多重脑震荡大鼠脑干中缝核团内5-羟色胺免疫阳性表达变化的研究

为了探讨多重脑震荡(multiple cerebral concussion,MCC)后大鼠中缝核团内5-羟色胺(5-HT)能神经元的变化规律,本实验采用自制单摆式机械打击装置复制MCC大鼠模型,研究伤后大鼠脑干中缝核团内5-HT及5-HT合成过程中的限速酶-色胺酸羟化酶(TPH)的表达。将56只大鼠随机分为7组:对照组、伤后1、2、4、8、16和24d组(n=8)。用免疫组织化学染色技术及图像分析法定量分析伤后大鼠脑干中缝核团内5-HT和TPH的表达变化。结果显示:(1)TPH免疫反应阳性产物在中缝背核、正中中缝核的表达在伤后2d时达到高峰,与正常对照组相比有显著性差异(P<0.05);中缝大核和中缝苍白核分别以伤后1d组和4d组阳性反应最强;(2)5-HT免疫反应阳性产物在中缝背核、正中中缝核的表达也在伤后2d时达到高峰,16、24d组基本恢复至正常水平;而中缝大核和中缝苍白核内5-HT的免疫反应性在各损伤组与正常对照组之间均无显著性差异(P>0.05)。以上结果表明,多重脑震荡后中缝核团内TPH和5-HT的表达增高,这为研究5-HT对MCC后认知障碍的影响提供了形态学依据。     

大鼠多重脑震荡基底前脑胆碱能与5-羟色胺能神经的变化

目的:探讨体育运动中较为多发的多重脑震荡(MCC)后的脑损伤机制.方法:用金属单摆闭合性脑损伤打击装置复制MCC大鼠模型,伤后分1～24 d多个损伤组,用免疫组织化学技术研究基底前脑5-羟色胺(5-HT)能与胆碱能神经元的变化.结果:脑震荡后随胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫阳性表达的降低,色氨酸羟化酶(TPH)免疫阳性表达升高,随损伤后时间的延长,ChAT表达逐渐升高,TPH表达也随之下调趋正常.结论:多重脑震荡后,与认知密切相关的不同脑区在5-HT神经元表达增强的同时,胆碱能神经元呈下调改变,这些变化可能与脑损伤后的认知行为障碍有关.     

脑震荡鼠大脑多巴胺转运体变化研究

为了进一步探讨脑震荡(cerebral concussion,CC)大鼠认知行为障碍的神经生物学基础,本实验观察了CC大鼠多巴胺转运体(dopamine transporters,DAT)的变化规律。用自制金属单摆式闭合性脑损伤打击装置复制脑震荡大鼠模型48只,随机分为伤后1、2、4、8、16、24d六个实验组,另设一正常对照组(n=8)。运用抗DAT抗体SP法行免疫组化染色,并测定大脑前额叶皮质(PFC)、尾壳核(CPu)、伏隔核(Acbc)、内侧隔核(MS)、斜角带垂直臂核(VDB)、斜角带水平臂核(HDB)、梨形皮质(Pir)、顶叶皮质(CPL)、海马CA1-3、丘脑中央背内侧核(MD)、丘脑背外侧核(LD)、下丘脑腹内侧核(VMH)和杏仁核等16个脑区DAT阳性表达物的光密度值。结果表明,与正常对照组相比脑震荡后大鼠多个脑区DAT阳性表达物呈下调变化。PFC、CPu-2、MS、LD、MD的DAT阳性表达物在伤后第2d表达最低;CPu-1、VDB、HDB、CPL、CA1、CA2、CA3、VMH和杏仁核的DAT阳性表达物在伤后第4d表达最低;Pir的DAT阳性表达物在伤后第8d表达最低;Acbc的DAT阳性表达物在伤后第16d表达最低。各脑区恢复时间各不相同,至24d基本恢复正常。以上结果提示DAT可在大鼠不同脑区广泛表达;脑震荡后其在多个脑区呈下调性改变,提示多巴胺转运体的伤后变化可能参与了脑震荡后的认知障碍。     

大鼠舌乳头神经结构的乙酰胆碱受体亚型配布

目的:探索味觉的传递机制是否系味蕾细胞所接受的信息直接通过神经递质受体作用于舌乳头的感觉神经来完成。方法:免疫组化SABC技术对大鼠舌粘膜各部位各种乳头内神经结构上乙酰胆碱受体(AchR)的8种亚型(VR1、α2、α3、α4A、α4H、α7、β1及β2)的分布进行观察。结果:除丝状乳头外,其他3种乳头的支配神经束及纤维分支不同程度地分布有AchR的各亚型受体。阳性反应的AchR自乳头中轴上的神经束(干)起,并沿其分支分布,在临近味蕾前即中止,未见受体阳性的神经纤维终末到达味蕾细胞。结论:味觉感受的传递机制并非由AchR阳性感觉神经纤维直接从味蕾细胞“接力”上行。     

同时显示大鼠胃窦粘膜乙酰胆碱酯酶阳性神经和内分泌细胞的方法

本实验在同一张切片上利用Karnovsky-Roots(1964)方法,显示胃窦粘膜神经乙酰胆碱酯酶,用PAP免疫组织化学技术定位胃棗粘膜内分泌细胞(胃泌素细胞),为了解胃粘膜胆碱能神经和G细胞之间的形态关系,挺供一可行的方法。     

脑震荡对大鼠脑内乙酰胆碱M1受体亚型的影响

脑震荡是轻型闭合性脑损伤,占颅脑外伤患者的75．5%～78．2%。脑震荡后主要表现为立即出现短暂性昏迷与记忆障碍,其中学习记忆能力的损害是最持久和对患者影响最重的症状之一[2～4],国内外对开放性脑损伤的认知行     

大鼠胸腺的神经分布—银染色和乙酰胆碱酯酶组织化学的研究

用银染色法和乙酰碱酯酶组织化学法，观察大鼠胸腺的神经纤维分布，银染色法显示。在胸腺髓质中神经纤维构成复杂的网络状结构，在胸腺皮质和髓质中，均存在ＡＣｈＥ阳性神经纤维，其分支终止或环绕于胸腺细胞的附近。此外，ＡＣｈＥ阳性神经纤维与肥大细胞可形成紧密邻接。有些肥大细胞含有ＡＣｈＥ阳性反应物。作者认为，胸腺皮质和髓质都接受副交感的胆碱能神经纤维的支配，后者对胸腺细胞和肥大细胞等可能起调节作用。     

免疫应答期间大鼠脑内乙酰胆碱酯酶活性的变化

用绵羊红细胞（ＳＲＢｃ）免疫大鼠，在免疫后第３天至第６天，使用光电比色法检测大鼠海马、下丘脑、丘脑、中脑和脑桥内乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）活性的变化。结果表明，海马和下丘脑中ＡＣｈＥ活性在免疫后第３天至第６天均显著低于对照组；而丘脑、中脑和脑侨内ＡＣｈＥ活性与对照组比较均无明显差异。由此提示：在体液免疫应答期间，海马和下丘脑中ＡｃｈＥ活性降低，亦即以上两脑区中乙酰胆碱（ＡＣｈ）含量可能增加。我们以往的实验说明，中枢ＡＣｈ可调节体液免疫应答。综合两者结果，可以推测在中枢ＡＣｈ与免疫之间存在着相互作用。     

大鼠苍白球乙酰胆碱酯酶阳性神经元的衰老变化——形态计量学研究

本研究结合组织化学和形态计量学方法,观察幼龄(3月龄)和老龄(24月龄)雄性大鼠苍白球内乙酰胆碱酯酶阳性(AChE-P)神经元的衰老变化。老龄苍白球AChE-P神经元的数量,比幼龄组减少约11.8％;幼龄阳性神经元的突起总长度是老龄组的1.4倍;但在老龄组中,约有8.6％阳性神经元的突起总长度,大于幼龄的平均突起总长度(232.1μm);老龄苍白球AChE-P神经元的灰度值,明显高于幼龄组,但约有6.8％老龄阳性神经元的灰度值低于幼龄的平均灰度值(117.8);老龄苍白球AChE-P神经元的截面积,比幼龄增大约9.2％。形态学观察发现,大部分老龄AChE-P神经元呈退行性改变,但有一部分老龄AChE-P神经元胞体增大,染色加深,突起茂密,分支增多。上述结果表明,苍白球内AChE活性的增龄性下降及其神经元的退行性改变,并不是在所有的AChE-P神经元中同步发生。从而提示,在衰老过程中,苍白球AChE-P神经元可能存在着一种与衰老机制密切相关的代偿机制。     

大鼠多重脑震荡后脑内TPH表达变化

目的:探讨多重脑震荡(multiple cerebral concussion,MCC)后脑内5-HT能神经元内色氨酸羟化酶(tryptophan hydroxylase,TPH)含量的变化。方法:42只雄性大鼠随即分为7组,每组6只,一组为对照组,其余的大鼠用金属单摆式机械打击装置复制MCC大鼠模型,伤后分1~24 d不同时段的6个损伤组,用免疫组化技术和图像分析方法观察基底前脑及脑干5-HT能神经元内TPH含量的变化。结果:多重脑震荡后2~8 d上述脑区TPH免疫阳性表达升高(P<0.05),伤后24 d趋于正常(P>0.05)。结论:多重脑震荡后5-HT神经元TPH表达增强,可能与脑损伤后神经元的应激反应有关。     

小胶质细胞在单纯性脑震荡大鼠皮质中的变化

目的:观察单纯性脑震荡(pure cerebral concussion,PCC)大鼠前额叶皮质(prefrontal cortex,PC)、颞叶皮质(temporal cortex,TC)和梨状皮质(piriform cortex,Pir)内小胶质细胞(microglia,MG)的反应和时程变化规律,探讨小胶质细胞与脑损伤之间的病理联系。方法:采用自制金属单摆闭合式脑损伤打击装置制备清醒状态下PCC模型,随机分为伤后3 h、12 h、1 d、2 d、3 d、7 d六个损伤组(n=5),另设正常对照组(n=5)。采用OX-42单克隆抗体(MG特异性标记物)进行免疫组织化学和免疫荧光染色,观察PCC组和正常对照组大鼠PC、TC和Pir中OX-42的表达变化。结果:正常对照组大鼠PC、TC和Pir内OX-42免疫阳性产物的表达很弱,OX-42免疫阳性的小胶质细胞的数量少而轮廓不清。损伤后OX-42免疫阳性产物的表达和阳性细胞的数量逐渐增加,3 d时达高峰,7 d后有下降趋势,但仍高于正常组(P0.05)。结论:PCC损伤早期PC、TC和Pir中MG出现激活的形态学变化,提示MG可能参与了PCC致伤后的病理变化。     

单纯性脑震荡大鼠室管膜区小胶质细胞的表达变化

目的:观察单纯性脑震荡(pure cerebral concussion,PCC)模型大鼠室管膜区小胶质细胞(microglia MG)的反应和时程变化规律,探讨MG、室管膜区和PCC之间的病理关系和意义。方法:采用金属单摆闭合式脑损伤装置制备PCC模型,致伤后随机分为六个损伤组,即3 h、12 h、1 d、2 d、3 d、7 d(n=5),设正常对照组(n=5)。采用免疫组织化学SP法和免疫荧光单标染色法,观察PCC组和正常对照组大鼠脑室管膜区OX-42(MG特异性标记物)的表达变化。结果:正常对照组大鼠脑室管膜区OX-42阳性的小胶质细胞轮廓不清,数量较少,并且OX-42免疫阳性产物的表达很少。PCC组大鼠脑室管膜区OX-42阳性细胞的数量和阳性产物的表达呈现逐渐增高趋势,3 d组达高峰,7 d组有所下降,但仍高于正常对照组。各时间组与正常对照组相比均有显著性差异(P0.05)。结论:PCC损伤早期大鼠室管膜区的MG出现一系列形态学变化的激活表现,提示脑室管膜区的MG在PCC致伤后的病理变化中扮演着重要角色。     

Changes of acetylcholinesterase activity in the brain following septal lesions in the rat

Acetylcholinesterase activity in different parts of the limbic system (hippocampus, hypothalamus and amygdala) was decreased following medial septal lesions. On the other hand, this activity in the thalamus, frontal cortex, bulbus olfactorius, nucleus ruber, substantia nigra and basal ganglia was unaffected.These results raise the possibility that there is a functional relationship of the medial septum and those parts of the limbic system that we have studied.     

单纯性脑震荡大鼠海马mPGES-1的表达

目的:观察单纯性脑震荡(pure cerebral concussion,PCC)大鼠脑内海马区膜结合型前列素E合酶1(membrane-associated prostaglandin E synthase-1,mPGES-1)的表达变化,探讨mPGES-1是否通过前列腺素代谢途径参与PCC的病理变化及其变化规律。方法:采用清醒状态下自制金属单摆闭合式脑损伤打击装置制备PCC模型,致伤后随机分为3 h、12 h、1 d、2 d、3 d、7 d组(n=5),另设正常对照组(n=5)。采用mPGES-1多克隆抗体进行免疫组织化学法和Western blot技术,检测PCC组和正常组大鼠海马CA1-4区mPGES-1的定位及定量情况。结果:正常状态下,海马CA1-4区mPGES-1阳性细胞极少,轮廓不清,致伤后3 h海马各区的mPGES-1表达水平开始增高,至3 d达高峰,与正常组比较有显著性差异(P<0.05),3 d后逐渐下降,至7 d接近正常水平。mPGES-1蛋白的变化规律和免疫组化结果相似。结论:PCC损伤早期海马区出现mPGES-1表达增强,提示mPGES-1通过前列腺素代谢途径参与PCC致伤后的病理变化。     

Cyclosporine A inhibits acetylcholinesterase activity in selected parts of the rat brain

Cyclosporine A (CsA) is the major immunosuppressive drug used for organ and neural transplantation and the therapy of selected autoimmune diseases. We investigated the effect of CsA on the activity of acetylcholinesterase (AChE) in the frontal cortex, hippocampus, septum, and basal ganglia. AChE was determined spectrophotometrically with acetylthiocholine as substrate and 5,5-bis-2-nitrobenzoic acid as chromogen. CsA was administered in single doses of 20 or 45 mg/kg perorally; in the case of the higher dose we also performed a repeated administration of CsA in three consecutive doses separated by 24 h intervals. Both lower and higher doses of CsA decreased AChE activity in the frontal cortex and hippocampus to practically the same extent. On the contrary, AChE activity was more diminished in the case of the higher dose of CsA used in the septum and basal ganglia. Repeated administration of the higher dose of CsA did not lead, with the exception of the hippocampus, to a further decrease in AChE activity in the brain structures observed. These findings contribute to rare evidence concerning the interaction of CsA and the cholinergic system in the brain.