慢性粒细胞白血病PKR基因的表达及临床意义

目的检测双链RNA依赖性蛋白激酶(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)基因在慢性粒细胞白血病(CML)病人及CML细胞株K562细胞中的表达情况。方法分离CML患者慢性期(CP)15例,加速期(AP)11例,急变期(BC)9例及11例正常供者骨髓或外周血单个核细胞,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测其PKR基因表达情况,并同时检测PKR基因在K562细胞中的表达。结果正常对照组PKR表达阳性率为90.9%,高于加速期的81.8%(P0.05)及急变期的77.8%(P0.05);正常对照组PKR/GAPDH比值为(0.92±0.40)%,高于慢性期的(0.85±0.32)%(P0.05)及加速期的(0.72±0.54)%(P0.05),明显高于急变期的(0.46±0.31)%(P0.01)。K562细胞PKR/GAPDH比值为(0.55±0.13)%。结论 CML细胞及K562细胞株都有一定丰度的蛋白激酶PKR基因表达,为通过激活PKR而靶向诱导CML细胞凋亡奠定理论基础。     

吉西他滨对慢性粒细胞白血病患者骨髓细胞G-CSFR及bcr/abl mRNA的影响

为了观察吉西他滨对慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)及bcr/ablmRNA的作用,收集CML慢性期、急变期患者的及骨髓象正常的非血液病患者骨髓液,分为吉西他滨组(加入吉西他滨,调整浓度为10μg/ml)和对照组,培养48小时后收集细胞。采用流式细胞术检测各组标本骨髓G-CSFR的表达率;采用RT-PCR技术检测各组标本bcr/abl mRNA的表达。结果表明:吉西他滨组CML慢性期、急变期患者及骨髓象正常者骨髓G-CSFR的表达率分别为(50.72±8.57)%、(36.32±4.25)%和(59.42±7.62)%。对照组CML慢性期、急变期患者及骨髓象正常者骨髓粒系G-CSFR的表达率分别为(45.42±6.52)%、(30.58±5.68)%和(58.56±5.54)%。两组CML患者骨髓G-CSFR的表达率分别与骨髓象正常组比较,差异有显著性(p0.05),CML慢性期患者与急变期比较,差异有显著性(p0.05)。吉西他滨组CML患者G-CSFR的表达率与未加药组相应组别比较,差异有显著性(p0.05)。吉西他滨组CML慢性期、急变期患者bcr/abl mRNA表达水平比较,差异无显著性(p0.05)。吉西他滨组与对照组、CML慢性期、急变期患者G-CSFR表达率与bcr/abl mRNA表达水平呈负相关(p0.05)。结论:在体外培养下,吉西他滨可以提高CML慢性期、急变期患者骨髓G-CSFR的表达率,对bcr/abl mRNA表达的作用不明显,CML慢性期、急变期患者G-CSFR表达率与bcr/abl mRNA表达水平呈负相关。     

bcr/ab1 mRNA融合转录本水平与慢性粒细胞白血病演变关系

目的 检测不同病程慢性粒细胞白血病(CML)bcr/ab1 mRNA融合转录本表达水平,评价其在推断CML病情演变价值.方法 利用定量聚合酶链反应(PCR)检测患者不同病期骨髓单个核细胞bcr/ab1 mRNA融合转录本水平.结果 健康对照组0,CML慢性期0.34±0.03,慢性期治疗后0.10±0.03,加速期0.35±0.02,急变期为0.35±0.03,慢性期治疗前后差异无统计学意义,慢性期明显低于加速期和急变期. 结论 bcr/ab1 mRNA表达水平的改变与疾病演变关系密切.     

急变期慢性髓系白血病骨髓间充质干细胞下调白血病细胞凋亡

本研究旨在观察慢性髓系白血病（CML）骨髓间充质干细胞（BMMSC）对K562细胞和原代急变期CML白血病细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制及意义.K562细胞和原代急变期CML白血病细胞分别与不同组别的BMMSC共培养,应用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞线粒体膜电位,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-8、caspase-9、激活的caspase-3的表达.结果表明：CML急变期BMMSC不能抑制原代CML急变期白血病细胞的增殖,对K562仅有轻度的抑制作用;CML急变期BMMSC提高阿霉素处理后的K562细胞的存活率,并保护K562及原代CML-Bp骨髓单个核细胞,抑制阿霉素诱导的细胞凋亡（P＜0.05）;与CML慢性期及正常组BMMSC相比较,CML急变期BMMSC对白血病细胞的保护作用最强,其细胞共培养组的细胞线粒体膜电位下降最少（P＜0.05）;检测CML急变期BMMSC共培养组的K562显示,活性Caspase-3表达均较单独K562＋ ADM组明显下调,caspase-9表达显著增加（P＜0.05）.结论：CML急变期BMMSC下调阿霉素诱导的白血病细胞的凋亡,其机制可能与抑制细胞线粒体膜电位的下降,稳定caspase-9蛋白非活性的表达和下调caspase-3蛋白的激活有关.     

慢性髓系白血病中prame基因转录本的定量研究

本研究旨在分析慢性髓系白血病(CML)患者中黑色素瘤优先表达抗原(prame)的基因转录本表达状况及其临床意义。用实时定量PCR(RQ-PCR)方法对30例CML患者和15例缺铁性贫血(IDA)患者骨髓单个核细胞中prame基因转录本水平进行检测。结果表明:15例缺铁性贫血患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中prame转录本水平为0%-1.46%(中位0.19%),30例CML患者中BMMNC中prame基因转录本水平为0%-772.25%(中位8.28%),二组之间具有显著性差异(p0.001)。CML患者中prame基因转录本含量与bcr-abl融合基因转录本水平显著相关(r=0.708,p0.001);6例CML加速期(AP)和急变期(BC)患者中prame基因转录本水平明显高于24例慢性期(CP)患者(p=0.007)。动态检测2例CML患者在不同病程中prame基因转录本水平变化显示,AP及BC时prame基因转录本水平增高,经治疗后恢复至CP时prame基因转录本水平降低,与bcr-abl转录本变化趋势一致。结论:CML患者中prame基因转录本表达水平增高,且与病情发展相关,可用于病情监测。     

慢性髓系白血病患者中基因SCIN表达及启动子甲基化的临床研究

目的:探讨基因SCIN表达及启动子甲基化在慢性髓系白血病(CML)患者中的临床意义。方法:应用实时定量PCR检测64例CML患者和37例对照骨髓单个核细胞SCIN的表达水平。应用实时定量甲基化特异性PCR结合亚硫酸盐测序PCR检测65例CML患者和29例对照SCIN启动子甲基化水平。结果:CML患者与对照组相比细胞SCIN表达水平明显下调(P=0.010);慢性期、加速期与急变期患者中SCIN表达下调率分别为61%、67%和75%,有增加趋势。Spearman相关性分析显示,基因SCIN表达与BCR-ABL1转录水平呈负相关(r=-0.315,P0.05)。然而,SCIN低表达组与高表达组相比较,在性别、年龄、外周血白细胞数、血红蛋白水平、血小板数量、染色体特征、CML分期及BCR-ABL1转录水平等临床参数中未见差异(P0.05)。CML患者SCIN启动子甲基化水平与对照组比较无统计学差异,且SCIN表达与启动子甲基化水平无相关性(P0.05)。结论:基因SCIN在CML患者中非甲基化依赖性表达下调,可能与BCR-ABL1融合基因致病CML有关;SCIN表达下调可能与CML进展有关。     

bcr／abl mRNA融合转录本水平与慢性粒细胞白血病演变关系

目的检测不同病程慢性粒细胞白血病（CML）bcr／abl mRNA融合转录本表达水平．评价其在推断CML病情演变价值。方法利用定量聚合酶链反应（PCR）检测患者不同病期骨髓单个核细胞bcr／abl mRNA融合转录本水平。结果健康对照组0，CML慢性期0．34±0．03．慢性期治疗后0．10±0．（33，加速期0．35±0．02，急变期为0．35±0．03，慢性期治疗前后差异无统计学意义，慢性期明显低于加速期和急变期。结论bcr／abl mRNA表达水平的改变与疾病演变关系密切。     

利用SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR方法检测白血病患者RbAp46基因的表达

目的探讨白血病患者骨髓细胞RbAp46基因的表达水平.方法建立实时定量RT-PCR方法,利用SYBR Green Ⅰ染料检测140例急性白血病(AL)、13例慢性粒细胞白血病(CML)慢性期和7例CML急变期患者以及32例非白血病患者骨髓细胞RbAp46基因的表达水平.结果初诊与复发AL患者骨髓中RbAp46基因表达水平的M估计值分别为178.23和213.65,明显高于完全缓解组和对照组(分别为85.89和88.08);CML慢性期组M估计值为58.27,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而CML急变期组M估计值为173.24,明显高于CML慢性期组和对照组.98例初诊AL中除M2、M4亚型M估计值(62.63,130.67)与对照组相比差异无统计学意义外,余均明显高于对照组.初诊AL中RbAp46基因表达水平与bcr/abl、PML-RARα、mdrl基因的表达无相关性,但与WT1基因的表达水平呈正相关,与AML1/ETO融合基因表达呈负相关.结论RbAp46在AL初诊、复发及CML急变期患者骨髓细胞中高表达,可能参与白血病的发生.     

节律基因在慢性粒细胞白血病中表达水平及意义

目的探讨节律基因在慢性粒细胞白血病(CML)中的表达情况,及其与bcr/abl融合基因的相关性,为临床治疗提供新的分子靶点。方法收集106例CML患者慢性期、加速期、急变期的骨髓标本和50例健康体检人员的外周血为对照,采用RT-PCR法检测per1、per2、bcr/abl基因表达情况。结果 per1、per2、bcr/abl基因在慢性期、加速期和急变期存在不同水平的变化,并且per1、per2表达水平与bcr/abl基因存在负相关。结论节律基因作为肿瘤抑制因子在CML中是低表达的,在信号转导通路中是否与bcr/abl基因相互作用还需深入研究。     

慢性粒细胞白血病患者外周血Bmi1 mRNA的表达水平

目的采用实时荧光定量PCR(Rt-PCR)检测Bmi1基因表达的方法,了解慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血Bmi1基因的表达水平。方法采用Rt-PCR方法检测CML患者41例和10例健康人外周血中Bmi1基因的表达水平。结果Rt-PCR的结果显示,基因Bmi1在健康人、CML患者慢性期、加速期及急变期中的表达相对值分别为0.544±0.233、1.624±0.632、3.021±0.923及3.561±1.005。CML患者中Bmi1的表达水平明显高于健康人(P0.05),加速期及急变期中Bmi1的表达水平明显高于慢性期,急变期Bmi1的表达水平明显高于加速期,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 Bmi1基因在CML外周血中有高水平的表达,是监测CML患者病情进展及判断预后有价值的分子标记物。     

慢性粒细胞白血病病人Mcl一1基因和Bcr／Abl基因的表达及临床意义

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）病人Mcl—l基因和Bcr／Abl融合基因的表达水平及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术检测了4l例cML病人（包括慢性期15倒、加速期6例、急变期6例、伊马替尼治疗后遗传学完全缓解8例及非伊马替尼治疗的未缓解的CML病人6例）骨髓标本Mel—l基因、Ber／Abl融合基因的表达水平,以10例正常人作为对照。结果CML各组Mcl—I和Bcr／AblmRNA的表达水平差异均有显著性（X2=19．12—36．08,P〈0．05）。伊马替尼治疗组与正常对照组Mel—lmRNA的表达明显低于其他各组（z=2．547—3．254,P〈0．05）;加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间Mcl—lmRNA的表达水平差异无显著性（z=0．481一1．922,P〉0．05）,但均明显高于慢性期（z=2．65—3．465,P〈0．05）。Ber／AblmRNA在慢性期、加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间表达差异无显著性（z=0．48—1．196,P〉0．05）。CML患者Mel—l与Bcr／AblmRNA的表达水平呈正相关（r=0．68,P〈0．05）。结论Mcl—l和Ber／Abl与CML的病情密切相关,参与cML的发生和发展,是判断病情进展及预后的分子标记物。     

Synthesis of granulocyte colony-stimulating factor and its requirement for terminal divisions in chronic myelogenous leukemia

In this paper we demonstrate that maturing neoplastic cells from patients with chronic myelogenous leukemia (CML) constitutively produce G-CSF and are also receptive for this molecule. G-CSF functions as an autocrine growth factor in stable phase CML, and thus is responsible for divisions of maturing leukemic cells leading to an expansion of the compartment of mature cells. This observation is well in line with in vivo features of CML in stable phase, i.e., the hyperplasia of the mature granulocyte compartment. In acute blastic phase of CML expression of the G-CSF gene seems to be less common and not related to autonomous blast growth.     

bcl—2基因表达在慢性粒细胞白血病急变中的意义

目的探讨ｂｃｌ２基因表达在慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）急变中的生物学意义。方法采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶免疫复合物方法和地高辛标记探针原位杂交技术检测各期ＣＭＬ患者６０例新鲜骨髓标本中ＢＣＬ２蛋白和ｂｃｌ２ｍＲＮＡ的表达,并对其中１９例标本进行流式细胞术分析骨髓细胞凋亡率及细胞周期。结果初诊和治疗后ＣＭＬ中ｂｃｌ２基因表达相近,但明显低于急变时。ｂｃｌ２ｍＲＮＡ表达与蛋白表达基本一致。ｂｃｌ２基因高表达与ＣＭＬ患者外周血血红蛋白、血小板、幼稚细胞及骨髓不成熟细胞比例相关。加速／急变期ＣＭＬ细胞凋亡率明显低于慢性期,但细胞周期无明显变化。结论ＣＭＬ急变时ｂｃｌ２基因表达增高,骨髓细胞凋亡率降低,这些现象部分地阐明了ＣＭＬ急变预后不良的机制,也为ＣＭＬ急变的早期诊断和治疗提供了实验依据。     

慢性粒细胞白血病急变伴t(3;21)(q26;q22)染色体易位受累基因的研究

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）急性髓系白血病（AML）变伴t（3;21）（q26;q22）的受累基因.方法对1例CML AML变伴t（3;21）（q26;q22）患者细胞间期和中期分裂相细胞采用荧光原位杂交技术（FISH）检测AML1和bcr/abl基因重排,RT-PCR联合序列分析检测t（3;21）（q26;q22）受累基因.结果der（3）和der（21）染色体上均检测到AML1基因杂交信号,AML1-MDS1-Evi1、AML1-MDS1、AML1-EAP及Evi1基因均表达,未见AML1-Evi1融合基因表达,AML1-MDS1-Evi1基因表达水平是AML1-MDS1、AML1-EAP表达水平的1.58和1.54倍,患者Evi1基因表达水平是HEL细胞系Evi1表达水平的2.71倍.结论t（3;21）（q26;q22）导致形成AML1-MDS1-Evi1、AML1-MDS1融合基因及Evi1基因激活,这些继发的分子遗传学异常是CML急性变伴t（3;21）（q26;q22）患者急变发生的分子基础.     

白血病患者WT1基因表达的研究

目的：探讨WT1基因与白血病发病的关系和临床意义。方法：采用逆转录－巢式聚合酶链反应（RT－巢式PCR）方法检测了K562和HL－60两个白血病细胞系、49例急性白血病（AL）患者、33例慢性髓系白血病（CML）患者和25例正常对照的WT1基因表达。结果：K562和HL－60两个白血病细胞系、29例初治或复发AL患者中有21例、20例完全缓解（CR）期AL中有1例、18例CML急变期中有15例、5例CML加速期中有1例、10例CML慢性期患者中有1例表达WT1基因。WT1基因表达见于所有AL亚型，其相对水平与急性白血病的CR率有相关性。≥1．0的患者CR率低及生存期短。在CML中WT1基因表达表现出明显的阶段性，与慢性粒细胞白血病临床阶段及病情进展有关。结论：WT1基因表达与白血病发生有关，WT1基因高表达的患者CR率低、无病生存期短，可作为判断急性白血病预后和监测微量残留病的一项指标，也可作为CML急变的一项诊断指标。     

伊马替尼治疗Ph阳性慢性粒细胞白血病引起的骨髓形态学变化

目的　观察伊马替尼治疗Ph阳性慢性粒细胞白血病 (CML)引起的骨髓形态学变化 ,并探讨其与血液学、遗传学疗效之间的关系。方法　 117例Ph阳性CML患者 ,包括干扰素治疗失败的慢性期 5 4例、加速期 4 1例、急髓变期 2 2例 ,日服伊马替尼 4 0 0或 6 0 0mg,持续 18个月以上。结果　治疗18个月内 ,各期患者骨髓增生程度显著降低、原始粒细胞 早幼粒细胞显著减少、骨髓无CML特征的比例显著增加 ,慢性期和加速期患者粒、红细胞比例显著降低、巨核细胞数量显著减少 (P值均 <0 0 5 )。获得血液学疗效者骨髓形态持续正常。治疗中发生骨髓增生低下或极度低下还是增生活跃以上与血液学和遗传学疗效密切相关 :慢性期患者其遗传学有效率分别为 5 8.8%和 86 .5 % (P =0 .0 35 ) ,加速期患者血液学完全缓解率分别为 2 6 .3%和 75 .0 % (P =0 .0 0 4 ) ,急变期患者生存期短于 6个月者比例分别为 77.8%和 16 .7% (P =0 .0 0 9)。在CML进展期 ,治疗 1个月时骨髓形态学无CML特征与有CML特征者相比 ,加速期患者 18个月疾病进展率显著降低 (分别为 2 5 .0 %和 75 .0 % ,P =0 .0 2 8)、总生存率显著升高 (分别为 75 .0 %和 11.8% ,P =0 .0 0 4 ) ;急变期患者获得血液学效应的比例显著增加 (分别为 10 0 .0 %和 4 0 .0 % ,P =0     

微卫星Mfd41和DCC的遗传不稳定性与慢性粒细胞白血病病程发展关系研究

目的：研究微卫星ＤＮＡｓ的遗传不稳定性与慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）加速、急变的关系。方法：采用基础ＰＣＲ银染方法对９例加速期和８例急变期ＣＭＬ患者的骨髓细胞与其慢性期标本位于染色体１７ｐ的Ｍｆｄ４１和１８ｑ的ＤＣＣ两个微卫星序列进行比较分析。结果：１７例ＣＭＬ加速期或急变期患者中有８例出现微卫星不稳定性（ＭＳＩ）或杂合性丢失（ＬＯＨ），占总病例数的４７．５％。６例（加速期２例，急变期４例）出现ＤＣＣ改变，占总病例数的３５．３％；２例（加速期和急变期各１例）出现Ｍｆｄ４１改变，占总病例数的１１．８％。结论：微卫星ＤＮＡｓ的遗传不稳定性可能参与ＣＭＬ加速或急变的演变     

β-catenin在慢性粒细胞白血病中的表达及与bcr/abl的关系

本研究检测β-catenin在慢性粒细胞白血病(CML)各期中的表达情况,并与bcr/abl的表达变化相比较,为进一步探讨β-catenin在CML急性变中的意义提供依据。首先分离CML各期患者及正常供者骨髓单个核细胞(BMMNC),提取总RNA,逆转录为cDNA,用实时定量PCR的方法检测β-catenin的表达情况,同时检测部分标本bcr/abl的表达情况,分析二者在CML进展过程中的表达变化及两者的相关性。结果表明:β-catenin在CML急性变期BMMNC的表达明显高于慢性粒细胞白血病(CML)慢性期(p<0.001)、加速期(p=0.016)及正常人(p=0.004),而在后三者之间未见统计学差异。急性变期bcr/abl的表达明显高于慢性期(p=0.001)。β-catenin的表达量与bcr/abl表达水平有明显的相关性(r=0.620,p<0.001)。结论:CML急性变期β-catenin的表达明显升高,并与bcr/abl的表达量有相关性。β-catenin的表达增高可能与CML急性变有关。     

肿瘤抑制基因P16和UBAP1在慢性粒细胞白血病的表达研究

目的探讨肿瘤抑制基因P16和UBAP1表达水平与慢性粒细胞白血病(CML)病程进展的关系。方法纳入93例CML初诊患者,其中慢性期(CP)76例、加速期(AP)及急变期(BC)17例(急髓变12例、急淋变5例),以22例非恶性血液病患者作为对照组,分别提取外周血单个核细胞总RNA,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测UBAP1和P16的表达情况。结果 PCR产物电泳图及熔解曲线均显示实时荧光定量PCR法扩增P16和UBAP1基因具有较好的特异性。CML-CP组、急髓变组P16mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);急淋变组,P16基因mRNA表达水平低于对照组(P<0.05)。CML-CP组UBAP1mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),CML-AP与CML-BC组表达水平降低(P<0.05);急髓变和急淋变组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论不同CML病程患者具有不同的UBAP1和P16基因表达水平;UBAP1与P16基因表达水平与CML疾病进展存在一定的关系。