新疆地区多民族常见耳聋基因热点突变调查结果分析

目的 调查分析新疆地区汉族、维吾尔族、回族、哈萨克族人群遗传性聋常见致聋基因和热点突变的携带情况。方法 收集5 860例新疆地区11个县市耳聋高危家庭(4 608例)及散发耳聋患者(1 252例)的外周静脉血标本,其中汉族2 349例、维吾尔族2 840例、回族471例、哈萨克族200例,应用微阵列芯片法对GJB2基因(c.35delG、c.176＿191del16、c.235delC、c.299＿300delAT)、GJB3基因(c.538C>T)、SLC26A4基因(c.2168A>G、c.919-2A>G)、线粒体12SrRNA(MT-RNR1基因)(1494C>T、1555A>G)4个常见耳聋基因的9个热点突变位点进行检测。结果 共检出1 294例携带致聋基因变异,总突变检出率22.1%,其中GJB2:9.35%,MT-RNR1:7.25%,SLC26A4:4.74%,GJB3:0.29%,双基因突变26例,占0.44%。4个民族高危家庭及散发聋人中均检出GJB2、MTRNR1和SLC26A4基因突变,汉族和维吾尔族人群中GJB2基因检出率最高,分...     

2个耳聋家系中常见耳聋基因的基因型与表型相关性分析

目的:检测耳聋家系中耳聋患者的基因型,结合听力损失程度,分析常见耳聋基因的基因型与表型之间的关系。方法:选取2个耳聋小家系,检测4个耳聋基因的9个位点的突变,同时对家系成员进行纯音测听检查。结果:LGR-1家系中,Ⅰ:1、Ⅰ:2、Ⅰ:4和Ⅱ:5基因型为单杂合突变,表型为轻中度聋;Ⅱ:3和Ⅱ:4基因型为双杂合突变,Ⅱ:2和Ⅲ:1基因型为复合杂合突变,表型均为重度或极重度聋。HXL-2家系中,Ⅰ:1和Ⅰ:2基因型为单杂合突变,表型为轻中度聋;Ⅱ:2、Ⅱ:3、Ⅱ:5和Ⅲ:2基因型为单杂合突变,但表型为重度或极重度聋;Ⅱ:1基因型为双杂合突变,表型为极重度聋;Ⅲ:1基因型为单杂合突变,左耳为中度聋,右耳为中重度聋。结论:单杂合突变患者表型多为轻度或中度聋,而基因型为单杂合突变的重度或极重度聋患者可能存在另外一个没有检测到的突变;基因型为双杂合突变或复合杂合突变的患者,表型多为重度或极重度聋;基因型与听力表型之间存在一定的正相关性。     

GJB2基因在遗传性聋中的检测

目的对遗传性聋家系进行GJB2基因突变检测,为该病的基因诊断提供依据。方法采用PCR直接测序法对20个非综合征型遗传性聋家系的先证者(均为耳聋患者)进行GJB2基因的突变检测。结果发现了三种碱基改变:109G>A、79G>A和341G>A。109G>A是已报道的具有争议的致病突变,本实验在两个隐性遗传性聋家系的先证者中检测到109G>A纯合突变,且与耳聋共分离。79G>A和341G>A是已报道的多态。结论本研究发现了具有争议的致病突变109G>A的纯合突变,极可能导致隐性遗传性聋。     

遗传性聋病相关诊断技术及其意义

耳聋是临床上最常见的遗传病之一,也是导致言语交流障碍最常见的疾病。据各国统计,有0.05%～0.1%的儿童出生时为极重度耳聋,同时50%以上的儿童期耳聋是由于遗传因素造成的。由于导致语前聋的环境因素的存在,有时无法判断患者是否为遗传性聋。对     

特发性突聋患者GJB2 235delC突变分析

目的：分析GJB2 235delC突变在特发性突聋患者中的发生频率,探寻其与特发性突聋发病的可能相关性。方法：收集234例特发性突聋患者,以同期听力正常的80例体检人员为对照组。分别采外周静脉血,提取基因组DNA,经聚合酶链反应扩增GJB2基因编码区后,用限制性内切酶酶切的方法筛查235delC位点突变,同时对特发性突聋患者的临床资料汇总分析。结果：234例特发性突聋患者中,5例检测出GJB2 235delC杂合突变,突变检出率为2.1%,未检测出235delC纯合突变;对照组中未检出GJB2 235delC突变。2组人群235delC突变检出率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：特发性突聋患者中GJB2 235delC突变检出率低,提示该突变位点可能与特发性突聋的发病无相关性。     

86例非综合征型耳聋患者耳聋基因芯片检测结果分析

目的探讨遗传性耳聋基因芯片用于非综合征型耳聋患者检测的临床意义。方法采用遗传性聋基因芯片试剂盒对86例非综合征型耳聋患者基因组DNA的GJB2、SLC26A4、GJB3和mtDNA12s rRNA四个耳聋相关基因的9个致聋突变位点进行检测;对所有患者进行颞骨高分辨率CT（HRCT）、头颅MRI、内听道扫描,耳蜗水成像。结果在86例非综合征型耳聋患者中携带所检测热点耳聋相关基因突变者占51.16%;其中GJB2基因突变携带者24例(27.91%,24/86),GJB3基因突变携带者2例,SLC26A4基因突变携带者19例,颞骨CT均显示前庭水管扩大,而且均伴有耳蜗发育畸形,表现为蜗顶发育不全;mtDNA12s rRNA基因突变0例,考虑与样本量少有关。结论遗传性聋基因芯片试剂盒可以考虑作为新疆地区耳聋患者的快速诊断方法,但基因测序法应作为必要补充。大前庭水管综合征患者的SLC26A4基因检测结果与其颞骨影像学检查结果吻合。     

遗传性传导性聋家系的遗传学特征分析

目的探讨遗传性传导性聋的家系遗传学特征。方法利用解放军总医院耳鼻咽喉研究所遗传资源网络所收集的遗传性聋家系资源,对发现的一个特殊的常染色体显性遗传的传导性听力损失伴上睑下垂大家系（028家系）,追踪调查了四代成员44人,对现存家系成员中具有遗传信息的19人进行了全身体检及听觉系统功能的检查,对2名传导性听力损失患者进行鼓室探查术。结果9名患者表现为先天性传导性听力损失伴双侧上睑下垂,1名患者表现为单纯上睑下垂,2名患者表现为单纯传导性聋。对2名典型传导性聋患者进行的鼓室探查术发现,其传导性听力损失源于中耳发育畸形（听骨链畸形与镫骨固定）。家系图谱分析显示该家系为常染色体显性遗传性聋家系。结论028家系是目前国内发现的第一个传导性聋表型大家系,进一步的基因定位与克隆研究将为遗传性传导性聋分子病理机制的研究创造条件。     

赤峰市特教学校耳聋患者GJB2和GJB3及GJB6基因突变分析

目的:利用基因诊断的方法调查内蒙古自治区赤峰市特教学校非综合征耳聋患者的常见分子病因,对GJB2、GJB3、GJB6基因编码区突变进行分析.方法:调查对象来自赤峰市特教学校非综合征耳聋患者134例(耳聋组),对照组为中国北方地区(北京、河北、内蒙、山西)听力正常者100例.所有受检者均采集外周血并提取DNA,首先进行GJB2基因编码区测序,对携带GJB2单杂合突变的患者进一步检查GJB6 del(GJB6-D13S1830)突变并进行GJB6编码区测序.对除GJB2基因、线粒体A1555G突变相关性耳聋及前庭水管扩大综合征外的分子病因不明的91例非综合征耳聋患者进行GJB3基因编码区测序.结果:134例非综合征耳聋患者及100例正常对照中共检测到6种GJB2基因新的突变方式.耳聋组41例携带GJB2病理性突变,其中双等位基因突变22例,单等位基因突变19例,在GJB2单等位基因突变的耳聋患者中未检测到GJB6 del(GJB6-D13S1830)及编码区其他突变;对照组4例携带GJB2基因病理性突变.在91例分子病因不明的耳聋患者及100例正常对照中共检测到3种GJB3基因新的突变方式.耳聋组2例携带GJB3基因病理性突变,均为杂合子,其中1例同时携带GJB2单等位基因突变235delC;对照组1例携带GJB3基因病理性突变.结论:通过GJB2、GJB6、GJB3基因编码区突变分析为赤峰市特教学校16.42%(22/134)的非综合征耳聋学生明确了分子病因;新发现的突变和多态丰富了中国人GJB2、GJB3基因突变及多态性图谱,为深入开展耳聋基因筛查奠定了基础.     

一个中国耳聋近亲婚配家系TMIE基因致病性新突变

目的对一个有近亲婚配史的常染色体隐性遗传性聋家系进行遗传学分析,明确其病因,为该家系的遗传咨询提供依据。方法首先,收集该家系成员的临床资料及外周血血样;其次,运用耳聋基因芯片对先证者进行167个已知耳聋基因检测;最后,对检出的致病变异在家系中进行Sanger测序验证。结果该家系先证者及其父亲为极重度感音神经性聋患者,均存在TMIE基因c.458_462delAAGGA纯合变异,母亲为c.458_462delAAGGA杂合变异。家系内该变异与耳聋表型共分离,此变异经查阅文献和数据库未见致病性报道。结论 TMIE基因c.458_462delAAGGA纯合变异为该家系耳聋患者的致聋遗传因素,并通过本研究首次明确了此变异为致病性变异。     

PCR-GeneScan法检测遗传性聋相关基因GJB2 235 delC和mtDNA A1555G突变

目的:检测GJB2 235delC杂合突变和mtDNA A1555G突变。方法:对120例样本进行诊断试验,其中测序GJB2 235delC杂合突变样本16例,mtDNA A1555G突变17例。用PCR方法对目标片段进行扩增,PCR产物在3100DNA sequencer(ABI)上聚丙烯酰胺胶毛细管电泳,GeneScan、GeneMarker软件数据分析。结果:120例样本均得到检测结果,检出GJB2 235delC杂合突变样本17例,mtDNA A1555G突变17例,1例正常样本误诊为235delC杂合突变而出现假阳性。结论:PCR-GeneScan技术可以同时检测2种不同基因的突变,单管多重PCR和GeneScan荧光标记法结合是同时检测多种突变一种新的思路,而且可能是一种有效的方法。     

Compound heterozygous GJB2 mutations associated to a consanguineous Han family with autosomal recessive non-syndromic hearing loss

Conclusion: This study demonstrates that the gap junction protein beta-2 gene (GJB2) p.R32C and p.L79Cfs*3 variants are associated to a consanguineous family with autosomal recessive non-syndromic hearing loss (ARNSHL). The p.R32C variant is found for the first time in the NSHL patients of Han Chinese origin. The finding sheds new light on the accurate genetic diagnosis and counseling for the family. Objective: ARNSHL is a highly heterogeneous genetic disease. ARNSHL usually displays non-progressive congenital or pre-lingual deafness. In this study, the aim is to detect the disease-causing mutation(s) in a Han family with ARNSHL. Methods: A consanguineous Han family with ARNSHL was enrolled. Two hundred ethnicity-matched unrelated subjects without any hearing impairments were used as normal controls. Exome sequencing and Sanger sequencing were applied to identify the causative mutation in the ARNSHL family. Results: Compound heterozygous variants c.94C?>?T (p.R32C) and c.235delC (p.L79Cfs*3) in the GJB2 gene were identified in the two patients of the ARNSHL family, and the heterozygous GJB2 c.94C?>?T and c.235delC variants were identified in his unaffected father and mother, respectively. The two variants in the GJB2 gene were absent in the 200 unrelated controls.     

湖北地区306例极重度聋患儿基因芯片筛查分析

目的：通过检测湖北地区极重度感音神经性聋患儿常见耳聋基因突变情况,分析该人群的分子病因学特点,为临床耳聋防治和遗传咨询提供参考。方法：收集306例湖北地区极重度感音神经性聋患儿,抽取外周血,提取DNA,应用遗传性耳聋基因芯片检测GJB2、GJB3、SLC26A4和线粒体12SrRNA4个基因的9个突变热点。对所有携带SLC26A4基因突变患者进行颞骨CT扫描。结果：306名患儿中,132例（43．14％）检出携带不同基因突变,其中有2例携带双基因突变。GJB2基因突变检出率为29．41％（90／306）,SLC26A4基因突变检出率为13．72％（42／306）,线粒体12SrRNA基因突变检出率为O．65％（2／306）。本组患者未检出GJB3基因突变。36例携带SLC26A4基因突变者颞骨CT扫描显示前庭水管扩大。结论：GJB2基因和SLC26A4基因是本组患儿最主要的致聋基因,其中235delC突变为最常见的突变位点,其次为1VS7—2A〉G突变。筛查SLC26A4基因常见突变有助于大前庭水管综合征的诊断。     

耳聋-掌跖皮肤角化综合征的连接蛋白基因型和表型分析

目的GJB2、GJB6、GJB3基因与遗传性耳聋及角化病有关，以GJB2、GJB6、GJB3基因为候选基因，研究1例伴有掌跖角化病的综合征型耳聋先证者的分子病因，探讨其表型及遗传特征。方法 采集先证者及其父母外周血并提取DNA，对GJB2、GJB6、GJB3基因编码区进行PCR扩增，以直接测序的方法进行突变分析。结果 先证者及其父母GJB3、GJB6基因测序未发现突变。先证者携带GJB2基因R75W单等位基因突变，其父母未携带此突变，在证实先证者与其父亲的亲子关系后明确先证者携带的R75W为新生突变。301名中国正常对照中未发现GJB2基因R75W突变。结论 在中国首次发现了GJB2基因新生突变R75W，此突变可能以显性方式遗传，导致耳聋-掌跖皮肤角化综合征。在不同种族R75W导致的耳聋多为双侧重度到极重度感音神经性聋。而皮肤表型的严重程度有所不同。     

产前诊断对遗传性耳聋家庭的生育指导

目的通过一典型的有再生育要求的耳聋家庭病例，具体阐述耳聋产前诊断为耳聋家庭提供科学生育指导的内容、过程及意义。方法此耳聋家庭育有一子，为先天性耳聋患者，父母均为昕力正常者。对先证者进行详细的体格检查、昕力学及影像学检查后，采集先证者及其父母的外周血并提取DNA，进行GJB2，SLC26A4（PDS）基因分析和线粒体DNA（mtDNA）A1555G位点突变检测。明确受检者基因型并向该家庭提供遗传学信息后，在母亲妊娠早期（约10周）行产前诊断取材并提取DNA，明确胎儿的基因型。结果先证者携带GJB2复合突变，父母为携带者，此耳聋家庭再发风险为25％，产前诊断显示胎儿仅携带一个母系突变，出生后随访听力正常。结论耳聋产前诊断可为遗传性耳聋家庭提供科学的生育指导。     

母系遗传药物性聋与非综合征性聋大家系与基因突变的研究

目的对一个氨基糖甙类药物性聋和非综合征聋的母系遗传性中国大家系进行遗传学分析,并发现全新的线粒体DNA C1494T突变.方法征集该家系中成员进行听力学检查,并收集提取DNA进行线粒体DNA PCR扩增分析,对其主要成员建立传代细胞系进行氨基糖甙类抗生素敏感试验和细胞氧消耗率检测.结果在没有接受氨基糖甙类抗生素时,一些母系遗传的成员表现为迟发/进行性听力下降,其程度不等,平均发病年龄自55岁(第2代)逐渐提前到10岁(第5代).氨基糖甙类抗生素可导致母系成员听力下降,而且接受药物的年龄似乎与听力下降程度有关.对该家系成员进行线粒体DNA测序发现高度保守的12S rRNA中1494位点C突变为T(C1494T),可以形成新的U1494-1555A碱基对,与耳聋有关的A1555G突变所造成的C1494-1555G碱基对结构相类似.当培养液中含有氨基糖甙类抗生素时,携带C1494T突变的4名听力遗传者和2名听力正常成员所建立的传代淋巴细胞系的细胞倍增时间显著延长,并且其细胞氧消耗总量显著降低.结论线粒体12S rRNA的A点是氨基糖甙类药物性聋的主要作用位点,而细胞核背景在氨基糖甙类药物性聋的发病中有重要作用,对C1494T突变的相关的耳聋发病中也有重要作用.     

An approach to the causes of early childhood deafness

In order to provide information on the etiology of early childhood deafness it is necessary to have at one's disposal a systematic methodology. In this way it is easier to ascertain the degree of certainty of the etiology of the deafness in any individual case. According to a predetermined methodology, the causes of deafness were studied in 60 pupils from an institute for the Deaf whose ages were between 10 and 15, and additionally in 33 of their deaf relatives. For this purpose there was at our disposal for each individual child an extensive history, all ascertainable medical data, and a physical and ophthalmological examination. In addition, a genealogical investigation up to the fifth generation was instituted in order to investigate consanguinity. In 22 of the 60 pupils a hereditary etiology was considered certain or probable, and in 23 of them a non hereditary etiology was accepted. In the remaining 15 the etiology was unascertainable. In 31 of the 33 deaf relatives, a hereditary etiology was considered certain or probable. In the group of hereditary etiology 25% were part of a syndrome. In approximately 15% of the 60 cases, consanguinity was detected with the help of genealogical investigation. In these cases there were also other arguments for an autosomal recessive inheritance.     

Parental attitudes toward genetic testing for prelingual deafness in China

Objective

Recent advances in molecular biology of hearing and deafness have made genetic testing an option for deaf individuals and their families. In China, DNA microarray and other genetic testing method has been applied to rapid genetic diagnosis of non-syndromic hearing loss. However, there is no information about the interests in such testing in China. The purpose of this study is to document the attitudes of parents with normal hearing who have one or more deaf children toward diagnostic, carrier, and prenatal genetic testing for deafness.

Methods

A structured, self-completion questionnaire was given to delegates at a conference held at Hubei Rehabilitation Research Center for Deaf Children, Wuhan, China on March 3, 2010. Of 366 surveys distributed, 290 were completed and returned.

Results

Ninety-four percent of the respondents had a positive attitude toward genetic testing. Seventy-two percent stated that they were interested in genetic testing of deaf child. Of the individuals who were interested in such testing, 69% would consider having prenatal genetic testing for deafness.

Conclusion

The present study provided evidence of a predominantly positive attitude toward genetics. Appropriate genetic counseling can help parents to understand the risk, benefits, and limitations of genetic testing for prelingual deafness.     

辽宁地区非综合征型耳聋患者常见耳聋基因突变分析

目的：分析辽宁地区重度和极重度非综合征型耳聋患者常见耳聋基因热点突变的特点及规律。方法：收集中国医科大学附属第一医院就诊的非综合征型耳聋患者128例,采集外周血并从中提取DNA,应用耳聋基因芯片检测中国人群中常见的4个基因GJB2、GJB3、SLC26A4、线粒体12SrRNA的热点突变位点,同时结合耳聋问卷调查、听力学检测及颞骨CT检查。结果：128例患者中52例（40．6％）存在不同的被检测基因位点突变：①22例存在GJB2基因突变,其中c．235delC位点纯合突变10例,单杂合突变5例c.176_191 del 16位点单杂合突变1例;c.35 del G位点单杂合突变1例;c．235 del C／c．299_300 del AT复合杂合突变1例,C．235delC／c．176_--191del16复合杂合突变1例,035delG／c.176_191 del 16复合杂合突变1例;c.299_300 del AT纯合／c．919-2A〉G杂合1例儿235 del C纯合／c．919-2 A〉G杂合1例。②30例存在SLC26A4基因突变,其中c．919-2 A〉G位点纯合突变6例、单杂合突变17例,c．2168 A〉G位点纯合突变1例、单杂合突变2例,c．2168 A〉C／c．919-2 A〉G复合杂合突变2例,c．919-2 A〉G／GJ B2 c．235 del C复合突变2例。③无GJB3和线粒体12S rRNA基因突变,考虑与样本量少有关。在基因水平,明确诊断遗传性聋者24例（18．8％）,遗传性耳聋基因突变携带者28例（21．9％）。结论：辽宁地区耳聋患者存在较高的遗传性耳聋发生率,耳聋基因芯片诊断技术可应用于临床中进行快速筛查、诊断并指导聋儿康复。     

应用耳聋基因芯片检测技术筛查重度耳聋儿童及其父母的遗传性基因缺陷

目的 应用耳聋基因芯片对非综合征性感音神经性聋儿童及其家庭成员进行耳聋相关基因检测,探讨其在临床筛查中的可行性.方法 选择来自广东省聋儿康复中心的30个非综合征性耳聋患儿及其父母,应用耳聋基因芯片对该30个家庭进行耳聋相关基因检测.结果 采用基因芯片对这30个家庭进行遗传性耳聋基因的快速筛查,其中8个家庭有阳性结果,筛查出的阳性率为26.7%.有2例为GJB2基因235delC位点纯合突变,其中有1例混有IVS7-2位点杂合突变(PDS基因);有2例为GJB2基因235delC位点和299del AT复合杂合突变;有1例为GJB2基因176del16位点杂合突变,有1例为1494C>T位点均质突变(线粒体12S rRNA);有2例为PDS基因IVS7-2位点杂合突变.结论 应用基因芯片可以高效、快速地在人群中,尤其是聋儿患者中进行大规模的筛查.     

GJB2 and mitochondrial DNA 1555A>G mutations in students with hearing loss in the Hubei Province of China

Objectives

The GJB2 and MTRNR1 1555A > G mutations are the prevalent causes of hearing loss worldwide. However, the mutation profiles of the two genes are dependent on the ethnic or geographic origins. Therefore, this study was to characterize the forms and frequencies of the two genes in 813 students with hearing loss in Hubei province, Central China.

Methods

Blood samples from 813 students were obtained with informed consent. Genomic DNA was extracted from peripheral blood leukocytes. The target fragments were amplified by polymerase chain reaction (PCR). Sequencing (or enzyme digestion) was applied to identify sequence variations.

Results

Ten different mutations were identified in GJB2 in 146 of the 813 (17.96%) patients and 11.81% (96/813) patients had homoplasmic mtDNA 1555A > G mutation.

Conclusions

This study demonstrated the high prevalence of GJB2 and mtDNA 1555A > G mutations in Central Chinese population. Therefore, it will be effective to perform GJB2 and mtDNA 1555A > G mutation analysis for genetic screening for hearing loss in this population.