小鼠脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞促造血恢复作用观察

目的:观察小鼠成体脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞体内外能否促进造血恢复.方法:用小鼠脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞作滋养层,接种造血细胞,观察培养后1～4周造血细胞数及粒-巨噬细胞系集落形成单位(CFU-GM)的变化,并设对照组.30只经137Cs全身照射0.35 Gy的雌性C57BL/6小鼠随机分为3组,空白对照组尾静脉注射生理盐水,对照组注射骨髓有核细胞,实验组注射骨髓有核细胞及脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞,注射后均检测外周血和骨髓有核细胞数及CFU-GM变化,PCR检测受体小鼠体内Y染色体的表达.结果:体外实验中实验组接种后2～4周造血细胞数均高于对照组(P均＜0.05),接种后1～4周CFU-GM值均高于对照组(P均＜0.05);体内实验中空白对照组小鼠移植后10 d左右死亡,实验组小鼠外周血和骨髓有核细胞数、CFU-GM从第2周起均高于对照组(P均＜0.05),第4周实验组小鼠骨髓细胞有Y染色体表达.结论:脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞能促进小鼠造血恢复.     

HepaRG细胞移植治疗鼠特异性Fas抗体诱导的小鼠急性肝衰竭

目的 探讨HepaRG细胞移植对鼠特异性Fas抗体诱导的急性肝衰竭小鼠的治疗作用和人肝细胞异种移植的策略.方法 利用特异性鼠抗Fas抗体(Jo2 mAb)腹腔注射,剂量为0.3 mg/kg,诱导20只SCID小鼠制备急性肝衰竭模型,24 h内按照实验动物随机数字表分组方法 ,经脾移植2×106HepaRG细胞的小鼠为实验组(10只),未经HepaRG细胞移植的小鼠为对照组(10只).观察小鼠的存活率、肝脏功能、肝组织变化情况.实验组移植4周免疫组化检测肝组织人白蛋白、人CK18、人Hep Par1的表达,免疫荧光检测人白蛋白的表达.结果 实验组小鼠有9只存活超过4周,而对照组小鼠3 d内先后死亡9只,实验组血清ALT和AST趋于正常,显著低于对照组(P<0.01),且存活时间显著高于对照组(P<0.01).实验组经HepaRG细胞移植能避免Jo2 mAb所致肝组织出血、坏死,移植后4周免疫组化可见人白蛋白、CK18、Hep Par 1阳性表达细胞,肝组织免疫荧光可见人白蛋白阳性细胞的表达.结论 移植HepaRG细胞可治疗Jo2mAb腹腔注射小鼠诱导的急性肝衰竭,HepaRG细胞不仅在小鼠肝内存活,且得以增殖.     

人免疫重建NOD/SCID小鼠模型的建立

目的探讨NOD/SCID（nonobese diabetic/severe combined immunodeficien）t小鼠人免疫重建模型的建立方法和免疫特性.方法 16只NOD/SCID小鼠随机分成实验组和对照组,每组8只.Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,通过腹腔注射移植给实验组小鼠,空白对照组小鼠每只腹腔注射无菌PBS,第4、8和12周时,流式细胞术检测小鼠外周血中人的CD3＋T、CD19＋B淋巴细胞,ELISA法测定小鼠血清中人IgG含量,免疫组织化学染色检测小鼠脾脏和肝脏中人CD3＋T、CD19＋B淋巴细胞浸润情况.结果移植PBMC 4周后,实验组NOD/SCID小鼠外周血中人CD3＋T、CD19＋B的细胞分别为85.6%、76.7%,并且在小鼠脾脏组织中也可以检测到人CD3 T、CD19 B淋巴细胞.移植4、8及12周后小鼠血清中人IgG含量分别达到（863±12.5）μg/mL、（1217±16.7）μg/mL、（958±13.1）μg/mL.结论用人外周血PBMC经腹腔注射可以成功建立人免疫重建NOD/SCID小鼠模型,方法简便可靠.     

肝细胞刺激因子对骨髓单个核细胞向肝归巢的影响

目的:探讨肝细胞刺激因子对骨髓单个核细胞(BMMNC)在小鼠体内向肝归巢的影响。方法:制备BALB/c小鼠2-乙酰氨基芴-四氯化碳肝损伤模型,供鼠分离BMMNC,体外经PKH26染色,经尾静脉途径输入肝损伤小鼠体内,实验组立即以80μg/(kg.d)剂量腹腔内注射肝细胞刺激因子,对照组注射等量5%葡萄糖溶液。移植2周后取小鼠肝,冷冻切片计荧光细胞数,苏木精-伊红(H-E)染色观察病理组织学变化。结果:实验组小鼠肝冷冻切片上平均荧光细胞数多于对照组(84vs61,P<0.05)。H-E切片上新生肝细胞较多。结论:肝细胞刺激因子对BMMNC向肝归巢有一定的促进作用。     

Fah~(-/-)小鼠对NTBC的药物依赖性观察

目的观察Fah-/-小鼠对NTBC的药物依赖性,更详尽的掌握该模型的生物学特征,使该模型得以更有效的利用。方法 Fah-/-小鼠NTBC停药后,观察小鼠体重变化、生存状态、生存时间,定期取样记录血清学和肝脏病理学变化。结果 NTBC停药后,Fah-/-小鼠体重进行性下降,活力降低,5~7周死亡,期间伴随着ALT、AST等血清指标的升高及肝细胞严重变性及大量坏死。结论 Fah-/-小鼠需终身服用NTBC,依赖性强,停药会出现严重肝损伤,表明该模型是研究酪氨酸血症Ⅰ型和其他肝损伤的理想模型。     

瑞舒伐他汀对动脉粥样硬化APOE-/-小鼠VCAM-1、VEGF和TNF-α表达的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀对载脂蛋白E敲除基因(APOE^-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用以及对血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）和α肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF-α）表达的影响。方法 将18只8周龄健康雄性APOE^-/-小鼠随机分为3组,即模型组、低剂量治疗组和高剂量治疗组,每组6只,6只C57BL/6小鼠作为对照组;除对照组小鼠用普通饲料喂养外,3组APOE^-/-小鼠均用高脂饲料喂养。喂养8周后,低剂量治疗组按瑞舒伐他汀1.5 mg/kg灌胃给药,高剂量治疗组按瑞舒伐他汀5 mg/kg灌胃给药,对照组和模型组用等量蒸馏水灌胃,1次/d,共8周;取胸主动脉HE染色后,观察主动脉的病理形态学变化,计算主动脉内弹力板周长、外弹力板周长、残腔周长和动脉粥样硬化斑块的面积;分别用蛋白质免疫印迹（Western Blot, WB）法...     

期刊文摘

大鼠胰岛细胞转染Wee1Hu基因延长异种胰岛细胞移植后存活时间[周新荣,周华蓉,朱慧芬等.中华器官移植杂志.2007,28(4):223～225]探讨大鼠胰岛细胞转染Wee1Hu基因对异种胰岛细胞移植后存活时间的影响。以Wistar大鼠为供者,Balb/c糖尿病小鼠为受者,进行异种胰岛细胞移植。实验分为2组,每组20只。实验组:将转染Wee1Hu基因的1×106个供者胰岛细胞悬于0.5ml无菌生理盐水中,注射至受者的腹腔;空白对照组:将1×106个空载体胰岛细胞用与实验组相同的方法注射至受者腹腔。实验组和空白对照组的部分受者在移植前1周腹腔注射降植烷0.5ml,并于胰岛细…     

Fah基因剔除小鼠在肝细胞移植中的应用及其病理学变化

目的： 观察外源成体肝细胞在Fah^-/-小鼠肝脏中增殖的微观特性并对该小鼠模型肝脏损伤后的病理学变化进行研究。方法： 野生型小鼠成体肝细胞经脾脏移植到Fah^-/-小鼠后,观察移植Fah^-/-小鼠的体重变化,生存状态及肝组织的Fah免疫组化和电镜观察以评价再殖效率和病理学变化。结果： Fah^-/-小鼠的肝HE染色显示为亚急性损伤的病理特点。电镜观察显示,初期肝细胞坏死,凋亡现象随时间增多,随后有凋亡和坏死并存。而Fah^-/-小鼠在NTBC［2-（2-硝基-4-三氟甲基苯甲酰基）-环己烷-1,3-二酮］药物的治疗后,无明显病理学变化。肝细胞移植后的Fah^-/-小鼠均健康存活,体重稳步上升。8周时可以达到90%以上再殖。肝脏生化指标恢复正常。结论： Fah^-/-小鼠的肝脏损伤可以使移植的肝细胞90%以上的再殖,维持肝脏正常的组织结构,并发挥正常的肝细胞功能。Fah^-/-小鼠作为肝脏再殖模型可用于干细胞肝向分化研究。     

基于GFP/SCL-tTA/Bcr-abl转基因小鼠建立CML嵌合小鼠模型

目的 建立慢性粒细胞白血病(CML)的转基因嵌合小鼠模型,为靶向白血病干细胞(LSCs)治疗CML的研究提供良好的动物模型.方法 将Bcr-abl转基因小鼠与SCL-tTA转基因小鼠进行杂交,子代小鼠再与GFP转基因小鼠杂交,PCR鉴定Bcr-abl、tTA和GFP基因三阳性的小鼠(GFP/SCL-tTA/Bcr-abl小鼠).通过诱导GFP/SCL-tTA/Bcr-abl小鼠Bcr-abl基因表达4周后,取其骨髓白细胞移植至经致死剂量(900 cGy)辐照的FVB/N野生型小鼠.移植3周后,采用Western blotting检测Bcr-abl蛋白表达,流式细胞术检测小鼠外周血GFP+中性粒细胞的比例以及脾脏和骨髓GFP+ LSCs的比例.结果 PCR结果显示,GFP/SCL-tTA/Bcr-abl小鼠骨髓细胞成功植入FVB/N受体小鼠;Western blotting检测结果显示,移植小鼠的骨髓细胞中表达Bcr-abl蛋白;流式细胞术结果显示,移植小鼠的外周血GFP+中性粒细胞比例以及脾脏和骨髓GFP+ LSCs的比例明显升高.结论 成功建立了GFP/SCL-tTA/Bcr-abl转基因CML嵌合小鼠模型.     

利用bcl-2抗Fas凋亡特性联合Fas抗体促进人鼠嵌合肝中人肝细胞的增殖

目的 移植bcl-2转基因HepaRG细胞到小鼠体内,并联合使用Jo2抗体诱导鼠肝细胞凋亡策略,促进人鼠嵌合肝中人肝细胞的增殖.方法 SCID鼠经脾移植2×106 bcl-2转基因HepaRG细胞,移植后1d始腹腔注射0.2mg/kg Jo2抗体,每周1次,持续10周为实验组;移植未转染bcl-2基因的HepaRG细胞,同样给予Jo2 抗体腹腔注射为对照1组,移植未转染bcl-2基因的HepaRG细胞,未腹腔注射Jo2抗体为对照2组,建立人鼠嵌合肝动物模型.从2周开始,后4、8、12、16、20、24周,分别采用免疫组化、免疫荧光和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时相点实验组和对照组嵌合肝中肝组织人清蛋白以及人清蛋白mRNA,并用酶联免疫法(ELISA)定量检测鼠血清人清蛋白的含量.结果 实验组和对照组小鼠均能存活至24周,鼠肝组织和血清中均能检测到清蛋白的表达.实验组肝组织和血清人清蛋白的表达均可持续到24周,人血清清蛋白高峰值为95.32ng/mL,出现在16周;而对照1组肝组织和血清人清蛋白的表达可持续到20周,人血清清蛋白高峰值为42.37ng/mL,出现在12周;对照2组肝组织和血清人清蛋白的表达可持续到12周,人血清清蛋白高峰值为22.91ng/mL,出现在8周.结论 利用bcl-2抗Fas凋亡特性,转染bcl-2基因的HepaRG细胞移植并联合小剂量Jo2抗体腹腔注射SCID鼠,有利于人鼠嵌合肝中人肝细胞的增殖和存活.     

急性淋巴细胞白血病移植瘤模型小鼠髓外浸润过程中血清Wnt5A和LINE-1启动子甲基化水平检测及其意义

目的:建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的急性淋巴细胞白血病(ALL)移植瘤小鼠模型,研究ALL髓外浸润过程中血清游离DNA(cfDNA)特异基因甲基化的变化,为ALL髓外浸润监测提供理论和实验依据.方法:60只ICR小鼠随机分为对照组、实验15 d组和实验30 d组,每组20只.实验组小鼠通过尾静脉注射构建GFP标记AL...     

异臭椿烷对S180肉瘤细胞小鼠移植瘤的影响

目的 探讨不同剂量的异臭椿烷治疗S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤效果.方法 建立S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为空白对照组、阳性对照组、异臭椿烷高、中、低剂量组,每组9只.异臭椿烷高、中、低剂量组分别给予1.0、0.5、0.1 mg/L异臭椿烷0.1 mL,灌胃给药,每天1次;阳性对照组采用环磷酰胺腹腔注射给药,25 mg/(kg*d);空白对照组每只给予0.1 mL纯食用油灌胃.5组均连续给药5 d后间隔2 d再次连续给药5 d.停药后24 h处死小鼠, 称取小鼠体质量,比较小鼠实验前后体质量变化;称取瘤质量,计算抑瘤率.结果 异臭椿烷各剂量组和阳性对照组小鼠状态总体表现明显强于空白对照组,体质量增加幅度明显高于空白对照组,肿瘤生长速度明显慢于空白对照组,差异均有显著意义(F=34.786、16.407,q=3.059～16.077,P<0.05).结论 异臭椿烷对S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤生长具有一定的抑制作用.     

移植前输注供体细胞的小鼠单倍体相合骨髓移植实验

目的建立小鼠非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,探讨移植前输注供体细胞的造血干细胞植入效果。方法以CB6F1雌性小鼠为受鼠,C57BL/6雄性小鼠为供鼠,移植前3d经尾静脉输注供鼠脾细胞或骨髓细胞3×107,输注细胞后24h和48h分别通过腹腔注射阿糖胞苷0.015g/d,移植前1d予450cGy全身照射（TBI）,移植当天输注供鼠骨髓有核细胞5×107/只。监测受鼠白细胞恢复、Y染色体性别决定基因（SRY）以及外周血供鼠CD3＋细胞嵌合状态。结果单纯给予TBI小鼠均存活,且移植后30d白细胞恢复正常,TBI＋骨髓细胞移植（TBI＋BMT）组移植后14、30、60d时外周血SRY基因PCR检测结果均阳性,60d供体CD3^＋细胞嵌合率达54.4%。移植前输注供体脾细胞组嵌合率最高,移植后60d达93.5%±4.8%,优于移植前输注供体骨髓细胞组（P〈0.05）。结论 450cGy TBI的非清髓性预处理可以成功建立非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,移植前输注供体脾细胞可促进造血干细胞植入。     

异基因脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞小鼠移植后嵌合体形成及免疫耐受检测

目的:探讨器官移植中脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞诱导免疫耐受的可能性.方法:20只C57BL/6小鼠经致死量射线照射后随机等分为2组,实验组移植C57BL/6小鼠骨髓细胞和BALB/c小鼠脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞,对照组仅移植C57BL/6小鼠骨髓细胞,以CM-DiI荧光染料示踪脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞的体内分布情况,并以PCR方法检测Y染色体的存在以进一步鉴定.以皮肤移植实验观察脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞移植小鼠对供体来源组织器官移植物的反应性,以未移植Flk1 CD31-CD34-细胞小鼠为对照.结果:脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞可进入并较长期(30 d)存在于异基因小鼠免疫器官内;在细胞移植组小鼠脾脏组织中可检测到供体来源T细胞占受体脾细胞的6.68%;脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞移植组小鼠供体来源皮肤移植物存活＞90 d,未处理组为8～9 d.结论:异基因脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞移植后可形成稳定嵌和体,并诱导特异性免疫耐受的产生.     

转绿色荧光蛋白基因小鼠子宫内膜异位症模型的建立和评价

目的建立小鼠子宫内膜异位症种植模型,探讨荧光检测异位子宫内膜的方法。方法将转绿色荧光蛋白(GFP)基因小鼠的子宫内膜剪碎后,注射入C57BL/6小鼠的腹腔,喂养含17-β-雌二醇的无菌水,3周后剖检小鼠,在活体荧光成像系统下观察腹腔的绿色荧光,并做免疫组化染色。结果在移植转GFP基因小鼠子宫内膜的C57/BLC57BL/6小鼠的腹腔内存在绿色荧光,且免疫组化证实该异位内膜组织中表达GFP,而对照组均阴性。结论转GFP基因小鼠子宫内膜模型可清晰地显示异位内膜病灶,具有良好的应用前景。     

氧化苦参碱对苯巴比妥钠诱导的肝细胞凋亡小鼠肝细胞bcl-2、bax基因表达的影响

目的：探讨氧化苦参碱（OM）阻断苯巴比妥钠（PB）诱导的肝细胞凋亡的机制。方法：105只雄性昆明种小鼠随机分为5组。空白对照组：腹腔注射生理盐水，连续7d，停药12h后处死。PB组：5g/L PB75 mg/kg,1次／d，腹腔注射，连续7d，停药后12h处死。PB撤除组：5g/L PB 75mg/kg,1次／d，腹腔注射，连续6d，停药后36h处死。OM治疗I组：首先腹腔注射5g/L PB 75mg/kg,1次／d；第6d后腹腔注射OM 150mg/kg,3次／d，至停PB后36h，将动物处死。OM治疗Ⅱ组：首先腹腔注射5g/L PB 75mg/kg,1次／d，第6d后腹腔注射OM 75mg/kg,3次／d，至停PB后36h，将所有动物脱颈处死，取出肝脏，体积分数为4％多聚甲醛固定，石蜡包埋。用Tunel法检测肝细胞凋亡，用免疫组化和原位杂交技术检测bcl-2、bax基因的表达。结果：仅PB撤除组Tunel法检测到细胞凋亡。Bcl-2蛋白在OM治疗I、Ⅱ组的表达较PB撤除组显著增强（P＜0．05），在OM治疗I组和Ⅱ组之间差异无统计学意义。Bax蛋白在PB撤除组表达较其他各组显著增强（P＜0．05），而在其他各组之间差异无统计学意义（P＞0．05）。bcl-2、bax基因表达的mRNA阳性信号强度与Bcl-2、Bax蛋白免疫组化反应的强度一致。结论：氧化苦参碱可能通过上调bcl-2基因的表达来阻断肝细胞凋亡。     

大鼠胰岛细胞转染Wee1Hu基因延长异种胰岛细胞移植后存活时间

探讨大鼠胰岛细胞转染Wee1Hu基因对异种胰岛细胞移植后存活时间的影响。以Wistar大鼠为供者，Balb／e糖尿病小鼠为受者，进行异种胰岛细胞移植。实验分为2组，每组20只。实验组：将转染Wee1Hu基因的1×10^6个供者胰岛细胞悬于0．5ml无菌生理盐水中，注射至受者的腹腔；空白对照组：将1×10^6个空载体胰岛细胞用与实验组相同的方法注射至受者腹腔。实验组和空白对照组的部分受者在移植前1周腹腔注射降植烷0．5ml，     

小鼠原代海马神经元培养方法优化及HT22-GRK2-/-细胞构建

目的 探究并优化新生小鼠海马神经元体外原代培养方法；构建小鼠海马神经元HT22细胞中G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因敲除细胞株(HT22-GRK2^-/-)。方法 为优化小鼠原代海马神经元的培养，取新生1～2 d C57BL6/J小鼠海马组织，经胰酶消化后吹打形成细胞悬液，于Neurobasal-A培养基中加细胞培养添加剂维持细胞生长。利用CRSIPR/Cas9基因编辑技术构建HT22-GRK2^-/-细胞株，并通过免疫荧光染色和Western blot检测GRK2敲除效率。结果 以3×10⁷/孔密度接种的新生小鼠原代海马神经元以无血清培养方式接种于6孔板中，可获得纯度高、活性好的小鼠原代海马神经元细胞；HT22-GRK2^-/-细胞株构建成功。结论 成功建立并优化小鼠海马神经元体外原代培养方法，利用CRSIPR/Cas9基因编辑技术成功构建HT22-GRK2^-/-细胞株。     

补血养肝法对血虚证小鼠肝细胞凋亡的影响

目的:观察补血养肝法对血虚证小鼠肝细胞凋亡的影响。方法:30只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、实验组。以腹腔注射环磷酰胺建立血虚证模型,检测各组小鼠外周血红细胞数、白细胞数及血红蛋白含量,采用Tunnel法检测肝细胞凋亡。结果:与模型组相比,实验组小鼠外周血红细胞数、白细胞数以及血红蛋白含量升高(P0.05),肝细胞凋亡百分率下降(P0.05)。结论:补血养肝法对血虚证的治疗作用可能与其减少肝细胞凋亡有关。     

IL-10和HGF对大鼠活体肝移植术后急性排斥反应的抑制作用

目的研究hIL-10和HGF重组体对大鼠活体肝移植术后急性排斥反应的抑制作用。方法以DA大鼠(RT1a)为供体,Lewis大鼠(RT1l)为受体建立异种肝移植鼠模型,实验组于移植后1d及7d,腹腔内注射T-HGF和T-hIL-10重组体(100μg/mL)100μL,对照组注射等量生理盐水。移植后1、7、10和20d取大鼠尾静脉血,ELISA法测定血清HGF、IL-10水平,RT-PCR测定肝细胞HGF、IL-10mRNA的表达水平,常规肝功能测定,活体肝移植动物生存期观测。结果实验组鼠肝细胞有HGF和IL-10mRNA表达,对照组肝细胞表达微弱。对照组大鼠HGF和IL-10水平一直维持在较低水平,实验组大鼠HGF和IL-10水平明显高于对照组(P<0.05)。注射重组体的实验组平均生存时间为(19±0.9)d,20d时存活只数为6只,存活率75%;对照组平均生存时间为(8.6±0.5),20d时存活只数为2只,存活率25%(P<0.05)。对照组未注射重组体,ALT和AST值持续升高,注射重组体后ALT和AST值亦有升高,但明显低于对照组(P<0.05)。结论活体肝移植大鼠导入IL-10和HGF基因重组体后可抑制移植术后急性排斥反应。