LncRNA-BLACAT1调节CyclinD1/CDKN2B轴对非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制

目的：探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者癌组织和癌细胞中长链非编码RNA（LncRNAs）BLACAT1的表达特征及其调控机制,阐明BLACAT1在NSCLC发生发展中的作用和临床意义。方法：高通量基因表达数据库（GEO数据库）分析BLACAT1在NSCLC组织的表达特征,Kmplot网站分析BLACAT1表达与NSCLC患者生存预后的联系。qRT-PCR法检测BLACAT1在25例NSCLC患者癌组织和癌旁组织及NSCLC细胞系中的表达情况。将si-NC（阴性对照）和si-BLACAT1（抑制物）转染入NSCLC A549细胞作为si-NC组和si-BLACAT1组,qRT-PCR法分别检测各组A549细胞中BLACAT1 mRNA表达水平,流式细胞术检测各组细胞不同细胞周期细胞百分率,细胞集落生成实验检测各组细胞克隆形成能力,CCK8实验检测各组细胞增殖活性,qRT-PCR和Western blotting法检测各组A549细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B（CDKN2B）mRNA和蛋白表达水平。结果：GEO数据库的NSCLC数据集GSE18842和GSE19804、qRT-PCR法检测以及Kmplot分析,与癌旁组织比较,NSCLC患者癌组织中BLACAT1表达水平明显升高（P< 0.01）;NSCLC患者癌组织中BLACAT1低表达患者的存活时间明显高于BLACAT1高表达患者（P=0.011）。与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞中BLACAT1 mRNA表达水平明显降低（P< 0.05）;与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞周期G₁期细胞百分率增加（P< 0.05）,S期细胞百分率降低（P< 0.05）,细胞克隆形成能力和细胞增殖活性均降低（P< 0.05或P<0.01）;与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞中CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P< 0.05）,而CDKN2B mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P< 0.05或P<0.01）。结论：LncRNA-BLACAT1在NSCLC患者癌组织和癌细胞中表达升高,下调BLACAT1表达可通过调节CyclinD1/CDKN2B轴从而抑制NSCLC A549细胞增殖,BLACAT1可作为NSCLC患者的潜在治疗靶点。     

长链非编码RNA NORAD在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖能力的影响

目的 研究长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA (NORAD)在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖的影响。方法 RNA-seq分析肺癌组织中LncRNA及miRNA的表达改变,根据表达量确定候选LncRNA;q RT-PCR检测分析肺癌组织及肺癌细胞中候选NORAD的表达;免疫荧光检测分析肺癌组织中细胞增殖核抗原Ki-67的表达;通过线性回归分析肺癌组织中NORAD与Ki-67的表达相关性。生物在线软件联合miRNA测序结果,并通过荧光素酶检测分析NORAD与miR-26b-5p、miR-654-5p结合情况。将A549细胞分成空白对照组(Control)、si-NORAD组、miR-26b-5p mimics、miR-654-5p mimics、si-NORAD与miR-26b-5p mimics联合组、si-NORAD与miR-654-5p mimics联合组,利用EdU检测细胞增殖能力、Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡、蛋白印迹(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白(Bad、Bcl-2、Cleaved Caspase-3)的表达。结果 NORAD...     

长链非编码RNA PVT1对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移能力的影响及其机制研究

目的 通过上调或者下调PVT1的表达，分析探究长链非编码RNA PVT1在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和迁移能力中的作用及机制，并在此基础上运用RNA-Seq分析PVT1的靶向基因，说明其作用机理。 方法 ①通过TCGA数据库(The Cancer Genome Atlas)分析NSCLC细胞中PVT1的表达与NSCLC患者生存时间之间的关系；②探究PVT1上调或下调对NSCLC细胞增殖及迁移能力的影响；③运用RNA-seq技术探究PVT1的下游靶基因，然后运用siRNA沉默该基因，探究此基因对NSCLC细胞增殖和迁移能力。 结果 ①PVT1的高表达与肺癌患者存活时间减少有显著关系(P<0.001)；②PVT1高表达可以显著促进肺癌患者肿块体积的增大，并且与肿瘤分期和淋巴结转移程度密切相关(均P<0.05)；③过表达PVT1可以促进NSCLC细胞的增殖及迁移；④用Si-RNA下调PVT1可以抑制NSCLC细胞的增殖及迁移；⑤PVT1下调会使LATS2的表达水平显著升高。 结论 PVT1通过表观调控LATS2促进NSCLC细胞增殖和迁移能力。      

miR-29c过表达载体的构建及其对95D肺癌细胞增殖的影响

目的构建miR-29c真核表达载体并转染95D肺癌细胞,观察miR-29c过表达对95D细胞增殖能力的影响。方法克隆miR-29c片段插入质粒pcDNA3．1,构建miR-29c表达质粒pcDNA3．1-miR-29c;通过脂质体瞬时转染人肺癌细胞株95D,荧光PCR检测细胞miR-29c表达水平,MTT法检测过表达miR-29c对细胞增殖能力的影响。结果重组质粒pcDNA3．1-miR-29c经酶切及测序证明构建成功,荧光PCR证实转染后95D细胞miR-29c表达水平显著升高,是对照组的36倍。MTT检测结果表明,过表达miR-29c的95D细胞增殖受到显著抑制,至72h抑制率最高,达38．63％。结论成功构建miR-29c真核表达质粒pcDNA3．1-miR-29c,初步观察显示过表达miR-29c显著抑制95D肺癌细胞增殖效应。为进-步深入研究miR-29c对肺癌的作用打下良好基础。     

LINC00511表达对鼻咽癌细胞增殖和凋亡影响及机制

目的 探讨长基因间非编码RNA 00511(LINC00511)在鼻咽癌组织中的表达及其对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响和分子机制.方法 采用实时定量PCR(RT-qPCR)分析鼻咽癌组织和癌旁组织中LINC00511和miR-590-3p表达水平.应用双荧光素酶报告实验和RT-qPCR分析LINC00511对miR-59...     

胃癌中lncRNA HOXA-AS2的表达及其对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 分析lncRNA HOXA-AS2在胃癌组织中的表达水平及其对胃癌恶性生物学的影响。方法 采用qPCR方法检测胃癌组织和胃癌细胞系中lncRNA HOXA-AS2的表达水平;通过生物信息分析在线网站Kaplan-Meier Plotter 分析lncRNA HOXA-AS2对胃癌患者预后的影响;分析lncRNA HOXA-AS2表达水平与胃癌患者临床病理特征之间的关系;构建干扰lncRNA HOXA-AS2表达的细胞株,利用CCK-8、克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验、分析下调lncRNA HOXA-AS2对胃癌细胞增殖能力,迁移能力,侵袭能力的影响。结果 与癌旁组织比较,胃癌组织中lncRNA HOXA-AS2的表达水平显著上调;与人正常胃黏膜细胞GES比较,胃癌细胞系中lncRNA HOXA-AS2的表达水平显著升高(P＜0.05);生存分析表明,lncRNA HOXA-AS2的高表达与胃癌患者的不良预后相关;lncRNA HOXA-AS2的表达水平与胃癌分期,淋巴结转移和分化程度相关(P＜0.05);转染siRNA的胃癌细胞中lncRNA HOXA-AS2的表达水平显著下降(P＜0.05),其细胞增殖、迁移和侵袭能力也显著下降(P＜0.05)。结论 lncRNA HOXA-AS2在胃癌中发挥癌基因的作用且与预后相关,下调lncRNA HOXA-AS2的表达可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

人LncRNA MIR31HG基因稳定转染PC9细胞系的构建及其对细胞增殖和迁移的影响

目的：检测过表达人MIR31HG基因对PC9细胞增殖和迁移的影响,阐明促癌基因MIR31HG的作用机制。方法：通过RT-PCR法扩增长链非编码RNA（LncRNA）MIR31HG全长序列,分子克隆至pcDNA3.1（-）真核表达载体,将pcDNA3.1-MIR31HG过表达质粒和对照质粒pcDNA3.1分别转染人肺癌PC9细胞。采用酶切鉴定法检测MIR31HG过表达载体的构建情况。通过G418药物筛选建立稳定过表达MIR31HG的PC9细胞系（PC9-pcDNA3.1-MIR31HG,稳定转染组）和对照细胞系（PC9-pcDNA3.1,空载体组）。采用RT-PCR法检测稳定转染细胞系中MIR31HG基因表达水平,采用CCK-8法和划痕愈合实验检测PC9细胞增殖活性和迁移能力。结果：琼脂糖凝胶电泳,成功扩增得到了MIR31HG的特异基因片段;MIR31HG真核表达载体经双酶切后分别产生目的基因和载体2个片段。RT-PCR法检测,稳定转染组细胞中MIR31HG mRNA表达水平明显高于空载体组（P<0.05）。CCK-8检测,在培养24、36和48h时,稳定转染组细胞增殖活性明显高于空载体组（P<0.01）。划痕愈合实验,在培养48h时,稳定转染组细胞划痕愈合率明显高于空载体组（P<0.05）。结论：成功构建了人LncRNA MIR31HG基因的真核过表达载体和过表达MIR31HG的稳定转染PC9细胞系,且MIR31HG过表达能够促进肺癌PC9细胞增殖和迁移。     

长链非编码 RNA HOTAIR 对肾癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨长链非编码 RNA(LncRNA) HOTAIR 对肾癌细胞系786-O 和 ACHN 增殖和凋亡的影响。方法两种细胞系转染针对 HOTAIR 的小干扰 RNA(siRNA),利用qRT-PCR 检测干扰效率,再分别以噻唑蓝(MTT)法、ELISA法和 Hochest 染色法检测 HOTAIR 表达降低后786-O 和ACHN 细胞在增殖和凋亡方面的变化。结果 siRNA 可有效降低 HOTAIR 表达(P <0．05);减少 HOTAIR 含量可显著抑制两种细胞的增殖(P <0．05),同时增加细胞凋亡(P <0．05)。结论 HOTAIR 具有促进肾癌细胞生长的作用。     

长链非编码RNA525893重组慢病毒载体的构建及其对宫颈癌细胞增殖的影响

［摘要］目的: 构建含长链非编码RNA525893（lnc525893）的重组慢病毒载体,观察其对宫颈癌细胞增殖的影响。方法: 以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)为模板扩增出lnc525893基因片段,并将其插入至慢病毒载体pCDH CMV MCS EF1 copGFP中,构建重组质粒pCDH lnc525893。将重组质粒pCDH-lnc525893、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共同转染人胚肾上皮细胞（293 T细胞）,包装含有lnc525893的重组慢病毒,采用梯度稀释法测定病毒滴度。将重组慢病毒感染宫颈癌HeLa细胞,通过实时荧光定量PCR（quantitative real time PCR,qRT PCR）检测HeLa细胞中lnc525893的表达;采用细胞增殖实验（cell counting kit-8,CCK-8）检测过表达lnc525893对HeLa细胞增殖的影响。结果： 质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果证实重组质粒pCDH-lnc525893构建成功。梯度稀释法测得重组慢病毒滴度约为1×107pfu/mL。重组慢病毒感染HeLa细胞后,qRT PCR结果显示细胞中lnc525893表达显著升高;CCK-8结果表明,高表达lnc525893可以抑制HeLa细胞的增殖。结论： 成功构建含lnc525893的重组慢病毒载体,该长链非编码RNA能够抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖     

长链非编码RNA-C00473在子宫内膜癌中的表达及其通过miR-15b/cyclin D1对Ishikawa细胞增殖的影响

目的 观察长链非编码RNA（lncRNA）C00473在子宫内膜癌组织中的表达,及其通过调控微小RNA-15b（miR-15b）对子宫内膜癌细胞（Ishikawa）增殖能力的影响。方法 qRT-PCR检测20例子宫内膜癌组织（研究组）与20例正常子宫内膜组织（正常组）中lncRNA C00473的表达情况。在Ishikawa细胞中转染过表达质粒（pcDNA3.1-C00473）、siRNA C00473以及空质粒（pcDNA3.1）,分别为过表达组、抑制组及对照组（NC组）。CCK8 法检测各组Ishikawa细胞增殖情况。qRT-PCR、western blot检测各组中lncRNA-C00473、miR-15b及其靶基因细胞周期蛋白 D1（cyclin D1）的表达情况。结果 与正常组相比,研究组lncRNA-C00473的表达增高（P＜0.05）。qRT-PCR显示Ishikawa细胞中lncRNA C00473过表达与抑制效果显著（P＜0.05）;与NC组相比,过表达组细胞增殖能力升高,抑制组细胞增殖力降低,差异有统计学意义（均P＜0.05）;过表达组miR-15b水平低于抑制组,cyclin D1在mRNA和蛋白水平均高于抑制组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 lncRNA-C00473与子宫内膜癌相关,其可能通过miR-15b/cyclin D1途径影响子宫内膜癌细胞增殖能力。     

细胞增殖周期调控基因p16在非小细胞肺癌中的表达和意义

目的 探讨Ｐ１６对非小细胞肺癌增殖的作用及临床诊断应用的价值。方法 运用枸橼酸－ＡＢＣ－微波免疫组化技术检测Ｐ１６在７３例原发性非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）,６例肺炎性假瘤和５例癌旁正常肺组织中的表达情况。结果 Ｐ１６阳性率为２５％,明显代于下沉肺组织及肺炎性假瘤（８２％）;Ｐ１６的表达与肺门淋巴结转移和组织学分级有关;Ｐ１６的表达,肺门淋巴结转移和组织学分级有关;Ｐ１６的表达、肺门淋巴结转移和组织     

lncRNA SOX2OT在卵巢癌细胞系中的表达及其对卵巢癌生物学行为的影响

目的 探讨lncRNA SOX2OT在卵巢癌细胞系中相对表达情况,评估其对卵巢癌生物学行为的影响。 方法 将2017年4月—2019年4月宁波市鄞州人民医院治疗的112例卵巢癌患者纳入研究,分析卵巢癌及卵巢癌旁组织、卵巢癌细胞系lncRNA SOX2OT表达情况,并测试其影响增殖及周期、迁移状况。 结果 卵巢癌组织内SOX2OT mRNA表达(3.50±0.13)高于癌旁组织(1.59±0.21,t=81.045,P<0.01);HO-8910PM细胞株内lncRNA SOX2OT表达(5.78±0.04)高于HO-8910细胞株(1.05±0.11,t=405.918,P<0.05)。空白对照组克隆细胞数、迁移细胞数、侵袭细胞数高于siSOX2OT-1组、siSOX2OT-2组;阴性对照组克隆细胞数、迁移细胞数、侵袭细胞数高于siSOX2OT-1、siSOX2OT-2组(均P<0.01)。子宫内膜样癌、浆液性卵巢癌、黏液性卵巢癌lncRNA SOX2OT表达分别为4.12±0.25、3.68±0.42、3.44±0.31,组间差异无统计学意义(均P>0.05)。 结论 lncRNA SOX2OT在卵巢癌细胞系中呈异常高表达,敲低lncRNA SOX2OT表达可对卵巢癌细胞的增殖及迁移、侵袭进行抑制,加快卵巢癌细胞凋亡。      

子宫内膜癌中lncRNA KRT7-AS的表达及其对HEC-1A细胞增殖的影响

目的：探索子宫内膜癌(EC)中长链非编码RNA KRT7-AS的表达及其对HEC-1A细胞增殖的影响。方法：采用在线数据库检测分析KRT7-AS在EC及癌旁正常组织中的表达;用RT-qPCR法检测人子宫内膜癌细胞系HEC-1A、HEC-1B、KLE、B-MD-1C细胞中KRT7-AS的表达;分别构建KRT7-AS敲低(shKRT7-AS)和对照(shCtrl)慢病毒。慢病毒感染HEC-1A细胞并培养5 d后,采用RT-qPCR检测敲低效率,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术测定细胞周期和凋亡。结果：在EC组织中,KRT7-AS表达高于癌旁组织(P<0.05),KRT7-AS高表达患者的总生存数低于低表达患者(P<0.05)。KRT7-AS敲低组的HEC-1A在第5天增殖速率显著降低(P<0.05)。KRT7-AS敲低导致HEC-1A细胞停滞于G0/G1期(P<0.05);细胞凋亡比例则显著增加(P<0.05)。结论：KRT7-AS异常高表达促进EC的发展。     

GLI1真核表达载体的构建、鉴定及其对肺癌PC9细胞增殖的影响

构建GLI1真核表达载体,探讨过表达GLI1对肺癌PC9细胞增殖的影响。