TCF4）蛋白表达水平。结果：透射电镜下观察,HeLa细胞中分离的外泌体为是圆形或椭圆形、直径为40~100 nm的囊泡状小体,且富含CD63和CD81蛋白。共聚焦显微镜下观察,Exo组HeLa细胞膜表面有外泌体附着,而对照组HeLa细胞膜表面无外泌体附着。Transwell小室实验,Exo组HeLa细胞中侵袭细胞数明显高于对照组（t=17.894,P<0.01）。细胞划痕实验,Exo组HeLa细胞迁移距离明显长于对照组（t=9.689,P<0.01）。Western blotting法检测,与对照组比较,Exo组HeLa细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin和TCF4蛋白表达水平均明显升高（t=13.159,P<0.01;t=15.478,P<0.01;t=7.734,P<0.01）。结论：宫颈癌HeLa细胞来源的外泌体可促进宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与HeLa细胞来源外泌体可促进Wnt/β-catenin信号通路的激活及下游TCF4基因的表达有关。     

负载骨髓干细胞来源外泌体的3D水凝胶通过调节免疫促进损伤软骨的修复

目的 分探究负载骨髓干细胞来源外泌体的GelMA水凝胶对软骨损伤的修复情况。方法 首先利用超速离心法分离提取出骨髓干细胞上清液中的外泌体,并通过外泌体透射电镜、粒径分析以及Western blot检测外泌体表面marker。检测负载外泌体的GelMA水凝胶相关性能（包括流变以及电镜）。通过BCA测蛋白法检测外泌体的释放情况,以及通过PKH26红色荧光染料标记外泌体,观察外泌体被RAW264.7细胞吞噬情况。将RAW264.7细胞种在孔板表面,分为空白对照组（Control组）、单纯外泌体组（Exo组）、单纯水凝胶组（GelMA组）、负载外泌体的水凝胶组（GelMA-Exo组）。通过q-PCR以及免疫荧光检测负载外泌体的GelMA水凝胶对于RAW264.7细胞极化的影响。建立材料/RAW264.7细胞/软骨细胞Transwell共培养模型,上室为软骨细胞,下室为材料/ RAW264.7细胞,分组与上面一致,通过q-PCR以及免疫荧光检测损伤软骨细胞的修复情况。构建大鼠膝关节软骨损伤模型,分为假手术组（Sham组）、单纯损伤组（SI组）、单纯水凝胶组（GelMA组）以及负载外泌体的水凝胶组（GelMA-Exo组）,通过HE和Masson染色检测软骨修复情况。结果 通过对提取的细胞进行多系分化能力的检测,成功获取了骨髓干细胞。通过透射电镜、粒径分析以及Western blot检测,成功分离出骨髓干细胞外泌体。负载外泌体的GelMA水凝胶明显促进RAW264.7细胞向M2型极化（P<0.05）。体外共培养模型表明负载外泌体的GelMA水凝胶能显著促进损伤软骨细胞的修复通过调节RAW264.7细胞由M1型向M2型转化（P<0.05）。HE和Masson染色表明负载骨髓干细胞来源外泌体的GelMA水凝胶明显促进软骨损伤的修复。结论 负载骨髓干细胞来源外泌体的GelMA水凝胶能够通过改善免疫微环境明显促进大鼠软骨损伤的修复。     

肿瘤相关巨噬细胞对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响

目的 研究肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响.方法 采用白细胞介素(IL)- 4体外诱导人M2型巨噬细胞,Western blot检测其标志分子CD68、巨噬细胞甘露糖受体(MMR)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况.Transwell非接触式共培养TAM和SW620细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测TAM分泌的细胞因子IL-10、IL-12、IL-23和转化生长因子-β(TGF-β)水平;活性凝胶电泳迁移分析法(EMSA)检测SW620细胞中核因子-κB(NF-κB)活性;四氮甲唑蓝法(XTT)和荧光激活细胞分选术(FACS)双标记法分别检测培养后SW620细胞的增殖和凋亡情况.结果 IL- 4诱导的人M2型巨噬细胞可表达CD68和MMR,不表达iNOS.SW620与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,培养上清液中M2型巨噬细胞分泌的IL-10和TGF-β水平较培养前明显升高(P均＜0.01),IL-12和IL-23水平与培养前差异无统计学意义(P均＞0.05).与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,SW620的NF-κB DNA结合活性较培养前分别降低了72%和75%(P均＜0.01),细胞增殖活性分别下降了48%和59%(P均＜0.01);凋亡率分别为6.37%和7.68%,明显高于对照组的0.37%(P均＜0.01).结论 TAM可能通过抑制SW620细胞的NF-κB活性,抑制SW620细胞增殖,促进SW620细胞凋亡.     

lncRNA NEAT1在乳腺癌肿瘤相关巨噬细胞中的表达及作用机制

目的 探究长链非编码RNA NEAT1(lncRNA NEAT1)在乳腺癌肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)中的表达,并初步探究其对TAMs极化的调控和功能影响。方法 收集30例自2019年10月至2021年1月于海口市妇幼保健院确诊的乳腺癌患者肿瘤组织样本,葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离乳腺癌组织中的TAMs(TAMs组),同时以健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)做为对照(PBMC组),RT-PCR检测两组巨噬细胞中M2型标记分子精氨酸-1(Arg-1)、CD206和CD163与M1型标记分子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和人类白细胞抗原DR(HLA-DR)的mRNA表达水平。使用LPS和IFN-γ诱导人单核细胞系THP-1和小鼠巨噬细胞Raw264.7分化为M1型,IL-4进行M2型诱导分化。RT-PCR检测lncRNA NEAT1在诱导后M1、M2型巨噬细胞中的表达;在Raw264.7细胞中转染沉默lncRNA NEAT1表达和阴性对照慢病毒(LV-shNEAT1与LV-NC),并使用Transwell共培养体系将转染后的Raw264.7与乳腺癌细胞MCF-7进行共培养,并将...     

子痫前期蜕膜巨噬细胞源性外泌体来源miR-146a-5p通过靶向HIF1α抑制滋养细胞的活力和侵袭能力

目的：探究蜕膜巨噬细胞源性外泌体miR-146a-5p对子痫前期滋养细胞的作用及其分子机制。方法：收集子痫前期（preeclampsia,PE）患者和正常妊娠女性蜕膜组织，使用密度梯度法与流式细胞术分选获得巨噬细胞，提取蜕膜巨噬细胞源性外泌体；为了鉴定外泌体，采用透射电镜观察结构，western blot验证外泌体CD63蛋白表达；采用CCK-8检测外泌体对滋养细胞活力的影响；Transwell实验检测滋养细胞迁移变化；qPCR检测外泌体中miR-146a-5p的表达；western blot检测滋养细胞中HIF1α蛋白表达；双荧光素酶报告基因检测miR-146a-5p与HIF1α是否存在结合位点。结果：巨噬细胞外泌体呈现直径约30～130 nm的中间凹陷“饼状”结构形态，CD63高表达，符合外泌体特征。与正常组相比，PE组蜕膜巨噬细胞源性外泌体显著降低滋养细胞增殖与迁移（P<0.001）。PE组蜕膜巨噬细胞源性外泌体中miR-146a-5p表达量显著下降，蜕膜巨噬细胞源性外泌体处理滋养细胞后滋养细胞中HIF1α蛋白表达显著升高，miR-146a-5p和HIF1α之间存在靶向结合...     

低氧条件下M2型巨噬细胞外泌体对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响及机制

目的 探究低氧条件下M2型巨噬细胞外泌体对卵巢癌细胞生物学功能的影响及机制。方法 人单核细胞系THP1诱导分化为M2型巨噬细胞，提取并且鉴定正常培养条件下M2型巨噬细胞外泌体(N-M2 exo)以及缺氧培养条件下M2型巨噬细胞外泌体(H-M2 exo)。SKOV-3细胞分为PBS组、N-M2 exo组和H-M2 exo组，分别与PBS、10μg/ml的N-M2 exo和H-M2 exo共孵育48 h, CCK-8法检测各组细胞增殖能力，Transwell小室检测各组细胞迁移和侵袭能力，流式细胞术检测各组细胞凋亡水平，Western blot检测各组细胞MEK和ERK的磷酸化水平。结果 相比于PBS组，N-M2 exo组和H-M2 exo组SKOV-3细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均显著增加(P<0.05),细胞凋亡水平显著下降(P<0.001),MEK和ERK的磷酸化水平显著增加(P<0.001)。相比于N-M2 exo组，H-M2 exo组SKOV-3细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均显著增加(P<0.05),细胞凋亡水平显著下降(P<0.001),M...     

lncRNA-MIAT对肿瘤相关巨噬细胞M2型极化的作用及其机制

目的：探讨lncRNA-MIAT对肿瘤相关巨噬细胞M2型极化的作用,并阐明其可能的作用机制。方法：体外培养THP-1细胞,将过表达（LV-MIAT）与下调lncRNA-MIAT表达（LVshMIAT）的慢病毒颗粒及空载体（LV-Vector）转染入THP-1细胞中,将THP-1细胞诱导活化为巨噬细胞,并采用Transwell共培养体系将活化后的巨噬细胞与骨肉瘤（OS） MG63细胞共培养,将上述共培养体系分为MG63+LV-Vector组（阳性对照组）、 MG63+LV-shMIAT组、 MG63+LVMIAT组和IL-4+LV-Vector组。检测各组THP-1细胞中lncRNA-MIAT表达水平,流式细胞术检测各组细胞中M2型巨噬细胞百分率,ELISA法检测各组THP-1细胞上清液中血管内皮生长因子（VEGF）、、白细胞介素4 (IL-10)和转化生长因子β1 (TGF-β1)水平,检测各组HUVEC中血管内皮细胞生长因子受体2 (VEGFR2)、Notch1和δ样蛋白4 (DLL4)表达水平。取各培养体系中的巨噬细胞与人脐静脉内皮血管细胞（HUVEC）共培养,EDU染色法检测各组...     

血管内皮细胞来源外泌体miR-214对H2O2诱导血管内皮细胞损伤的影响

探讨血管内皮细胞来源外泌体miR-214对过氧化氢(H2O2)诱导的血管内皮细胞损伤的影响。方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）,并转染miR-214抑制物（in-miR-214）及其阴性对照（in-miR-NC）,分离并鉴定外泌体,同时检测miR-214表达。再次培养HUVEC,分为正常对照组（Control组）、氧化损伤组（H2O2组）、空白外泌体+氧化损伤组（exo NC+H2O2组）、in-miR-NC外泌体+氧化损伤组（exo in-miR-NC+H2O2组）和in-miR-214外泌体+氧化损伤组（exo in-miR-214+H2O2组）。qRT-PCR检测细胞中miR-214表达水平;MTT和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;Western blot检测细胞增殖、凋亡、迁移相关蛋白水平。结果 成功从HUVEC 细胞中分离出外泌体,且转染in-miR-214可抑制外泌体中miR-214表达（P＜0.05）。H2O2诱导后,HUVEC细胞增殖活力和划痕愈合率降低,凋亡率增高;同时,细胞中miR-214表达水平增高,Cyclin D1、PCNA、Bcl2、MMP2和MMP9蛋白水平降低,Bax蛋白水平增高（P＜0.05）。添加HUVEC外泌体和外泌体来源的in-miR-214可部分削弱H2O2 对HUVEC细胞的损伤,且后者的效果要明显优于前者（P＜0.05）。结论 HUVEC来源外泌体通过低表达miR-214保护HUVEC免受H2O2诱导的细胞损伤     

M2型巨噬细胞外泌体包裹miR-374a促进前列腺癌恶性进展的机制研究

目的：探究M2型巨噬细胞外泌体包裹miR-374a对前列腺癌(prostate cancer, PCa)恶性进展的影响并探讨其分子机制。方法：在成功建立M2型巨噬细胞的基础上，抽提并鉴定其外泌体，检测外泌体中差异表达的miRNA,同时在不同PCa细胞中验证，选取miR-374a进行研究；M2细胞中转染cy3荧光标记的miR-374a与PC3细胞共培养，荧光显微镜观察PC3细胞中cy3荧光表达情况；DU145和PC3细胞中转染miR-374a inhibitor进行增殖、迁移等细胞功能学实验及裸鼠皮下成瘤实验；通过数据库筛选叉头盒转录因子(FOXO1)作为靶基因，通过Western blotting、荧光素酶报告基因实验及免疫荧光实验进行验证；干扰FOXO1后进行细胞功能学实验，观察是否能逆转miR-374a inhibitor对DU145及PC3细胞功能学的影响。结果：成功建立M2细胞并抽提其外泌体，其中miR-374a在M2细胞外泌体中高表达；荧光定量PCR实验结果证明miR-374a在PC3及DU145中表达量显著高于LNCaP,在M2细胞中表达量高于THP-1细胞，PC3细胞与M...     

外泌体lncRNA干扰素诱导GTP酶假基因1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨外泌体长链非编码RNA（lncRNA）干扰素诱导GTP酶假基因1（GVINP1）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法收集2016年10月至2018年2月在湖州师范学院附属第一医院经病理组织学确诊为NSCLC的51例患者外周血51份以及健康体检者45例外周血45份;培养人正常肺上皮细胞（BEAS-2B）和NSCLC细胞（A549、H1299）,收集选择性培养基;提取血浆外泌体,采用电镜和纳米颗粒跟踪分析法进行鉴定;采用RT-PCR法检测GVINP1mRNA表达水平,并分析患者血浆外泌体GVINP1mRNA表达水平与其临床特征之间的关系;利用NSCLC细胞选择性培养基和外泌体处理巨噬细胞（RAW264.7）,采用RT-PCR法检测炎症因子mRNA表达水平。结果在电镜下可见NSCLC患者外周血中含有丰富的外泌体,大小为26.7~136.1nm。NSCLC患者和健康体检者血浆外泌体中存在CD9、CD81和Alix蛋白表达;NSCLC患者血浆外泌体GVINP1mRNA表达水平明显高于健康体检者（P＜0.05）,其中有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期的NSCLC患者血浆外泌体GVINP1mRNA表达水平较低（均P＜0.05）。与人正常肺上皮细胞（BEAS-2B）选择性培养基外泌体比较,NSCLC细胞（A549、H1299）选择性培养基外泌体中GVINP1mRNA表达水平均明显升高（均P＜0.05）。与空白对照组（DMEM培养基）相比,BEAS-2B组和NSCLC细胞组选择性培养基中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA表达水平均明显升高（均P＜0.05）,而NSCLC细胞组中IL-10mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）。与去除外泌体的细胞选择性培养基比较,BEAS-2B和NSCLC细胞选择性培养基外泌体中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA表达水平均明显升高（均P＜0.05）,而NSCLC细胞中IL-10mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）。结论NSCLC可能通过选择性释放携带GVINP1的外泌体进而影响巨噬细胞表型转化,从而促进肿瘤进展,这为NSCLC治疗提供了新的靶点。     

M2巨噬细胞外泌体对高糖高胰岛素条件下小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨M2巨噬细胞外泌体(M2 macrophage exosomes,M2-exo)对高糖高胰岛素条件下小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchyml stem cells,BMSCs)成骨分化及Hedgehog信号通路的影响。方法诱导小鼠巨噬细胞系RAW 264.7向M2极化后,提取并鉴定M2-exo,检测BMSCs对外泌体的摄取内吞。将BMSCs分为正常对照组(Control组,使用不含胰岛素、不含M2-exo,且葡萄糖浓度为5.5 mmol/L成骨诱导培养基)、高糖高胰岛素组(HGI组,使用含25 mmol/L葡萄糖及174 nmol/L胰岛素的成骨诱导培养基)及高糖高胰岛素M2-exo干预组(HGI+M2-exo组,使用与HGI组相同的培养基,并分别添加6、30、60μg/mL的M2-exo),成骨诱导7 d后行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色,成骨诱导14 d后行茜素红染色,评估各组BMSCs成骨分化能力。另取Control组、HGI组、HGI+30μg/mL M2-exo组BMSCs细胞,成骨诱导培养14 d后(qP...     

包虫抗原B通过肿瘤坏死因子受体2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症的改善作用

目的：探讨包虫抗原B (HA-B)对小鼠免疫性血小板减少症(ITP)的改善作用,阐明其相关作用机制。方法：将野生型(WT)和肿瘤坏死因子受体2 (TNFR2)基因敲除(TNFR2^-/-)的C57/B6小鼠分为WT对照组、WT-ITP模型组、WT-HA-B组、TNFR2^-/-对照组、TNFR2^-/-ITP模型组和TNFR2^-/-HA-B组,检测各组小鼠体质量、脏器指数和血常规指标,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血中M2巨噬细胞百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠血清中精氨酸酶1(Arg1)、白细胞介素10 (IL-10)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和白细胞介素6 (IL-6)水平,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中Arg1、IL-10、iNOS和IL-6表达水平。分别将WT对照组和TNFR2^-/-对照组小鼠BMDM诱导为M2巨噬细胞(WT M2组和TNFR2^-/-M2组),加入HA-B...     

经HIV包膜蛋白gp120刺激的T细胞外泌体促进巨噬细胞M2极化

目的：本研究旨在探讨经HIV膜蛋白gp120处理后人T淋巴细胞系（H9）外泌体对巨噬细胞极化的影响。方法：采用CCK8试剂盒检测gp120处理后人T淋巴细胞H9活力；采用ELISA法检测H9细胞上清液中炎症因子水平；通过电镜和Western blot实验鉴定外泌体特征；PHK67染色观察外泌体进入巨噬细胞情况；最后通过ELISA和免疫荧光检测巨噬细胞极化标记物，分析gp120处理后T细胞外泌体对巨噬细胞极化的影响。结果：HIV gp120蛋白抑制人T淋巴细胞H9增殖并促进炎症因子释放。成功提取人T淋巴细胞H9外泌体，电镜下为中间凹陷的膜结构，高表达标记蛋白CD9、CD63、CD81。PHK67染色结果显示H9细胞外泌体可进入巨噬细胞。经gp120处理的H9细胞外泌体可促进巨噬细胞向M2型极化。结论：HIV膜蛋白gp120处理人T淋巴细胞H9分泌的外泌体能够促进巨噬细胞M2极化，可能是gp120在免疫调节中的新机制。     

外泌体miR-940在前列腺癌骨转移中的作用

目的探讨外泌体miR-940在前列腺癌（PCa）骨转移中的作用。方法采集2017年6月在温州医科大学附属第一医院就诊的3例正常老年男性及3例PCa骨转移患者的血清标本,采用RT-PCR法检测血清外泌体中微小RNA（miRNA）表达并绘制miRNA谱。培养PCa细胞株PC-3及正常前列腺上皮细胞株RWPE-1,提取并鉴定细胞外泌体;采用RT-PCR法检测细胞外泌体中miR-940表达。PC-3细胞经转染后与人骨髓间充质干细胞（hMSC）共培养48h,采用RT-PCR法检测成骨细胞分化相关基因表达,VonKossa染色法检测矿化面积占比。结果与正常老年男性比较,PCa骨转移患者血清外泌体中多个miRNA表达明显升高,其中miR-940尤为明显。在电镜下,PC-3细胞外泌体呈40~100nm的盘状囊泡,外泌体标志性蛋白VDAC、CD63、Hsp70、CD81表达均明显上调。PC-3细胞外泌体中miR-940表达明显高于RWPE-1细胞外泌体（P＜0.05）。在PCa-hMSC共培养体系中,miR-940过表达组ALP、骨钙素（BGLAP）基因表达及矿化面积占比较miR-940敲减组、空白对照组均明显降低（均P＜0.05）。结论外泌体miR-940可以有效抑制PCa-hMSC成骨分化,这为转移性PCa个体化治疗提供了新的靶点。