良性胆管狭窄形成机制的研究

目的：探讨良性胆管狭窄的形成机制。方法：用28只犬建立犬胆总管损伤修复的动物模型，分别于术后3d、1周、3周、3月、6月取材行光镜、电镜观察及免疫组化观察巨噬细胞、转化生长因子（TGF-β1）、平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在胆管愈合过程不同时期组织中的表达强度、阳性细胞数和组织分布。结果：光镜及电镜显示：在整个胆管修复过程中炎性渗出期较长，胆道粘膜上皮愈合较慢，瘢痕组织细胞持续增生活跃，细胞外基质过度沉积，胶原纤维排列致密杂乱。肌成纤维细胞（MFB）功能活跃，持续存在于整个愈合过程中。免疫组化：巨噬细胞、TGF-β1）、α-SMA 在胆管愈合过程中表达较强，且持续较长时间。Mφ阳性主要表达于胆道粘膜下固有层；TGF-β1主要表达于肉芽组织、成纤维细胞、Mφ及血管内皮细胞浆和细胞膜；α-SMA 表达于MFB胞浆、平滑肌组织。Mφ、TGF-β1及α-SMA的表达呈正相关。结论：①胆管愈合方式属于过度愈合。②肌成纤维细胞功能活跃，地、持续存在，是导致胆管瘢痕性挛缩的重要原因。③Mφ、TGF-β1及α-SMA高表达是造成胆管愈合过程中成纤维细胞增殖旺盛、细胞外基质过度沉积、胆管瘢痕性挛缩的重要因素。     

良性胆管狭窄瘢痕中CD68、TGFβ1、α-SMA的表达

目的探讨良性胆管瘢痕性狭窄的形成机制。方法收集14例良性胆管瘢痕性狭窄的胆管瘢痕组织,用10例正常胆管作为对照,分别用光镜、SEM、TEM观察其形态学特点;用免疫组织化学SP法分别检测CD_(58)、TGFβ_1、α-SMA在两组中的表达及定位。结果胆管瘢痕存在以巨噬细胞(MΦ)为主的炎细胞持续浸润,缺血缺氧和MFB等特点。CD_(68)、TGFβ_1、α-SMA在胆管瘢痕中表达较强,与正常胆管有显著差异。CD_(68)主要表达于MΦ。α-SMA表达于MFB的胞浆、血管平滑肌组织、胆管平滑肌。胆管瘢痕中新生血管增多,部分管壁明显增厚。TGFβ_1主要表达于肉芽组织、FB、MΦ等炎细胞。结论胆管瘢痕中存在以MΦ为主的持续慢性炎症,MΦ通过分泌TGFβ_1导致胶原纤维过度沉积、改建不良和MFB的形成,引起胆管瘢痕性狭窄。胆管瘢痕的缺血可能是加剧良性胆管狭窄形成的重要原因。     

良性胆管狭窄形成机制的实验研究

目的：探讨良性胆管狭窄形成机制。方法：通过制作犬胆管损伤修复模型,术后采用免疫组化SP法法对巨噬细胞（MΦ）、TGF－β1及α－SMA在胆管愈合过程不同时期组织中的表达和分布进行研究。结果：MΦ、TGF－β1及α－SMA愈合过程中表达较强,且持续较长时间。MΦ阳性表达于粘膜固有层;TGF－β1主要表达于肉芽组织、成纤维细胞、MΦ及血管内皮细胞。α－SMA表达于肌纤维细胞胞浆。结论：MΦ、TGF－β1及α－SMA高表达是造成胆道愈合过程成纤维细胞增殖旺盛、细胞外基质过度沉积、胆道瘢痕性挛缩的重要因素。     

肌成纤维细胞在胆道愈合过程中的表达及意义

目的探讨肌成纤维细胞在医源性胆管狭窄形成过程中的作用及意义。方法通过制作犬肝外胆管损伤修复模型，分别于术后1周、3周、3个月、6个月取材行透射电镜观察和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学染色观察。结果肌成纤维细胞功能活跃，持续存在于整个胆道愈合过程，细胞外基质过度沉积。α-SMA表达于肌成纤维细胞胞浆，术后1周至6个月表达均较强,与正常对照比较差异有显著性（P<0.01）,术后各期表达差异无显著性（P>0.05）。结论肌成纤维细胞是导致胆道瘢痕性挛缩和管腔狭窄的主要原因。     

感觉神经对鼠皮肤伤口愈合中肌成纤维细胞分化的影响

在伤口愈合过程中，肌成纤维细胞通过其胞浆内的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的收缩，使伤口皮缘相互靠拢，从而闭合伤口。通常认为肌成纤维细胞主要由成纤维细胞、平滑肌细胞以及血管周围细胞分化而来。细胞间质以及巨噬细胞释放的转化生长因子β(TGF-β)和α-SMA表达诱导因子参与肌成纤维细胞分化的调控，肥大细胞脱颗粒释放的类     

α—平滑肌肌动蛋白在瘢痕成纤维细胞中的表达

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的诱导作用。方法 以5例增生性瘢痕为实验组,3例正常瘢痕为对照组,采用成纤维细胞二维培养和三维培养体系及LSAB免疫组织化学染色技术,观察在不同TGF-β1浓度作用下,来源于实验组和对照组的成纤维细胞表达α-SMA的情况。结果 实验组的成纤维细胞,三维培养体系中α-SMA含量明显低于二维培养体系,不同浓度TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达α-SMA的作用不同,以5ng/ml的TGF-β1作用最有效;与对照组的成纤维细胞相比,实验组的成纤维细胞在表达α-SMA方面,对TGF-β1的反应更为敏感。结论 在体外,TGF-β1诱导α-SMA在瘢痕成纤维细胞中的表达作用存在着浓度差异;实验组与对照组中的成纤维细胞在细胞性状方面存在差异,对TGF-β1敏感性不同;细胞外基质成分可能会降低TGF-β1的诱导作用,使α-SMA的表达减少。     

瘢痕防治讲座(五)

6.3生长因子、生物活性因子与病理性瘢痕 6.3.1关于TGF-β的研究 (1)检测TGF-β1,2,3在增生性瘢痕(HS)和成熟瘢痕中的表达,发现在HS中TGF-β1,2、α-SMA(平滑肌肌动蛋白)均有较强表达,与成熟瘢痕有非常显著的差异;TGF-β3在成熟性瘢痕和女性患者以及病程1年以上的HS中有较强表达;结论:TGF-β1,2、α-SMA的表达与瘢痕的增生及挛缩有关,TGF-β3与瘢痕缓解有关.抑制TGF-β1,2或促进TGF-β3表达,有利于防止瘢痕增生和挛缩.     

PPARγ激动剂对成人正常皮肤成纤维细胞转分化的作用

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导成纤维细胞转分化的影响,探讨其抗瘢痕纤维化的潜在作用。方法：体外培养成人正常皮肤成纤维细胞,利用免疫荧光细胞化学法观察、分析PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2（15d-PGJ2）及其激动剂曲格列酮对TGF-β1诱导的α平滑肌动蛋白（α-SMA）表达的影响,利用Western blot、实时荧光RT-PCR技术检测PPARγ激动剂对TGF-β1诱导的α-SMA蛋白及mRNA水平的影响。结果：TGF-β1能显著增加成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞;与TGF-β1诱导组相比,10μM曲格列酮、15d-PGJ2预处理组的α-SMA表达量显著减少（P〈0.01）,抑制效应分别为31%、57%;预处理组的α-SMA mRNA水平显著下降（P〈0.01）。结论：PPARγ激动剂能抑制TGF-β1诱导的成人正常皮肤成纤维细胞的转分化的效应,具有抗皮肤瘢痕化、挛缩的潜在作用。     

巨噬细胞及转化生长因子-β1在肝外胆管损伤修复过程中的表达及其意义

目的　观察巨噬细胞 (MΦ)及转化生长因子 β1(TGF β1)在胆道愈合过程中的表达和分布 ,探讨其在良性胆管狭窄形成过程中的作用及意义。方法　通过制作犬胆管损伤修复模型 ,术后分为 1周组、3周组、3个月组、6个月组。采用免疫组织化学过氧化酶标记的链霉卵白素 (SP)法对MΦ、TGF β1在各组中的表达和分布进行研究。结果　MΦ 1周时表达 ,与其他各期比较差异有显著性(P <0 .0 5 ) ,3周～ 6个月表达差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;TGF β1愈合过程中持续表达较强 ,各期比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。MΦ主要表达于粘膜固有层 ;TGF β1主要表达于肉芽组织、成纤维细胞、MΦ及血管内皮细胞。结论　MΦ、TGF β1高表达是造成胆道愈合过程成纤维细胞增殖旺盛、细胞外基质过度沉积、瘢痕增生的重要因素。     

TNF-α对兔胆管成纤维细胞P311/TGF-β1/α-SMA通路的影响及川芎嗪的干预作用

目的:探讨TNF-α对兔胆管成纤维细胞P311/TGF-β1/α-SMA通路的影响及川芎嗪的干预作用。方法:分离、培养正常家兔胆管成纤维细胞并鉴定,将胆管成纤维细胞分别给予TNF-α、TNF-α联合不同浓度的TMP(0.08、0.4、2.0 mg/m L)干预48 h,以无处理的胆管成纤维细胞为空白对照,用CCK-8法检测细胞增殖水平;real-time PCR检测细胞P311、TGF-β1、α-SMA m RNA表达;Western blot检测细胞TGF-β1、α-SMA蛋白表达。结果:与空白对照比较,胆管成纤维细胞经TNF-α处理后,增殖明显增强,P311、TGF-β1、α-SMA m RNA以及TGF-β1、α-SMA蛋白表达明显上调(均P0.05);TMP对TNF-α的上述效应有抑制作用,并且呈现浓度依耐趋势,其中0.4、2.0 mg/m L的TMP有明显作用(均P0.05)。结论:TNF-α可能通过调控P311/TGF-β1/α-SMA信号通路促进胆管成纤维细胞增殖,TMP能抑TNF-α对该通路的活化,故可能对良性胆道狭窄有防治作用。