胀果甘草渣及其黄酮制品中3种成分的含量测定

目的:建立甘草渣及其黄酮制品中甘草查尔酮A、甘草黄酮B、甘草次酸的含量测定方法,为胀果甘草渣开发利用及其黄酮制品质量控制提供依据。方法:Kinetex色谱柱(150 mm×4.6 mm,2.6μm);流动相:乙腈-0.1%甲酸溶液梯度洗脱,检测波长为280、310、254 nm,柱温为30℃,洗脱流速为1.0 m L·min~(-1)。结果:HPLC分析表明胀果甘草渣及其黄酮制品中含甘草查尔酮A等10个黄酮成分和甘草次酸,本文选择含量较高的甘草查尔酮A和分离度较好的甘草黄酮B、甘草次酸进行含量测定,3种成分均能达到基线分离,在相应的浓度范围内均呈良好线性关系,平均加样回收率分别为101.4%、98.4%、103.1%,RSD均小于2.31%。结论:本研究结果可为胀果甘草渣及其黄酮制品的质量控制提供参考。     

高效液相色谱法测定甘草中甘草查尔酮A的含量

目的 建立甘草中甘草查尔酮A的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱(HPLC)法,使用Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm),以甲醇-水-冰醋酸(60:40:1)为流动相,流速1.0 ml·min-1, 检测波长为372 nm,柱温 25℃.结果 甘草查尔酮A线性范围0.2～1.0 μg, r=0.999 2;精密度实验RSD为1.51 %;重复性实验RSD为2.54 %;稳定性实验RSD为1.72 %;平均加样回收率98.76 %,RSD=1.94 %.结论 该方法灵敏、准确,重复性好,可作为甘草中甘草查尔酮A的含量测定方法.     

甘草废渣中黄酮类化合物的分离及鉴定

目的:分离甘草渣中黄酮类化合物,并进行结构鉴定.方法:采用制备HPLC及制备TLC对甘草渣黄酮提取物进行分离,采用LC-Ms和H-NMR进行结构鉴定.结果:分离得到胀果香豆素甲Inflacoumarin A、Dehydrolicochalone-A、甘草查尔酮甲Licochalcone-A、异芹糖甘草苷Isoliquiritin apioside、芹糖甘草苷Liquiritin apioside、柚皮苷Naringin 6种黄酮物质.结论:以上化合物可作为甘草渣黄酮提取物质量标准制定时的参考指标.     

HPLC法指认甘草废渣中黄酮类成分及含量测定

目的：研究甘草废渣中的黄酮类成分。方法：建立HPLC分析方法对分离得到的黄酮类化合物进行指认,选择甘草废渣中含量较高的甘草黄酮B、甘草查尔酮甲、甘草二氢查耳酮醇为指标进行含量测定。结果：甘草废渣中的黄酮类化合物与甘草类似,但含量存在较大差异,经检测甘草废渣中甘草黄酮8、甘草查尔酮甲、甘草二氢查耳酮醇的含量分别为0.081%、0.55%、0.074%。结论：本研究为合理利用甘草废渣提供了依据。     

UV法检测甘草渣总黄酮含量

目的确定甘草渣总黄酮的含量测定方法。方法以甘草查尔酮A为对照,采用UV法测定甘草渣总黄酮的含量。结果UV法测定甘草渣总黄酮含量:检测波长为453nm,甘草查尔酮A在0.0255~0.1533mg的范围内线性关系良好(R2=0.9993),平均加样回收率为104.27%(n=6),RSD为4.43%。结论 UV法简便、快速,可以用于甘草渣总黄酮的含量测定。     

甘草查尔酮B诱导小鼠黑色素瘤细胞凋亡作用

目的:研究甘草查尔酮B(licochalcone B)诱导小鼠黑色素瘤细胞(B16F0)凋亡作用并初步探讨其机制.方法:取对数生长期B16F0细胞按5 000个/孔接种于96孔板中,MTT染色法检测甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5,15 mg·L-1)作用24 h后,对B16F0细胞的增殖抑制作用;取对数生长期B16F0细胞按1×105个/孔接种于6孔板中,甘草查尔酮B(7.5,15mg·L-1)作用24 h后,Hoeehst 33258染色法观察细胞凋亡形态;取对数生长期B16F0细胞按5×105个/瓶接种于细胞培养瓶中,甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5 mg·L-1)作用24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测与凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2) mRNA表达;荧光法检测半胱氨酸蛋白酶蛋白9(Caspase-9)和半胱胺酸蛋白酶蛋白3(Caspase-3)相对活性.结果:甘草查尔酮B能有效抑制B16F0细胞增殖,作用24 h后对细胞的生长有明显的抑制作用,IC.011.3 mg·L-1,在5～15 mg·L-1表现出明显的剂量依赖,细胞出现明显凋亡特征,随甘草查尔酮B浓度的增加凋亡率逐渐升高;甘草查尔酮B(10,12.5 mg·L-1)能明显下调Bcl-2/Bax,上调Caspase-3,Caspase-9的表达,其中7.5 mg·L-1甘草查尔酮B引起Caspase-9,Caspase-3的活化程度较12.5 mg·L-1高.结论:甘草查尔酮B可能通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导B16F0细胞凋亡.     

高速逆流色谱法分离纯化甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲

采用高速逆流色谱法,从胀果甘草的乙醇粗提物中分离纯化甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲。甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲的结构用1H-NMR、13C-NMR、UV、FTIR和EI-MS鉴定。纯度用HPLC方法测定,采用归一化计算。分离采用的溶剂系统为正己烷-氯仿-甲醇-水(5:6:3:2),上相做固定相,下相做流动相,流动相流速为1.8 mL／min,甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲的纯度分别为95.0％和98.8％。纯化采用的溶剂系统为正己烷-氯仿-甲醇-水(1.5:6:3:2),上相做固定相,下相做流动相,流动相流速为1.5 mL／min。纯化后甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲的纯度分别为99.1％和99.6％。该方法操作简单,费用低廉,重现性好,可做为高纯度甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲化学对照品的制备分离方法。     

人中黄炮制前后6种化学成分的含量变化及其质量评价

目的:建立同时测定人中黄中甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草酸、甘草查尔酮A及甘草次酸6种化学成分含量的方法,比较甘草转化成人中黄前后三萜类和黄酮类成分的变化情况,评价人中黄样品的质量,为建立其科学制备方法提供参考。方法:采用HPLC,流动相乙腈-0.05%磷酸水溶液梯度洗脱,采集时间100 min,流速1 m L·min~(-1),柱温30℃,检测波长237 nm。采用聚类分析、主成分分析和G检验3种方法进行分析。结果:12批市售人中黄样品中甘草苷,甘草素,异甘草素,甘草查尔酮A,甘草酸和甘草次酸的质量分数分别为0.04~0.23,0.25~0.66,0.17~0.37,0.33~3.42,1.54~15.21,0.03~0.95 mg·g~(-1)。甘草中这6种成分的平均质量分数分别为1.64,0.32,0.17,0.50,22.46,0 mg·g~(-1)。相比甘草,市售人中黄中甘草苷含量下降了98.17%,甘草素升高了40.63%,异甘草素升高了17.65%,甘草酸下降了76.80%,甘草查尔酮A升高了68.00%。甘草与人中黄具有本质差别,不同方法制备的人中黄及12批市售样品间均具有一定差异。结论:该方法稳定可行、重复性好。当前市面流通的人中黄样品质量参差不齐、差异明显,可能是由于人中黄的制备工艺存在差异或原料甘草品种不同所致,且在某种程度上氨化环境对于人中黄的形成具有积极作用。     

HPLC同时测定甘蒲祛斑凝胶中甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A的含量

目的: 建立同时测定甘蒲祛斑凝胶中甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A含量的方法。方法: 采用高效液相色谱法,Agilent HC-C₁₈色谱柱 (4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相0.05%磷酸水(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~4 min,80%A;4~18 min,80%~65% A;18~22 min,65%~62% A;22~25 min,62% A,25~30 min,62%~55% A;30~35 min,55% A,35～45 min,55%~50% A;45~50 min,50%~55% A;50~60 min,55%~80% A),柱温30 ℃,流速0.8 mL·min^-1,检测波长276,368 nm。结果: 甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A的线性范围分别为0.050 4~0.403 2 (r=1),0.039 4~0.315 2 (r=1),1.638~8.192 μg (r=0.999 9);甘草素平均回收率为98.81%,RSD 1.7%;异甘草素平均回收率为99.16%,RSD 1.2%;甘草查尔酮A平均回收率为97.68%,RSD 1.0%。结论: 该方法简便、灵敏度高、专属性强,可用于甘蒲祛斑凝胶中3种指标性成分的含量测定。     

甘草总黄酮微海绵的制备及体外释放度评价

目的:优选甘草总黄酮微海绵的制备工艺并考察其体外释放度。方法:利用类乳剂溶媒扩散法制备甘草总黄酮微海绵,以微海绵得率、包封率及分散系数为指标,通过星点设计-效应面法考察聚乙烯醇用量、药物与乙基纤维素的比例、搅拌速度对甘草总黄酮微海绵制备工艺的影响。利用紫外分光光度法测定甘草总黄酮微海绵的包封率,检测波长335 nm;建立HPLC同时测定甘草总黄酮中甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A和光甘草定的含量,检测波长300 nm,流动相乙腈-甲醇-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱;利用透析法比较甘草总黄酮及甘草总黄酮微海绵中6个成分的体外释放度。结果:甘草总黄酮微海绵的最佳制备工艺为聚乙烯醇用量2.69%,药物-乙基纤维素(6∶1),搅拌速度1 100 r·min~(-1),搅拌时间4 h。8 h内甘草总黄酮中甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A和光甘草定的累积释放度分别为87.47%,86.83%,76.98%,78.48%,86.58%和56.58%,24 h内甘草总黄酮微海绵中这6个成分的累积释放度分别为91.45%,89.74%,77.57%,82.64%,87.74%和67.74%。结论:利用类乳剂溶媒扩散法制备的甘草总黄酮微海绵粒径大小均匀、工艺稳定且操作简便。甘草总黄酮微海绵具有明显的缓释作用。     

甘草中黄酮的纯化方法和含量测定

目的:研究聚酰胺富集甘草中黄酮的工艺参数,同时建立其含量测定方法。方法:以二氢黄酮类化合物在碱性条件下转化为查尔酮类的量作为指标,以柚皮苷为对照品,经聚酰胺吸附柱富集后,采用碱性比色法显色、测定。结果:纯化工艺条件为甘草聚酰胺比2∶1(g/g),树脂径高比1∶7,用5倍量柱体积70乙醇洗脱,甘草黄酮洗脱率在90左右;含量测定平均加样回收率为98.81(RSD=2.00)。总固物中黄酮含量可达45。结论:本法富集、纯化甘草总黄酮可行;甘草黄酮含量测定方法稳定,可靠。     

胀果甘草中查尔酮类物质对结肠癌的作用研究

目的:探讨甘草查尔酮类物质对结肠癌的作用及机理。方法:采用AOM/DSS诱导结肠癌小鼠模型研究甘草查尔酮类物质对结肠癌的作用。结果:甘草查尔酮类物质可以显著缓解小鼠体重下降情况,并可以延长生存时间;实验结果还显示,甘草查尔酮能显著降低结肠湿重系数,呈剂量依赖性;可以显著降低肿瘤个数,高剂量组肿瘤平均抑制率可达到55.5%;结肠病理切片显示,甘草查尔酮高剂量组可以显著恢复DSS诱导的结肠炎坏死黏膜。结论:甘草查尔酮类物质可以通过抑制结肠细胞炎症因子的释放,从多项指标上预防结肠癌的发生或缓解病变;甘草查尔酮类物质有望成为新型预防及治疗结肠癌的候选药物。     

高效液相色谱法测定甘草中4种黄酮类化合物

目的:建立甘草提取物中四种黄酮类化合物甘草苷、异甘草苷、甘草素和异甘草素的测定方法.方法:色谱柱HC-C_(18)ODS,流动相为0.04%甲酸溶液和乙腈梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长为292 nm.结果:乌拉尔甘草黄酮富集液中甘草苷的含量为原药材的27.72%,异甘草苷为10.87%,甘草素为0.17%,异甘草素为0.01%.结论:本方法可用于同时测定甘草中四种黄酮类化合物,操作简便,重现性好.     

甘草药渣中黄酮类成分及其抗氧化活性的研究

目的研究甘草药渣中黄酮类成分及其抗氧化活性,为其资源再利用提供依据。方法甘草药渣提取液中的黄酮成分采用硅胶、C18中压反相柱色谱和重结晶进行分离纯化,波谱分析进行结构鉴定,然后其抗氧化活性采用1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)自由基清除及酪氨酸酶抑制实验来测定。结果从中分离鉴定出10个黄酮类化合物,分别为甘草查尔酮甲(1)、异甘草素(2)、甘草黄酮C(3)、甘草黄酮(4)、甘草异黄酮乙(5)、光甘草酮(6)、甘草素(7)、半甘草异黄酮B(8)、甘草异黄酮甲(9)、芒柄花素(10)。其中,化合物1、2、5、6清除DPPH自由基作用相对较强,IC50分别为27.9、61.0、18.2、26.0μg/m L;化合物1~3能较显著地抑制酪氨酸酶,IC50分别为60.3、4.9、54.9μg/m L。结论甘草药渣中仍含有多种具抗氧化活性的黄酮类化合物,应进一步开发利用。     

高效液相色谱法测定甘草苷和甘草酸含量的研究

目的建立甘草苷和甘草酸的HPLC含量测定方法。方法使用KromasiL-C18(4.6 mm×200 mm,5μm)柱,甘草苷采用乙腈-0.5%醋酸(20:80)为流动相,检测波长276 nm,柱温为室温;甘草酸流动相为甲醇-0.2 mol.L-1乙酸铵溶液-冰乙酸(67∶32∶1),检测波长252 nm,柱温为室温。二者流速均为1.0 ml.min-1,采用外标法定量测定。结果甘草苷在2.7~27μg.ml-1范围内呈良好线性关系(r=0.999 7);甘草酸在6~36μg.ml-1范围内呈良好线性关系(r=0.999 8);甘草苷和甘草酸的平均回收率分别为101.4%和101.3%,其RSD值分别为1.18%和1.22%。结论该方法操作简便、准确,线性相关系数良好,且稳定性和重复性好,适用于甘草黄酮粗提物及纯化物中甘草苷和甘草酸的含量测定。     

胀果甘草中查尔酮类物质的富集

目的建立胀果甘草中查尔酮类物质的富集方法。方法使用水提、醇提、氯仿提取等方式进行粗提,再使用大孔树脂,聚酰胺柱层析等方法对其进行纯化精制;并对得到的精制物进行HPLC含量测定,检测条件为乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱),检测波长310nm。结果获得的甘草查尔酮纯化物中的甘草查尔酮A含量分别为14.87%和16.5%。结论大孔树脂和聚酰胺柱层析两种方式方法简便易行,均可得到合适的甘草查尔酮纯化物。     

HPLC法测定参苓白术散中三种成分的含量

目的:建立参苓白术散中苍术酮、白术内酯Ⅰ和甘草苷的定量检测方法。方法:采用HPLC法,以C₁₈色谱柱(5μm, 4.6 mm×250 mm),乙腈作为流动相A,测定了参苓白术散中苍术酮、白术内酯Ⅰ、甘草苷的含量。结果:苍术酮在0.0082～0.1308 mg/mL浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率97.8%(RSD=0.7%,n=6);白术内酯Ⅰ在0.0016～0.0256 mg/mL浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率103.4%(RSD=1.8%,n=6);甘草苷在0.0153～0.2444 mg/mL浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率104.2%(RSD=0.5%,n=6)。结论:本研究成功建立了参苓白术散中苍术酮、白术内酯I和甘草苷的检测方法,且方法专属性强,精密度、重复性良好。     

栽培甘草的化学成分研究

目的对栽培甘草的化学成分进行分离和鉴定。方法采用硅胶、葡聚糖凝胶LH-20、ODS柱等分离手段对栽培甘草的化学成分进行分离;利用NM R和M S等光谱技术对化合物进行鉴定。结果分离得到10个化合物,光甘草酮(g labrone,Ⅰ)、芒柄花素(form ononetin,Ⅱ)、对羟基苯甲酸(p-hydroxyben ic ac id,Ⅲ)、甘草查尔酮A(lic-ocha lcone A,Ⅳ)、6,7-二羟基香豆素(6,7-d ihydroxy coum arin,Ⅴ)、甘草黄酮A(licoflavone A,Ⅵ)、美迪紫檀素-3-O-葡萄糖苷(m ed icarp in-3-O-g lucos ide,Ⅶ)、芒柄花苷(onon in,Ⅷ)、甘草素-4′-芹菜糖苷(liqu iritigen in-ap iosy l(1-2)-g lucos ide,Ⅸ)、异甘草素-葡萄糖芹菜糖苷(licuras ide,Ⅹ)。结论其中化合物Ⅲ、Ⅴ为本属植物首次分得,化合物Ⅰ为本种植物首次分得,10个化合物均为首次从栽培甘草中得到。     

反相高效液相色谱法测定新疆不同品种甘草中甘草苷的含量

目的 测定新疆5个品种甘草中甘草苷的含量.方法 反相高效液相色谱法.色谱条件:Kromasil C18柱(5 μm, 250 mm × 4.6 mm i.d.);流动相为乙腈 - 0.5%冰醋酸(25∶75,V/V);检测波长276 nm.结果 测定方法在2.0 ～ 60 μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.999 6),平均回收率为98.4% (RSD=0.82%,n= 3).甘草中甘草苷的含量与品种有较大的关系,其中乌拉尔甘草中甘草苷的含量最高,含量为 3.14%,其次为光果甘草,含量为 2.01%,而胀果甘草中甘草苷的含量最低,仅为 0.96%.结论 实验为进一步开发利用新疆丰富的甘草资源提供了参考依据.     

HPLC梯度波长法同时测定甘肃省不同产地甘草中6种成分含量及主成分分析研究△

目的:建立HPLC同时测定甘草中甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A、甘草酸和甘草次酸含量的方法,应用主成分分析识别甘草的质量。方法:以乙腈-0.1%的磷酸水溶液进行流动相梯度洗脱,梯度波长采集法,柱温为室温,流量0.6mL·min-1;用spss17.0软件对数据进行分析。结果:色谱峰分离效果良好,甘草苷、甘草素、甘草酸铵、异甘草素、甘草查尔酮A和甘草次酸在各自浓度范围内均具有良好的线性关系。主成分分析对不同产地的样品排序结果与传统评价基本相符合。结论:本实验建立的HPLC同时测定黄酮类、三萜类成分的含量方法准确、简便,可作为甘草质量控制的方法之一。