CXC趋化因子配体10对肝细胞癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的：探讨外源性CXC趋化因子配体10 (CXCL10)对肝细胞癌(HCC) SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响,并阐明其作用机制。方法：按照CXCL10作用浓度,将人HCC SMMC-7721细胞分为0 mg·L^-1 CXCL10组、10 mg·L^-1 CXCL10组和30 mg·L^-1 CXCL10组。上述部分细胞给予细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂PD98059 (80μmol·L^-1)后,将SMMC-7721细胞分为0 mg·L^-1CXCL10+PD98059组、 10mg·L^-1 CXCL10+PD98059组和30mg·L^-1 CXCL10+PD98059组。CCK-8法检测各组SMMC-7721细胞增殖率,EdU法检测各组SMMC-7721细胞中EdU阳性表达率,Transwell小室实验检测各组SMMC-7721细胞迁移率,Western blotting法检测各组SMMC-7721细胞中ERK、磷酸化ERK (...     

丝胶对高糖所致足细胞损伤和JNK信号通路的影响

目的：探讨丝胶对高糖所致足细胞损伤时c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路相关蛋白的表达及足细胞凋亡的影响,阐明丝胶的保护作用及其可能机制。方法：分化成熟的条件永生化小鼠足细胞随机分为正常对照组(含5.5 mmol·L^-1葡萄糖的培养基)、高渗对照组(含5.5 mmol·L^-1葡萄糖+24.5 mmol·L^-1甘露醇的培养基)、高糖组(含30.0 mmol·L^-1葡萄糖的培养基)、低浓度丝胶组(含30.0 mmol·L^-1葡萄糖+150.0 mg·L^-1丝胶的培养基)、中浓度丝胶组(含30.0 mmol·L^-1葡萄糖+300.0 mg·L^-1丝胶的培养基)和高浓度丝胶组(含30.0 mmol·L^-1葡萄糖+600.0 mg·L^-1丝胶的培养基)。采用光学倒置显微镜观察各组足细胞形态表现,实时荧光定量PCR (RT-q PCR)法检测各组足细胞中裂孔膜蛋白(Nephri...     

枸杞多糖对高糖干预的人晶状体上皮细胞中SIRT1及SIRT6表达的影响

目的 研究枸杞多糖(LBP)对高糖干预的人晶状体上皮(HLEB3)细胞中沉默信息调节因子1(SIRT1)及沉默信息调节因子6(SIRT6)表达水平的影响。方法 将对数生长期的HLEB3细胞随机分为对照组(CON组,5.5 mmol·L^-1)、高糖组(HG组,55.5 mmol·L^-1)、HG+12.5 mg·L^-1LBP组、HG+25 mg·L^-1LBP组、HG+50 mg·L^-1LBP组,培养24 h后,分别用相应培养基干预48 h,用显微镜观察各组细胞的形态及密度变化;采用CCK-8试剂盒检测各组细胞的存活率;采用免疫荧光法对各组细胞中SIRT1和SIRT6蛋白进行定位检测;采用Western blot法测定各组细胞中SIRT1与SIRT6蛋白的表达水平。结果 光镜下观察发现,CON组HLEB3细胞主要呈梭形贴壁生长,HG组细胞形态呈不规则状,细胞密度降低;与HG组相比,HG+12.5 mg·L^-1LBP组、HG+25 mg·L^-1     

FOXP3调控非小细胞肺癌A549细胞对阿霉素敏感性的作用及其机制

目的：探讨叉头蛋白3 (FOXP3)基因沉默后非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞对阿霉素(Dox)敏感性的变化,阐明其参与Dox耐药的机制。方法：采用脂质体法将FOXP3小干扰RNA(siRNA)片段转染至人NSCLC A549细胞,细胞分为空白对照组(不转染)、si-NC组(转染对照siRNA)和si-FOXP3组(转染FOXP3-siRNA)。采用Westernblotting法和免疫荧光法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平,CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性和半数抑制浓度(IC50)值。各组A549细胞中分别加入0、10和20μmol·L^-1 DAPT,作为0、10和20μmol·L^-1 DAPT组;另取A549细胞,分别加入0μmol·L^-1DAPT、 1.0mg·L^-1Dox和1.0mg·L^-1Dox联合10μmol·L^-1DAPT,作为0μmol·L^-1 DAPT组、1.0 mg·L^-1     

苦参总黄酮对醋酸铅诱导小鼠睾丸间质细胞氧化应激的改善作用及对Keap1/Nrf2信号通路的影响

目的：观察苦参总黄酮(SF)对醋酸铅(LA)诱导的小鼠睾丸间质细胞TM3氧化应激的改善作用及其对KELCH状ECH相关蛋白1 (Keap1)/细胞中核因子E2相关因子2 (Nrf2)信号通路的影响,探讨SF改善由LA诱导的TM3细胞氧化应激的相关作用机制。方法：利用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0、10、20、50和80μmol·L^-1) LA和不同浓度(0、12.5、25.0、50.0和80.0 mg·L^-1) SF分别干预24 h后的TM3细胞存活率;将TM3细胞随机分为空白对照组、LA组、LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组。除空白对照组外,其他各组均采用50μmol·L^-1 LA诱导TM3细胞24 h建立TM3细胞氧化应激模型,其中LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组TM3细胞再分别给予12.5、25.0和50.0 mg·L^-1 SF。利用MTT法检测TM3细胞存活率;WST-1法和硫代巴比妥酸(TBA)法检测TM3细胞中超氧化物歧化酶(SOD)...     

发酵红参总皂苷对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转化的抑制作用及其机制

目的：探讨发酵红参总皂苷(FRGTS)对高糖诱导下肾小管上皮细胞发生上皮细胞-间充质转化(EMT)的抑制作用,并阐明其作用机制。方法：将大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞分为正常对照组(5.5 mmol·L^-1D-葡萄糖)、高糖组(30.0 mmol·L^-1D-葡萄糖)、沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂EX527组(30.0 mmol·L^-1D-葡萄糖+10.0μmol·L^-1.EX527)、 FRGTS组(30.0 mmol·L^-1D-葡萄糖+25 mg·L^-1FRGTS)和EX527+FRGTS组(30.0 mmol·L^-1D-葡萄糖+10μmol·L^-1EX527+25 mg·L^-1FRGTS)。采用免疫荧光法检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中E-cadherin、...     

大豆异黄酮协同索拉非尼对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移的影响及机制

目的 探讨大豆异黄酮协同索拉非尼对宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移的影响及机制。方法 取对数生长期Hela细胞随机分为对照组、大豆异黄酮组、1 mmol·L^-1索拉非尼组、2 mmol·L^-1索拉非尼组、4 mmol·L^-1索拉非尼组、6 mmol·L^-1索拉非尼组、1 mmol·L^-1索拉非尼+大豆异黄酮组、2 mmol·L^-1索拉非尼+大豆异黄酮组、4 mmol·L^-1索拉非尼+大豆异黄酮组、6 mmol·L^-1索拉非尼+大豆异黄酮组,应用噻唑蓝法检测各组细胞增殖情况,划痕实验检测对照组、大豆异黄酮组、2 mmol·L^-1索拉非尼组、2 mmol·L^-1索拉非尼+大豆异黄酮组、4 mmol·L^-1索拉非尼组、4 mmol·L^-1索拉非尼+大豆异黄酮组细胞迁移情况,实时荧光定量-聚合酶链反应法检测对照组、大豆异黄酮组、4 mm...     

小檗碱对人胶质瘤T98G细胞迁移和侵袭的抑制作用及其机制

目的：探讨小檗碱(BBR)对人胶质瘤T98G细胞脂肪酸的调控作用及细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明其潜在的作用机制。方法：对数生长期T98G细胞分为对照组和不同浓度(25、50及100 mg·L^-1) BBR组,采用细胞划痕愈合实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞侵袭率。对数生长期T98G细胞分为对照组和100 mg·L^-1 BBR组,质谱法检测2组细胞中脂肪酸含量。对数生长期T98G细胞分为对照组和不同浓度(50、 100及150 mg·L^-1) BBR组,采用Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K (p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT (p-AKT)、固醇调节元件结合蛋白1 (SREBP-1)和脂肪酸合成酶(FASN)蛋白表达水平。应用基因沉默技术抑制FASN表达,将对数生长期T98G细胞分为对照组、shFASN1组和shFASN2组,采用Western blotting法检测各组细胞中FASN蛋白表达水平,克隆形成实验...     

枸杞多糖对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞中NLRP3炎症小体/细胞焦亡信号通路的影响

目的 观察枸杞多糖(LBP)对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体/细胞焦亡信号通路的影响。方法 将体外培养的ARPE-19细胞,随机分为5组,即正常组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖)、高糖组(55.5 mmol·L^-1葡萄糖)、LBP低浓度组(55.5 mmol·L^-1葡萄糖+100μg·mL^-1LBP)、LBP中浓度组(55.5 mmol·L^-1葡萄糖+200μg·mL^-1LBP)和LBP高浓度组(55.5 mmol·L^-1葡萄糖+400μg·mL^-1LBP)。采用免疫荧光观察各组细胞中NLRP3蛋白的表达,Western blot检测炎症小体NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和其下游细胞焦亡蛋白消皮素D(GSDMD)的相对表达量,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素(interleukm,...     

睾酮在体外对人卵巢颗粒细胞SVOG凋亡的影响及其内质网应激机制

目的：探讨睾酮在体外对颗粒细胞凋亡的诱导作用,并阐明其作用机制。方法：噻唑蓝(MTT)比色法检测人卵巢颗粒细胞SVOG的细胞增殖抑制率,筛选最佳药物作用浓度后,将SVOG细胞分为对照组、睾酮组(1.0×10^-5 mol·L^-1睾酮)、睾酮+氟他胺组(1.0×10^-5 mol·L^-1睾酮+1.0×10^-5 mol·L^-1氟他胺)、睾酮+牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)组(1.0×10^-5 mol·L^-1睾酮+1.5 g·L^-1 TUDCA)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组SVOG细胞中剪切型X盒结合蛋白1(XBP1s)、激活转录因子4 (ATF4)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)和死亡受体5(DR5)mRNA表达水平,流式细胞术检测各组SVOG细胞凋亡率。结果：与对照组比较,睾酮组SVOG细胞形态改变,异型细胞增多,胞质中出现较多颗粒,培养基中细胞碎片增多,SVOG细...     

Sirtuins蛋白在双酚A诱导的雄性生殖系统损伤模型小鼠睾丸组织和GC-2细胞中的表达及其意义

目的：探讨Sirtuins (Sirt)蛋白家族在双酚A (BPA)诱导的雄性生殖系统损伤细胞和动物模型中的作用,阐明其对BPA诱导的雄性生殖系统损伤的影响。方法：40只昆明种小鼠随机分为对照组、低剂量BPA组(给予3 mg·kg^-1·d^-1 BPA)、中剂量BPA组(给予30 mg·kg^-1·d^-1 BPA)和高剂量BPA组(给予300 mg·kg^-1·d^-1 BPA),每组10只。低、中和高剂量BPA组小鼠采用玉米油(0.01 mL·g^-1)配成相应浓度BPA灌胃,对照组小鼠给予0.01 mL·g^-1玉米油。5周后,检测各组小鼠体质量、睾丸指数和附睾指数,计算机辅助精液分析(CASA)系统检测各组小鼠精子质量,HE染色观察各组小鼠睾丸组织形态表现,Western blotting法检测各组小鼠睾丸组织中Sirt1～Sirt7蛋白表达水平。小鼠GC-2细胞分为0、20、40和80μmol·L^-1     

黄芩素对人舌鳞状细胞癌CAL27细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：探讨黄芩素对人舌鳞状细胞癌(简称舌鳞癌) CAL27细胞增殖的影响,阐明其潜在的作用机制。方法：将对数生长期CAL27细胞分为对照组和不同浓度(12.5、25.0、50.0、100.0和200.0μmol·L^-1)黄芩素组,采用结晶紫染色法观察各组细胞克隆形成情况,CCK-8法检测各组细胞增殖率,2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测各组细胞中活性氧(ROS)水平,罗丹明123 (Rhodamine123)荧光探针检测各组细胞线粒体膜电位(MMP)水平。对数生长期CAL27细胞分为对照组和不同浓度(50、100和200μmol·L^-1)黄芩素组,采用流式细胞术检测各组不同细胞周期细胞百分率和细胞凋亡率。对数生长期CAL27细胞分为对照组、不同浓度(50和100μmol·L^-1)黄芩素组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、50μmol·L^-1黄芩素+NAC组和100μmol·L^-1黄芩素+NAC组,采用DCFH-DA荧光探针和Rhodamine123荧...     

胰高血糖素样肽1受体激动剂对高糖高脂环境下大鼠心肌细胞损伤的改善作用及其铁死亡机制

目的：探讨胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)激动剂Exendin-4 (E4)对高糖高脂(HGHL)环境下心肌细胞损伤的影响,阐明其相关机制。方法：大鼠心肌H9C2细胞分为对照组、HGHL组、HGHL+E4组和HGHL+E4+铁死亡激活剂(Erastin)组,H9C2细胞采用33 mmol·L^-1葡萄糖和500μmol·L^-1棕榈酸脂诱导HGHL模型,HGHL+E4组和HGHL+E4+Erastin组H9C2细胞在诱导形成HGHL细胞模型后分别采用100 nmol·L^-1 E4和5μmol·L^-1 Erastin进行处理,CCK-8法检测各组细胞存活率,Hoechst 33258荧光染色法观察各组细胞凋亡情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测各组细胞中活性氧(ROS)水平,采用相关试剂盒检测各组细胞中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平,JC-1染色法检测各组细胞中线粒体膜电位(MMP)水平,FerroOrange荧光探针检测各组细...     

高糖条件下沉默LRP6通过Wnt/β-catenin途径抑制大鼠视网膜Müller细胞的自噬与凋亡

目的:探究在高糖作用下大鼠视网膜Müller细胞中低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)的表达及其对高糖条件诱导的Müller细胞自噬与凋亡的作用和机制。方法:体外培养大鼠视网膜Müller细胞,采用RT-PCR与Western blotting检测高糖条件下Müller细胞中LRP6 mRNA和蛋白的表达水平;利用siRNA干扰技术沉默Müller细胞中的LRP6,并分别在葡萄糖浓度为5.6 mmol·L^-1(NG)与35 mmol·L^-1的DMEM培养液(HG)中进行培养,按处理方式的不同将Müller细胞分为葡萄糖浓度为5.6 mmol·L^-1的DMEM培养的正常葡萄糖组(NG组)、葡萄糖浓度为35 mmol·L^-1的DMEM培养的转染si-NC组(HG+si-NC组)和si-LRP6的Müller细胞组(HG+si-LRP6组);采用Western blotting检测各组Müller细胞中自噬相关蛋白P62的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ之值、Beclin1与Atg12-Atg5复合体的表达;共...     

姜酮通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻OGD/R后氧化应激损伤对HT22细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨姜酮对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)后小鼠海马神经元HT22细胞的保护作用,阐明其相关作用机制。方法：培养HT22细胞,设置不同OGD/R时间梯度,建立OGD/R细胞损伤模型。HT22细胞分为对照组、OGD/R组、OGD/R+1μmol·L^-1姜酮组、OGD/R+10μmol·L^-1姜酮、OGD/R+100μmol·L^-1姜酮组和OGD/R+0.2%二甲亚枫(DMSO)组,CCK-8法检测各组细胞活性并计算各组细胞存活率,确定姜酮最适药物浓度。细胞分为对照组、OGD/R组、OGD/R+姜酮组和OGD/R+姜酮+核因子E2相关因子2 (Nrf2)抑制剂(ML385)组,OGD/R+姜酮组细胞经姜酮给药处理4 h后予以OGD 8 h和复糖复氧8 h处理,OGD/R+姜酮+ML385组细胞在姜酮给药前予以10μmol·L^-1 ML385预处理6 h, CCK-8法检测各组细胞活性,Western blotting法检测各组细胞中Nrf2、血红素加氧酶1 (HO-1)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-...     

当归红芪超滤物对X射线引起人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的：探讨当归红芪超滤物(UFE-AH)对X射线引起人脐静脉内皮细胞(HUVECs损伤的保护作用,阐明其可能的机制。方法：体外培养HUVECs,采用不同剂量(0、2、4、6、8和10 Gy) X射线辐射,筛选出最佳辐射剂量(6 Gy);用不同浓度(0、 50、100、200、400、600、800和1 000μg·L^-1 ) UFE-AH干预HUVECs,筛选出最佳促增殖浓度(100、200和400μg·L-1)。实验分为空白组、模型组(6 Gy X射线)、低剂量UFE-AH组(6 Gy X射线+100μg·L^-1 UFE-AH)、中剂量UFE-AH组(6 Gy X射线+200μg·L^-1 UFE-AH)和高剂量UFE-AH组(6 Gy X射线+400μg·L^-1 UFE-AH)。CCK-8法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,透射电子显微镜下观察各组细胞超微结构,Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)、磷酸化Akt (p...     

丙泊酚对脂多糖诱导肝癌细胞炎症反应、增殖、黏附、侵袭的影响及机制

目的 探讨丙泊酚对脂多糖(LSP)诱导的人肝癌细胞炎症反应、增殖、凋亡、黏附、侵袭的影响及机制。方法 将对数生长期肝癌MHCC97H细胞按随机数字表法分为对照组、LPS组和低剂量丙泊酚、中剂量丙泊酚、高剂量丙泊酚组。对照组细胞不做干预；LPS组细胞给予1 mg·L^-1 LPS干预；低剂量丙泊酚组、中剂量丙泊酚组和高剂量丙泊酚组均给予1 mg·L^-1 LPS干预24 h后，再分别给予12.5、25.0和50.0μmol·L^-1丙泊酚干预。采用酶联免疫吸附试验检测各组细胞培养液中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平，采用细胞计数试剂盒-8测定各组细胞活力，采用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷法检测各组细胞增殖情况，采用Hoechst 33258染色法检测各组细胞凋亡情况，采用细胞黏附实验测定各组黏附细胞数，采用Transwell小室检测各组细胞的侵袭能力，采用蛋白免疫印迹法测定细胞周期素D1(Cyclin D1)、caspase-3、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N...     

八宝丹体外抑制淋巴管生成的作用机制研究

目的:探讨八宝丹(babao dan, BBD)体外抑制淋巴管生成的作用机制。方法:将人淋巴内皮细胞(human lymphatic endothelial cells, HLECs)分为不同浓度的BBD组,即0 g·L^-1 BBD组、0.25 g·L^-1 BBD组、0.5 g·L^-1 BBD组及0.75 g·L^-1 BBD组。MTT法检测细胞增殖情况;Hoechs33258染色实验观察细胞凋亡情况;细胞划痕实验考察细胞损伤修复能力;Transwell实验考察细胞的迁移能力;管腔形成实验分析细胞淋巴管生成能力;Western Blot检测血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)、血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9蛋白表达水平。结果:B...     

表没食子儿茶素没食子酸酯乙基化衍生物Y6对耐阿霉素人肝癌细胞丝裂原活化蛋白激酶通路的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)乙基化衍生物Y₆在逆转耐阿霉素(DOX)人肝癌细胞耐药过程中对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)途径的影响。方法 将对数生长期的耐DOX人肝癌细胞BEL-7404/DOX随机分为空白对照组、DOX组、DOX+维拉帕米(VER)组、DOX+EGCG组、DOX+低剂量Y₆组和DOX+高剂量Y₆组,空白对照组不加任何药物,DOX组加入终浓度为10μmol·L^-1的DOX,DOX+VER组加入终浓度为10μmol·L^-1的DOX和10μmol·L^-1的VER,DOX+EGCG组加入终浓度为10μmol·L^-1的DOX和10μmol·L^-1的EGCG,DOX+低剂量Y₆组加入终浓度为10μmol·L^-1的DOX和10μm...