胎鼠嗅球分离培养出神经干细胞的研究

目的研究胎鼠嗅球中分离培养产生神经千细胞(NSCs)的情况。方法取孕16～18d的孕鼠。取胎鼠的嗅球,用含10％FCS的培养基培养传代分离出的细胞。免疫细胞化学方法鉴定培养和传代出的细胞,对染色阳性的细胞计数检测纯度。结果P^75染色阳性证明分离培养的细胞为嗅鞘细胞(OECs)；来源于嗅球的细胞培养出的神经球行NeS血染色阳性证明为NSCs；传代OECs纯度为95%-98％。结论胎鼠嗅球中可分离培养出NSCs,OECs可稳定传代。可以作为移植用的种子细胞。     

胎鼠海马神经细胞的原代培养及鉴定

目的建立较理想的SD大鼠胎鼠海马神经细胞体外原代培养方法。方法孕18 d(E18)SD大鼠的胎鼠,采用胰酶消化和机械分离相结合的方法进行海马神经元的原代无血清培养。结果在体外培养条件下神经细胞结构特征明显化,并能形成典型的神经细胞网络。结论该培养技术是海马神经细胞体外培养的理想方法。     

胎鼠神经干细胞分离培养和鉴定

目的:建立胎鼠神经干细胞体外培养方法,观察神经干细胞生长特点。方法:采用含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)的无血清培养基对大鼠胚胎大脑组织细胞悬液进行培养,细胞免疫荧光方法对神经干细胞鉴定,MTT法测定不同细胞密度的OD值,绘制生长曲线。结果:从胎鼠脑组织分离培养的细胞巢蛋白阳性。MTT结果显示细胞接种密度以2(×104～105)/ml生长良好(r=0.95,P<0.05)。结论:无血清培养基分离培养的胎鼠脑组织神经干细胞具有自我更新和增殖能力,巢蛋白细胞免疫鉴定为神经干细胞。     

胎鼠肺细胞的分离纯化及原代培养

目的 建立一套可靠的胎鼠肺细胞分离、纯化和培养技术，用于体外研究肺发育和早产儿肺部疾病。方法 采用胰酶和胶原酶消化19d胎鼠肺组织块，经差速离心和反复贴壁法，分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)和肺成纤维细胞(LF)，并进行原代培养。用细胞角蛋白(cytokeratin)和波形蛋白(vimentin)免疫细胞化学染色和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定。结果 该方法所得细胞产量大、纯度高。免疫细胞化学鉴定，AECⅡ细胞cytoker—atin染色阳性，vimentin染色阴性，LF则相反。透射电镜观察AECⅡ，可见细胞内板层小体。结论 该方法是一种可靠的胎鼠肺细胞的分离纯化培养技术，可用于体外研究肺发育与早产儿肺部疾病。     

胎鼠海马神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠行为学及海马凋亡的影响

目的:观察胎鼠海马神经干细胞移植对阿尔茨海默病(AD)大鼠行为学及海马凋亡的影响.方法:建立AD模型后,将大鼠分为移植组、对照组、正常组.将原代培养的神经干细胞移植入AD大鼠脑内,4周后通过水迷宫和跳台实验观察AD大鼠的学习记忆能力;用病理学观察移植后AD大鼠海马的凋亡的变化.结果:神经干细胞移植后的AD大鼠学习记忆能力明显增强;AD大鼠海马凋亡明显减轻,与正常组比较无明显差异(P＞0.05),与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:胎鼠神经干细胞移植可以明显改善AD大鼠的痴呆症状,具有一定的疗效.     

不同条件对胎鼠海马神经干细胞增殖分化的影响

目的:探讨不同条件对胎鼠海马神经干细胞的增殖与分化的影响.方法:从胎鼠海马获取神经干细胞;新生鼠坐骨神经获取雪旺细胞.培养成功后对细胞进行鉴定.将提取的神经干细胞放在不同的培养条件下:雪旺细胞与神经干细胞共培养、DMEM/F12 bFGF EGF及DMEM/F12进行比较,观察其增殖和分化的情况.结果:含雪旺细胞的共培养组神经干细胞生长分化得最好,bFGF EGF组次之,DMEM/F12组生长的最差;共培养组细胞团之间建立了良好的突触联系,尤其是远距离的细胞间更为明显.此现象在bFGF EGF组及DMEM/F12组则没有出现,且该两组生长速度也较共培养组差.结论:雪旺细胞能更好的促进神经干细胞的生长、增殖和分化,它为神经干细胞提供了与活体内相似的环境 .     

ICR胎鼠原代神经元细胞培养及鉴定

目的 建立较理想的胎鼠神经元细胞体外原代培养方法。方法 取13.5 d ICR胎鼠的大脑皮层,经剪碎消化得到单细胞悬液进行培养,观察细胞形态并作PCR及Western blotting等进行神经元相关的基因及蛋白Tuj1和Map2的鉴定。结果 细胞生长状态良好,细胞胞体明显,周围有明亮光晕,细胞突触交错形成网络样,通过PCR及Western blotting验证证明所分离培养的细胞是神经元细胞。结论 本培养方法简单易行,可获得典型和纯度较高的ICR胎鼠大脑皮层神经元细胞。     

胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离及原代培养

目的:探讨胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial cell type Ⅱ,AECⅡ)的分离、纯化及原代培养方法,为有关胎儿肺发育及新生儿肺部疾病的研究奠定基础.方法:采用胰酶结合胶原酶的消化方法,分离肺组织细胞成份,然后经差速离心和差速贴壁的方法纯化AEC Ⅱ,进行原代培养;通过台盼蓝染色检测细胞活力,倒置相差显微镜观察细胞生长特点及形态特征,透射电镜鉴定,改良巴氏染色检测细胞纯度以及免疫荧光技术检测表面蛋白C(Surfactant protein c,SPC)的表达.结果:每3～5只胎鼠可获得AEC Ⅱ(36 ± 5)× 106,活力98%±2%.镜下观察原代AECⅡ呈岛状生长,外观呈多边形或立方形.透射电镜可见特征性的板层小体,改良巴氏染色见胞质内有较多颗粒,纯度为96%±3%,呈现SPC绿色免疫荧光的细胞占96%以上.结论:利用胰酶和胶原酶消化,以及差速离心和差速贴壁的方法可成功分离出高产量、高纯度的胎鼠AEC Ⅱ,能满足体外进一步实验的需要.     

SD乳鼠心肌细胞原代培养及纯化方法的优化探索

目的 通过对乳鼠心肌细胞原代培养及纯化方法的优化探索,寻找简单、有效的培养及纯化方法。方法 20只乳鼠随机分两组,A组采用酶消化法+吸管吹打获取心肌细胞;B组通过酶消化法+自制转子磁力搅拌获取心肌细胞。两组均采用差速贴壁和5-溴脱氧尿核苷（BrdU）纯化心肌细胞,免疫荧光法鉴定心肌细胞纯度,台盼蓝染色观察心肌细胞活性,显微镜下计数心肌细胞搏动性。结果 A组心肌细胞的存活率、搏动率、纯度分别为（89.90±2.92）%、（91.30±2.00）%和（94.90±1.79）%; B组分别为（94.70±2.31）%、（95.00±1.24）%和（95.60±1.43）% 。B组心肌细胞活性及搏动率均高于A组,差异有统计学意义(\P>0.05);B组的心肌细胞纯度稍高于A组,但差异无统计学意义(\P>0.05)。BrdU加入后与未加入相比,抑制成纤维细胞的生长。结论 酶消化法+自制转子磁力搅拌更优于酶消化法+吸管吹打,可以有效获取心肌细胞,BrdU有利于心肌细胞的纯化。     

胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、原代培养与鉴定

 【目的】探讨胎鼠肺泡Ⅱ型细胞原代培养及鉴定方法，建立肺泡Ⅱ型细胞培养模型，为体外研究肺泡Ⅱ型细胞及胎儿肺发育提供实验手段。【方法】采用低浓度胰酶消化20d胎鼠肺组织，经差速离心和特异性免疫吸附后，分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞，进行原代培养；根据细胞生长特点、形态特征、细胞表型和肺表面活性特异蛋白A的分泌，用免疫细胞化学染色、透射电镜及酶联免疫吸附法对分离的细胞进行形态学和功能鉴定。【结果】原代培养的肺Ⅱ型细胞12h开始贴壁，外观呈多边形，岛状生长。培养的24～48h，细胞连接成单层，胞浆内颗粒明显，培养的6～7d细胞内颗粒大量减少；免疫细胞化学鉴定细胞肺表面活性特异蛋白A（surfactant pmtein A，SP-A）染色阳性，透射电镜可见观察到细胞内板层小体，培养液中SP-A含量随培养时间延长逐渐增多，于培养36h达峰值，为80ng／mL；细胞纯度达（92±2）％，产量为（18．6±7）×10^6。【结论】差速离心和免疫黏附法是一种高效的分离和纯化胎肺Ⅱ型细胞的方法，所得细胞产量大、纯度高，可以用于体外研究肺泡Ⅱ型细胞和晚期胎肺发育的研究.     

人胚胎海马神经干细胞体外培养方法的建立

为建立人胚胎海马神经干细胞的体外培养方法 ,防止神经干细胞在培养过程中的分化 ,确立最佳的传代时机和方法 ,分离 1 6周人胚海马组织 ,采用无血清培养基对所分离的神经干细胞进行体外培养 ,比较不同培养条件与方法所获得的神经球数量的差异。结果 :建立了人胚胎海马神经干细胞体外培养的优化条件 ,确立了最佳传代方法与时机。提示 :人胚胎海马神经干细胞在体外抑制分化的条件下可以长期处于未分化状态增生 ,并且可多次传代。     

胎牛血清对胎鼠神经干细胞分化的影响

目的探讨胎牛血清对神经干细胞（neural stem cells,NSCs）分化结果的影响．方法通过无血清培养的方法,将胎鼠大脑皮质进行原代培养所获得的神经干细胞克隆传代纯化后,分别接种在加入DMEM／F12＋B27和DMEM／F12＋B27＋5％FCS两种不同培养基的培养皿中诱导分化,9d后行免疫荧光细胞化学染色,用抗体β—Tubulin Ⅲ、GFAP、GalC鉴定分化细胞,并观察其形态特点．结果成功分离获得NSCs,并具有分化为神经元和胶质细胞的能力;在相同时间内含血清培养基中的细胞球分化快而充分,且分化结果不同．结论血清可促进NSCs分化并影响分化结果．     

胎鼠表皮干细胞的分离培养及毛囊再生

0　引言　近年来 ,随着组织工程的飞速发展 ,人类组织干细胞的研究及其临床应用日益成为国内外学者关注的焦点 ,表皮干细胞即是其中之一 .因此 ,表皮干细胞的培养成功为利用组织工程原理及分子生物学手段构建全新的人工皮肤组织带来了希望 .1　材料和方法1.1　材料　ＤＭＥＭ培养基、胰蛋白酶、ｄｉｓｐａｓｅ酶及角朊细胞培养基均购自Ｇｉｂｃｏ公司 ,小鼠ＩＶ型胶原购自Ｓｉｇｍａ公司 ,ｉｎｔｅｒｇｒｉｎ β1兔多抗为ＳａｎｔａＣｒｕｔｚ公司产品 ,一级昆明小鼠由第四军医大学实验动物中心提供 ,裸鼠购自上海生物所 .1.2　方法1.2 .1　…     

SD胎鼠脊髓神经干细胞分离、培养及鉴定

目的 分离、培养和鉴定胎鼠脊髓神经干细胞,为建立稳定的脊髓神经干细胞系提供基础.方法 应用无血清培养技术从胎鼠脊髓分离、培养神经干细胞,用免疫细胞化学方法鉴定分离的神经干细胞.结果 分离培养的细胞具有不断增殖的能力,表达神经巢蛋白,并能经过诱导分化为神经元和神经胶质细胞.结论 分离到的细胞具有自我复制能力和多向分化潜能,是中枢神经系统的干细胞,为应用于中枢神经系统损伤治疗提供了基础.     

胚胎大鼠神经干细胞的分离培养及鉴定研究

目的建立胎鼠神经干细胞体外培养方法并鉴定神经干细胞,观察神经干细胞生长特点。方法采用含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的无血清培养基对大鼠胚胎间脑组织细胞悬液进行培养。通过检测神经干细胞的特异性抗原、神经干细胞的自我增殖能力和分化能力来鉴定神经干细胞。结果分离培养出了大量具有不断增殖的能力、表达神经巢蛋白的神经干细胞,并能经过诱导分化为神经元和神经胶质细胞,并能稳定传代20代以上。结论无血清培养基分离培养的胎鼠脑组织神经干细胞具有自我更新和增殖能力,巢蛋白细胞免疫荧光鉴定为神经干细胞,成功建立了大鼠神经干细胞的分离培养方法。     

胎鼠脊髓神经干细胞分离培养及诱导分化

目的 探讨机械分离法与酶消化法在脊髓源性神经干细胞（NSCs）体外培养的优劣,并观察脊髓源性NSCs体外培养时增殖和分化的特点.方法 取妊娠第15天（E15 d）的胎鼠神经管组织,分别采用酶消化法和机械吹打分离法离散细胞,进行无血清培养,并以上述两种方法传代培养.借助免疫细胞化学法对NSCs及分化结果进行鉴定,细胞球计数法检测成球率,测量神经球直径分析细胞增殖能力,MTT法监测细胞生长情况.结果 ①培养的细胞具有增殖成球生长的特性并且抗巢蛋白免疫荧光阳性、血清可诱导分化出胶质细胞酸性蛋白（GFAP）、神经元特异性希醇化酶（NSE）阳性表达的细胞.②细胞直径：酶消化组（137.74±11.62）μm,机械分离组（143.69±12.20） μm（P ＞0.05）.③生长曲线结果显示酶消化组NSCs综合生长增殖能力较高,OD值：酶消化组（0.39 ±0.15）,机械分离组为（0.36±0.13）.结论 胎鼠脊髓组织中存在具有自我增殖和多分化潜能的NSCs,原代无血清成球培养时采用酶消化法更有利于获得较多NSCs.     

人胚神经干细胞的长期培养和传代

目的 探讨人胚神经干细胞的体外培养条件及传代方法.方法 采用机械方法从胎脑中分离神经细胞,用Eagles MEM培养基,加入碱性成纤维生长因子和表皮生长因子刺激细胞增殖,传统的方法进行传代培养;应用免疫组织化学和免疫荧光染色对培养的细胞及分化的细胞进行鉴定.结果 培养第8天,细胞具备神经元形态;折光性强的锥形或圆形胞体及长的多极突起.免疫组化和免疫荧光染色,神经元特异性烯醇化酶、神经蛋白、胶质纤维酸性蛋白酶、微管相关蛋白为阳性.结论 在体外的培养条件下,可以从胎脑组织中培养出神经干细胞,为中枢神经系统疾病移植打下了基础.     

胎鼠脊髓神经干细胞的分离、培养和鉴定

目的:分离、培养和鉴定胎鼠脊髓神经干细胞,为建立稳定的脊髓神经干细胞系提供基础.方法:应用无血清培养技术从胎鼠脊髓分离、培养神经干细胞,并应用神经干细胞特异性抗体对其进行标记;应用BrdU掺入培养检测其分裂增殖能力;应用神经元和星形胶质细胞特异性抗体分析其多向分化潜能.结果:分离到的细胞具有不断分裂增殖的能力,可被神经干细胞特异性抗体所标记,并在血清条件下分裂为神经系统多种细胞.结论:分离到的细胞具有自我复制能力和多向分化潜能,是中枢神经系统的干细胞,为应用于中枢神经系统损伤治疗提供了基础.     

神经干细胞分离培养方法的介绍

在成体的许多组织中发现了多能干细胞,这些干细胞可以进行自我复制,参与组织的正常修复。神经干细胞在体外能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,并具有多向分化潜能。成体神经干细胞和胚胎干细胞都能分化成成体神经系统中的各种神经细胞。神经干细胞具有自我更新能力,因此神经干细胞可以应用于神经损伤或者神经疾病的修复。本文概述了神经干细胞体外分离培养的方法及其生长影响因子。