CD4+CD25+调节性T细胞对狼疮样小鼠的干预性研究

目的分析CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）对狼疮样小鼠的干预效应,为系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）的免疫干预提供新的思路。方法采用磁活性标记的细胞分选方法（magnetic activated cell sorting,MACS）分选BALB/c小鼠CD4+CD25+T细胞,应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测分选细胞纯度。将68w♀CB6F1小鼠随机分为3组,包括正常对照组、狼疮鼠模型组（亲代淋巴细胞免疫）、狼疮鼠干预组（亲代淋巴细胞免疫后2w,输入5×106Tregs/鼠）。分别于诱导后2、4、8、12w,采用ELISA法检测ANA和抗-dsD-NA抗体,并观察肾标本的病理学改变。结果BALB/c小鼠脾脏单个核细胞经MACS分选后,CD4+CD25+T细胞纯度达98.5%。经亲代淋巴细胞输注后,CB6F1小鼠出现体重降低、皮肤干涩;ANA和抗ds-DNA抗体上升;以及狼疮肾炎的病理学改变。而输入Tregs对已出现自身抗体的狼疮鼠有明显的逆转...     

实验性抗磷脂综合征小鼠CD4~+CD25~+调节性细胞及foxp3表达的变化

目的:观察实验性抗磷脂综合征(experimental anti-phospholipid antibody syndrome,EAPS)进展过程中小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)数量和功能变化。方法:以重组人β2糖蛋白1(rhβ2GP1)主动免疫BALB/c小鼠建立实验性APS模型,免疫12周后检测抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2-GP1)、抗心磷脂抗体(ACA)、流产率(%)、活化部分凝血活酶时间(aPTT)、血小板计数(PLT PBC)。以流式细胞术检测小鼠PBMC中CD4+CD25+Treg细胞频率,RT-PCR检测转录因子Foxp3 mRNA的表达水平。结果:模型小鼠anti-β2-GP1、aCL水平明显升高,aPTT延长,PLT PBC降低,流产率提高,差异有统计学意义(P0.05)。模型小鼠PBMC中foxp3基因表达在4周短暂高于对照组(P0.05),8周后随着APS进展开始逐渐降低,12周后明显低于对照组(P0.05)。PBMC中CD4+CD25+Treg细胞频率8周前与对照组相比差异无统计学意义(P0.05),12周后逐渐减少,明显低于对照组(P0.05)。结论:CD4+CD25+Treg数量和功能下降参与抗磷脂综合征的发病机制。     

删除CD4~+CD25~+T细胞对OVA诱导的小鼠体液免疫应答的影响

目的观察删除CD4+CD25+T细胞对OVA免疫小鼠体液免疫应答的影响。方法小鼠腹腔注射抗CD25单克隆抗体,分别于3天、10天、27天采血流式检测外周血中CD4+CD25+T细胞的比例;注射抗CD25单克隆抗体3天后,OVA加铝佐剂免疫未删除和删除CD4+CD25+T细胞小鼠,7天后加强免疫一次,分别于初次免疫后7天,加强免疫后14天采血制备血清,ELISA法检测血清中OVA特异性IgE和IgG1的浓度。结果注射抗CD25单克隆抗体3天和10天,外周血中无CD4+CD25+T细胞;27天后CD4+CD25+T细胞的比例部分恢复。初次免疫7天后,删除CD4+CD25+T细胞小鼠总IgE、OVA特异性IgE和IgG1浓度较未删除组升高;加强免疫14天后,删除CD4+CD25+T细胞小鼠OVA特异性IgE较未删除组升高。结论删除CD4+CD25+T细胞能够影响小鼠OVA特异性体液免疫应答。     

IL-4诱导CD8~+T细胞分化为IL-10分泌性CD8~+T细胞

目的体外诱导CD8+T细胞,以期诱导分化出一种IL-10分泌性CD8+调节性T细胞,为用细胞疗法进行自身免疫性疾病的预防及治疗奠定基础。方法以tiger转基因小鼠(以其GFP+细胞代表IL-10+细胞)为实验动物,流式细胞仪分选幼稚CD8+T细胞,然后在细胞培养体系中加入ConA或抗CD3以及IL-2,IL-4加或不加,培养48 h对细胞进行诱导分化,继而,细胞继续扩大培养,至96 h时,加入佛波酯和离子霉素对细胞进行再刺激6 h,流式检测CD8+T细胞GFP的产生情况。同时,为验证IL-4对IL-10分泌性CD8+T细胞的诱导分化作用,在培养体系中加入抗IL-4,流式检测CD8+T细胞IL-10的表达情况。结果经流式细胞仪检测幼稚CD8+T在未经诱导分化时不产生IL-10;而在ConA或抗CD3的刺激及IL-4的诱导下,幼稚CD8+T可分化为IL-10分泌性细胞,且其比例分别占CD8+T细胞的31.16%(ConA组)和32.20%(抗CD3组);培养体系中加入抗IL-4后,IL-10分泌性CD8+T细胞的分化被抑制,其比例降为11.2%。结论 IL-10分泌性CD8+T细胞可由CD8+T诱导分化而来,IL-4是诱导IL-10产生的关键细胞因子。     

抑制性寡脱氧核苷酸对小鼠CD4+T细胞T bet、STAT4及STAT6表达的影响

目的探讨体外实验中,抑制性寡脱氧核苷酸(Sup ODN)对小鼠脾脏CD4+T细胞转录因子T细胞表达的T盒(T bet)、信号转导子和转录激动子(STAT) 4及STAT6表达的影响。方法分离小鼠脾脏淋巴细胞,免疫磁珠阳选法纯化CD4+T细胞,流式细胞仪分析分选纯度,在抗 CD3ε抗体、抗 CD28抗体、白细胞介素（IL） 12作用下,加入Sup ODN或对照寡脱氧核苷酸(Con ODN)培养72 h后,常规提取核蛋白。Western blot测定核蛋白中磷酸化的STAT (pSTAT) 4、pSTAT6 和T bet蛋白表达。结果与Con ODN 组和PBS组比较,Sup ODN组中T bet 和pSTAT4的表达水平明显降低（P＜0.05）,而pSTAT6表达水平明显升高（P＜0.05）。结论Sup ODN可能通过下调pSTAT4和T bet的表达,体外抑制小鼠CD4+T细胞向Th1细胞的功能性分化,上调pSTAT6的表达,促进Th2细胞的分化。     

CD4+CD25+调节性T细胞在艾滋病病毒感染中的作用

CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)是一类具有特殊免疫调节功能的T细胞亚群,是Tregs的重要组成部分,参与多种感染性疾病的免疫应答,在病毒感染的慢性化、免疫病理、阻止自身免疫应答和维持机体免疫平衡等方面发挥重要的作用.此文就CD4+CD25+Tregs在HIV感染进程中的作用作了综述.     

CD4~+ Notch1~+调节性T细胞和CD4~+ FoxP3~+调节性T细胞 在不明原因复发性流产中的表达

目的:探讨CD4+Notch1+调节性T细胞和CD4+FoxP3+调节性T细胞在不明原因复发性流产(URSA)中的表达。方法:流式细胞术分析复发性流产和正常妊娠动物模型中雌性小鼠CBA/J脾细胞CD4+CD25+Treg、CD4+FoxP3+Treg和CD4+Notch1+Treg的表达百分率变化。结果:流式细胞术分析(FACS)结果显示,相比于正常妊娠组,在复发性流产中CD4+CD25+Treg表达百分率减少、CD4+FoxP3+Treg表达百分率减少、CD4+Notch1+Treg表达百分率增加。结论:Notch1增加与FoxP3表达减少相关,CD4+Notch1+Treg的表达百分率增加可能是URSA的机制之一。     

CD4+CD25+T细胞与复发性流产

CD4+CD25+T细胞是一类具有免疫调节功能的细胞.正常情况下在体内发挥免疫抑制作用.该类细胞分泌白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β),表达CD25(IL-2Rα)、叉头蛋白(FOXP3蛋白)及细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)分子等,通过细胞间直接接触或细胞因子间接方式广泛参与自身免疫耐受、肿瘤免疫、移植免疫.妊娠类似同种异体移植,妊娠时脱落人母体循环的胎儿抗原刺激CD4+CD25+T细胞的产生并在母胎界面形成免疫耐受微环境,防止胎儿受到母体排斥.CD4+CD25+T细胞数量或功能失调则会导致各种疾病的发生,如自身免疫病,移植物抗宿主病,流产等.在复发性流产患者体内CD4+CD25+T细胞数目及功能明显下降.实验表明增强CD4+CD25+T细胞数量或功能可以阻止移植物抗宿主病和治疗复发性流产.     

雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠抗ds-DNA抗体和T细胞表面分子CD69、CD25表达的影响

目的：初步观察雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠SLE动物模型抗双链DNA抗体及T细胞表面分子CD69、CD25表达及其生存时间的影响。方法：将MRL/lpr狼疮小鼠随机分为空白（蒸馏水）对照组、纳米雄黄低中高剂量组,每天灌胃一次,分别在不同时间点采集血清和称重;在实验结束后,取外周淋巴结分离T细胞并体外培养;放射免疫法测定血清抗ds-DNA抗体效价,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD69、CD25表达水平;并计算各个观察点的小鼠死亡率。结果：雄黄治疗各组MRL/lpr小鼠生存时间比对照组明显延长,差异有统计学意义（P〈0.05）;雄黄低、中、高各组血清抗ds-DNA抗体总平均值显著低于对照组,其中高剂量与低剂量比较,差异也有统计学意义（P〈0.05）。雄黄各剂量组T细胞表面的CD69和CD25表达水平较空白对照组有明显的降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：雄黄可能通过抑制MRL/lpr小鼠T细胞表面的CD69和CD25表达以减少T细胞的活化,从而减少抗ds-DNA抗体的分泌,减轻小鼠自身免疫反应损伤,延缓SLE疾病发展进程。     

足月妊娠分娩发动前后孕妇蜕膜中NK细胞及CD4~+CD25~+T细胞的变化

目的:检测足月妊娠分娩发动前后孕妇蜕膜中NK细胞及CD4+CD25+T细胞的变化情况,探讨它们与分娩发动的关系。方法:对40例健康足月孕妇按临产情况分为足月未临产组和足月临产组,收集孕妇蜕膜组织,密度梯度离心法分离出淋巴细胞,流式细胞术(FCM)检测两组中NK细胞、CD4+CD25+T细胞含量。结果:足月临产组的蜕膜NK细胞占蜕膜淋巴细胞的(36.3±6.5)%,足月未临产组蜕膜NK细胞占蜕膜淋巴细胞的(33.9±3.0)%,差异无统计学意义;足月临产组的蜕膜NK细胞表面CDl6的表达明显高于足月未临产组,两者分别为(8.9±1.1)%与(4.6±0.9)%(P<0.05);足月临产组的蜕膜CD4+CD25+T细胞含量明显小于足月未临产组CD4+CD25+T细胞的含量,两者分别为(4.5±0.7)%与(9.1±1.0)%(P<0.05)。结论:足月妊娠分娩发动前、后蜕膜中的NK细胞及CD4+CD25+T细胞发生变化,推测NK细胞与CD4+CD25+T细胞可能参与了分娩发动。     

CD4+CD25+调节性T细胞治疗反复性流产的动物实验研究

目的:通过动物实验,探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞用于反复性流产免疫治疗的效果。方法:密度梯度离心法从正常昆明白新生鼠的血液和能正常生育的BALB/c雄鼠血液中分别分离单核淋巴细胞,再用免疫磁珠法筛选出CD4~+CD25~+调节性T细胞;以CBA/J雌鼠×DBA/2J雄鼠交配组合作为反复自然流产的动物模型,于孕期给予鼠尾静脉注射不同种类的淋巴细胞;采用独立样本t检验对各组得到的数据进行分析和处理。结果:注射CD4~+CD25~+T细胞组小鼠CD4~+CD25~+T细胞在CD4~+T细胞中的占比为(17.49±0.60)%,高于注射单核淋巴细胞组的(14.68±0.83)%、无菌PBS组的(9.54±0.85)%和不注射组的(9.28±0.68)%(t=4.754,P0.05;t=13.242,P0.05;t=15.621,P0.05)。CD4~+CD25~+调节T细胞中的Foxp3蛋白相对表达量(5.85±0.45)高于注射单核淋巴细胞组(2.86±0.54)、无菌PBS组(1.08±0.16)和不注射组(1.00±0.00)(t=7.276,P0.05;t=17.227,P0.05;t=18.635,P0.05)。在第4天和第8天分别注射调节T细胞得到了较好的效果,胚胎吸收率为(4.92±0.08)%,低于注射单核淋巴细胞组的(13.07±0.06)%、注射无菌PBS组的(23.11±0.12)%和不注射组的(25.47±0.11)%(t=-2.603,P0.05;t=-4.012,P0.05;t=-4.700,P0.05)。结论:给反复性流产小鼠于孕期进行多次CD4+CD25+T细胞注射,免疫治疗效果好于传统的注射单核淋巴细胞。     

Enhancing therapeutic HPV DNA vaccine potency through depletion of CD4CD25 T regulatory cells

Therapeutic human papillomavirus (HPV) vaccines targeting E6 and/or E7 antigens represent an opportunity to control HPV-associated lesions. We have previously generated several therapeutic DNA vaccines targeting HPV-16 E7 antigen and generated significant antitumor effects. Since regulatory T cells (Tregs) play an important role in suppressing immune responses against tumors by immunotherapy, such as DNA vaccines, we tested if the therapeutic effects of a DNA vaccine encoding E7 linked to heat shock protein 70 (Hsp70) can be improved by a strategy to deplete Tregs using a anti-CD25 monoclonal antibody (PC61) in vaccinated mice. We found that administration of PC61 prior to vaccination with E7/Hsp70 DNA was capable of generating higher levels of E7-specific CD8⁺ T cells compared to the control antibody, leading to significantly improved therapeutic and long-term protective antitumor effects against an E7-expressing tumor, TC-1. Thus, a strategy to deplete CD4⁺CD25⁺ Tregs in conjunction with therapeutic tumor antigen-specific DNA vaccine may represent a potentially promising approach to control tumor. The clinical implications of our study are discussed.     

前列腺癌患者手术前后外周血调节性T细胞和FOXP3mRNA的表达及临床意义

目的探讨前列腺癌（PCa）患者手术前后外周血CD4^＋ CD25＋调节性T细胞（Tregs）及其特异标志物FOXP3mRNA的表达比例的变化及临床意义。方法应用流式细胞术检测50例前列腺癌及50例正常对照组外周血单个核细胞（PBMC）中Trigs占CD4CF细胞的比例,应用RT～PCR技术检测人外周血PBMCFOXP3mRNA的表达。结果随着Gleason分级升高,CD4^＋CD25^＋Tregs／CD4^＋T比值和FOXP3 mRNA表达量均有升高趋势;PCa患者术前CD4^＋CD25^＋Treg细胞占CD4^＋细胞的比例和FOXP3mRNA表达水平高于正常对照组（均P〈0．05）,术后水平与正常对照组差异无统计学意义;PCa组Tregs表达率与FOXP3mRNA呈正相关（r=0．623,P〈0．01）。结论Tregs及其特异标志物FOXP3具有维持自身免疫稳定和抑制肿瘤免疫作用,可能参与前列腺癌的发生。     

上皮性卵巢癌患者外周血CD4~+CD25~(high)调节性T细胞分析

目的探讨CD4+CD25highT细胞(Treg)在60例上皮性卵巢癌患者外周血中的分布及其表型特征,分析手术对卵巢癌患者外周血Treg的影响。方法采用流式细胞术检测卵巢癌患者及健康人外周血中Treg的比例,探讨其表型特征并分析手术对患者外周血Treg比例的影响。结果与正常对照(2.95±1.09)%相比,60例上皮性卵巢癌患者外周血中Treg比例明显增加(9.81±5.19)%,二者差异有统计学意义(P0.01);手术后,患者外周血中Treg的比例相比术前显著下降(P0.01);Treg表型分析发现:Treg高表达CD45RO、HLA-Ⅰ、Foxp3分子,较高水平表达OX40、GITR、CD152、CD95、CD95L、B7-H1,几乎不表达CD80、CD86、B7-H4、CD45RA、CD69分子,而HLA-DR、CD154的表达水平在个体间差异较大,同时大部分Treg细胞CD127表达阴性。结论上皮性卵巢癌患者外周血CD4+CD25highT细胞水平明显升高,可能参与卵巢癌患者肿瘤免疫抑制。     

卵巢癌患者外周血CD4~+ CD25~(high)调节性T细胞及Foxp3的检测及临床意义

目的:检测CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)及Foxp3在卵巢癌患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,探讨其在抗肿瘤免疫调节中的作用及临床意义。方法:采用流式细胞术检测75例卵巢癌患者PBMC中CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25high/CD4+T细胞百分比以及CD4+CD25+及CD4+CD25highT细胞中Foxp3+T细胞的表达,并与73例正常对照组进行比较。结果:卵巢癌患者治疗前PBMC中CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25high/CD4+T细胞百分比及Foxp3表达水平均较正常对照组增高(P<0.05),治疗后上述指标较治疗前减低(P<0.05)。结论:卵巢癌患者外周血调节性T细胞增高可能是其免疫异常的主要原因之一,定期检测外周血中上述指标的变化有助于了解卵巢癌患者的病情变化及判断预后。     

Dietary polyunsaturated fatty acids modulate in vivo, antigen-driven CD4+ T-cell proliferation in mice

Our objective was to determine whether dietary lipids affect in vivo, antigen-driven, proliferation of na?ve CD4(+) T lymphocytes. To accomplish this, we adoptively transferred lymphocytes from T-cell receptor (TCR) transgenic DO11.10 (i.e., donor) mice into syngeneic, nontransgenic BALB/c (i.e., recipient) mice. Before adoptive transfer, recipient mice were fed for 4 wk AIN93G-type diets that differed only in fat source: lard, low in PUFA, fish oil, rich in (n-3) PUFA, and soybean oil, rich in (n-6) PUFA. One week after transfer, recipient mice were immunized with antigen (i.e., ovalbumin), and expansion of CD4(+) T(DO11.10) cells in the spleen and draining lymph nodes (LN) was measured by flow cytometry. Five days postimmunization (p.i.), at the peak of expansion, CD4(+) T(DO11.10) cells in the draining LN and spleen were 5- to 10-fold higher than in unimmunized mice, then quickly declined during the contraction phase (i.e., 7 and 10 d p.i.). Recipients fed the (n-6) PUFA rich diet had approximately 25% greater in vivo expansion of CD4(+) T(DO11.10) cells than lard- and fish oil-fed recipient mice at 5 d p.i. (P < 0.05). However, at 7 and 10 d p.i., CD4(+) T(DO11.10) cells in the draining lymph nodes did not differ between groups, nor in the spleen at 5, 7, and 10 d p.i. In summary, we are the first to demonstrate that dietary PUFAs affect antigen-driven expansion of na?ve CD4(+) T cells in vivo. Surprisingly, (n-3) PUFA consumption did not reduce CD4(+) T-cell expansion.     

大鼠上皮性卵巢癌动物模型CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化

目的:为明确CD4+CD25+调节性T细胞与上皮性卵巢癌的关系,探讨上皮性卵巢癌中CD4+CD25+调节性T细胞的变化、来源以及CD4+CD25+调节性T细胞对上皮性卵巢癌免疫功能的影响。方法:应用Fischer 344大鼠建立上皮性卵巢癌动物模型,应用流式细胞仪和RT-PCR方法检测大鼠胸腺和脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞的变化。结果:上皮性卵巢癌大鼠动物模型脾脏T淋巴细胞功能增强,CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞比例及FOXP3 mRNA表达较正常大鼠均明显增加,而胸腺无明显改变。结论:提示上皮性卵巢癌由外周诱导导致CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞比例增加,表达增强。     

CD4+CD25+ regulatory T cell-mediated changes in the expression of endocytic receptors and endocytosis process of human dendritic cells

CD4⁺CD25⁺ regulatory T cells (Tregs) are known to inhibit immune responses to antigens. Since, the process of antigen uptake by dendritic cells (DC) is central to induction of immune responses, we analyzed the effect of Tregs on the expression of endocytic receptors on DC and its repercussion on antigen uptake. Our results demonstrate that Tregs down-regulate the expression and uptake of antigens via C-type lectin-like receptors CD206 and DC-SIGN, restrain the pinocytosis process of DC and augment the expression of FcγRIIB, an inhibitory Fcγ receptor the engagement of which by IgG-bound antigens leads to inhibition of DC activation. Our results thus provide an additional insight on the pertinence of strategies aimed at blocking Treg functions towards improved vaccination protocols.