脑胶质瘤组织中p16和pRb表达水平的研究

为了解脑胶质瘤和抑癌基因表达产物间的关系，用免疫组化的方法对３１例脑胶质瘤标本ｐ１６和ｐＲｂ蛋白进行了检测。结果发现：癌组织中ｐ１６和ｐＲｂ的阳性表达平分别为６４．５％，６１．３％；ｐＲｂ和ｐ１６蛋白之间呈负相关表达。此结果提示：ｐＲｂ和ｐ１６蛋白表达的降低可能是脑胶质瘤发生的因素之一。     

人脑胶质瘤p16、p15、CDK4基因改变和pRb表达及等位基因谱分析的研究

颅内肿瘤中以胶质瘤最常见,约占43.5％。尽管应用了手术、放疗和化疗等综合疗法,胶质瘤患者的预后仍然很差,绝大部分患者难以避免肿瘤复发,其中胶质母细胞瘤患者术后的平均生存期不到一年。因此,人脑胶质瘤的治疗仍然是神经外科所面临的一大难题。本研究针对临床实践中的这一难点,对脑胶质瘤发生发展的分子生物学和分子遗传学机制进行了探索,共包括两大部分内容。 1.针对肿瘤的多基因病变特性,同步进行了4     

p16,CDK4和PCNA蛋白在滋养细胞肿瘤中的表达

用ＳＰ法检测滋养细胞肿瘤，葡萄胎和正常绒毛中ｐ１６蛋白，ＣＤＫ４及ＰＣＮＡ的表达，发现：（１）ｐ１６蛋白在肿瘤表达低于绒毛中（Ｐ〈０．０５），ｐ１６蛋白阳性标本的ＰＣＮＡ表达率低于ｐ１６阴性者（Ｐ〈０．０５）。（２）ＣＤＫ４表达在滋养细胞肿瘤，葡萄胎和绒毛三者间及与ＰＣＮＡ表达间无差异（Ｐ〉０．０５）。（３）ｐ１６阳性肿瘤患者３年存活率较高，提示ｐ１６基因突变可能是滋养细胞癌变的重要原因，检测ｐ１     

人喉癌组织中p15、p16基因缺失和STK15基因过表达的研究

目的 探讨p15、p16基因和STK(丝氨酸/苏氨酸激酶)15基因表达与喉癌发生、发展的关系。方法 自50例术前未经化疗和放疗的喉鳞状细胞癌患者的新鲜手术标本中,分别取癌组织和癌旁正常组织进行以下检测:(1)提取DNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术,进行p15基因第二外显子(p15E2)和p16基因第二外显子(p16E2)纯合缺失研究;(2)提取RNA,反转录合成cDNA,以β-肌动蛋白基因为内对照进行PCR扩增,分析STK15基因表达的水平。同时检测人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞系STK15基因表达水平。结果 喉癌组织p15E2纯合缺失率为12％(6/50),p16E2纯合缺失率为14％(7/50),p15E2、p16E2共同缺失率为6％(3/50)。50例患者中34例(68％)癌组织STK15基因表达高于癌旁正常组织;全组患者癌组织STK15基因表达/β-肌动蛋白基因表达平均密度比值(ADV)为1.03±0.30,癌旁正常组织STK15基因表达/β-肌动蛋白基因表达ADV为0.89±0.22,其间差异有非常显著意义(t=4.333,P<0.01)。Hep-2细胞系中STK15基因表达高于内对照β-肌动蛋白基因。结论p15E2、p16E2纯合缺失和STK15基因过表达可能在喉癌的发生及恶性进展中发挥一定作用。     

p16,CDK4及Rb在结肠病变中的表达研究

采用免疫组化法分析６０例结肠癌，结肠息肉及结肠炎标本Ｒｂ，ＣＤＫ４和ｐ１６的蛋白表达。ｐ１６表达随细胞分化程度降低而减少，结肠炎组织ｐ１６表达随细胞分化程度降低而减少，结肠炎组织ｐ１６表达高于癌和息肉组。Ｒｂ在癌组织和息肉组织中表达明显减少。     

鼻咽癌细胞中外源性p16表达对CDK4,Cyclin D1及pRb的影响

目的：分析外源性ｐ１６表达对ＣＤＫ４,Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｐＲｂ的影响,探讨其抑制细胞生长的机制。方法：绘制生长曲线,比较细胞倍增时间,分析ＨＮＥ１,＃４－２及＃３－２克隆中细胞增殖状况;利用流式细胞仪分析上述细胞中细胞周期分布的改变;结合Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ方法,分析外源性ｐ１６表达对ＣＤＫ４,Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｐＲｂ的影响。结果：生长曲线示,ＨＮＥ－１倍增时间为２３．４ｈ,＃３－２和＃４     

外源性p16基因稳定转染对胶质瘤细胞周期和增殖的影响

目的：研究外源性ｐ１６基因对胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４的抑制作用,探索胶质瘤基因治疗的新途径。方法：利用携带４９０ｂｐ的人ｐ１６全长ｃＤＮＡ真核表达载体,采用脂质体介导法将其导入人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４中,用Ｇ４１８筛选阳性克隆,以原位杂交,免疫组化方法检测ｐ１６基因在细胞转染前后的表达情况。,应用流式细胞仪,电子显微镜,生长曲线测定等方法研究ｐ１６基因对胶质瘤细胞周期,形态,生长等的影响.     

原发皮肤恶性黑色素瘤p16蛋白、pRb表达研究

目的:为探讨p16蛋白、pRb在恶黑中的作用.方法:以黑素细胞痔为对照,用免疫组化法检测了p16蛋白、pRb在恶黑中的表达.结果:发现恶黑中的p16蛋白阳性率(33.06%)显著低于黑素细胞痣(84.21%)(P＜0.05);伴淋巴结转移组阳性率(33.33%)显著低于无转移组(64.25%)(P＜0.05).pRb和p16蛋白在恶黑中的表达强度存在明显负相关关系.结论:p16蛋白表达缺失与恶黑及其转移有关,p16蛋白与pRb在恶黑中的负相关表明,恶黑发生机制涉及到周期表D1、CDK4、p16蛋白、pRb调节通路障碍.     

P15及P16蛋白在脑胶质瘤中表达的研究

目的探讨抑癌基因p16、p15在脑胶质瘤中的表达及其与胶质瘤病理分级、恶性程度的关系。方法应用免疫组化SP方法检测63例人脑胶质瘤手术标本中P16、P15蛋白的表达水平。结果P16、P15蛋白的表达率与脑胶质瘤的病理分级呈负相关,且低恶性组(Ⅰ~Ⅱ级)与高恶性组(Ⅲ~Ⅳ级)相比较有显著差异(P<0.001)。结论P16及P15蛋白的表达与胶质瘤的病理分级和恶性程度有关。从而可作为反映脑胶质瘤的增生能力及恶性进展的参考指标。     

脑胶质瘤中P16,P15蛋白表达的研究

目的：研究脑胶质瘤发生、演化及预后与Ｐ１６、Ｐ１５蛋白表达的关系。方法：采用免疫组织化学技术对４５例石蜡标本中Ｐ１６、Ｐ１５蛋白进行了检测。结果：Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中Ｐ１６、Ｐ１５蛋白表达阴性率（６０％、６５％）高于Ⅰ～Ⅱ级（２８％、２０％）,Ｐ〈０．０５、Ｐ〈０．０１。结论：胶质瘤发生、演化及恶性程度可能与Ｐ１６、Ｐ１５蛋白阴性表达有关;Ｐ１６、Ｐ１５蛋白阴性表达在一定程度上反映了胶质瘤细胞的恶性生     

食管鳞癌组织中p16、cyclinD1、CDK4的表达

目的：探讨p16、cyclinD1、CDK4蛋白在食管鳞癌发生中的意义及其相互间的作用。方法：采用LSAB免疫组化染色法,对43例食管癌手术标本的p16、cyclinD1、CDK4蛋白进行标记。结果：在鳞癌组织中,3种抗体的阳性物质存在于细胞核中和／或胞浆中,且从正常鳞状上皮→癌旁不典型增生→鳞癌组织,p16的阳性率逐渐下降,而p16、cyclinD1、CDK4的阳性率却逐渐上升。正常皮皮与癌组织之间的阳性率差异均有显著性（P＜0．05）;随着癌分化程度下降,p16阳性率呈下降趋势,Ⅲ级与Ⅰ级鳞癌之间阳性率差异有显著性（P＜0．05）,但未检出cyclinD1、CDK4与癌分化程度的关系。结论：p16、cyclinD1、CDK4蛋白表达的变化是食管癌发生中的早期事件,三者构成的调节通路障碍可能参与了癌的发生。     

人脑胶质瘤中p16基因的表达

目的 探讨胶质瘤中p16基因的缺失及免疫组化情况.方法 利用、PCR技术和免疫组化检测43例胶质瘤p16基因的缺失.结果 PCR组:12例脑星形细胞瘤p16E1和p16E2均缺失,占28名(12/43),2例仅缺失p16E1,占5%(2/43);p16E基因缺失多发生在Ⅲ-Ⅳ级脑星形细胞瘤中(Ⅲ级6/16,Ⅳ级8/14),Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级比较有显著性差异(P<0.05).免疫组化组:p16表达缺失率为60.5%.P16表达缺失在Ⅲ级(43.6%)、Ⅳ级(85.7%)脑胶质瘤中显著高于Ⅰ-Ⅱ级(22.2%)(P<0.05).结论 p16基因失活可能与脑星形细胞瘤的分化程度有关,p16基因缺失是p16基因失活的主要机制.     

胃癌中p16INK4a-CDK4-pRb通路蛋白表达异常

目的：检测胃癌组织中p16^INK4a-CDK4-pRb通路p16^INK4a、CDK4、pRb蛋白表达状况，探讨蛋白表达与胃癌发生发展以及临床病理指标的关系。方珐；采用免疫组织化学方法检测了胃癌组织中p16^INK4a、CDK4、pRb蛋白表达。结果：10例正常胃黏膜中相应蛋白表达全部阳性．而肿瘤组织中p16^INK4a、pRb蛋白表达阳性率分着1为54％（44／81）和90％（73／81），p16^INK4a蛋白表达显著低于正常组织（P=0．005），26％（21／81）的肿瘤组织中CDK4过表达。p16^INK4a、pRb、CDK4蛋白表达与肿瘤组织学类型、淋巴结转移及性别、年龄均无相关性．结论：p16^INK4a、CDK4、pRb蛋白表达异常是胃癌细胞常见的分子事件p16^INK4a-CDK4-pRb细胞周期调控通路异常可能参与了胃癌的发生发展。     

715及P16蛋白在脑胶质瘤中表达的研究

目的探讨抑癌基因p16、p15在脑胶质瘤中的表达及其与胶质瘤病理分级、恶性程度的关系。方法应用免疫组化sP方法检测63例人脑胶质瘤手术标本中P16、P15蛋白的表达水平。结果P16、P15蛋白的表达率与脑胶质瘤的病理分级呈负相关,且低恶性组（Ⅰ～Ⅱ级）与高恶性组（Ⅲ～Ⅳ级）相比较有显著差异（P〈0．001）。结论P16及P15蛋白的表达与胶质瘤的病理分级和恶性程度有关。从而可作为反映脑胶质瘤的增生能力及恶性进展的参考指标。     

脑胶质瘤p16基因转染对细胞生长及放射敏感性的影响

探索ｐ１７基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及ｐ１６基因与肿瘤细胞放射敏感性间的关系。方法将外源野生型ｐ１６基因导入胶质瘤细胞珠Ｕ２５１、Ｃ６，筛选阳性克 时以空载体质粒ｐＣＤＮＡ３为对照，免疫组化检测ｐ１６基因表达，用ＭＴＴ法测定细胞生长曲线及肿瘤杀伤率。结果转染Ｐ１６基因的Ｕ２５１、Ｃ６细胞有外源Ｐ２１６基因的整合及表达，克隆形成率减少，生长速度明显减慢，对辐射的敏感性增强。结论导入外源野生型     

p16蛋白在脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的 :探讨抑癌基因p16蛋白在脑胶质瘤发生、分化过程中的作用及其与预后的关系经。方法 :采用免疫组化的方法检测 5 4例脑胶质瘤患者病理标本中的p16蛋白 ,分析p16蛋白的缺失与病理分级、患者预后之间的关系。结果 :全组共有 2 9例 (5 3.7% )标本p16蛋白表达阴性 ,Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤的p16蛋白的阴性率明显高于Ⅰ、Ⅱ级 (P <0 .0 5 )。p16蛋白表达阳性患者的复发率明显低于p16蛋白表达阴性者 (P <0 .0 5 ) ,分别为 2 0 .0 %和 5 5 .2 %。结论 :p16蛋白的缺失与脑胶质瘤的恶性程度有关 ,恶性程度越高 ,p16蛋白的缺失率越高 ;p16蛋白的缺失与预后相关 ,其缺失率越高 ,患者复发率越高。     

p16基因启动子CpG区甲基化与人脑胶质瘤临床病理特征的关系

目的　研究 p16基因启动子CpG区甲基化的改变与脑胶质瘤发生及其临床病理特征的关系。 方法　采用甲基化特异PCR技术 (MSP法 )研究脑胶质瘤组织p16基因甲基化 ,并分析其与临床病理特征的关系。结果　 5 6例脑胶质瘤组织中有 10例 (17.9% )呈 p16CpG区甲基化阳性。胶质瘤的 p16CpG区甲基化与性别、年龄无关 ,而与肿瘤级别、浸润与否有关。有浸润的脑胶质瘤 p16CpG区甲基化明显高于暂无浸润者。p16CpG区甲基化也多发生于Ⅲ级、Ⅳ级 (即肿瘤恶性程度高 )的病例。结论　p16基因启动子区甲基化可作为脑胶质瘤的预后影响因子之一